גידים מכופפים ביד נפצעים נפוץ, מה שמוביל פונקצית יד לקויה. עם זאת, תגובת ריפוי צלקת הרקמות אינה מאופיינת היטב. מודל Murine של ריפוי גיד מכופף מודגם כאן. מודל זה יכול לשפר את ההבנה הכוללת של תהליך הריפוי ולהעריך גישות טיפוליות כדי לשפר את הריפוי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
גידים מכופפים ביד נפצעים נפוץ, מה שמוביל פונקצית יד לקויה. עם זאת, תגובת ריפוי צלקת הרקמות אינה מאופיינת היטב. מודל Murine של ריפוי גיד מכופף מודגם כאן. מודל זה יכול לשפר את ההבנה הכוללת של תהליך הריפוי ולהעריך גישות טיפוליות כדי לשפר את הריפוי.
גיד מתחבר שרירים ועצמות השלד, הקלת התנועה של כמעט את כל הגוף. ביד, גידים מכופפים (FTS) לאפשר כיפוף האצבעות ותפקוד יד בכלל. פציעות FTS נפוצות, וריפוי משביע רצון לעתים קרובות נפגע בשל רקמת צלקתית עודפי הידבקויות בין גיד הרקמה שמסביב. עם זאת, מעט מאוד ידוע על הרכיבים המולקולריים התאיים של תיקון FT. לשם כך, מודל Murine של תיקון FT כי משחזר היבטים רבים של ריפוי בבני אדם, כולל מגוון לקוי של תנועה וירידה תכונות מכניות, פותחה שתואר לעיל. הנה הדגמה מעמיקה של הליך כירורגים זה מסופקת, מעורב חיתוך רוחב והתיקון הבא של longus digitorum המכופף (FDL) גיד הכף האחורית בעכברים. טכניקה זו יכולה לשמש כדי לבצע ניתוח שושלת של תאים מסוגים שונים, להעריך את ההשפעות של רווח גן או פסד של פונקציה, וכדי לבדוק את האפיםcacy של התערבויות תרופתיות בתהליך הריפוי. עם זאת, ישנן שתי מגבלות עיקריות מודל זה: i) גיד FDL באמצע החלק של הכף האחורית בעכברים, שבו חיתוך הרוחב והתיקון להתרחש, אינו מוקף נדן סינוביאלי. לכן מודל זה אינו לוקח בחשבון את התרומה הפוטנציאלית של הנדן לתהליך היווצרות צלקת. ii) כדי להגן על היושרה של אתר התיקון, FT הוא שוחרר בצומת myotendinous, ומקטין את הכוחות המכאניים של הגיד, תורם סביר היווצרות צלקת מוגברת. בידוד של תאים מספיק מן הרקמה פרור של FT במהלך תהליך הריפוי עבור ניתוח תזרים cytometric הוכיח מאתגר; צנטריפוגה ציטולוגיה להתרכז תאים אלה היא שיטה חלופית בשימוש, ומאפשר הדור של ההכנות התא שעליו תיוג immunofluorescent יכול להתבצע. באמצעות שיטה זו, כימות של תאים או חלבונים בעלי עניין במהלך ריפוי FT הופכת אפשרית.
גידים מכופפים בעבודת היד בתיאום עם השרירים המכופפים של אמת נדנים דיגיטליים כדי לאפשר כיפוף של הספרות ותפקוד אחיזה של היד. גידים מכופפים לרוץ לאורך היבט Palmar של היד; יחסית שטחית במיקום זה לעתים קרובות תוצאות פציעות בגידים המכופפים במהלך טראומה אל היד. גידים לרפא באמצעות תגובת צלקת רקמות ולא התחדשות של גיד נורמלי רקמות 1. בעוד רקמת צלקת זה מספקת המשכיות לגיד, פונקציה דרמטית פחת יחסית גיד בריא. מרוכבים רקמת גיד-צלקת מאופיינים תכונות מכניות לקוי 1, טיוח הגידים לתיקון סביר יותר להתפקע. בנוסף, רקמת צלקת חסרה את הארגון של מבנה סיבי קולגן גיד הילידים, וכתוצאה מכך לעלייה בגודל גיד וצובר. בהתחשב במגבלות האנטומי של יחידת-נדן הגיד, אפילו עלייה מתונה גודל גיד יכול דרסטי אדוםתחיקת פונקצית הגלישה של הגיד, ולכן טווח ספרה של תנועה ותפקוד יד.
