הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הכנת מושבות אחת-עוקבה טיפול הורמונלי של דבורי הדבש Worker לנתח Associated פיזיולוגיה עם תפקיד ו / או המערכת האנדוקרינית

15.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/54240

⸱

6 בספטמבר 2016

 ,  , 
1Department of Biological Sciences, Graduate School of Sciences, The University of Tokyo, 2Faculty of Pharmaceutical Sciences, Doshisha Women's College

במאמר זה

סיכום

כאן אנו מתארים הפרוטוקול המפורט שלנו לעריכת מושבות דבורים חד עוקבה - כלי שימושי לניתוח הפיסיולוגיה עובדת הקשורים התפקיד. כמו כן, אנו מתארים פרוטוקולים מפורטים לטיפול עובדים עם הורמון נעורי ecdysone להעריך את המעורבות של הורמונים אלה בויסות התנהגות עובד ו / או פיזיולוגיה.

תקציר

עובדי דבורי הדבש עוסקים במשימות שונות הקשורות לשמירה על פעילות המושבה. משימות העובדים משתנות בהתאם לגילם (חלוקת עבודה תלוית גיל). עובדים צעירים עוסקים בטיפול בדגים (דבורים אחיות), בעוד שעובדים מבוגרים יותר עוסקים בחיפוש אחר צוף ואבקה (מלקטים). הפיזיולוגיה של העובדים משתנה בקשר לשינוי תפקיד זה. לדוגמה, התפקיד העיקרי של בלוטות ההיפופרינגיאליות (HPGs) משתנה מהפרשת חלבוני מזון מלכות עיקרי (MRJPs) להפרשת אנזימים מטבוליים של פחמימות. מכיוון שמשימות העובדים משתנות ככל שהעובדים מזדקנים במושבות טיפוסיות, קשה להבחין בין השינויים הפיזיולוגיים המתרחשים עם ההזדקנות לבין אלה המתרחשים עם שינוי התפקיד. כדי לחקור את השינויים הפיזיולוגיים ברקמות העובדים, כולל HPGs, בקשר לשינוי התפקיד, יהיה שימושי לתמרן את אוכלוסיית מושבות דבורי הדבש על ידי הכנת מושבות חד-קבוצתיות שבהן עובדים כמעט באותו גיל מבצעים משימות שונות. כאן אנו מתארים פרוטוקול מפורט להכנת מושבות עוקבה אחת לניתוח זה. שישה עד שמונה ימים לאחר הכנת מושבה של קבוצה אחת, מופיעים במושבה מלקטים מוקדמים המבצעים משימות חיפוש מזון מוקדם מהרגיל. תוצאות מייצגות הצביעו על שינויים הקשורים לתפקיד בביטוי הגנים של HPG, מה שמרמז על תפקוד HPG הקשור לתפקיד. בנוסף למניפולציה של אוכלוסיית המושבות, ניתוח המערכת האנדוקרינית חשוב לחקירת פיזיולוגיה הקשורה לתפקיד. כאן, אנו מתארים גם פרוטוקול מפורט לטיפול בעובדים עם 20-הידרוקסיאקדיזון (20E), צורה פעילה של אקדיזון, ומתופרן, אנלוגי להורמון נעורים. שיעור ההישרדות של הדבורים שטופלו היה מספיק כדי לבחון את ביטוי הגנים ב-HPG. שינויים בביטוי הגנים נצפו בתגובה לטיפול ב-20E ו/או מתופרן, מה שמרמז על כך שטיפולים הורמונליים גורמים לשינויים פיזיולוגיים של ה-HPG. פרוטוקול הטיפול ההורמונלי המתואר כאן מתאים לבחינת ההשפעות ההורמונליות על הפיזיולוגיה של העובדים.

