הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

קרצינומה תא syngeneic עכבר הדגם של גרורתי כליות עבור הערכה כמותית אורך ורוחב של טיפולים פרה-קליניים

13.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55080

⸱

12 באפריל 2017

 ,  ,  , 
1Department of Urology, University of Minnesota, 2Masonic Cancer Center, University of Minnesota, 3Microbiology, Immunology, and Cancer Biology Graduate Program, University of Minnesota, 4Department of Medical Microbiology, Immunology and Cell Biology, Southern Illinois University School of Medicine, 5Simmons Cancer Institute

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

יישום מודל orthotopic של קרצינומה של תאי כליה בעכברים עם מערכת חיסון תקינים מקנה החוקר מערכת קלינית רלוונטית המוגדרת על ידי הנוכחות של גרורות גידול ריאות כליות עיקריות באותה החיה. מערכת זו יכולה לשמש כדי preclinically לבדוק מגוון של טיפולים in vivo.

תקציר

קרצינומה של תאי כליה (RCC) משפיעה> 60,000 אנשים בארצות הברית מדי שנה, ו ~ 30% מחולי RCC יש גרורות מרובות בעת האבחנה. RCC גרורתי (mRCC) הוא חשוך מרפא, עם זמן הישרדות החציוני של רק 18 חודשים. התערבויות מבוססות חיסוניות (למשל, אינטרפרון (IFN) ו interleukin (IL) -2) לגרום לתגובות עמידות בשבריר של חולי mRCC, ומעכבי multikinase (למשל, sunitinib או sorafenib) או הקולטן אנטי VEGF נוגדנים חד שבטיים (מב) הם בעיקר פליאטיבי, כמו הפוגות להשלים הם נדירים. חסרונות כאלה טיפולים נוכחיים לחולי mRCC לספק את הרציונל לפיתוח פרוטוקולי טיפול חדשניים. מרכיב מרכזי בניסויים פרה-קליניים של טיפולים חדשים עבור mRCC הוא מודל החיה מתאימה. תכונות מועילות כי לשחזר את המצב האנושי כוללות גידול כלייתי עיקרי, גרורות גידול כליות, ומערכת חיסון שלמה לחקור כל effecto חיסון מונע טיפולתגובות r ויצירת גורמים לדיכוי חיסוניים-induced גידול. דו"ח זה מתאר מודל עכבר orthotopic mRCC כי יש את כל התכונות הללו. אנו מתארים טכניקת השתלת intrarenal באמצעות שורת תאי אדנוקרצינומה עכבר כליות Renca, ואחריו ההערכה של גידול בכליה (האתר הראשי) וריאות (אתר גרורתי).

מבוא

קרצינומה של תאי הכליה (RCC) מהווה את רוב שאתות כליות ממאירים ו בערך 3% מכלל המחלות הממאירות מבוגרים ברחבי העולם 1, 2. בשל חוסר תסמינים, אבחון מוטעה, וכלי הקרנה מספיק RCC, כמעט 30% מחולים יציגים עם גרורתי RCC (mRCC) בעת האבחנה, עם מטופלים 20-30% של תוספת התקדמות לשלב גרורתי 2. במקרים אלה לגרום ~ 13,500 מקרי מוות בשנה 1, 3. למרות מוקדם איתור והטיפול הראשוני RCC השתפר, שיעור מוות קשור RCC ממשיך לגדול, מה שמרמז כי מחלה גרורתית היא אחראית במידה רבה תמותה 3. פיתוח תרפים עבור RCC התקדם בעשור האחרון עם הגילוי והיישום של טיפולי immunotherapies ממוקדים. למרבה הצער, surviv ללא התקדמותאל והישרדות כוללת של מקרים מתקדמים עדיין היטב מתחת 2 שנים עבור רוב המטופלים 4, 5, 6. נתונים אלה להצדיק את הצורך במחקר נוסף לתוך זיהוי ופיתוח של טיפולים יעילים עבור RCC. כדי לקדם התערבויות טיפוליות כראוי mRCC, מודלים טרום קליניים translationally-רלוונטיים של המחלה יש צורך תחילה.

