Method Article

שיטת הזרקה אלטרנטיבית והמאומתת עבור גישת שטח subretinal דרך בגישה אחורית Transcleral

DOI:

10.3791/54808

⸱

December 7th, 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Jules Stein Eye Institute, University of California, Los Angeles

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זריקות תת-רשתית הן הטכניקה הנפוצה ביותר להעברת חומרים טיפוליים גדולים כגון חלבונים ווקטורים נגיפיים לקולטני האור ולאפיתל הפיגמנט ברשתית. שיטה חלופית בעכברים המכוונת בהצלחה לחלל התת-רשתית עם נזק אגבי מינימלי וזמני התאוששות מהירים מתוארת כאן.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זריקות subretinal שימשו בהצלחה בשני בני אדם ומכרסמים לספק התערבויות טיפוליות של חלבונים, סוכנים ויראלי, ותאי לתא interphotoreceptor / subretinal כי יש חשיפה ישירה קולטני האור ואת אפיתל הפיגמנט ברשתית (RPE). זריקות subretinal של plasminogen וכן ניסויים פרה-קליניים וקליניים האחרונים הוכיחו בטיחות ו / או יעילות של מתן וקטורים ויראליים ותאי גזע ליחידים עם מחלת רשתית מתקדמת. מודלים עכבר של מחלת רשתית, במיוחד dystrophies רשתית תורשתי, חיוניים לבדיקת לטיפולים אלה. הליך ההזרקה הנפוץ ביותר במכרסמים הוא להשתמש transcorneal הקטן או חתכי transcleral עם גישה קדמית לרשתית. עם גישה זו, מחט הזריקה חודר הרשתית הנוירו לשבש את הרשתית הבסיסית ועל החדרת יכול בקלות ניק העדשה, גרימת עכירות העדשה וירידת ערך Imagi פולשניתng. גישה למרחב subretinal באמצעות transcleral, גישה אחורית תמנע בעיות אלה: המחט חוצה את בלובן העין כ 0.5 מ"מ מן עצב הראייה, ללא חדירת רשתית ונמנעה לשבש את הזגוגית. נזק סביבתי מוגבל כי הקשורים מוקדי sclerotomy ואת ההשפעות של חולף, היפרדות רשתית הצפק. הפשטות של השיטה ממזער פגיעה עינית, מבטיחה שחיבור רשתית מהיר והתאוששות, ויש לו שיעור כישלון נמוך. הניזק המינימאלי רשתית הרשתית מאפשר הערכה ברורה של יעילויות התרופות ותופעות ישירות של הסוכנים הטיפוליים עצמם. כתב יד זה מתאר טכניקת ההזרקה subretinal הרומן, שניתן להשתמש בהם כדי למקד וקטורים ויראליים, סוכני תרופתי, תאי גזע או גזע מושרים (iPS) תאים למרחב subretinal בעכברים עם יעילות גבוהה, נזק מינימלי, והתאוששות מהירה.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זריקות subretinal הן האמצעי העיקרי של אספקת סוכנים הסלולר ויראלי אל הרשתית של עכברים ללמוד והשפיע על קולטני אור ואת 1,2 שבבסיס הרשתית. רוב פרוטוקולי הזרקת subretinal בעכברים להשתמש transcorneal או קדמי זריקת transcleral לקו המשווה (איור 1). גישה זו יכולה לגרום נזק סביבתי הגלום הכולל שסחב ו ערפול כתוצאה של העדשה, שיבוש של שלמות, חדירה הזגוגית של הרשתית הנוירו ואיריס, דימום ברשתית, היפרדות רשתית משמעותי ובצקת subretinal קיימא 3-9. מניפולציות ניסוייות חייבות להתגבר על תופעות אלה על מנת להעריך את ההשפעות של התערבויות טיפוליות 3,7,10,11. מחקר זה מספק תיאור מפורט ואימות של שיטת הזרקה ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בעלי חיים: סוג Wild עכברים C57Bl / 6J bred באוניברסיטת קליפורניה בלוס אנג'לס (UCLA). כל בעלי החיים היו בין 11 - בן 17 שבועות, וכלל זכר עכברות. כל העכברים היו שוכן קבוצה, שמור מחזור אור / חושך 12:12 עם כרצונך מזון ומים. כל הניסויים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות של UCLA והאגודה לחקר חזון הצהרת עיניים לשימוש של בעלי חי עיניים ו Vision Research.

הערה: כל התרופות והסוכנים להזרקה הן ארצות הברית Pharmacopeia (USP) ציון.

