מאמר שיטה

ניתוח בידוד תזרים Cytometric של האדם תאים האנדוצרוויקאלית גמא דלתא T

DOI:

10.3791/55038

⸱

6 בפברואר 2017

 ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, Miller School of Medicine, University of Miami, 2Division of Infectious Diseases, Miller School of Medicine, University of Miami

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מתארים כאן שיטת בידוד להשגת לימפוציטים תוך-אפיתליאליים אנדו-צוואריים אנושיים לניתוח תאי T גמא דלתא תוך-אפיתליים. ניתן להרחיב פרוטוקול זה לטיהור תאי T גמא דלתא אנדו-צוואריים על ידי חרוזים מגנטיים או על ידי מיון תאים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

באיברי הרבייה הנקביים (FRT) הרירית מערכת החיסון משמש כקו ההגנה הראשון. להכיר טוב יותר את רירית איברי המין ולכן הוא חיוני להבנת פתוגניות של פתוגנים שונים כולל איידס. דלתא גמא (GD) ותאי T הם האבטיפוס של "בלתי שגרתיים" תאי T והם מייצגים קבוצה קטנה יחסית של תאי T מוגדר על ידי הביטוי שלהם של קולטני תאי T heterodimeric (TCRs) מורכב שרשראות גמא דלתא. זה שמבדיל אותם מתאי הקלסיים הרבה יותר טוב ידוע CD4 + T מסייע תאי CD8 + T ציטוטוקסיים המוגדרים על-ידי TCRs בטא-אלפא. תאי GD T לעתים קרובות להראות לוקליזציה רקמות ספציפיות ומועשרים ב האפיתל. תאי GD T לתזמר תגובה חיסונית דלקת, מעקב גידול, מחלות זיהומיות, אוטואימוניות.

כאן, אנו מציגים שיטה לבודד reproducibly ולנתח לימפוציטים GD T האנדוצרוויקאלית האדם intraepithelial. אנו חהve דגימות cytobrush האנדוצרוויקאלית בשימוש מנשים שהשתתפו במחקר זיהום נשים בין-HIV (WIHS). יש ידע על אינטראקציות תאי GD T במהלך תנאים שבם יש עלבון הרירי בנרתיק יכול להיות מיושם על כל ניסוי קליני נוסף בו פגיעות ריריות הופנה, כולל הפיתוח בנוסף microbicides.In נרתיק, ידע על תגובות תא הרירי GD T פוטנציאל היישום של טיפול החיסוני מבוסס תאי GD T בטיפול במחלות זיהומיות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פיתחנו מתודולוגיה של שימוש בדגימות מברשת האנדוצרוויקאלית להעריך תאים GD T intraepithelial. התעלה האנדוצרוויקאלית מצופה בשכבה אחת של אפיתל עמודי. לימפוציטים intraepithelial מייצגים לימפוציטים חזית המתגוררים בתוך שכבת האפיתל שיכול ליזום תגובה חיסונית במהירות כשנתקלה 7 חיידקים פתוגניים, 8. הבנת האירועים אימונולוגיים של תא האנדוצרוויקאלית intraepithelial חשוב בעיצוב של אסטרטגיות אפקטיביות כדי למנוע זיהומים, כולל איידס.

השיטה שלנו יכול להיות מיושם על דגימות האנדוצרוויקאלית אדם טרי שנאספו כמו גם תאים אנדוצרו....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פעילויות המחקר התקיים באוניברסיטת יחידת המחקר מיאמי HIV בשיתוף עם לחקר בין-HIV נשים מיאמי (WIHS) והמרכז מיאמי לאיידס מחקר (וכפר) המועצה לביקורת .Institutional (אוניברסיטת מיאמי מילר מבית הספר לרפואה) התקבל אישור מראש לגיוס וכל נהלים בנושא הערכה או מחקר.

1. אוסף דוגמאות האנדוצרוויקאלית מברשת

הערה: משתתפים עברו בדיקת גינקולוגית מבוצעת על ידי MD המאומן או גינקולוג וגבייה לימפוציטים intraepithelial בוצעו תחת בחינת ספקולום ידי החדרת cytobrush.

    הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

    תוצאות

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    לאחרונה, ניתחנו תאים GD T intraepithelial האנדוצרוויקאלית והיינו הראשון לדווח על הפסד של תאי T דלתא גמא אנדוצרוויקאלי בנשים הנגועים באיידס 9, 11. כאן אנו מתארים פרוטוקול לבודד ולנתח את המשנה של תאי T דלתא גמא האנדוצרוויקאלית. כפי שניתן לראות בתרשים 1, תאי GD T ניתן לאתר בקלות את דגימות תאי האנדוצרוויקאלית אדם.

    הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

    דיון

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    הערכת הפגיעות ריריות בדרכי נשית תחתונות איברי מין היא מרכיב חיוני של מחקרים קליניים פונים סיכון רכישת HIV ושידור. בדרך כלל פגיעות FGT מפני הדבקה ב- HIV מוערכות על ידי מדידת מאפננים חיסוניים מסיסים הפרשות איברי מין (ציטוקינים, chemokines ופפטידים מיקרוביאלית) 12, 13. עם זאת, סמנים אלה מצביעים רק של דלקת בנרתיק, הם מושפעים מאירועים פיזיולוגיים ופתולוגיים, ואינם מייצגים תמיד נזק הרירית ישיר. על מנת לשפר את הבנתנו כיצד גורמים .......

    הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

    גילויים

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    מחברים אין עמותה מסחרית או אחרת שעלולים להציב ניגוד העניינים (למשל, בעלות על מניות תרופות, ייעוץ, חברות בועדה מייעצות, פטנטים רלוונטיים, או למימון מחקר).

    תודות

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    אנו מודים משתתפי המחקר מיאמי WIHS על נכונותם להשתתף בעבודה זו. נתונים בכתב היד הזה היו שנאספו במסגרת פרויקט HIV Interagency של מיאמי נשים (WIHS). התכנים של פרסום זה הם באחריות בלעדית של הכותבים ואינם מייצגים את הדעות הרשמיות של המכון הלאומי לבריאות בארה"ב (NIH). עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות ולימוד זיהום HIV Interagency לנשים (WIHS) [AI103397 U01 מספר מענק], המכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות, המכון הלאומי לבריאות [מספר מענק P30AI073961], המרכז הלאומי לקידום מדעי translational לבין המכון הלאומי לבריאות המיעוט ופערים הבריאות, המכון הלאומי לבריאות [מספר מענק UL1TR000460 ו 1KL2TR000461], המכון הלאומי....

    הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

    חומרים

    רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
    שםחברהמספר קטלוגהערות
    ציטומברשת פלוס GT (CareFusion, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב
    IMDM, המדיום של Dulbecco המותאם של Iscove ThermoFisher Scientific12440061
    בקמן קולטר מונה תאים אוטומטי (מנתח כדאיות התאים מסדרת Vi-CELLבקמן קולטר496178
    DMSO, דימתיל סולפוקסיד סיגמא אולדריץ' D2650
    FBS, סרום בקר עובריInvitrogen, Gibco26140-079
    PBSInvitrogen, Gibco10010023
    BSASigma AldrichA-9647
    LIVE/DEAD ערכת כתמי תאים מתים צהובים לתיקון Life Technologies,L349S9
    1% פרפורמלדהידסיגמא אולדריץ' D6148
    ציטומטר זרימה של פורטסה Becton Dickinson
    UltraComp eBeadseBioscience01-2222-42
    ArC אמין חרוזי פיצוי תגובתיים (Life Technologies, גרנד איילנד, ניו יורק, ארה"ב)Life TechnologiesA10346
    Anti-TCR גמא/דלתא MicroBead Kit Milteny Miltenyi Biotec Inc.130-050-701
    עמודת103-042-201
    מפריד4124
    MS MACS

    מקורות

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
    1. Kaul, R., et al. The genital tract immune milieu: an important determinant of HIV susceptibility and secondary transmission. J Reprod Immunol. 77, 32-40 (2008).
    2. Haase, A. T. Targeting early infection to prevent HIV-1 mucosal transmission.<....

    הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

    הדפסות חוזרות והרשאות

    בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

    בקש הרשאה

    תגיות

    TCR Gamma DeltaCD45CD3

    מאמרים קשורים