מבוא

דבורת הדבש האירופית, שהאפיס Apis, הוא חרק eusocial עם חברה מאורגנת מאוד 1. דבורי עבודה (כת עבודה) עוסקים משימות שונות כדי לשמור על פעילות מושבה, ומשימות אלה לשנות בהתאם לגיל של דבורת הדבש עובד לאחר eclosion, אשר נקרא חלוקה הקשורות לגיל העבודה 2-4. עובדים צעירים (<13 ימים) לטפל גוזלים בכוורת על ידי הפרשת מזון מלכות (דבורי אחות), ואילו עובדי מבוגרים (> 15 ימים) לאסוף צוף ואבקה מחוץ לכוורת (לקטים) 2-4. הפיזיולוגיה של העובדים משתנה בשיתוף עם משמרת את התפקיד הזה. לדוגמא, הפונקציה של בלוטות hypopharyngeal (HPGs), לזווג בלוטות אקסוקרינית הממוקמות בראש, שינויים בשיתוף עם מעבר התפקיד מ סיעודי ליקוט 2,5. HPGs דבורה מטפל בעיקר לסנתז חלבוני מזון המלכות גדולים, המהווים מרכיבים עיקריים של חלב דבורה. מצד השני, forager HPGs בעיקרלסנתז אנזימים חילוף חומרים של פחמימות, כגון-glucosidase α III, לעבד צוף לתוך דבש ידי המרת סוכרוז לגלוקוז ופרוקטוז. המחקרים הקודמים שלנו גילו כי הביטוי של mrjp2, מקודד חלבון מזון מלכות גדול, Hbg3, מקודד-glucosidase α III, שינויים במהלך תפקיד המשמרת 6-9.

כדי לקבוע אם השינויים הפיסיולוגיים ברקמות העובד, לרבות HPGs, קשור בתפקיד המשמרת או עם הגיל של העובדים, זה יהיה שימושי כדי לתפעל את רכב האוכלוסייה של מושבת דבורת דבש, כגון להכין-עוקבה יחידה מושבות בה עובדים של כמעט בני אותו גיל לבצע משימות שונות 10,11. רובינסון et al. (1989) תיאר שיטה להקמת מושבה אחת-עוקבה 10. מושבות קוהורט יחיד בתחילה מהוות מלכה 0-2 יום עובדים ישנים. ימים ספורים לאחר הקמת המושבות, עובדי ALMost באותו הגיל להניח משימות שונות. חלק מהעובדים לבצע משימות סיעוד כמו במושבות טיפוסיות, ואילו עובדים אחרים לבצע משימות ליקוט מזון מוקדם מהרגיל ולכן נקראים לקטים מוקדמים. ג'ין השוואות ביטוי בין דבורי אחות לקטים מוקדמים תספקנה מידע שימושי על הפיסיולוגיה קשור התפקיד של רקמות עובדים 12-16. כאן אנו מתארים פרוטוקול מפורט להכנת מושבות-עוקבה אחת לניתוח של משחק תפקידים ו / או גיל הקשורים לפיזיולוגיה של HPGs 16. כמו כן, אנו מתארים בקצרה כיצד לבחון את ביטוי הגנים של mrjp2 ו Hbg3 ידי תגובת שרשרת שעתוק-פולימראז הפוך כמותית (RT-PCR) להעריך פיזיולוגיה HPG.

בנוסף הניתוח של פיזיולוגיה עובד במושבות חד עוקבה, הבדיקה של מערכת האנדוקרינית חשובה לניתוח מנגנוני הוויסות של פיזיולוגיה עובדים הקשורים תפקיד. הורמון נעורים (JH), אשר known כמו ההורמון 'סטטוס קוו' ב זחלי חרקים, מאיץ את המעבר בתפקיד מ סיעוד לחפש מזון דבורים עובדים 11. יתר על כן, ecdysone, אשר ידוע בתור הורמון השרה במהלך המטמורפוזה, עשוי להיות מעורב תפקיד המשמרת כמו גנים המקודדים מולקולות איתות ecdysone באים לידי ביטוי בגופי הפטריות, מרכז גבוה של המוח עובד 17-19. לכן, אנו גם מתארים את הפרוטוקול המפורט השתמש במחקר הקודם שלנו 16 לטיפול עובדים עם 20E, שהינה בעלת צורה פעילה של ecdysone, ו methoprene, אנלוג JH, לניתוח של שפעת המערכת האנדוקרינית על פיזיולוגית HPG (ביטוי של mrjp2 ו Hbg3).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הכנת מושבות אחת-עוקבה

