מאמר שיטה

הדמיה חיה לחקר חוסר יציבות microtubule דינמי סרטן השד עמיד taxane

7.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55027

⸱

20 בפברואר 2017

 ,  , 
1Department of Medical Genetics, Signal Transduction Research Group, Faculty of Medicine and Dentistry, University of Alberta

במאמר זה

סיכום

במאמר זה, אנו מדווחים על פרוטוקול המתאר שיטה in vivo למדידת חוסר יציבות דינמית של מיקרו-צינורות בתאי סרטן שד עמידים לדוסטקסל (MCF-7TXT). בשיטה זו משתמשים במערכת הדמיה של מיקרוסקופיה דה-קונבולוציה כדי לזהות את הביטוי של GFP-tubulin בתאי מטרה.

תקציר

טקסאנים כגון דוסטקסל שייכים לקבוצה של חומרים מכווני מיקרו-צינוריות (MTAs) שבדרך כלל מסתמכים עליהם לטיפול בסרטן. עם זאת, עמידות לטקסאן בתאים סרטניים מפחיתה באופן דרסטי את יעילות השימוש ארוך הטווח בתרופות. עדויות מצטברות מצביעות על כך שהמנגנונים העומדים בבסיס עמידות לטקסאן כוללים הן מנגנונים כלליים, כגון התפתחות עמידות לתרופות מרובות עקב ביטוי יתר של חלבוני פליטת תרופות, והן מנגנונים ספציפיים לטקסן, כגון אלה הכוללים דינמיקה של מיקרו-צינורות.

מכיוון שטקסנים מכוונים למיקרו-צינורות תאים, מדידת חוסר יציבות דינמית של מיקרו-צינורות היא צעד חשוב בקביעת מנגנוני העמידות לטקסנים ומספקת תובנה כיצד להתגבר על עמידות זו. בניסוי נעשה שימוש בשיטת in vivo למדידת אי יציבות דינמית של מיקרו-צינורות. α-טובולין מתויג GFP בא לידי ביטוי ושולב במיקרו-צינורות בתאי MCF-7, מה שמאפשר הקלטה של דינמיקת המיקרו-צינורות על ידי קיטועי זמן באמצעות מצלמה רגישה. התוצאות הראו כי בניגוד לתאי MCF-7CC ההורים שאינם עמידים, הדינמיקה המיקרו-צינורית של תאי MCF-7TXT עמידים לדוסטקסל אינה רגישה לטיפול בדוסטקסל, מה שגורם לעמידות למעצר מיטוטי ואפופטוזיס המושרה על ידי דוסטקסל. מאמר זה יתאר את שיטת in vivo למדידת אי יציבות דינמית של מיקרו-צינורות.

מבוא

הגורם המוביל לתמותה מסרטן השד הוא באמצעות גרורות 1, 2. Taxanes, כגון docetaxel ו- paclitaxel, משמש כיום כקו ראשון משטר לטיפול בסרטן השד גרורתי 2, 3, 4, 5, 6. הם חלק מהקבוצה של סוכני מיקוד-microtubule (MTAs) משבשי דינמיקת microtubule. עם זאת, אחד האתגרים הגדולים ביותר באמצעות taxanes בטיפול מרפא הוא הפיתוח של התנגדות taxane בתאים סרטניים, אשר מובילה למחלות ישנות 7. עמידות לתרופות אחראית ליותר מ -90% מכלל מקרי המוות בקרב חולי סרטן שד גרורתי 7.

Microtubules נוצרות על ידי פילמור של heterodimers α- ו β טובוליןclass = "Xref"> 8, 9. ההתקנה המדויקת של דינמיקת microtubule חשובה תפקודים תאיים רבים, כולל קיטוב תא, התקדמות מחזור התא, תחבורה תאית, ואיתות תא. חוסר וויסות של microtubules והדינמיקה שלהם ישבש תפקוד התא לגרום מוות של תאים 10, 11. תלוי איך הם לגרום חוסר וויסות זה, תרופות MTA ניתן לסווג גם כסוכני ייצוב microtubule (כלומר, taxanes) או סוכני microtubule-destabalizing (כלומר, אלקלואידים וינקה או באתר קולכיצין סוכנים מחייב) 20. למרות ההשפעות שלהם הפוכות על מונית microtubule, במינון מספיק, כיתות שניהם יכולות להרוג תאים סרטניים באמצעות השפיע על דינמיקת microtubule 21.

