הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

לא פולשני

8.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55180

⸱

8 במאי 2017

 ,  ,  ,  , 
1Werner Siemens Imaging Center, Department of Preclinical Imaging and Radiopharmacy, Eberhard Karls University of Tübingen, 2Department of Nuclear Medicine, Eberhard Karls University of Tübingen, 3Department of Dermatology, Eberhard Karls University of Tübingen

במאמר זה

סיכום

מאמר זה מסביר את היישום של הדמיה פלואורסצנטי באמצעות בדיקת הדמיה אופטית activatable לדמיין את הפעילות vivo של metalloproteinases מטריצה ​​מפתח בשני מודלים ניסיוניים שונים של דלקת.

תקציר

מאמר זה מתאר שיטה לא פולשנית metalloproteinases מטריצה ​​הדמיה (MMP) - פעילות על ידי בדיקה פלואורסצנטי activatable, באמצעות in vivo פלואורסצנטי הדמיה אופטית (OI), בשני מודלים עכבר שונים של דלקת: דלקת מפרקים שגרונית (RA) ואיש קשר מודל תגובה רגישות (CHR). אור עם אורך גל בחלון אינפרא אדום הקרוב (NIR) 650 - 950 ננומטר) מאפשר חדירת רקמה עמוקה יותר וקליטה אות מינימלית לעומת אורכי גל מתחת 650 ננומטר. היתרונות העיקריים באמצעות פלואורסצנטי OI היא שזה זול, מהיר וקל ליישם דגמים שונים של בעלי חיים.

בדיקות ניטור Activatable הם שתיקה אופטית במדינות שלהם מומת, אבל להיות מאוד פלורסנט כאשר מופעל על ידי פרוטאז. הופעל MMPs להוביל להרס רקמות לשחק תפקיד חשוב להתקדמות המחלה בתגובות hyperersensitivity סוג מתעכב (DTHRs) כגון RA ו CHR. יתר על כן, MMPs הםאת פרוטאזות מפתח עבור סחוס העצם השפלה והם המושרה על ידי מקרופאגים, fibroblasts ו chondrocytes בתגובה לציטוקינים פרו דלקתיים. כאן אנו משתמשים בדיקה כי הוא מופעל על ידי MMPs מפתח כמו MMP-2, -3, -9 ו -13 ו לתאר פרוטוקול הדמיה עבור קרוב הקרינה אינפרא אדום OI של פעילות MMP ב RA ו עכברים שליטה 6 ימים לאחר אינדוקציה המחלה גם כן כמו בעכברים עם אקוטי (1x אתגר) וכרוני (5x אתגר) CHR על האוזן הימנית לעומת האוזניים בריא.

מבוא

מחלות אוטואימוניות כגון דלקת מפרקים שגרונית (RA) או vulgaris פסוריאזיס מדורגות כמו תגובות של רגישות יתר מסוג מתעכב (DTHRs). RA 1 היא מחלה אוטואימונית נפוצה המאופיינת סינוביטיס מכרסמת והרס המפרק. 2 דלקת מפרקים מוסתים להפגין חדירה והתפשטות של תאי דלקת, ביטוי מוגבר של תאי פרו-דלקתיים מובילים להיווצרות pannus, סחוס והרס עצם. מחשוף 3, 4 של מולקולות תא מטריקס, כגון קולגן על ידי metalloproteinases מטריצה (MMPs), הוא חיוני עבור המרת רקמות אנגיוגנזה וגורם הרס רקמות. 5, 6 תגובות רגישות-יתר לתקשר (CHR) מאופיין צבירה של נויטרופילים שמובילים פרץ חמצונים. 7 בדומה RA, MMPs ב CHR הם involVed ב המרה רקמות, הגירה תא אנגיוגנזה על מנת ליצור דלקת כרונית.

כדי לחקור RA, גלוקוז 6-פוספט איזומראז (GPI) - סרום מזרק עכבר המודל שימש. 8 סרום מעכברים K / BxN מהונדס המכיל נוגדנים נגד GPI, הוזרק לתוך BALB / עכברים c נאיבי לאחר מכן דלקת ראומטית החלה להתפתח בתוך 24 שעות עם מקסימום של נפיחות בקרסול ביום 6 לאחר הזרקה בסרום GPI (ראה 1.1). כדי לנתח CHR כרונית, C57BL / 6 עכברים היו רגיש עם trinitrochlorobenzene (TNCB) על הבטן. האוזן הימנית נתגלתה עד 5 פעמים החל משבוע לאחר הרגישות (ראה גם 1.1 ו -1.2).

