כתב יד זה מתאר פרוטוקול מפורט להניע התחדשות שרירי שלד חריפה בעכברים בוגרים ומניפולציות הבאות של השרירים, כגון לנתיחה, מקפיא, חיתוך, מכתים שיגרתי, וניתוח שטח החתך myofiber.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
אינדוקציה של התחדשות שריר שלד החריף ידי Cardiotoxin הזרקה
במאמר זה
סיכום
תקציר
התחדשות שריר שלד היא תהליך פיסיולוגי המתרחש שרירי שלד מבוגרים בתגובת פציעה או מחלה. פגיעה הנגרמת חריפת התחדשות שריר שלד היא בשימוש נרחב, מערכת מודל רבה עצמה כדי לחקור את האירועים מעורבים התחדשות שרירים, כמו גם את מנגנוני שחקנים שונים. אכן, ידע מפורט של תהליך זה הוא חיוני להבנה טובה יותר של מצבים פתולוגיים שמובילים ניוון שרירי שלד, וזה מסייע בזיהוי אסטרטגיות טיפוליות ממוקדות חדשות. העבודה הנוכחית מתארת פרוטוקול מפורט לשחזור להניע התחדשות שרירי שלד חריפה בעכברים באמצעות זריקה תוך שרירית אחת של cardiotoxin (CTX). CTX שייך למשפחת מרעלים ארס נחשים וגורם myolysis של myofibers, אשר בסופו של דבר מעורר את אירועי התחדשות. הדינמיקה של התחדשות שריר שלד מוערכת על ידי ניתוח היסטולוגית סעיפי שריר. הפרוטוקול גםממחיש את הפרוצדורות עבור לנתח, מקפיא, חיתוך השריר הקדמי tibialis, כמו גם מכתים Hematoxylin & Eosin שגר כי נעשה שימוש נרחב לניתוח מורפולוגיים morphometric הבא.
מבוא
שרירי שלד מבוגרים יונק נוצרים על ידי קבוצות של fascicules של תאי שריר multinucleated (myofibers) כי הם מיוחדים עבור התכווצות. כל myofiber הוא syncytium מוארך, מוקף sarcolemma (קרום plasmatic) ו במיופיברילים המכיל, אשר עשויים מחלבונים התכווצות מאורגן קבוע וחוזר (סיבי אקטין ו שרירן). בהבגרות ובתנאים המנוחים, שרירי שלד יש תחלופה נמוכה מאוד של myonuclei שלהם 1; ואכן, myonuclei, אשר ממוקמים בפריפריה של myofiber, תחת sarcolemma, נעצרים בשלב G0 של מחזור התא אינם מסוגלים להתרבות 1,2.
יש שרירי השלד יכולת מופלאה להתחדש בעקבות נזקים והגיע הומאוסטזיס....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הניסויים נערכו בהתאם קפדן עם ההנחיות המוסדיות עבור מחקר בבעלי חיים ואושר על ידי המחלקה לבריאות הציבור, בריאות בעלי החיים, תזונה ובטיחות המזון של המשרד האיטלקי בריאות בהתאם לחוק על ניסויים בבעלי חיים. נהלים נקע בצוואר רחם עשויים להשתנות ממוסד למוסד מבוסס על IACUC או הדרישות המקבילות שלה.
1. הזרקת Cardiotoxin בשריר השוקה הקדמית
- כן 10 מיקרומטר פתרון עובדים של cardiotoxin (CTX) על ידי דילול פתרון מניות cardiotoxin ב פוספט שנאגר סטרילי מלוח (PBS) או במים לפני תחילת ההליך.