Taxanes לתפקד בעיקר על ידי ייצוב microtubule ציר 12, המובילחוסר תיאום כרומוזומליות. ההפעלה התמידית הבאה של מחסום הרכבת ציר (SAC), עוצרת את תא מיטוזה. מעצר mitotic ממושך ואז גורם לאפופטוזיס 13, 14. Taxane אינטראקציה עם microtubules דרך האתר taxane מחייב על β טובולין 8, 15, אשר שוהה רק טובולין התאספו 16.

מנגנונים מרובים להתנגדות taxane הוצעו 9, 17. מנגנונים אלה כוללים הן התנגדות multidrug כללית בשל ביטוי יתר של חלבונים-בזרימת סמים taxane ספציפי התנגדות 5, 9, 18, 19. לדוגמא, תאים סרטניים עמיד taxane יש בו כדי לשנות ביטוי ותפקוד של β-גיגית מסוימתulin isotypes 5, 9, 19, 20, 21, 22, 23. באמצעות שיטה in vivo למדוד חוסר יציבות microtubule דינמי, אנו מראים כי, כאשר בהשוואה ללא-עמיד, תאי CC MCF-7 הוריה 17, דינמיקת microtubule של תאי docetaxel העמיד MCF-7 TXT הן רגישה לטיפול docetaxel.

כדי להבין טוב יותר את הפונקציה של MTAs ואת המנגנון המדויק של התנגדות taxane בתאים סרטניים, זה הכרחי למדוד דינמיקת microtubule. כאן אנו מדווחים שיטה in vivo לעשות זאת. באמצעות הדמיה חיה בשילוב עם ביטוי של טובולין-tagged GFP בתאים, אנו יכולים למדוד את הדינמיקה microtubule של TXT MCF-7 ותאי CC MCF-7 עם ואינטרנטthout טיפול docetaxel. התוצאות יכולות לעזור לנו לעצב תרופות יעילות יותר שיכול להתגבר על התנגדות taxane.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הכנת תאים עבור הדמיה חיה

