הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

דור של כבד עכבר אנושי באמצעות תאי גזע אנושי כבדיה

10.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/54167

⸱

29 באוגוסט 2016

 ,  , 
1Department of Regenerative Medicine, Graduate School of Medicine, Yokohama City University, 2Department of Advanced Gastroenterological Surgical Science and Technology, Faculty of Medicine, University of Tsukuba, 3Regenerative Medicine Research Center, Jiangsu University Hospital

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים מודל כבד עכבר אנושי חדש שנוצר בעכברי נוקאאוט של תאים מתווכים של קולטן רעלן Alb (TRECK)/SCID לאחר השתלת תאי גזע כבד אנושיים לא בשלים וניתנים להרחבה.

תקציר

פותח מודל חדש של בעלי חיים הכולל עכברים כימריים עם כבד אנושי שהוקם באמצעות השתלת הפטוציטים אנושיים. עכברים אלה, שבהם הכבד אוכלס מחדש בהפטוציטים אנושיים פונקציונליים, יכולים לשמש ככלי שימושי לחקר הביולוגיה של תאי הכבד האנושיים, מטבוליזם של תרופות ויישומים פרה-קליניים אחרים. אחד הגורמים המרכזיים הנדרשים להשתלה מוצלחת של הפטוציטים אנושיים בעכברים הוא חיסול ההפטוציטים האנדוגניים כדי למנוע תחרות עם התאים האנושיים ולספק מרחב ומיקרו-סביבה מתאימים לקידום התרחבות והתמיינות של תאי תורם אנושיים. עד כה, הוקמו שני מודלים עיקריים של עכברים לפגיעה בכבד המשתמשים בעכברי fumarylacetoacetate hydrolase (Fah) ו-uroplasminogen activator (uPA). עם זאת, עכברי Fah משמשים בעיקר עם הפטוציטים בוגרים והיישום של מודל ה-uPA מוגבל על ידי ירידה ברבייה. כדי להתגבר על מגבלות אלה, נעשה שימוש בעכברי נוקאאוט תאים מתווכים של קולטן רעלן Alb (TRECK)/SCID להתמיינות in vivo של הפטוציטים אנושיים לא בשלים ויצירת כבד אנושי. תאי גזע כבדיים אנושיים (HpSCs) אכלסו מחדש בהצלחה את הכבד של עכברי Alb-TRECK/SCID שפיתחו אי ספיקת כבד קטלנית לאחר טיפול ברעלן דיפתריה (DT). למודל זה של כבד אנושי בעכברי Alb-TRECK/SCID יהיו יישומים פונקציונליים במחקרים הכוללים מטבוליזם של תרופות ואינטראקציות בין תרופות ויקדם מחקרים אחרים in vivo ו-in vitro.

מבוא

עכברים משמשים בדרך כלל לניסויים פרמצבטיים מכיוון שהמחקר הביו-רפואי בבני אדם מוגבל1; עם זאת, מודלים אלה לא תמיד שימושיים מכיוון שהם עשויים לדמות באופן לא מדויק את ההשפעות שנצפו בבני אדם. רוב התרופות בשימוש רפואי כיום עוברות חילוף חומרים בעיקר בכבד. עם זאת, אותה תרופה יכולה לעבור חילוף חומרים למטבוליטים שונים בכבד של עכברים ובני אדם בגלל הבדלים בין מינים. לפיכך, לעתים קרובות קשה לקבוע במהלך הפיתוח אם תרופה פוטנציאלית מהווה סיכונים כלשהם ליישומים קליניים2,3.

כדי לטפל בבעיה זו, כבדי עכברים "אנושיים" פותחו על ידי גידול תאי כבד אנושיים בתוך עכברים4-6; מודלים אלה מציגים תגובות תרופתיות דומות לאלו שנצפו בכבד האנושי. המודלים העכבריים העיקריים המשמשים כיום ליצירת כבד אנושי כוללים עכברי מפעיל אורופלסמינוגן (uPA+/+)4,7, עכברי fumarylacetoacetate hydrolase (Fah−/−)6, ועכברי תימידין קינאז (TK-NOG) שדווחו לאחרונה.