  1. כן שלוש מושבות דבורים ליצור שתי מושבות האחת-עוקבה להשיג מספר מספיק של עובדים יצאו זה עתה.
    1. בדקו כמה גלמים בתאים ההיקפיים כתרי המסרקים יש עיניים חומות לציפורן פיגמנט ידי פתיחת המסרקים כתרים באמצעות פינצטה. אם גלמים אלה קיימים בתאי מסרק פריפריה, רוב הגלמים של המסרקים כולה יצא ב כ 1-3 ימים.
    2. בהמשך לכך, לאסוף את המסרקים המכילים גלמים אלה אחרי הכל הדבורים הבוגרות החסידות הוסרו עם מברשת, ומערבבים מסרקים משלוש המושבות למזער שונה בין מושבות.
  2. מניח את המסרקים שנאספו תיבת כוורת ריקה לדגור על 33 מעלות צלזיוס מתחת בתנאי לחות (לחות יחסית> 60%). אסוף כ -6,000 עובדים עתה הגיח מעל 3 ימים (3,000 עובדים לכל מושבה) ממסרקי שנאספו.
  3. לקבוע את הכמות וורקrs לפי המשקל של חמישה פועלים עתה הגיח שנאספו באקראי ממושבות unmanipulated.
    1. לשקול חמש פועל עתה הגיח שנאספו באקראי ממושבות unmanipulated באמצעות ומכונות שקילות.
      הערה: המשקל של חמישה פועלים החדשים שנוצרו בסופו של דבר בדרך כלל 500-600 מ"ג.
    2. להעריך את כמות העובדים שנאספו על ידי חלוקת המשקל של העובדים שגבו המשקל הממוצע של חמישה פועל יצאו זה עתה.
  4. החל סימני צבע על thoraces של כ -1,800 עובדים (900 עובדים לכל מושבה) באמצעות סמני צבע פוסטר על בסיס מים.
    הערה: סמן רחיץ אשר משמש כדי להחיל את הצבע מופיע בטבלה של חומרים.
  5. הצג מלכה וכ -3,000 העובדים הישנים 0-2 היום לתיבת כוורת חדשה המכילה שני מסרקים, מנה אחת של דבש מסרק המכיל ואבקה כמו מזונות משומרים ועוד מסרק ריק הטלה ידי המלכה. אסוף את המסרק המכיל fr דבש ואבקת פרחיםom אחר מושבת unmanipulated אחרי כל הדבורים החסידים יוסרה.
    הערה: שימוש תיבת כוורת גרעינית (תיבת כוורת בגודל קטנה) מומלץ.
  6. אסוף דבורי אחות לקטים מוקדמים עם סימני צבע 6 עד 8 ימים לאחר יצירת מושבות האחת-עוקבה.
    1. כדי לאסוף דבורי אומנות, להרים עובדים כי טמנו את ראשיהם לתוך תאים מסרקים לטפל של הגוזלים. להשתמש בפינצטה כדי לאסוף דבורי אחות מסרקים המכילים עובדים גוזלים ומבוגרים רבים.
      הערה: אם HPGs עובדים שנאספו מפותחים כאשר גזור כמתוארים בשלב 1.7, עובדים אלה מוגדרים דבורי אומנות. החזקת thoraces ידי פינצטה מומלץ להרים עובדים מהמסרקים.
    2. כדי לאסוף לקטים, השתמש נטו חרקים ללכוד עובדים לחזור הכוורות שלהם עם המון אבקה על רגליהם האחוריות.
      הערה: אם HPGs העובדים שנתפסו מופיעים מצומק כאשר גזור כמתואר בשלב 1.7, עובדים אלה מוגדרים הלקטים.
  7. ClasSify HPG לשלוש קבוצות, 'פותח', 'ביניים', ו 'שהתכווץ' על ידי לנתיחה תחת סטראו.
    1. להרדים 10-15 דבורים בתוך כלוב חרקים במקרר למשך 10-15 דקות עד דבורים לא יכול לעוף או ללכת. לאחר מכן, להעביר דבורים על קרח ולהשלים את ההרדמה על קרח למשך 5 דקות.
      הערה: זה לוקח בערך 15-20 דקות בסה"כ להגיע להרדמה. אם זמן ההרדמה צריך להתקצר, מספר דבורים בתוך כלוב צריך להיות מופחת 1-3 דבורים בכל כלוב.
    2. לנתח את הראש מהגוף עם מספריים פינצטה. תקן את הראש על שעוות שיני דגש על צלחת פטרי עם סיכות. הכנס שתי סיכות לתוך הבסיסים של האנטנות לתקן את הראש. משרים ראשי קבוע מלוחים חרקים (130 mM NaCl, KCl 5 מ"מ, 1 מ"מ CaCl 2).
    3. הסר את ההיבט הקדמי של לציפורן של הראש באמצעות פינצטה בסדר וסכין כירורגית תחת מיקרוסקופ משקפת.
      הערה: HPGs ניתן למצוא בקלות ראש לאחר הסרת גuticle. HPG הוא איבר botryoid שקיים סביב המוח בראשו.
    4. הסרת הרקמה קנה הנשימה שהנה רקמה קרומית לבנה מתחת לציפורן. לאחר מכן, לנתח את HPGs מהראש ידי משיכת אותם לאט עם פינצטה.
    5. לסווג HPGs עם acini גדול עגול כמו 'פותח'. לסווג HPGs עם acini קטן ומעוות כמו 'שהתכווצה'. לסווג HPGs מתאים לא 'פותח' ולא 'שהתכווצתי' כמו 'ביניים'.
      הערה: תמונות נציג המראות שלושה שיעורים אלה של מדינות HPG מסומנים באיור 2.
    6. נושא 'פותח' ו HPGs 'שהתכווצה' כדי מיצוי RNA כמו 'HPGs דבורה מטפלת' ו 'HPGs forager', בהתאמה, ולהשוות ביטוי גנים HPGs בין אחות דבורים הלקטים (סעיף 4).