  1. תרבות זריעת תאים
    1. השתמש תאי סרטן השד MCF-7 נבחרו להתנגדות docetaxel (MCF-7 TXT) וקו תא ההורים שאינם העמיד שלהם (CC MCF-7). תהליך הבחירה מפורט לאפיון שורות תאים שנבחרו אלה תוארו בעבר 24.
    2. לגדול כל תאים בצלחות תרבות 10 ס"מ על 37 מעלות צלזיוס במדיום מורכב 90% של המדיום של הנשר שונה של Dulbecco (DMEM) ו -10% בסרום שור העובר (FBS) שיושלם עם חומצות אמינו לא חיוניות. לשמור על המדיום באווירה 2 5% CO. שמור על תאי TXT MCF-7 ב 5 docetaxel ננומטר.
    3. תאי זרע על coverslips הדמיה לחיות. לעקר 24 מ"מ coverslips זכוכית מצופה פולי- L- ליזין על ידי שטיפה אותם עם אלכוהול 70% ולאחר מכן לחשוף אותם UV למשך הלילה. מניחים את coverslips לתוך צלחת תרבות 6-גם של 35 מ"מ. Plאס coverslip אחד בכל טוב.
    4. הסר את המדיום מצלחת התרבות של 10 ס"מ לשטוף את התאים עם PBS. הוסף 0.5 מ"ל של טריפסין-EDTA כדי בצלחת כדי לנתק את התאים מצלחת. הוסף 5 מ"ל של מדיום תרבות צלחת לנטרל את טריפסין בעקבות ניתוק של התאים.
    5. ספירת התאים עם hemocytometer כדי לקבוע את מספר הסלולרי ליחידת נפח.
    6. להוסיף כ 10 5 תאים לכל מבוסס היטב על המספר הנייד ליחידת נפח. אחרי שלחצתי אותו בעדינות, לשים צלחת בחזרה לתוך החממה כדי לאפשר לתאים לצרף את coverslips.
  2. הביטוי של טובולין α GFP-tagged
    1. כדי assay דינמיקת microtubule, transduce התאים עם GFP-tagged α-טובולין באמצעות שלט תמרת GFP המסחרי (למשל, BacMam) על פי הפרוטוקול של היצרן.
    2. תרבות תאי הבאר במשך 36 שעות בתוך חממת תרבית תאי 37 ° C כדי לאפשר comהידבקות plete ו מפגש 60%.
    3. חשב את הנפח המתאים של GFP-tagged α-טובולין להוסיף כל טוב, על פי המשוואה הבאה:
      figure-protocol-1
      מספר התאים הוא המספר הכולל המשוער של תאים היטב בעת תיוג ואת PPC הרצוי הוא מספר חלקיקים לכל תא.
      הערה: מתזמנת את תאי MCF-7 צריכה הכפילה את ספירת התאים מ 10 5 2 x 10 5 עם PPC רצוי של 20, נפח דרושים כל coverslip לכן 40 μL. עבור תאים שונים, היקף מחושב על בסיס הנוסחה לעיל לא יכול להיות הטוב ביותר. ההיקף המדויק צריך להיות מותאם בהתאם לרמת הביטוי בפועל של טובולין GFP.
    4. מערבבים את פעמים טובולין-α GFP-tagged כמה על ידי היפוך כדי להבטיח פתרון הומוגני. לא מערבולת.
      הערה: לקבלת השליטה, Null (שליטה) מגיב חסר כל גנטי יונקיםאלמנטים וניתן להשתמש בו כדי לקבוע אפקטי קרינת רקע baculovirus בתיווך פוטנציאליים. פקד תמרת GFP הלא ממוקדת עשוי לשמש גם, אשר יאיר את התא כולו.
    5. החלף את מדיום התרבות עם מדיום חדש. הוסף 2 מ"ל של מדיום חדש ו -40 μL של ה- GFP-tagged α-טובולין היטב כל אחד.
    6. לנער את הצלחת בעדינות כדי לאפשר ערבוב מלא של טובולין-α GFP-tagged עם המדיום לתרבות. מחזירים את הצלחת אל האינקובטור תרבות דגירה במשך 24 שעות כדי לאפשר את הביטוי של טובולין GFP.
  3. תאי Treat עם docetaxel
    הערה: ניסוי זה היא לבדוק את ההשפעה של docetaxel על חוסר יציבות microtubule דינמי. לפיכך, תאי מטופלים עם הריכוז הרצוי של docetaxel.
    1. הכן בינוני מורכב 90% של DMEM ו -10% של FBS שיושלם עם חומצות אמינו לא חיוניות. השתמש DMEM ללא פנול אדום בגלל פנול אדום עלולים להפריע fluorescence של טובולין GFP. מוסיפים את הריכוז הרצוי של docetaxel (הנעים בין 10 ננומטר ל -10 מיקרומטר). פתרון המניות של docetaxel הוא 10 מ"מ ב sulfoxide דימתיל (DMSO).
    2. טרום לחמם את המדיום המכיל docetaxel עד 37 ° C בחממה בתרבית רקמה.
    3. החלף את מדיום התרבות הנורמלי עם המדיום המכיל docetaxel דגירה במשך 30 דקות ב בתרבית רקמת החממה. לא צריך להיות לפחות 3 coverslips לכל טוב עבור כל ריכוז docetaxel.