עם זאת, דיווחים קודמים הראו שתאים או תאי גזע אנושיים מושתלים הם פחות תחרותיים מאשר הפטוציטים אנושיים בוגרים בכבדי עכבר Alb-uPA tg(+/-)Rag2(−/−)8-10. יתר על כן, עכברי Fah−/- מספקים יתרון גדילה רק עבור הפטוציטים מובחנים ולא עבור תאי אב כבד לא בשלים11. השתלת תאי גזע כבדיים אנושיים (HpSCs) בעכברי TK-NOG במעבדה לא הצליחה. לפיכך, לא קיים כיום מודל עכבר שימושי להשתלה יעילה של תאי כבד אנושיים לא בשלים.

לפיכך, פיתחנו מודל עכבר Alb-TRECK/SCID חדשני שניתן לאכלס מחדש ביעילות בהפטוציטים אנושיים לא בשלים. מודל עכבר טרנסגני זה מבטא קולטני גורם גדילה דמוי EGF (HB-EGF) קושרים להפרין אנושי תחת שליטת מקדם אלבומין ספציפי לתאי כבד. לאחר מתן רעלן דיפתריה (DT), עכברים אלה מפתחים דלקת כבד פולמיננטית עקב אבלציה מותנית של הפטוציטים, המאפשרת שהות ושגשוג של תאי תורם12. למרות שהפטוציטים של עכברים הושתלו בהצלחה בעכברי Alb-TRECK/SCID במחקרים קודמים13,14, עדיין לא דווח על יצירת כבד אנושי באמצעות עכברי Alb-TRECK/SCID.

במחקר זה, כבדים אנושיים נוצרו בעכברי Alb-TRECK/SCID באמצעות השתלת HpSCs. כבד אנושי זה מספק סביבה in vivo להתמיינות אוניברסלית של תאי גזע ויכולת לחזות דפוסי חילוף חומרים של תרופות אנושיות ואינטראקציות בין תרופות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הפרוצדורות בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות צער בעלי חיים של אוניברסיטת העיר יוקוהמה.

1. דור של במודל העכבר הפגיע בכבד החריף

  1. הוסף 1 מ"ל של תמיסת 0.85% NaCl phenolized (פנול 0.6 גרם ב 100 מ"ל של תמיסת 0.85% NaCl) עד 1 רעלן דיפתריה מ"ג (DT) כדי להפוך פתרון מניות 1 מ"ג / מ"ל ​​DT. הערה: DT בריכוז של 1 מ"ג / מ"ל ​​ניתן לאחסן כ 2 שנים 3 מעלות צלזיוס עד 8 מעלות צלזיוס.
  2. סדרתי לדלל את פתרון מניות 1 מ"ג / מיליליטר DT 0.3 מיקרוגרם / מיליליטר DT בתמיסת phenolized 0.85% NaCl ולהכין aliquot של פתרון DT 0.3 מיקרוגרם / מיליליטר כפתרון עבודה. הערה: הפתרון עובד זה אמור להיות מוכן טרי.
  3. כדי לערוך ניסויים שימוש במינון sublethal (~ 50 הקטלניות%), לנהל עכברים 8 שבועות בן מנה 1.5 מיקרוגרם / ק"ג של DT.
    1. בצע זריקה intraperitoneal של DT ידי החזקת העכבר שכיבה על הגב והכנס את needlה להלן העיקול של הברכיים, שמאלה או ימינה של קו האמצע. הימנע קו האמצע כדי למנוע חדירה של שלפוחית ​​השתן. זווית את המחט על כ 45 מעלות לגוף.
    2. באמצעות מזרק אינסולין, להזריק עכברים עם 100 μl של המוכן טרי 0.3 מיקרוגרם / מ"ל ​​DT לכל 20 גרם של משקל העכבר. לדוגמה, עכבר 18 גרם צריך לקבל 90 μl של פתרון DT 0.3 מיקרוגרם / מ"ל.
  4. בשעה 48 הזרקת שעות שלאחר DT, לאסוף דם מווריד הזנב על ידי הצבת העכבר בתוך עוצר ומחמם הזנב העכבר באמבט המים 37 מעלות צלזיוס למשך כ 10 דקות כדי להרחיב את כלי הדם. לאחר מכן, לבצע ניק 1-מ"מ ס"מ הזנב 2 מהקצה עם להב אזמל חד לאסוף את הדם עם צינור microcapillary.
    1. צנטריפוגה צינור microcapillary המכיל את הדם ב 1500 XG במשך 5 דקות לאסוף את הסרום על ידי הפרדת גלולת supernatant ותא.
  5. פיפטה 50 μl של 1:20 סרום עכבר מדולל על GOT / AST-PIII מחליק. מדוד את הספיגה של מוצר התגובה (צבע כחול) ב 650 ננומטר באמצעות נתח רב תכליתי אוטומטית יבשה-כימיה על פי הפרוטוקול של היצרן.
    הערה: מתוך לקריאה של aminotransferase aspartate (AST) / transaminase oxaloacetic גלוטמית (GOT) פעילות מוצגת באופן אוטומטי. 2 ימים שלאחר DT זריקה, כ -60% מהעכברים הציג ערכים AST בין 12,000 - 16,000 IU / L ונחשבו סובל מנזק כבד חריפה. עכברים אלו הועברו לכלוב חדש ומשומש כמקבל השתלה תאית.