2. הזרקה של 20E

  1. אסוף דבורי אומנות ממושבות טיפוסיות כמו described בהליך 1.6.1.
    הערה: HPGs לא יכול להיבחן מהדבורים כמו הדבורים יהיה גודלו.
  2. להרדים את הדבורים ב 4 ° C במקרר (לא על הקרח).
    הערה: זה לוקח בערך 30 דקות כדי להשיג הרדמה. אם זמן ההרדמה מתקצר, מספר דבורים בכלוב צריך להיות מופחת 1-3 דבורים בכל כלוב.
  3. בעזרת פינצטה, לשתק את הדבורים על שעוות שיני דגש על צלחת פטרי.
  4. להזריק 1 μl של פתרון 20E לתוך ההיבט הקדמי של הראש באמצעות טיפ הזרקה עשוי micropipette נימים מכויל באמצעות חולץ מחט זכוכית.
    1. ממיסים 20E מלוחים אתנול-חרקים (130 mM NaCl, KCl 5 מ"מ, 1 מ"מ CaCl 2) תערובת (1: 4) ב 2.5 מיקרוגרם / μl.
    2. חבר את קצה ההזרקה לצינור גומי, ולהתחבר טיפ micropipette צהוב לצד השני של הצינור.
    3. מקום 1 μl של פתרון 20E על parafilm באמצעות micropipette, להחזיק את קצה micropipette צהוב פה,d לצייר הפתרון לתוך קצה ההזרקה.
    4. הכנס את קצה ההזרקה לתוך הבסיס של האנטנות, ולהזריק את הפתרון על ידי נושבת קצה micropipette הצהוב.
      ההערה: הפרוטוקול שמוצג צעד זה הוא שיטת הזרקת הנציג, אבל השימוש של מכונת ההזרקה האוטומטית מומלץ עבור בטיחות כמו 20 הכרחית.
  5. אחורי הדבורים המוזרקים בכלובי חרקים ב 33-36 מעלות צלזיוס (הטמפרטורה האידיאלית הם 35 מעלות צלזיוס) בתנאים כהים ולחים (> 60% לחות יחסית) עבור 1 או 3 ימים. אספקת תערובת דבש-מים (1: 1) כדי הדבורים. במידת הצורך, לספור לשרוד דבורים לאחר ההזרקה.