2. הדמיה חיה לבדיקת חוסר יציבות microtubule דינמי

  1. הגדרת המערכת
    1. בצע ניסויים בתא שמור על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. לרכוש תמונות קרינה על ידי זמן לשגות עם מערכת מיקרוסקופית מצויד בעדשה אובייקטיבית 60X, 1.42 NA שמן על מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך עם מצלמת CCD.
    2. הגדר את תאי הדמיה לחיות. טרום חם הוא לבעל המדגםהמדיום ל -37 מעלות צלזיוס. בחר coverslip לבחון. הר coverslip ריבית על בעל מדגם דגירה זה עם 1 מ"ל של מדיום המכיל-docetaxel מוכן בשלב 1.3.1.
  2. הדמיה חיה של חוסר יציבות microtubule דינמי
    1. זהה את התאים אשר ישמשו הדמיה. הם צריכים להיות שטוחים, יש עוצמת קרינה גבוהה של GFP-טובולין באו לידי ביטוי, ויש מבני microtubule ברורים.
    2. בחר תא אחד מהקבוצה של חוליות מזוהות משלבים 2.2.1 לבחון תחילה. דגש על אזור הפריפריה של התא המזוהה. הגדר את התכנית עבור זמן חשיפה ואת תדירות רכישה של תמונה. ככל שזמן חשיפה הוא בדרך כלל 0.5 s, התמונות תירכשנה כל שתי שניות.
    3. לאפשר 20 דקות נוספות עבור צעדים מן 1.33 ל 2.2.3. לכן, בדיוק 50 דקות לאחר תוספת של docetaxel, כמתואר בשלב 1.3.3, להתחיל הדמיה (זה סטנדרטיזציה).
    4. רשום את ד microtubuleynamics למשך 2 דקות, מצלם כל 2 שניות. בסך הכל, לרכוש 60 תמונות עבור התא המזוהה.
    5. העבר אל התא הבא מזוהה וחזור על שלבים 2.2.2 עד 2.2.4. חזור על התהליך עד 5 תאים כבר צילמו. זה הכרחי כדי לעשות זאת לפני הזמן מגיע 70 דקות לאחר התוספת של docetaxel, כמתואר בשלב 1.3.3.
    6. עבור כל תנאי הטיפול, חזור על שלבים 2.2.1 עד 2.2.5 3 coverslips שונים. בסך הכל, תאי 15 תמונה, וזה מספיק נתונים כדי למדוד חוסר יציבות microtubule דינמי.

3. עיבוד תמונה וניתוח נתונים

  1. Deconvolution של תמונות
    1. Deconvolve התמונות רכשו להשיג באיכות גבוהה. פתח את תכנית deconvolution מצוידת במערכת מיקרוסקופ.
    2. לחץ על "תהליך" ובחר "deconvolve." גרור את קובץ התמונה אל החלון "קלט" ולחץ על "Do." קובץ התמונה יהיה deconvolved, ואתקובץ deconvolved יישמר כקובץ חדש באופן אוטומטי.
  2. דור של קטעי וידאו
    1. לחץ על קובץ תמונת deconvolved לפתוח עם תוכנה מאובזרת.
    2. לחץ על "קובץ" ובחר "שמירה בשם הסרט." בחר "פורמט הסרט" כמו "AV" ואת "סגנון האנימציה" כמו "קדימה". בחר את "איכות הדחיסה" ל "100%" ואת "קצב הפריימים" ל "5 / שני."
    3. סמן את התיבה של "הנפשת בזמן" ולחץ על "עשה זאת." הקליפ יופק.
  3. מדידת קיצור microtubule ושיעור הצמיחה
    1. זהה את microtubules אשר ישמש למדידה. עבור כל תא, רק כמה microtubules תוכל להיות הקיצור או הצמיחה שלהם בעקבות ברור ומלא.
    2. לבחון כל מסגרת של וידאו כדי לזהות את המסגרת המציגה את אורך ההתחלה של א microtubulend המסגרת עם microtubule המורחבת ביותר או מקוצר. מודד את השינוי באורך בין שני microtubules ואת הזמן שחלף בין שתי המסגרות.
    3. חשב את קצב צמיחה או קיצור ידי חלוקת השינוי באורך ידי זמן (היחיד הוא מיקרומטר / s). עבור כל תנאי הטיפול, אחרי לפחות 10 תאים ולמדוד לפחות 20 microtubules.
    4. חשב את הממוצע ואת סטיית התקן עבור כל תנאי הטיפול. נתח את הבדל סטטיסטי בין תנאי שימוש במבחן הסטודנטים. דווח על הנתונים בטבלה ו / או בתרשים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

באמצעות הפרוטוקול המובא כאן, חקרנו את ההשפעות של docetaxel על הדינמיקה microtubule של הנורמה (CC MCF-7) ו- docetaxel עמיד (MCF-7 TXT) תאי סרטן השד. שני סטים של תמונות להראות את ההשפעות של docetaxel (0.5 מיקרומטר) על צמיחה microtubule וקיצור ב CC MCF-7 ו MCF-7 תאים TXT (איור 1 א).