2. הכנה בתאי גזע אנושית כבדיה

  1. לבודד תאי גזע בכבד אדם מתאי כבד עוברי עיקרי אדם עם סדרן תא באמצעות CDCP1, CD90, ו אנטיגנים תא CD66 להשיג subpopulation CDCP1 + CD90 + CD66-, אז זרע אוכלוסיית התאים המבודדת על קולגן תרבות מנות IV-מצופות, כפי שדווח בעבר 15. השתמש בתאים בכבד עובר עיקריים אדם של עובריגיל בין שבועות 14 ו -18.
  2. אסוף בתאי גזע כבד אנושיים תרבותיים עד 80% - מפגש 90% על תרבות מנות 100 מ"מימ, לשאוב את מדיום התרבות, לשטוף את התאים עם 10 מיליליטר PBS, ולאחר מכן להסיר את PBS. Trypsinize את התאים עם פתרון 0.05% טריפסין / EDTA 2 מ"ל במשך 5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. הערה: תאים בבית יותר מ 90 מפגש% אינם מתאימים השתלת תאים מאז התמיינות תאים עשויה להשפיע יכולת השגשוג שלהם בעכברים.
  3. לפקח על מצב של פיזור התאים תחת מיקרוסקופ. כאשר התאים מופיעים בריחוף או לזרום בחופשיות, לעצור את העיכול אנזימטי על ידי הוספת 8 מיליליטר של DMEM / F12 המכיל 10% FBS.
  4. להשעות את התאים לאט בעזרת פיפטה סרולוגיות 10 מ"ל ולהעביר את התאים לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל. צנטריפוגה התאים למשך 5 דקות ב 100 XG ו -4 מעלות צלזיוס.
  5. בזהירות resuspend התא גלולה ב 10 מ"ל DMEM / F12 המכיל 10% FBS ולקבוע מספרים סלולריים באמצעות תא ספירה מיקרוסקופ.
  6. מחלקים את התאים לתוך 1.0 x 10 6 תאים לכל 50 μl של aliquots PBS עבור כל עכבר הפרט ולאחסן על הקרח עד להשתלה.

3. השתלת Intrasplenic של תאי גזע אנושי כבדיה

  1. מניחים לכלוב נקי על כרית חימום חשמלי 37 ° C.
  2. להרדים את שאיפת isoflurane באמצעות העכבר (1 - 1.5% (כרך / כרך) ב 2 ליטר של חמצן לדקה) על ידי הצבתו מתחת זרבובית. לחלופין, השתמש צינורות המכילים גזה ספוגה isoflurane.
    1. ודא כי העכבר הוא מורדם על ידי צובט את השודד האחורי בקלילות. אם אידיוט ברך מתקבל, למקם את העכבר בחזרה לתא. השתמש במשחת וטרינר על העיניים כדי למנוע יובש לאחר הרדמה.
  3. לגלח את האתר כירורגית באמצעות קוצץ חשמלי ולהחיל 70% (כרך / כרך) אתנול povidone יוד לעקר. ואז לעשות חתך בעור 1-ס"מ בכנף שמאל ממש מתחת לגבול costal של הצלעות, ואחריו חתך עלדופן הבטן, כמו גם את הצפק.
  4. בזהירות לחשוף את הטחול. השתמש במזרק microinjection 100 μl עם מחט 32-G 1/2-inch להזריק ישירות 1.0 x 10 6 בתאי גזע בכבד האדם 50 μl PBS לתוך הטחול של כל עכבר. הטה את המחט בזווית 5 מעלות להזרקה.
    1. ודא כי ועומק הזרקה הוא פחות ממחצית עובי של הטחול. המחט צריכה להיכנס הטחול בקצה אחד (ראש) וכן להפקיד את התאים בקצה השני (הזנב).
  5. כדי למנוע דליפה של התאים לאחר ההזרקה, להפעיל לחץ בעדינות בעזרת האצבע למשך 2 דקות ולאחר מכן להסיר את המחט.
  6. מניח את הטחול בחזרה לתוך גוף העכבר ולסגור את החלל עם תפר ריצה נורמלי השרירים והעור.
  7. מעבירים את העכברים לכלוב מחומם מראש 37 ° C מיד לאחר ההשתלה. כדי להבטיח את העכבר הוא מסוגל לנשום בנוחות, הצב את העכבר על צדו בכלוב,רקת קשר בין מצעי כלוב באתר של ניתוח.
  8. צג העכברים עד ההרדמה פגה כדי להבטיח את התפרים נשארים סגורות העכברים לחזור טרום ניתוח תנאים.
  9. ודא העכברים מסופקים עם מים ומזון שתייה רגילים. אחרי השעה 1, להחזיר את הכלוב לחדר העכבר של מרכז בעלי החיים לפקח על העכברים יומיים.