פיתוח מודל רלוונטי ועקבי כדי לשחזר את המצב האנושי של מתקדמי RCC צריך לענות על שאלות מרכזיות: 1) האם המודל רלוונטי מבחינת אנטומית; 2) האם התקדמות הגידול בדומה הפתולוגיה האנושית; 3) האם גרור להתעורר מן הגידול הראשוני; ו 4) יכול התקדמות הגידול הראשוני גרורתי להיות במעקב לאורך זמן? בהתאם לסוג טיפול נחקר, שורות תאים סרטניים עכבר RCC, שורות תאים סרטניים אנושיות RCC, ואת xenog האנושי RCC נגזרות החולותרפסודות עשויות לשמש ב עכברים או immunodeficient. שורה עם מערכת חיסונית שלמה ומתפקדת נדרשת ללימודים אלה בהערכת היבט כלשהו של טיפול חיסוני, יש צורך בהפעלת הקו הסלולרי Renca היטב תאר נגזר אדנוקרצינומה כליות ספונטנית של עכברי Balb / ג 7. רוב המחקרים להזריק תאי Renca תת-עורית (SC), אשר מהווה גידול מקומי קל למדוד, או דרך וריד (IV) לעכברי Balb / c כדי לייצר "גרורות" ניסיוני ריאות 8, 9, 10, 11, 12. שימוש גידול SC-מושתל Renca מודל האנושי RCC יש מספר המגבלות, כולל עצבוב מדויק של כלי דם 13, הבדלי microenvironment 14, 15, וחוסר האיבר / תקשורת סלולרית גידול13 ation, 16. בנוסף, גידולים SC רבים (במיוחד Renca) לא גרורות לאיברים דיסטלי, עיכוב חקר אירוע הוא 17 מאפיין קליני נפוץ. כדי ללמוד mRCC, תאים Renca ניתן להזריק iv להקים נטל הגידול של הריאות-המיקום הראשוני של גרורות בחולי RCC. שיטת הזרקת IV של ייזום גרור, אולם, אינה מאפשרת את החקירה איך, מתי, או מדוע התאים הגרו האיבר העיקרי (כלומר, הכליות) לאתר המרוחק. דגם עם שני מחלות הראשוניות גרורתי ניכר החיה אותה הוא חיוני כדי ללמוד את ההתקדמות וטיפול במחלה מתקדמת, במיוחד בהתחשב בכך הגרורות בדרך כלל הגורם לתמותה בחולים אלה.

המעבדה שלנו פיתחה מודל בעכברים של mRCC המשלב את כל התכונות שתוארו לעיל. כדי לבסס יחסי ציבורגידולי imary, orthotopic, תאי Renca מושתלים ישירות לתוך הכליה של החיה דרך הצפק השקוף. חתך קטן האגף השמאלי מאפשר הדמיה של הטחול (כציון דרך) ואת הכליה עזבה. באמצעות מחט קטנה-מד, תאים סרטניים Renca מוזרקים ישירות לתוך הכליה דרך הצפק להשתלה orthotopic. בהשוואה לשיטות אחרות של השתלת תאי Renca מתחת הקפסולה כליות 18, שיטה זו של השתלה מאפשרת תפוקה גבוהה יותר, כפי שהוא די בלתי פולשני, אינו דורש תפירה, היא של כיתת כאב נמוכה, והוא זמן יעיל כאשר מְתוּרגָל.

מאופיין היטב זה תוצאות מודל נטל גידול ראשוני לשחזור (~ 99% בשיעור מיצוי) בכליות המוזרקות כמו גם עומס גרור סרטני הבריאות. היתרונות המשמעותיים של מודל זה כוללים טבע syngeneic שלה, המאפשרים חקירות חיסוניות; הגרורות הספונטניות שלה, ללמודמחלת dvanced; השתלת orthotopic שלה, למדל את ההשפעה אנטומיים על התקדמות וטיפול במחלה. טיפולים שמטרתם מיקוד RCC יפיקו תועלת רבה מן הניצול של מודל זה במהלך פיתוח פרה-קליני.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הפרוטוקול הבא מתאר בהליך ניסיוני גרימה וניטור הצמיחה של גידולי כליות orthotopic הניסיונות וכל גרורות ספונטניות פוטנציאל. כל הנהלים הבאים נעשים בהתאם למדיניות מוסדית נהלים שאושרו בנוגע לשימוש ההומני של חיות ניסוי.