הערה:<....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
צביעת H & E מאפשרת ההערכה של המורפולוגיה של תהליך ההתחדשות בנקודות זמן ספציפי במהלך רגנרציה שרירי שלד. איור 3 מציג את הניתוח כמובן הזמן שבוצע על שרירי ת"א נפצעו של עכברי סוג ברים. שרירים בודדו בבית 3, 7, 15, ו -30 ימים לאחר הזרקת CTX, כמו schematized באיור 3 א. תמונות נציג של H & חלקים רוחביים מוכתם E להראות הדינמיקה של תיקון שרירי שלד לאורך זמן (איור 3 ב-ה). ביום 3 לאחר פציעה, הארכיטקטורה .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
כאן אנו מתארים פרוטוקול לגרום לפגיעה חריפה בשרירי השלד (כלומר, זריקה תוך שרירית של CTX). זה נעשה שימוש נרחב ככלי רב עוצמה כדי ללמוד את הדינמיקה של התחדשות שריר השלד in vivo. הזרקת CTX גורמת לניוון של סיבי שריר, אשר נגרם על ידי שלילת הקוטביות של sarcolemma ואת ההתכווצות של הסיבים 12, ומפעילה המפל של אירועים שמובילים התחדשות שריר. שרירי שלד גזורים בנקודות זמן רצויות לאחר ההזרקה ופציעה, על פי דרישות ניסוי, ומשתמשים עבור ניתוחים היסטולוגית שלאחר מכן. השריר.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
אנו מודים לבית החיות ולמתקני המיקרוסקופיה המשולבים של IGB-CNR. עבודה זו נהנתה ממימון מחקר מתוכנית המסגרת השביעית של הקהילה האירופית בפרויקט ENDOSTEM (הפעלה של תאי גזע הקשורים לכלי דם ותאי גזע של שריר לתיקון ותחזוקה של רקמת שריר, הסכם מענק מספר 241440), משרד החינוך-אוניברסיטה-מחקר האיטלקי (MIUR-PRIN2 010-2011) ל-GM ו-S.B. ו-PON Cluster IRMI ל-GM, וקרן CARIPLO ל-GM ו-S.B.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| קרדיוטוקסין מ Naja mossambica mossambica | SIGMA ALDRICH | C9759 | |
| מזרק לאינסולין BD Micro-Fine+ מחט 30 גרם x 8 מ"מ - Da 0.3 מ"ל | BD | 324826 | |
| Tragacanth | Gum MP BIOMEDICALS, LLC 104792 | ||
| 2-מתילבוטן (איזופנטן) | SIGMA ALDRICH | 78-78-4. | |
| OCT Killik פתרון להכללה Cryostat | Bio-optica | 05-9801 | |
| להב מיקרוטום נוצה S35 | ביו-אופטיקה | 01-S35 | |
| שקופיות זכוכית Superfrost בתוספת | Menzel-Glä ser | 09-OPLUS | |
| Dumon #5 מלקחיים בגימור מראה | 2מכשירים ביולוגיים | 11251-23 | |
| מספריים ישר חד / חד | 2מכשירים ביולוגיים | 15024-10 | |
| מספריים נויס ישר | 2מכשירים ביולוגיים | 15012-12 | |
| מספריים איריס עדין ישר חד / חד 10.5 ס"מ | 2מכשירים ביולוגיים | 14094-11 | |
| יוקיט | ביו-אופטיקה | 09-00100 | |
| כיסוי שקופיות | BIOSIGMA | VBS651 | |
| קסילן | SIGMA ALDRICH | 214736 | |
| אתנול 100% | סיגמא-אולדריץ' | 02860-2.5 ליטר | |
| המטוקסילין | J.T. BAKER | 3873 | |
| Eosin | SIGMA ALDRICH | HT110116 | |
| Cryostat | LEICA | CM3050 S |
מקורות
- Morgan, J. E., Partridge, T. A. Muscle satellite cells. Int J Biochem Cell Biol. 35 (8), 1151-1156 (2003).
- Roca, I., Requena, J., Edel, M. J., Alvarez-Palomo, A. B. Myogenic Precursors from iPS Cells for Skeletal Muscle Cell Replacement Therapy. J Clin Med. 4 (2), 243-259 (201....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