4. איתור של מושתלי האדם כבדית גזע hepatocytes נגזר-Cell בכבד העכבר

הערה: ההליכים הבאים, להרדים כל בעלי החיים באמצעות מנת יתר של קטמין ו xylazine ואחריו נקע בצוואר הרחם.

  1. ב 4 - 6 שבועות לפרסם ההשתלה, להרדים את העכברים ולפתוח את חלל הבטן על ידי חיתוך cutis בו זמנית fascia באמצעות מספריים כירורגיות.
  2. לנתח את רקמת החיבור מעל הצפק, באמצעות מספריים כמו מפזר, וחתך את הצפק לאורך alba Linea כדי לפתוח את הצפקחָלָל.
  3. הרם את החזה עם מלקחיים, לנקב את הסרעפת, ולחתוך בכל צד של עצם החזה עד דרך אבנט צוואר הרחם.
  4. לנתק את הווריד הנבוב בצד החזה של הכבד ולמשוך הוושט דרך הכבד לכיוון הקדמי. הסר את הסרעפת על מנת להסיר את הכבד.
    הערה: הקפד לשמור את קצות מספריים הצביע כלפי מעלה על מנת למנוע כל נזק לאיברים החזה מתחת. התימוס יש נטייה להיצמד מדי פעם בצד הגבי של החזה וזה יש להימנע בזהירות.
  5. באמצעות הסרעפת כידית, מתחיל ללחוץ על הכבד מתוך חלל הבטן. הווריד הנבוב הפנים יקיים כבד במקום. חותכים את הווריד הנבוב פנים; להיזהר שלא לשחרר את הכליה התקינה בטרם עת.
    הערה: יש עכברים כבדים ארבעה אונות מורכב אונת חציון, באונה שמאלית, אונה ימנית, ואונת caudate. את כיס המרה מושעה ב הסתעפות קטנה שלאונת החציון.
  6. הפרד את האונות אחד מהשני בצומת והטמעת אותם בטמפרטורת חיתוך אופטימלי מתחמת (אוקטובר) על פי הפרוטוקול של היצרן. Freeze ב- OCT המכיל את רקמת הכבד של רשתות מתכת על cryostat.
  7. חותכים חלקים מדגם בעובי של 5 מיקרומטר באמצעות cryostat ב C -18 ° ולעגן אותם בשקופיות מיקרוסקופ RT. אחסן את המניה ב -80 ° C. הכן את השקופיות עבור hematoxylin ו eosin (H & E) מכתים immunofluorescence פי נהלים שדווח בעבר 16.

5. איתור של הפרשת אלבומין אדם חישוב שיעור Chimeric

  1. כדי למדוד כינון מחדש כבד אנושי, לבצע אלבומין האנושי ELISA שימוש בסרום וערכת ELISA אדם אלבומין פי הוראות היצרן.
  2. חשב את שיעור כימרי הכבד האנושי על ידי בזמן אמת ניתוח PCR של רמות ביטוי בכבד השלם-אנושי. קבע את האקס יחסיתpression יחס רמה תקטין אדם ספציפי כדי יקטין צלב אדם ועכבר (1 יחס) והיחס של אקטין ספציפי בעכבר כדי יקטין צלב אדם ועכבר (יחס 2). שיעור כימרי מחושב כיחס 1 / (יחס 1 + יחס 2).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