תחזוקת 1. של שורות תאים

  1. שמור על שורת תאי אדנוקרצינומה בעכברי כליות, Renca, במכון זיכרון רוזוול פרק (RPMI) 1640 בינוניים בתוספת 10% עוברי עגל בסרום (FCS), 1% פניצילין, סטרפטומיצין, ו 1 מ"מ כל אחד חומצות אמינו לא חיוני, L-גלוטמין פירובט, ונתרן (המכונה RPMI להשלים). תאי תרבות באינקובטור ב 37 ° C ו 5% CO 2.
    הערה: כמו עם כל קו התא הוקם, מומלץ להשתמש בתאי מעבר-המספר הנמוך Renca עבור transfection ואת ההשתלה לאחר למזער שינויים פנוטיפי או גנטי שיכול להתרחש לאחר פולחן לטווח ארוךיור.
    1. השתמש במערכת transposon להנדס תאי Renca לבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק ביציבות (GFP) ו בלוציפראז גחלילית.
      1. באמצעות תאים מגיבים transfection ליפוזום מבוסס קטיוני, שיתוף transfect Renca עם וקטור ביטוי transposase (pPGK-SB11) וכן קידוד וקטור transposon לביטוי של הגחלילית בלוציפראז, כמו גם קידוד גן היתוך עבור GFP ואת גן התנגדות Zeocin , שניהם בשליטת תעתיק של האמרגן דו כיווני (pKT2 / LuBiG) 19.
      2. ימים לאחר מכן, צלחת תאי transfected בדילול הגבלה ולאפשר לתאים להתרחב RPMI להשלים בתוספת Zeocin (300 מיקרוגרם / מיליליטר). אשר ביטוי GFP בכל שיבוט על ידי cytometry זרימה. תאים אלה מכונים Renca-GL.
        הערה: שיבוט דילול ההגבלה יאפשר התאים שנבחרו שייגזר תא בודד.
  2. כדי להשתיל תאי Renca intrarenally, להכין תאי Renca in כדי ההשעיה תא בודד ב 2 x 10 6 תאים / מ"ל תמיסת מלח מאוזן של האנק (HBSS).
    1. הסרת תאים Renca חסיד מהבקבוק בתרבית רקמה באמצעות טריפסין 0.25% ב HBSS. אחרי ~ 5 דקות, להוסיף RPMI להשלים את הבקבוק על מנת לנטרל את טריפסין ולהעביר את תאי צינור צנטריפוגות לשטיפה. צנטריפוגה התאים ב 300 גרם כוח צנטריפוגלי יחסית (XG RCF) במשך 5 דקות ב 25 מעלות צלזיוס.
    2. למזוג supernatant מחדש להשעות התאים HBSS. ספירת התאים באמצעות hemocytometer ולהתאים את עוצמת הקול עם HBSS להניב 2 x 10 6 תאים / מ"ל.
    3. צייר את התאים לתוך מזרק 1 מ"ל מצויד במחט 18-מד כדי למנוע מאמץ הגזירה על התאים. החלף את מחט 18-מד עם מחט 28-מד לפני ההזרקה של התאים הסרטניים. הזרקה של 0.1 מ"ל מספקת 2 x 10 5 תאים לתוך הכליה.

2. הכנת פינת כירורגים

  1. הכן ניתוח סטריליאזור בארון בטיחות ביולוגית על ידי הצבת לעטוף כירורגית סטרילית על כרית חימום. אסוף את כל הציוד, כולל מלקחיים, סכין המנתחים, מספריים, טיפות עיניים, 5% גזה חיטוי povidone-יוד, וסטרילי. חיטוי כל המכשירים לפני השימוש.
  2. לבצע את הניתוח באמצעות טכניקת טיפ מזוהמת. מכשירים לחטא מחדש בין חיות עם מעקר חרוז. ללבוש כפפות סטריליות, חלוק מעבדה, ואת פניו מסכה.