אנחנו גם...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

ישנן שתי שיטות עיקריות למדידת חוסר יציבות microtubule דינמי: במבחנה in vivo. בשיטה במבחנה, טובולין מטוהר משמש למדידת חוסר יציבות microtubule דינמית עם מיקרוסקופיה מחשב משופר זמן לשגות הפרש התערבות ניגודיות. בשיטת in vivo, microinjected טובולין ניאון, או הביע GFP-טובולין, הוא שולב microtubules. הדינמיקה (צמיחה וקיצור) של microtubules נרשמת לאחר מכן על ידי זמן לשגות באמצעות מצלמה רגישה באזור הפריפריה של תאים שלב 10,

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי מימון מ-CBCF (ל-ZW).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)Sigma-AldrichD5796
חומצות אמינו לא חיוניותLife Technologies, Invitrogen11140-050
FBSGibco, Invitrogen12483
Anti-Anti (100x)Life Technologies, Invitrogen15240-062
docetaxelSigma-Aldrich01885-5mg-F
DMEM פנול ללא אדוםGibco, Invitrogen21063
CellLight Reagent *BacMam 2.0* GFP-tubulinThermoFisher ScientificC10613מגיב מפתח לביטוי GFP tubulin בתאים
מגיב CellLight *BacMam 2.0* GFPThermoFisher ScientificB10383בקרת
דימתיל סולפוקסיד (DMSO)סיגמא-אולדריץ'+B9:AA9472301להסרת decetaxel
22 מ"מ זכוכית coveslipFisher Scientifics12-545-101
צלחת תרבית 6 בארותGreiner Bio-One International6 Well Celi Culture Plate
DeltaVision Microscopy Imaging SystemsGE Healthמערכת זו מצוידת בתחנת מזג אוויר לבקרת טמפרטורה ו-CO2. הוא מצויד גם בתוכנת Worx לדה-קונבולוציה ובקרת זמן-lapse.
טריפסין-EDTA (0.25%), פנול אדוםThermoFisher Scientific25200056
סט המציטומטר בקו בהיר, Hausser ScientificHausser Scientific, מופץ על ידי VWRמס' ספק: 1492 VWR מס': 15170-172