Alb-TRECK / hepatocytes עכברי SCID המבטא את גן HB-EGF קולטן DT אדם בשליטת אמרגן אלבומין ולהציג השפעות ציטוטוקסיות הבאים DT ממשל 12. כדי להעריך את ההשפעות של טיפול DT על פגיעה בכבד, מינונים DT של 1.5 מיקרוגרם / ק"ג הוזרקו בן 8 שבועות Alb-TRECK / SCID עכברים ואת שינויים פתולוגיים בממשל הכבד 48 שעות שלאחר DT הוערכו היסטולוגית. לעומת עכברי שליטה (שלא טופלו ב- DT), העכברים שטופלו DT הציגו ארכיטקטורה כבדה מאורגנת מראה תיקון עבור גודש עם פ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי הכבד העכבר ניתן אוכלס מחדש עם hepatocytes אדם, כולל hepatocytes מבוגר בתאי גזע בכבד שגשוג 17. כבדי אוכלס מחדש אלה שימשו דגמים ניסיוניים פרה-קליניים עבור בדיקות סמים מטבוליזם גילוי ופיתוח תרופות 18; בנוסף, סיפקו להם בסביבה vivo עבור התבגרות התא והבחנה 19. המטרה הראשית של המחקר הנוכחי הייתה ליצור מודל עכבר מחלת כבד רומן שאפשר התפשטות hepatocyte בשלה אדם, התבגרות, והבחנה, לרכישת פעילות חילוף חומרי סמים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין אינטרסים פיננסיים מתחרים לחשוף.

תודות

ברצוננו להודות לפרויקט הגנטיקה של היונקים, המכון המטרופוליטני למדעי הרפואה של טוקיו, על אספקת העכברים. אנו מודים גם ל-S. Aoyama ו-Y. Adachi ממכון המחקר ADME (ספיגה, הפצה, מטבוליזם, הפרשה) וטוקסיקולוגיה, Sekisui Medical Company Ltd., יפן, ול-K. Kozakai ו-Y. Yamada על הסיוע בניתוח LC-MS/MS. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי מענקי סיוע ממשרד החינוך, התרבות, הספורט, המדע והטכנולוגיה (MEXT), יפן ל-Y-W.Z. (18591421, 20591531 ו-23591872); על ידי הפרויקט החדשני והיזמי של ג'יאנגסו להכנסת כישרונות ברמה גבוהה ופרויקט תכנון המדע והטכנולוגיה של ג'יאנגסו (BE2015669); ועל ידי מענקים ל-H.T. לקידום אסטרטגי של מחקר ופיתוח חדשני (S-innovation, 62890004) מסוכנות המדע והטכנולוגיה היפנית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אלבומין אנושיסיגמאA6684עכבר
אנושי CK19עכבר דאקוM088801
גרעינים אנושייםMilliporeMAB1281עכבר
אנושי CK8/18ProgenGP11חזיר ניסיונות
CDCP1Biolegend324006עכבר
CD90BD559869 עכבר
CD66BD551479עכבר
GOT/AST-PIIIFujifilm14A2X10004000009
DMEM/F-12Gibco11320-033
FBSBiowestS1520
0.05% טריפסין-EDTA Gibco25300-054
רעלן דיפתריהSigmaD0564-1MG
אלבומין אנושי ELISA ערכתBethyl LaboratoriesE88-129
מזרק (1 מ"ל)TerumoSS-01T
32G 1/2 אינץ' מחטTSKPRE-32013
O.C.T.Compound (118 מ"ל)Sakura Finetek יפן4583
סדרן תאים מהיר MoFloבקמן קולטרB25982
DRI-CHEM 7000Fujifilm14B2X10002000046