לפני של פציעות 1960 עד הגידים המכופפים, בעיקר אלו המופיעות Zone II של היד, לא תוקנו באופן שיגרתי עקב הסיבוכים החמורים בריפוי שהתעוררו עם תיקונים אלה 2. אזור זה של היד כונה "שטח הפקר" 3. עם זאת, שיפורים בטכניקות הכירורגיות, דפוסי תפר ופרוטוקולים שיקום פיזיותרפיה השתפרו באופן דרמטי התוצאות של תיקונים גיד מכופף 2. למרות ההתפתחויות הללו, עד 40% של תיקונים לגרום להיווצרות הדבקה מספיק כדי לעכב ביד פונקציה 4. לכן, גישה ביולוגית נדרשה לשפר את הריפוי. למרבה הצער, מעט מאוד ידוע על תהליך ריפוי הגיד ברמה התאית ומולקולרית. לכן, המטרה הייתה לפתח מודל בעכברים שיכולים לשמש כדי לשפר את מבין מה היסודגרם של רכיבים התאיים ומולקולריים של ריפוי גיד מכופף ותגובת היווצרות הצלקת, כאמצעי לזיהוי מטרות טיפוליות חדשניות כדי לשפר את הריפוי.
גדולים יותר במודלים של בעלי חיים כבר סייעו לקדם הבנה של תהליך ריפוי הגיד המכופף. מחקרים בכלבי ארנב הוכיחו הוא את יכולת הריפוי הפנימית וחיצונית של גידים מכופפים 5,6, את החשיבות של תנועה פסיבית מבוקרת מוקדם מזעור ביחס היווצרות הידבקות לחוסר מעש 7, כמו גם את ההשפעות של דפוסי תפר שונים על תהליך הריפוי 8 , 9. בנוסף, מודל הכלבים כבר שימושי בבדיקת גישות רקמות הנדסת translational כדי לשפר את הריפוי 10. עם זאת, ישנם מספר יתרונות חשובים באמצעות קרוב משפחה במודל Murine מודל חיה גדולה, כולל בעלות היחסית, זמינות של ריאגנטים ספציפיים בעכברים, ואת הקלות של יצירת knoc העולמיk-outs או בונת מחיקה / ביטוי יתר רקמות ספציפיות. יתר על כן, את הדמיון התפקודי בין אדם ועכברים ביחס גידים מכופפים 11 מצביע על התועלת הפוטנציאלית בפיתוח מודל בעכברים.
פיתוח של מודל Murine של מחקת תיקון חיתוך רוחב ו גיד מכופף היבטים רבים של ריפוי קליני, כוללים ההיווצרות של רקמת צלקתית שופעת תכונות מכאניות לקויות. המודל המתואר כאן אינו ששחזור אמיתי של פרקטיקה קלינית עקב חיתוך רוחב של FDL בצומת myotendinous כדי להגן על האתר לתקן. יתר על כן, מודל זה אינו לוקח בחשבון את התרומה של תאי נדן סינוביאלי לתגובת הריפוי, כפי שאין נדן סינוביאלי כיסוי החלק באמצע של הגיד שבו התיקון מתרחש. למרות מגבלות אלה, מודל זה יש את היתרון של מגוון המניב של הידבקויות הגבלת תנועה, אשר טרם הוכיח במודלי Murine שיותר קלואיליי להיות קרובים ככל האפשר תרחיש הקליני. מודל זה נעשה שימוש כדי להעריך מודלים עכבר נוק-אאוט 12,13, וכדי לבחון גישות פרמקולוגיות שונות כדי לשפר את הריפוי 14-17. היסטולוגית מנתח של מודל זה, באמצעות אימונוהיסטוכימיה ו הכלאה באתרו, יכול לספק תובנות חשובות ל לוקליזציה של גנים מפתח וחלבונים במהלך הריפוי. עם זאת, היסטולוגיה מספק רק ניתוח מרחבי חתך ואינו מאפשר כימות ברחבי הרקמה כולה. Cytometry זרימה מייצגת גישה כמותית יותר, אך רק מספר מצומצם מאוד של תאים יכול להיות מבודד רקמת גיד ריפוי במודל העכבר, ומספר זה ירד עוד יותר במהלך שלבי קיבעון, permeabilization, ואת כביסה. אם תיקח את זה לחשבון, cytometry זרימה הופך גישה ישימה בשל מספר בעלי החיים אשר יידרש. שיטה חלופית יש צורך לשמר את רוב האוכלוסייה תא קטן זה כדיעוד לאפיין את סביבת הריפוי. השיטה המשמשת להשגת יעד זה, המוצג כאן, כרוך ריכוז של תאים בודדים באמצעות צנטריפוגה ציטולוגיה לשקופית זכוכית, ואחריו immunocytochemistry. במחקר הנוכחי EDU (5-ethynyl-2'deoxyuridine, אנלוגי thymidine) התאגדות התיוג הבא שמשה כדי לקבוע את מצב השגשוג היחסי של תאים באתר הריפוי. גישה זו ניתן ליישם על מנת לבחון את היעילות של טיפול תרופתי על התפשטות תאים, גני נוק-אאוט או ביטוי יתר, או לזהות ולכמת אוכלוסיות תאים שונות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ועדת אוניברסיטת על בעלי חיים למחקר באוניברסיטת רוצ'סטר אישר את כל הניסויים בבעלי חיים. עשרה-12 בשבוע C57BL נקבה בת / 6J שמש.