1. הכנת כירורגים

  1. לה....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אחורי גישת זריקות subretinal transcleral בוצעו ב -31 עיני בריאות מ -16 עכברים פראיים סוג עם זריקות של 0.3 μl (n = 18), 0.5 μl (n = 8) ו 1.0 מיקרוליטר (n = 5) של והעמסת 0.01%. עין אחת לא נכללה הזרקה בשל אטימות קרניות קיימות שמנעו ניתוח מבני ותפקודי. כל עין מוזרקת נכללת בדוח זה. אין היפרדות רשתית לא מכוונת, דקירות של רשתית הנוירו, או דליפה לתוך הזגוגית אותרו ולא הייתה שום ראיה של nicking עדשה, תגובות דלקתיות, אובאיטיס, או לאחר ניתוח זיהומים בכל עיניי.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זריקות subretinal הן את שיטת בחירה עבור המשלוח של וקטורים ויראליים גזע טיפול תאים שמקורם מניפולציה קולטני אור ואת הרשתית הוא במחקר בסיסי טיפול מרפאתי. בחולים, זריקות subretinal נעשים בדרך כלל עם sclerotomy הקדמי ליד פלאנה Pars, vitrectomy הליבה האחורי וחדירה של הרשתית על ידי מחט עם להדמיה ישירה. כמו במרבית ההליכים vitrectomy, זה נפוץ היווצרות קטרקט להתרחש בטרם עת, אלא אם העין היא כבר pseudophakic. בעכברים, זריקות subretinal נעשות באופן מסורתי עם קדמי sclerotomy לרשתית, שיטה קשורה .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לאף אחד מהכותבים אין גילויים מסחריים.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו אסירי תודה על תמיכתם של הקתדרה לרפואת עיניים ע"ש הרולד ופאולין פרייס ומכון העיניים ע"ש ז'ול שטיין ל-MBG, מענק הליבה של NEI (EY00331-43) ל-SN. המחקר נתמך בחלקו על ידי תרומה נדיבה ממשפחת סקריה ל-SN ו-MGB, וממענק בלתי מוגבל מהמחקר למניעת עיוורון למחלקת העיניים. אנו מודים לשרלוט יייי וואנג מבית הספר לאופטומטריה בברקלי על קבלת תמונות OCT ראשוניות של זריקות תת-רשתית.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
המילטון דגם 62 RN SYRהמילטון87942מזרק x 1
מחט המילטון 33 גרם, 1.0 אינץ', 20 מעלות, נקודה 3 (304 נירוסטה)המילטון7803-05מחטים x 6
מספריים מעוקלים של Vannasטד פלה, INC.13475 מ"מ להב
22.5 מעלות סכין מיקרו-כירורגיהWilson Ophthalmic Corp.91204
קטג'קט PhoenixNDC 57319-609-02קטמין
AnasedLloyd LaboratoriesNDC 61311-482-10קסילזין
פלואורסצאין 10% AK-FluorAkornNDC 17478-253-10100 מ"ג/מ"ל
0.9% מי מלח USPHospiraNDC 0409-4888-500.9% NaCl
משחה אנטיביוטיתAkornNDC 17478-235-35
מי עיניים משאבת מחזורGaymarTP-500 T / משאבה מקט יצרן 07999-000
sd-OCTBioptigenR-Series
מצלמת פונדוסמסחרית מעבדות מחקר פניקסMICRON III
פינצטה מסוג 3טד פלה, INC.5385-3SU
2.5% פנילפריןפרגון BioTeckNDC 42702-102-15
IMARIS8עיניים Bitplaneגרסה 8.1.2
ImageJNIHV1.8.0_77
Hypromellose  2.5%GonioviscAX0401מתיל צלולוז
(שטיפה)Bausch & תמיסת מלח Lomb
מיקרוסקופZeissStemi 2000מיקרוסקופ
מקור אורFostecP/N 20520מקור אור
טיפות עיניים

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Garoon, R. B., Stout, J. T. Update on ocular gene therapy and advances in treatment of inherited retinal diseases and exudative macular degeneration. Curr Opin Ophthalmol. 27 (3), 268-273 (2016).
  2. Pierce, E. A., Bennett, J.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Subretinal InjectionTranscleral ApproachSclerotomy ProcedureViral Vector DeliveryStem Cell TransplantationRetinal Detachment ModelOptical Coherence TomographyFluorescein TrackingMouse OphthalmologyPostoperative Monitoring

Related Articles