3. יישום Methoprene

  1. אסוף את המסרקים המכילים גלמי ממושבות בדרך כלל אחרי כל הדבורים הבוגרות החסידות תוסרנה עם מברשת. הדגירה המסרקת ב- C ° 33-36 (הטמפרטורה האידיאלית היא 35 מעלות צלזיוס) בתנאי לחות (לחות יחסית> 60%) בהיקף של עד 1 יום.
  2. אסופה דבורים חדשים הגיחו מסרקים שנאספו ולהחיל סימני צבע כדי thoraces שלהם באמצעות צבע פוסטר כמתואר בפרוטוקול להכנת מושבות האחת-עוקבה. החזר את הדבורים המסומנים למושבות שלהם.
  3. לאחר 6 ימים, לאסוף עובדים צבועים (6 יממה) מן המושבות. תרים עובדים צבועים מהמסרקים ידי החזקת thoraces שלהם עם פינצטה.
  4. להרדים את הדבורים ב 4 ° C במקרר (לא על הקרח) כמו בפרוצדורה 2.2. בעזרת פינצטה, לשתק את הדבורים על שעווה שיניים דגש על צלחת פטרי ולהחיל 1-5 μl של פתרון methoprene (50-250 מיקרוגרם / μl) מומס אצטון כדי ראשיהם באמצעות micropipette. השתמש קצה מסנן כי הוא עמיד בפני אצטון.
    הערה: אצטון יכול להיות השפעות מזיקות על דבורים מובילה למוות. אם התמותה של דבורים הגבוהות הוא ציין, צמצום היקף אצטון 1 μl לכל הפחות מומלץ.
  5. אחורי הדבורים בכלובי חרקים ב 33-36 ° C (t האידיאליemperature הוא 35 מעלות צלזיוס) במשך 7 ימים בתנאים כהים ולחים (לחות יחסית> 60%). אספקת תערובת דבש-מים (1: 1) כדי הדבורים. במידת הצורך, לספור לשרוד דבורים לאחר יישום מקומי.
    הערה: במאמר זה, דבורים לשרוד נספרים 7 ימים לאחר היישום (לוח 3).