3. הכנת בעלי חיים

  1. להרדים את העכברים עם קטמין / xylazine (87.5 מ"ג / ק"ג ו 12.5 מ"ג / ק"ג, בהתאמה, IP) בהתאם להנחיות מוסדיים. קביעת עומק ההרדמה על ידי ביצוע קמצוץ הבוהן.
  2. כאשר החיה נחשבת ללא יכולת תגובה, להכין את הזריקה (למשל, עזב אגף) על עכברי Balb / C על ידי מריטה (עם אצבעות) או גילוח (באמצעות קוצץ) הפרווה.
  3. הזז את העכברים מהאזור הכנה לניתוח (למשל, כלוב הדיור) אל אזור הניתוח ולהחיל משחת וטרינר אלעיניים כדי למנוע יובש. בנדיבות ספוגית באתר חתך מוכן עם% 5 povidone-יוד חיטוי.
  4. להזריק הידרוכלוריד bupivacaine (0.1 מ"ל של פתרון 2.5 מ"ג / מ"ל, SC) לאזור שבו חתך ייעשה כמו שיכוך כאבים טרום ניתוחית.
  5. ביצוע חתך יחיד (~ 1.0 - 1.5 ס"מ) על האגף השמאלי של החיה באמצעות אזמל או מספריים סטריליות, בזהירות כדי לא לחדור את הצפק. הפרד את הדרמיס מן הצפק עם מספריים סטרילי. טובלים במקום החתך עם גזה כותנה סטרילי כדי להסיר כל הדם.
  6. החזק את העכבר עם שתי הידיים, באמצעות יד שמאל כדי להחזיק את הראש ואת היד הימנית לתמוך בכנף.
  7. זהה את הטחול דרך הצפק, עם אצבע אחת של יד ימין, למשש את העכבר מלמטה; הכליה צריכה להיות גלויה עכשיו דרך הצפק. שמור אחיזה איתנה של החיה כדי לספק מתח פני הצפק הכליות.
  8. האם אדם שני להזריק גידול CELLS (מוכן בסעיף 1.2.) דרך הצפק שלם למרכז של כליות באמצעות מזרק 1 מ"ל מצויד במחט 28-מד. לאט לספק 0.1 מ"ל (2 x 10 5) של תאים. לאחר התאים מוזרקים, להחזיק את המחט במקום במשך 5 - 10 s לצמצם את הזרימה החוזרת של תאים. חשוב לציין את הצורך בזהירות רבה במהלך שלב זה, כמו האדם הזרקת התאים יהיה להביא את המחט לתוך בסמיכות האצבעות של אדם מחזיק את העכבר.
  9. הסר את המחט לסגור את החתך עם שכבה דקה של דבק רקמות cyanoacrylate.
  10. מניח את החיה חזרה לכלוב נקי עם מגבת נייר סטרילי. אפשר החיות להתאושש על כרית חימום. אין להשאיר את החיות ללא השגחה במהלך תקופת ההחלמה. אין להחזיר את החיות בתנאי דיור סטנדרטיים עד שהם זקופים sternal. פעל בהתאם להנחיות מוסדיות בכל ההליכים באמצעות חיות מעבדה.

4. ביוהדמיה זורחת

  1. מעקב אחר צמיחת הגידול על ידי הדמיה bioluminescent.
    הערה: פרטים פרוצדורלי לביצוע הדמיה bioluminescent ניתן לקבל Lim ואח. 20 אות בלוציפראז ניתן לאתר מוקדם ככל 24 שעות לאחר השתלת תאים סרטניים. מאחר ואין גידול חיצוני גלוי במודל זה, זה חיוני כדי לפקח על גידול מעת לעת. בהתאם הניסוי תוכנן, צמיחת גידולים orthotopic יכול להמשיך לפרקי זמן. אחד היתרונות של השימוש בתאי Renca להביע בלוציפראז הוא המזינים את הגידול ניתן לנטר שוב ושוב באותו חיה במרווחי זמן קבועים במשך כל תקופת הניסוי, וכן חקירה ספציפית של נושאות גידולים ואיברים חופשי הגידול יכול להיעשות בכל נקודת סיום מוגדר.
    1. להזריק לוציפרין (0.1 מ"ל של תמיסה 15 מ"ג / מ"ל ​​ב סטרילית PBS) IP ולאפשר לו להסתובב במשך 10 דקות לפני הצבת העכבר לתוך מערכת הדמיה פליטת אור. מניחים את mo לשימוש עם למעלה בצד הגבי שלה, התגלגל מעט על צידו, על מנת לקבל את הכליה המוזרקת פונה כלפי מעלה.
    2. מדוד את ניטל הגידול ב פוטונים של אור הנפלט לכל (שטף פוטון) השני בתוך אזור מוגדר של העניין (ROI) באמצעות תוכנת ניתוח תמונה.
  2. כימות של נטל הגידול באיברים הפרט.
    הערה: ניתן לבצע כימות בנקודות זמן שהוגדר איברים בודדים לאחר הוצאתם מן עכברים מורדמים.
    1. להזריק את העכברים עם לוציפרין, כמו בשלב 4.1.
    2. לאחר 10 דקות, להרדים את העכברים באמצעות הליך שאושר.
    3. לנתח את האיברים של עניין (למשל, כליות וריאות; ראה סעיף 5 להלן). העברת רקמות כדי 35 x מנות 10 מ"מ פטרי ולהכניס אותם לתוך מערכת הדמיה פליטת אור.
    4. מדדו את נטל הגידול ב הפוטונים של האור הנפלט לכל (השטף פוטון) השנייה בתוך ROI מוגדר באמצעות תוכנת ניתוח התמונה.
e_title "> 5. קציר איברים