מקורות

  1. Kamangar, F., Dores, G. M., Anderson, W. F. Patterns of cancer incidence, mortality, and prevalence across five continents: defining priorities to reduce cancer disparities in different geographic regions of the world. J Clin Oncol. 24 (14), 2137-2150 (2006).
  2. Yardley, D. A. Drug resistance and the role of combination chemotherapy in improving patient outcomes. Int J Breast Cancer. 2013, 137414(2013).
  3. Jassem, J., et al. Doxorubicin and paclitaxel versus fluorouracil, doxorubicin, and cyclophosphamide as first-line therapy for women with metastatic breast cancer: final results of a randomized phase III multicenter trial. J Clin Oncol. 19 (6), 1707-1715 (2001).
  4. Nabholtz, J. M., et al. Docetaxel and doxorubicin compared with doxorubicin and cyclophosphamide as first-line chemotherapy for metastatic breast cancer: results of a randomized, multicenter, phase III trial. J Clin Oncol. 21 (6), 968-975 (2003).
  5. Zelnak, A. Overcoming taxane and anthracycline resistance. Breast J. 16 (3), 309-312 (2010).
  6. Rivera, E. Implications of anthracycline-resistant and taxane-resistant metastatic breast cancer and new therapeutic options. Breast J. 16 (3), 252-263 (2010).
  7. Longley, D. B., Johnston, P. G. Molecular mechanisms of drug resistance. J Pathol. 205 (2), 275-292 (2005).
  8. Downing, K. H., Nogales, E. Crystallographic structure of tubulin: implications for dynamics and drug binding. Cell Struct.Funct. 24 (5), 269-275 (1999).
  9. McGrogan, B. T., Gilmartin, B., Carney, D. N., McCann, A. Taxanes, microtubules and chemoresistant breast cancer. Biochim.Biophys.Acta. 1785 (2), 96-132 (2008).
  10. Kamath, K., Oroudjev, E., Jordan, M. A. Determination of microtubule dynamic instability in living cells. Methods Cell Biol. 97, 1-14 (2010).
  11. Dumontet, C., Jordan, M. A. Microtubule-binding agents: a dynamic field of cancer therapeutics. Nat Rev Drug Discov. 9 (10), 790-803 (2010).
  12. Jordan, M. A., Wilson, L. Microtubules as a target for anticancer drugs. Nat.Rev.Cancer. 4 (4), 253-265 (2004).
  13. Gascoigne, K. E., Taylor, S. S. How do anti-mitotic drugs kill cancer cells? J.Cell Sci. 122 (15), 2579-2585 (2009).
  14. Kavallaris, M. Microtubules and resistance to tubulin-binding agents. Nat.Rev.Cancer. 10 (3), 194-204 (2010).
  15. Diaz, J. F., Valpuesta, J. M., Chacon, P., Diakun, G., Andreu, J. M. Changes in microtubule protofilament number induced by Taxol binding to an easily accessible site. Internal microtubule dynamics. J.Biol.Chem. 273 (50), 33803-33810 (1998).
  16. Abal, M., Andreu, J. M., Barasoain, I. Taxanes: microtubule and centrosome targets, and cell cycle dependent mechanisms of action. Curr Cancer Drug Targets. 3 (3), 193-203 (2003).
  17. Wang, H., et al. Multiple mechanisms underlying acquired resistance to taxanes in selected docetaxel-resistant MCF-7 breast cancer cells. BMC Cancer. 14 (37), (2014).
  18. Lal, S., Mahajan, A., Chen, W. N., Chowbay, B. Pharmacogenetics of target genes across doxorubicin disposition pathway: a review. Curr. Drug Metab. 11 (1), 115-128 (2010).
  19. Murray, S., Briasoulis, E., Linardou, H., Bafaloukos, D., Papadimitriou, C. Taxane resistance in breast cancer: mechanisms, predictive biomarkers and circumvention strategies. Cancer Treat.Rev. 38 (7), 890-903 (2012).
  20. Kamath, K., Wilson, L., Cabral, F., Jordan, M. A. BetaIII-tubulin induces paclitaxel resistance in association with reduced effects on microtubule dynamic instability. J.Biol.Chem. 280 (13), 12902-12907 (2005).
  21. Banerjee, A. Increased levels of tyrosinated alpha-, beta(III)-, and beta(IV)-tubulin isotypes in paclitaxel-resistant MCF-7 breast cancer cells. Biochem.Biophys.Res.Commun. 293 (1), 598-601 (2002).
  22. Wiesen, K. M., Xia, S., Yang, C. P., Horwitz, S. B. Wild-type class I beta-tubulin sensitizes Taxol-resistant breast adenocarcinoma cells harboring a beta-tubulin mutation. Cancer Lett. 257 (2), 227-235 (2007).
  23. Iseri, O. D., Kars, M. D., Arpaci, F., Gunduz, U. Gene expression analysis of drug-resistant MCF-7 cells: implications for relation to extracellular matrix proteins. Cancer Chemother.Pharmacol. 65 (3), 447-455 (2010).
  24. Hembruff, S. L., et al. Role of drug transporters and drug accumulation in the temporal acquisition of drug resistance. BMC.Cancer. 8, 318(2008).
  25. Yenjerla, M., Lopus, M., Wilson, L. Analysis of dynamic instability of steady-state microtubules in vitro by video-enhanced differential interference contrast microscopy with an appendix by Emin Oroudjev. Methods Cell Biol. 95, 189-206 (2010).
  26. Sammak, P. J., Gorbsky, G. J., Borisy, G. G. Microtubule dynamics in vivo: a test of mechanisms of turnover. J Cell Biol. 104 (3), 395-405 (1987).
  27. Walker, R. A., et al. Dynamic instability of individual microtubules analyzed by video light microscopy: rate constants and transition frequencies. J Cell Biol. 107 (4), 1437-1448 (1988).
  28. Desai, A., Mitchison, T. J. Microtubule polymerization dynamics. Annu Rev Cell Dev Biol. 13, 83-117 (1997).
  29. Walczak, C. E. Microtubule dynamics and tubulin interacting proteins. Curr Opin Cell Biol. 12 (1), 52-56 (2000).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

DocetaxelGFPTime Lapse ImagingIn Vivo

מאמרים קשורים