הפקת 4. רנ"א כמותי RT-PCR

  1. להרדים דבורים לנתח HPGs כמתואר 1.7.1 צעדים 1.7.4.
  2. אסוף את HPGs גזור בצינור microcentrifuge על קרח ולאחסן יבש ב -80 ° C עד השימוש.
  3. להוסיף 400 μl של מגיב עבור denaturation חלבון.
    הערה: מגיב זה זמין מסחרית (ראו טבלה של חומרים).
  4. Homogenize רקמות HPG באמצעות יד שנערכה מערבל חשמלי עם עלי המגון שמתאים בתוך צינור microcentrifuge. Homogenize במהירות סיבוב של כ 300 סל"ד במשך 1 דקות על הקרח לשבור ותאי רקמות lyse.
    הערה: מערבל חשמלי כף יד זמין מסחרית (ראו טבלה של חומרים).
  5. הוסף 80 μl כלורופורם ומערבבים היטב. דגירה במשך 5 דקות ב RT.
  6. צנטריפוגה צינורות microcentrifuge ב 14,170 XG במשך 15 דקות ב 4 ° C.. מעביר את השלב המימי לצינור חדש. הוסף נפח שווה של isopropanol ו 1 גליקוגן μl (5 מ"ג / מ"ל). דגירה ב -20 ° C עבור 20 דקות לפחות.
  7. צנטריפוגה צינורות microcentrifuge ב 14,170 XG במשך 10 דקות ב 4 ° C ולהסיר את supernatant.
  8. להוסיף 400 μl של אתנול 75% על גלולה ומערבבים היטב, בצנטריפוגה צינורות microcentrifuge ב 14,170 XG במשך 15 דקות ב 4 ° C, ולהסיר את supernatant. חזור על נהלים אלה פעם נוספת.
  9. אוויר יבש גלולה במשך 5-10 דקות ולאחר מכן לפזר אותו 10 מים μl RNase חינם.
    הערה: ייבוש מלא של הגלולה עלול לגרום insolubilization של גלולת RNA במים. לפיכך, גלולה שהוא רטוב מעט מתאיםהֲמָסָה.
  10. למדוד את ריכוז RNA באמצעות ספקטרופוטומטר כגון NanoDrop או דומה.
  11. פנקו 500 ננוגרם של רנ"א הכל עם 2.0 U של DNase אני על ידי דוגרים על 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות כדי לבזות כל הדנ"א הגנומי מזהמים.
  12. Reverse-לתמלל 200 ננוגרם של DNase אני שטופלתי RNA ולבצע בזמן אמת PCR באמצעות ערכות זמינות מסחרי (ראה הרשימה בטבלה של חומרים ריאגנטים) ו פריימרים גן ספציפי (mrjp2; 5'-AAATGGTCGCTCAAAATGACAGA-3 ', ו -5 '-ATTCATCCTTTACAGGTTTGTTGC-3 ", Hbg3; 5'-TACCTGGCTTCGTGTCAAC-3' 5'-ATCTTCGGTTTCCCTAGAGAATG-3 '). בצעו את PCR כדלקמן: [95 ° C x 30 שניות + (95 מעלות צלזיוס x 5 שניות + 60 ° C x 15 שניות + 72 ° C x 20 שניות) x 45-55 מחזורים].
  13. לנרמל את כמות תעתיק עם זה של F2-1α גורם התארכות (EF1α˗F2) או 49 חלבון ריבוזומלי (rp49) 9,16,21,22. גנים אלו הם g המלא אמיןEnes לניתוח ביטוי גנים HPGs באמצעות qRT-PCR.
  14. בצע שני זנב מבחן t לזהות את ההבדלים המשמעותיים בין שתי קבוצות ניסוי (דבורי אומנות לעומת לקטים מפותחים לגילו, דבורים שטופל 20E לעומת דבורים שליטים, ודבורים שטופל methoprene לעומת דבורים מלאים) באמצעות תוכנה סטטיסטית.
    הערה: אם F-מבחן מניח שונויות, מבחן t ניתן להשתמש. אם לא, יכול לשמש מבחן t של וולש.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

סקירה כללית של פרוטוקול להכנת מושבות אחת-עוקבה מתוארת באיור 1A. זמן-במהלך הניסויים מלהכין מושבות אחת-עוקבה לדגום אוסף מוצג באיור 1B. עובד כי בקריטריונים התנהגותיים להתנהגות סיעוד או התנהגות שיחור מזון נאספו ממושבות יחידה עוקבה, ופיתוח HPG נאמד ב עובד אלה טבלה 1 מציגה את סיווג פיתוח HPG לשלוש קבוצות.; 'פותח', 'ביניים', ו 'שהתכווצו' בהתאם לגודל. תמונות נציג מראות כיתות שלושת ד...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הכנת מושבות אחת-עוקבה