  1. במבט קצה מוגדר לצורך ניסוי הפרט, להרדים עכברי נושאי גידול בהתאם להנחיות מוסדיות עדיפות (למשל, CO 2, נקע בצוואר רחם, ממנת יתר הרדמה). עם זאת, למנוע נקע בצוואר הרחם אם הריאות הם ייאספו לאחר האינפלציה דיו הודו.
  2. בצע הערכת ברוטו של גידול כליות עיקרי הכליות המוזרקות על ידי מדידת משקל האיבר הרטוב.
    1. כדי לקבוע את מסת הגידול (ב ז), לבודד 21 ולשקול את כלית נושאי גידול ואת הכליות הנגדיות מאותו העכבר, כאשר פער משקולות כליות מגדיר את מסת הגידול. בזהירות לנתח משם את כל רקמת חיבור זרה מן הכליות ניכרות לפני מדידת המשקל שלהן.
  3. להעריך את מידת גרורות של גידולים אל הריאות באמצעות ניפוח הריאות עם דיו הודו לפני כריתה ומיד תיקנה את הריאות בתמיסה של פקטהנַעֲרָה = "Xref"> 22. חישוב ידני של גרורות על פני שטח הריאות יכול להתבצע אז.
    1. ביצוע חתך קו אמצע באמצעות מספריים החלו באמצע שנתי הבטן, דרך בית החזה, ולמעלה דרך בלוטות צוואר / רוק. מוציאים בזהירות את בית החזה באמצעות מספריים מלקחיים, מבלי להתפשר על רקמת הריאות.
    2. לחשוף את קנה הנשימה על ידי הסרת רקמת החיבור.
    3. הכן מזרק מ"ל 3 עם מחט 18-מד מלא 10% פתרון דיו הודו ב HBSS.
    4. בעזרת מלקחיים, בזהירות חוט תפר משי תחת קנה הנשימה. זה ישמש כדי לקשור את קנה הנשימה פעם מנופחת.
    5. בזהירות להכניס את המחט לאורך קנה הנשימה לאט לדכא את המזרק כדי לנפח את הריאות עם פתרון דיו הודו. כ 1 - 1.5 מ"ל של פתרון דיו הודו יהיה לנפח את הריאות באופן מלא.
    6. לצבוט את קנה הנשימה לסגור ידי קשירה כמה קשרים, עם התפר מתחת מחט כדי לעכב את הזרימה החוזרת של הדיו.
    7. removדואר המחט בזהירות לחתוך את רקמת חיבור כדי להסיר את הריאות המנופחות.
    8. בשנת במנדף כימי, למקם את הריאות לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל המכיל 5 מ"ל של הפתרון של פקטה (35 מ"ל של 95% EtOH, 15 מ"ל של DH 2 O, 5 מ"ל של פורמלדהיד, ו 2.5 מ"ל של חומצה חומצי קרחונים ב בקבוק זכוכית 100 מ"ל) 23.
    9. אפשר הריאות לתקן / destain עבור 24 - 48 שעות בטמפרטורת החדר לפני ספירת גושים סרטניים destained ידני.
    10. הסר את הריאות השלמות אחרי destaining ובזהירות לנתח את הריאות הקבועות על ידי אונה בצלחת 35 x 10 מ"מ פטרי. ספירת הגושים סרטניים (גושים לבנים) על כל אונה תחת מיקרוסקופ לנתח.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