מקורות

  1. Muruganandan, S., Sinal, C. Mice as clinically relevant models for the study of cytochrome P450-dependent metabolism. Clin. Pharmacol. Ther. 83, 818-828 (2008).
  2. Nishimura, T., et al. Using chimeric mice with humanized livers to predict human drug metabolism and a drug-drug interaction. J. Pharmacol. Exp. Ther. 344, 388-396 (2013).
  3. Suemizu, H., et al. Establishment of a humanized model of liver using NOD/Shi-scid IL2Rgnull mice. Biochem. Biophys. Res. Commun. 377, 248-252 (2008).
  4. Tateno, C., et al. Near completely humanized liver in mice shows human-type metabolic responses to drugs. Am. J. Pathol. 165, 901-912 (2004).
  5. Hasegawa, M., et al. The reconstituted 'humanized liver'in TK-NOG mice is mature and functional. Biochem. Biophys. Res. Commun. 405, 405-410 (2011).
  6. Azuma, H., et al. Robust expansion of human hepatocytes in Fah−/−/Rag2−/−/Il2rg−/− mice. Nat. Biotechnol. 25, 903-910 (2007).
  7. Rhim, J. A., Sandgren, E. P., Degen, J. L., Palmiter, R. D., Brinster, R. L. Replacement of diseased mouse liver by hepatic cell transplantation. Science. 263, 1149-1152 (1994).
  8. Haridass, D., et al. Repopulation efficiencies of adult hepatocytes, fetal liver progenitor cells, and embryonic stem cell-derived hepatic cells in albumin-promoter-enhancer urokinase-type plasminogen activator mice. Am. J. Pathol. 175, 1483-1492 (2009).
  9. Sharma, A. D., et al. Murine embryonic stem cell-derived hepatic progenitor cells engraft in recipient livers with limited capacity of liver tissue formation. Cell. Transplant. 17, 313-323 (2008).
  10. Peltz, G. Can 'humanized' mice improve drug development in the 21st century. Trends Pharmacol. Sci. 34, 255-260 (2013).
  11. Zhu, S., et al. Mouse liver repopulation with hepatocytes generated from human fibroblasts. Nature. 508, 93-97 (2014).
  12. Saito, M., et al. Diphtheria toxin receptor-mediated conditional and targeted cell ablation in transgenic mice. Nat. Biotechnol. 19, 746-750 (2001).
  13. Ishii, T., et al. Transplantation of embryonic stem cell-derived endodermal cells into mice with induced lethal liver damage. Stem Cells. 25, 3252-3260 (2007).
  14. Machimoto, T., et al. Improvement of the survival rate by fetal liver cell transplantation in a mice lethal liver failure model. Transplantation. 84, 1233-1239 (2007).
  15. Taniguchi, H., Zheng, Y. -W. Human hepatic stem cell, method for preparation of the same, method for induction of differentiation of the same, and method for utilization of the same. Japan Patent. , 5822287 (2015).
  16. Zhang, R. -R., et al. Human hepatic stem cells transplanted into a fulminant hepatic failure Alb-TRECK/SCID mouse model exhibit liver reconstitution and drug metabolism capabilities. Stem Cell Res. Ther. 6, 1-12 (2015).
  17. Strom, S. C., Davila, J., Grompe, M. Chimeric Mice with Humanized Liver: Tools for the Study of Drug Metabolism, Excretion, and Toxicity. Hepatocytes. , Methods in Molecular Biology; 640. Springer. 491-509 (2010).
  18. Zhang, D., Luo, G., Ding, X., Lu, C. Preclinical experimental models of drug metabolism and disposition in drug discovery and development. Acta Pharm. Sin. B. 2, 549-561 (2012).
  19. Nowak, G., et al. Identification of expandable human hepatic progenitors which differentiate into mature hepatic cells in vivo. Gut. 54, 972-979 (2005).
  20. Naglich, J. G., Metherall, J. E., Russell, D. W., Eidels, L. Expression cloning of a diphtheria toxin receptor: identity with a heparin-binding EGF-like growth factor precursor. Cell. 69, 1051-1061 (1992).
  21. Mitamura, T., Higashiyama, S., Taniguchi, N., Klagsbrun, M., Mekada, E. Diphtheria toxin binds to the epidermal growth factor (EGF)-like domain of human heparin-binding EGF-like growth factor/diphtheria toxin receptor and inhibits specifically its mitogenic activity. J. Biol. Chem. 270, 1015-1019 (1995).
  22. Liu, Y., Yang, R., He, Z., Gao, W. -Q. Generation of functional organs from stem cells. Cell Regener. 2, 1(2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

עכברי Alb-TRECK/SCIDטיפול ברעל דיפתריהמודל כבד אנושיטכניקת הזרקה לסבך (Spleen)הליך השתלת תאיםהפרשת אלבמין אנושירמת התאכלוס מחדש של הכבדמודל עכבר כימרימחקרי מטבוליזם של תרופות
דור של כבד עכבר אנושי באמצעות תאי גזע אנושי כבדיה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.