כאן תיארנו את פרוטוקול השתמשו במחקר הקודם שלנו 16 להכין מושבות אחת-עוקבה לניתוח של הפיזיולוגיה HPG הקשורים משמרת בתפקיד הדבורים הפועלות. הדבורים המטפלות ואת הלקטים בוגרת לגילה, שלעתים עומדת בקריטריונים המתוארים נהלים 1.6-1.7 ואיור 2 נצפו מושבות אחת-עוקבה (טבלה 1). הצילומים באיור 2 יהיו שימושיים בסיווג HPG מקובע כהפניה. קריטריונים ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מענק סיוע למחקר מדעי (B) ומענק סיוע למחקר מדעי בתחומים חדשניים 'אתולוגיה מולקולרית של מערכות' ממשרד החינוך, התרבות, הספורט, המדע והטכנולוגיה (MEXT) של יפן. T.U. זכתה במענק סיוע מהאגודה היפנית לקידום המדע למדענים צעירים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
עט סמן UNIPOSCAמיצובישיPC-5Mליישום סימנים על דבורים   
20-hydroxyecdysoneSigma AldrichH5142
MethopreneSigma Aldrich33375
חרק מקרה רבייהIRIS OHYAMACP-SS
Electromotion mixier ISO23M-R25הומוגניזציה של רקמות
TRIZol ReagentInvitrogen15596-026המגיב למיצוי RNA כולל
DNase I של Takara2270A
PrimeScript RTTakaraRR037Aהמגיב לשעתוק הפוך
SYBR Premix ExTaq IITakaraRR820Aהמגיב ל-PCR
בזמן אמת LightCycle 1.2 InstrumentRoche12011468001 המכשיר לנימים PCR
LightCycle בזמן אמת (20μ l)Roche4929292001את החומר ל-PCR בזמן אמת
ערכת ריאגנטים