ההשתלה המוצלחת של תאי Renca תגרום להתפתחות גידולים בכליה וגרור לריאות של העכברים. לאחר הכריתה של הנושאים-גידול ואת הכליות הנגדיות, משקולות רקמות רטובות (ז) נמדדו כדי להדגים את ניטל הגידול מבוסס על משקל מוגבר (איור 1). גידולי Renca ניתן לזהות על ידי אימונוהיסטוכימיה באמצעות cytokeratin 8 ו 18 מכתים (איור 2). עבור מחקרים ארוכי טווח, קו התא Renca בלוציפראז-לבטא הושתלה. הדמיה Bioluminescent בוצע באמצעות מערכת

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

אנו מציגים פרוטוקול מודל העכבר RCC orthotopic. השרשה של תאים סרטניים אדנוקרצינומה עכבר כליות לתוך כלית העכבר מספקת מודל קליני רלוונטי של mRCC. מודל זה גורם הגידול הראשוני בתוך כליות גרורות מרוחקות של הריאות, אשר שניהם הם מסימני ההיכר של מתקדמים RCC. התיאור המובא כאן הוא ספציפי עבור קו התא Renca ב עכברים Balb / c. באמצעות מודל orthotopic זה, הראינו כי גידולי Renca מגיבים חיסוני, הוכחת התועלת של המודל הזה לבדיקה טיפולית 17, 2...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמכון הלאומי לסרטן (R15CA173657 ל- AW ו R01CA109446 כדי TSG), מכון הסרטן סימונס (כדי AW), ואוניברסיטת Minnestoa לטפס 4 כליות קרן סרטן (כדי TSG). אנו מודים לד"ר קריסטין אנדרסון לסיוע עם immunofluorescence.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
דמעות מלאכותיות משחת עינייםAkornNDC 17478-162-35
דבק רקמותVetbond 3MCBGBIW011019
תמיסת בטדין (פובידון-יוד, 5%)Purdue Products, L.P.NDC 67618-155-32
0.25% מרקאין (הזרקת בופיוואן הידרוכלוריד)הוספירה0409-1587-50 
כרית חימוםSunbeam
BD309659
GauzeVenture908291
קטמיןPhoenix PharmaceuticalsNDC 57319-609-02
קסילזין AkornNDC 59399-111
Hank' s מלחים מאוזניםSigma-AldrichH2387
IVISקליפר
D-לוציפרין, מלח אשלגןGoldBioLUCK-1G
הודו דיוChartpak Inc44201
מספריים
מלקחיים
היפהפייה הנרדמת (SB) מערכת טרנספוזוןנוירומיקה
SBT0200 רנקהATCCCRL-2947
מזרקי