1. הכנת בעלי חיים לכירורגיה גיד מכופף (~ 15 דקות)
ילדה = "jove_title"> 2. Murine מכופף פגיעה גיד וכירורגיה תיקון (~ 10 דקות)
3. Labeling של תאי רכיבה על אופניים (~ 10 דקות)
4. קציר תאים ציטולוגיה צנטריפוגה (2.5 שעות, ~ 30 hands-on דקות זמן)
5. Immunocytochemistry כדי זיהוי edu (2 hr, ~ 45 hands-on דקות זמן)
הערה: כל שלבי הדגירה צריכות להתבצע בחושך להגביל photobleaching של fluorophores.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
Longus digitorum מכופף השרירים (FDL), הממוקמים העגל, פועל כדי להגמיש את הספרות של הכף האחורית עכבר באמצעות הגיד המכופף (התווה בכחול באיור 1A, והראה היסטולוגית באיור 2 א), אשר פועלת proximally מן myotendinous צומת של דבר הוא מגיע הפלנגות דיסטלי. במודל זה של ריפוי גיד מכופף, גיד FDL הוא transected ותקן על אמצע הרגל, בקרבה ההסתעפות אל הספרות של הכפה האחורית (חצים אדומים, איור 1 א). כדי למנוע קרע של הת...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הליך כירורגי עבור מודל Murine של חיתוך רוחב מלא ותיקון של גיד longus digitorum מכופף מוצג במחקר זה. בנוסף יישום רומן לרכז אוכלוסיות תאים קטנות עם צנטריפוגות ציטולוגיה מודגם, המאפשר ניתוח immunocytochemical כמוני של הסביבה הסלולר במהלך ריפוי גיד מכופף. מודל זה של תיקון גיד מכופף מדגים תגובת הריפוי לשחזור, אשר ניתן להשתמש בהם כדי להעריך שינויים בתהליך הריפוי באמצעות מודלים בנוקאאוט או עם התערבות פרמקולוגית. לאחר הניתוח, תגובה דלקתית מתחיל תוך 24 שעות, שבמהלכו התאים מגויסים לאתר הפגי...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים
עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי האגודה האמריקאית לכירורגיה של פרס פיילוט יד ו- NIH / NIAMS 1K01AR068386-01 (כדי AEL) ו NIAMS / NIH P30AR061307.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <תכשיר כירורגי חזק> | |||
| C57BL/6J עכברים | מעבדות ג'קסון | 000664 | |
| קטמין | הוספירה | NDC# 0409-2051-05 | |
| קסילזין | לויד בע"מ | NDC# 61311-482-10 | |
| בופרנורפין | פאר פרמצבטיקה בע"מ | NDC# 42023-179-10 | |
| 0.9% נתרן כלורי השקיה | Hospira | NDC# 0409-6138-03 | להכנת תמיסות קטמין/קסילזין ובופרנורפין |
| מזרק 1 מ"ל | BD | 309659 | |
| 30 גרם מחט | BD | 305106 | |
| תמיסת פובידון-יוד | Aplicare | 82-226 | |
| 70% אתנול | |||
| משחה אופטית וטרינרית Puralube | Dechra מוצרים וטרינריים | NDC# 17033-211-38 | |
| שם | חברה | מספר קטלוגי | תגובות |
| כלים כירורגיים | |||
| Portable איזון 200 גרם | Ohaus | SP202 | |
| מספריים קפיציים | כלי מדע עדינים | 15124-12 | |
| Dumont #5 מלקחיים | כלי מדע עדינים | 11251-30 | |
| מחזיקי מחטים | כלי מדע עדינים | 91201-13 | |
| מספריים קפיצים מיקרו | כלי מדע עדינים | 15003-08 | |
| מחזיקי מחטים מיקרו | כלי מדע עדינים | 12061-02 | |
| 5-0 תפרי ניילון | Ethicon | 668G | |
| 8-0 מיקרו-כירורגיה תפרי ניילון | Ethicon | 2808G | |
| Lab-Line היסטולוגיה מחמם שקופיות | Barnstead International | 26025 | |
| שם< | strong>חברה | מספר קטלוגי | Comments |
| <שיטת >strongCytospin | |||
| Collagenase Type I, ליופיליזציה | Life Technologies | 1700-017 | |
| איתות תאי | אלבומין בסרום בקר | 9998S | |
| 1x PBS | Thermo Fisher | 10010-023 | |
| משפכי ציטולוגיה | Fisher HealthCare | 10-354 | |
| שקופיות מיקרוסקופ HistoBond+ | VWR | 16005-110 | |
| צנטריפוגה ציטוספין 2 | שנדון | SH-CYTO2 | |
| name | Company | Catalog Number | Comments |
| Immunocytochemistry | |||
| Slide מגש צביעה עם מכסה שחור | IHC World | M920-2 | |
| Click-iT Plus EdU Imaging Kit | Life Technologies | C10639 | כולל EdU ו- Hoeschst 33342 |
| Immedge עט מחסום הידרופובי | מעבדות וקטור | H-4000 | |
| ProLong יהלום הרכבה בינונית | תרמו פישר | P36970 | |
| כיסויי זכוכית 24 x 50 מ"מ #1.5 | |||
| לק |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.