מקורות

  1. Wilson, E. O. The insect societies. , Harvard university press. (1971).
  2. Winston, M. L. The biology of the honey bee. , Harvard university press. (1987).
  3. Lindauer, M. Ein Beitrag zur Frage der Arbeitsteilung im Bienenstaat. Zeitschrift für vergleichende Physiologie. 34 (4), 299-345 (1952).
  4. Sakagami, S. Untersuchungen uber die Arbeitsteilung in einen Zwergvolk der Honigbienen. Beitrage zur Biologie des Bienenvolkes, Apis mellifera L. I. Jap J Zool. 11, 117-185 (1953).
  5. Kubo, T., et al. Change in the expression of hypopharyngeal-gland proteins of the worker honeybees (Apis mellifera L.) with age and/or role. J Biochem. 119 (2), 291-295 (1996).
  6. Ohashi, K., Natori, S., Kubo, T. Change in the mode of gene expression of the hypopharyngeal gland cells with an age-dependent role change of the worker honeybee Apis mellifera L. Eur J Biochem. 249 (3), 797-802 (1997).
  7. Ohashi, K., Natori, S., Kubo, T. Expression of amylase and glucose oxidase in the hypopharyngeal gland with an age-dependent role change of the worker honeybee (Apis mellifera L). Eur J Biochem. 265 (1), 127-133 (1999).
  8. Ohashi, K., Sawata, M., Takeuchi, H., Natori, S., Kubo, T. Molecular cloning of cDNA and analysis of expression of the gene for alpha-glucosidase from the hypopharyngeal gland of the honeybee Apis mellifera L. Biochem Biophys Res Commun. 221 (2), 380-385 (1996).
  9. Ueno, T., Nakaoka, T., Takeuchi, H., Kubo, T. Differential gene expression in the hypopharyngeal glands of worker honeybees (Apis mellifera L.) associated with an age-dependent role change. Zoolog Sci. 26 (8), 557-563 (2009).
  10. Robinson, G. E., Page, R. E., Strambi, C., Strambi, A. Hormonal and genetic control of behavioral integration in honey bee colonies. Science. 246 (4926), 109-112 (1989).
  11. Sullivan, J. P., Fahrbach, S. E., Robinson, G. E. Juvenile hormone paces behavioral development in the adult worker honey bee. Horm Behav. 37 (1), 1-14 (2000).
  12. Ben-Shahar, Y., Robichon, A., Sokolowski, M. B., Robinson, G. E. Influence of gene action across different time scales on behavior. Science. 296 (5568), 741-744 (2002).
  13. Lehman, H. K., et al. Division of labor in the honey bee (Apis mellifera): the role of tyramine beta-hydroxylase. J Exp Biol. 209 (Pt 14), 2774-2784 (2006).
  14. Mutti, N. S., Wang, Y., Kaftanoglu, O., Amdam, G. V. Honey bee PTEN--description, developmental knockdown, and tissue-specific expression of splice-variants correlated with alternative social phenotypes). PLoS One. 6 (7), e22195(2011).
  15. Whitfield, C. W., Cziko, A. M., Robinson, G. E. Gene expression profiles in the brain predict behavior in individual honey bees. Science. 302 (5643), 296-299 (2003).
  16. Ueno, T., Takeuchi, H., Kawasaki, K., Kubo, T. Changes in the Gene Expression Profiles of the Hypopharyngeal Gland of Worker Honeybees in Association with Worker Behavior and Hormonal Factors. PLoS One. 10 (6), e0130206(2015).
  17. Paul, R. K., Takeuchi, H., Matsuo, Y., Kubo, T. Gene expression of ecdysteroid-regulated gene E74 of the honeybee in ovary and brain. Insect Mol Biol. 14 (1), 9-15 (2005).
  18. Takeuchi, H., et al. Identification of a novel gene, Mblk-1, that encodes a putative transcription factor expressed preferentially in the large-type Kenyon cells of the honeybee brain. Insect Mol Biol. 10 (5), 487-494 (2001).
  19. Takeuchi, H., Paul, R. K., Matsuzaka, E., Kubo, T. EcR-A expression in the brain and ovary of the honeybee (Apis mellifera L). Zoolog Sci. 24 (6), 596-603 (2007).
  20. Yamane, T., Miyatake, T. Reduced female mating receptivity and activation of oviposition in two Callosobruchus species due to injection of biogenic amines. Journal of Insect Physiology. 56 (3), 271-276 (2010).
  21. Ben-Shahar, Y., Leung, H. T., Pak, W. L., Sokolowski, M. B., Robinson, G. E. cGMP-dependent changes in phototaxis: a possible role for the foraging gene in honey bee division of labor. J Exp Biol. 206 (Pt 14), 2507-2515 (2003).
  22. Danforth, B. N., Ji, S. Elongation factor-1 alpha occurs as two copies in bees: implications for phylogenetic analysis of EF-1 alpha sequences in insects. Mol Biol Evol. 15 (3), 225-235 (1998).
  23. Pandey, A., Bloch, G. Juvenile hormone and ecdysteroids as major regulators of brain and behavior in bees. Current Opinion in Insect Science. 12, 26-37 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

פועלות דבורי דבשבלוטות היפופרינגיאליות20 הידרוקסיאקדיסוןיישום מתופרןאנליזה של ביטוי גניםדבורי מטפלותדבורי אוספותהכנת מושבה
הכנת מושבות אחת-עוקבה טיפול הורמונלי של דבורי הדבש Worker לנתח Associated פיזיולוגיה עם תפקיד ו / או המערכת האנדוקרינית
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.