מקורות

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J. Clin. 66, 7-30 (2016).
  2. Chow, W. H., Dong, L. M., Devesa, S. S. Epidemiology and risk factors for kidney cancer. Nat. Rev. Urol. 7, 245-257 (2010).
  3. Hollingsworth, J. M., Miller, D. C., Daignault, S., Hollenbeck, B. K. Rising incidence of small renal masses: a need to reassess treatment effect. J. Natl. Cancer Inst. 98, 1331-1334 (2006).
  4. Lee-Ying, R., Lester, R., Heng, D. Current management and future perspectives of metastatic renal cell carcinoma. Int. J. Urol. 21, 847-855 (2014).
  5. Rini, B. I. New strategies in kidney cancer: therapeutic advances through understanding the molecular basis of response and resistance. Clin. Cancer Res. 16, 1348-1354 (2010).
  6. Acquavella, N., Fojo, T. Renal cell carcinoma: trying but failing to improve the only curative therapy. J. Immunother. 36, 459-461 (2013).
  7. Salup, R. R., Wiltrout, R. H. Adjuvant immunotherapy of established murine renal cancer by interleukin 2-stimulated cytotoxic lymphocytes. Cancer Res. 46, 3358-3363 (1986).
  8. Ko, J. S., et al. Direct and differential suppression of myeloid-derived suppressor cell subsets by sunitinib is compartmentally constrained. Cancer Res. 70, 3526-3536 (2010).
  9. Kusmartsev, S., et al. Oxidative stress regulates expression of VEGFR1 in myeloid cells: link to tumor-induced immune suppression in renal cell carcinoma. J. Immunol. 181, 346-353 (2008).
  10. Rocha, F. G., et al. Endostatin gene therapy enhances the efficacy of IL-2 in suppressing metastatic renal cell carcinoma in mice. Cancer Immunol. Immunother. 59, 1357-1365 (2010).
  11. Shanker, A., et al. Treating metastatic solid tumors with bortezomib and a tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor agonist antibody. J. Natl. Cancer Inst. 100, 649-662 (2008).
  12. VanOosten, R. L., Griffith, T. S. Activation of tumor-specific CD8+ T Cells after intratumoral Ad5-TRAIL/CpG oligodeoxynucleotide combination therapy. Cancer Res. 67, 11980-11990 (2007).
  13. Bibby, M. C. Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages. Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).
  14. Devaud, C., et al. Tissues in different anatomical sites can sculpt and vary the tumor microenvironment to affect responses to therapy. Mol. Ther. 22, 18-27 (2014).
  15. Devaud, C., et al. Differential potency of regulatory T cell-mediated immunosuppression in kidney tumors compared to subcutaneous tumors. Oncoimmunology. 3, 963395(2014).
  16. Devaud, C., et al. Cross-talk between tumors can affect responses to therapy. Oncoimmunology. 4, 975572(2015).
  17. Norian, L. A., et al. Eradication of metastatic renal cell carcinoma after adenovirus-encoded TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)/CpG immunotherapy. PLoS One. 7, 31085(2012).
  18. Matin, S. F., et al. Immunological response to renal cryoablation in an in vivo orthotopic renal cell carcinoma murine model. J. Urol. 183, 333-338 (2010).
  19. Wilber, A., et al. RNA as a source of transposase for Sleeping Beauty-mediated gene insertion and expression in somatic cells and tissues. Mol. Ther. 13, 625-630 (2006).
  20. Lim, E., Modi, K. D., Kim, J. In vivo bioluminescent imaging of mammary tumors using IVIS spectrum. J. Vis. Exp. , (2009).
  21. Skrypnyk, N. I., Harris, R. C., de Caestecker, M. P. Ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice. J Vis Exp. , (2013).
  22. Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse. J. Vis. Exp. , (2010).
  23. Wexler, H. Accurate identification of experimental pulmonary metastases. J. Natl. Cancer Inst. 36, 641-645 (1966).
  24. James, B. R., et al. CpG-mediated modulation of MDSC contributes to the efficacy of Ad5-TRAIL therapy against renal cell carcinoma. Cancer Immunol. Immunother. 63, 1213-1227 (2014).
  25. James, B. R., Brincks, E. L., Kucaba, T. A., Boon, L., Griffith, T. S. Effective TRAIL-based immunotherapy requires both plasmacytoid and CD8a DC. Cancer Immunol. Immunother. 63, 685-697 (2014).
  26. James, B. R., et al. Diet-induced obesity alters dendritic cell function in the presence and absence of tumor growth. J. Immunol. 189, 1311-1321 (2012).
  27. Brincks, E. L., et al. Triptolide enhances the tumoricidal activity of TRAIL against renal cell carcinoma. FEBS J. 282, 4747-4765 (2015).
  28. Anderson, K. G., et al. Cutting edge: intravascular staining redefines lung CD8 T cell responses. J. Immunol. 189, 2702-2706 (2012).
  29. Anderson, K. G., et al. Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes. Nat. Protocols. 9, 209-222 (2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

השתלה תוך-כליאתיתגרורות גידולתאי Rencaדימות ביו-לומנסנטיגרורות ריאהגידול אורתוטופיטיפול פרה-קליניצביעת ציטוקרטין
קרצינומה תא syngeneic עכבר הדגם של גרורתי כליות עבור הערכה כמותית אורך ורוחב של טיפולים פרה-קליניים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.