Noninvasive חיה קטנה OI היא טכניקה המבוססת על in vivo החקירה של אותות ניאון, chemiluminescent ו- bioluminescent, אשר משמשים בעיקר במחקר פרה קליני. הנתונים הכמותיים הנרכשים מספקים תובנות למולקמנגנוני ular באיברים ורקמות של בריא כמו גם במודלים של בעלי חיים חולים ניסיוני, ומאפשר האורך מעקב מדידות (למשל להעריך פרופילים בתגובה טיפוליים in vivo). יתרון גדול של מחקרים ארוכים טווח הוא ההפחתה של מספרי בעלי חיים, כמו באותן החיות ניתן למדוד במחקרי מעקב במספר נקודות זמן במקום להשתמש בעכברים שונים לכל נקודת זמן. הרזולוציה של OI מאפשרת הדמיה תפקודית מפורטת של איברים ואף מבני רקמות קטנים יותר בחיות מעבדה.

השימוש מסנן עירור ופליטה ספציפי עם ספקטרום שידור צר, הגנה נגד אור מפוזר על ידי lightproof "תיבה כהה" ואת מכשיר טעון מצמידים רגיש (CCD) מצלמה, אשר מקורר במכשירים רבים עד -70 ° C , מאפשר מאוד מדידות ספציפיות ורגישות של אותות הקרינה.

באמצעות סוכני ניאון עם excitation- ופליטה-ספקטרה בחלון הקרינה האינפרה-אדום הקרוב (650 - 950 ננומטר), אות-לרעש ניתן לשפר יחסים משמעותיים. חלון הקרינה האינפרה-אדום הקרוב מתאפיין קליטה נמוכה יחסית של האות על ידי ההמוגלובין ומים וכן קרינה אוטומטית רקע נמוך. 9 זה מאפשר עומק החדירה של עד 2 ס"מ רקמות של חיות קטנות. OI-בדיקות יכולות לטפל יעד ישירות (למשל על ידי נוגדן הנקרא קרינה) או יכולות להיות מופעלת ברקמת היעד (למשל על ידי פרוטאזות). בדיקות OI Activatable שותקים אופטיים בצורתם המומתת בשל העברת אנרגית תהודת פורסטר (סריג) כדי מחצית מרווה, אשר מעבירה את אנרגית העירור בתוך מולקולת לתחום אחר. אם הצבע הוא ביקע (על ידי הפרוטאז למשל) האנרגיה כבר לא יועברו בתוך המולקולה אות ניאון יכול להיות מזוהים על ידי OI. זה מאפשר תכנון של בדיקות OI עם specificit גבוההy עבור תהליכים ביולוגיים ברורים אות לרעש-יחסים מעולים.

הפרוטוקול הבא מסביר בפירוט על הכנת החיות, מדידות OI באמצעות בדיקת OI Activatable לתמונת MMP-2, -3, -9 ו -13 פעילות in vivo ושני דגמים ניסיוניים של דלקת (RA, CHR).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל ההליכים המתוארים במאמר זה, בעקבות הקווים המנחים והסטנדרטים הבינלאומיים של טיפול ושימוש בבעלי מעבדה, אושרו על ידי הוועדה המקומית לרווחת בעלי חיים ואתיקה של ועדת המדינה Tuebingen, גרמניה. 8 - 12 שבועות BALB / C ו C57BL / 6 עכברים נשמרו על 12 שעות: 12 שעות אור: מחזור כהה היו שוכנו IVCs ותנאים סביבתיים סטנדרטיים ב 22 ± 1 מעלות צלזיוס בקבוצות של 2 - 5 עם מים גישה למודעה .

1. הכנה חומרית

  1. לדלל את צבע OI עבור קרוב אינפרא אדום הדמיה פלואורסצנטי על פי גיליון הנתונים בהתאמה ישירות לפני ההזרקה. צבע oi activatable (בדיקה מסחרית עם עירור ב 680 ננומטר) כדי למדוד MMPs ב vivo מוכן להשתמש בריכוז של 20 nmol ב 1.5 מ"ל 1x PBS. נער בעדינות או מערבולת את הפתרון לפני השימוש. OI צבע ניתן לאחסן 2 - 8 מעלות צלזיוס למשך עד 6 חודשים כאשר מוגן מפני האור.
  2. לקבלת תוך ורידי (IV) זריקות להכין צנתר ורידי. השתמש 20 U (0.5 מ"ל) מזרק אינסולין מלאים תמיסת מלח 0.9% (המכיל 10 יחידות הזרקה של הפרין 50 מ"ל), ו מחט 30-מד מחובר קטטר פוליאתילן. להזריק את המינון המומלץ של 2 nmol לכל עכבר של צבע OI.

אינדוקציה 2. של דלקת מפרקים שגרונית לבין התגובה לתקשר רגישות יתר כרונית

  1. דלקת מפרקים שגרונית:
    1. לדלל 100 μL של בסרום (שנצבר K / BxN עכברים 10) נוגדנים המכיל (AB) נגד איזומראז גלוקוז-6-פוספט (GPI) 1: 1 עם PBS 1x (200 μL) כדי לגרום RA. אחסן את הסרום המדולל ב -80 מעלות צלזיוס. נהלים מפורטים אינדוקציה של RA מתוארים על ידי ואח Monach. 8.
    2. כדי לגרום RA, להרים כל עכבר בעדינות בזנב להזריק 200 μL של intraperitoneal בסרום מדולל (IP) ביום 0 של tהוא הניסוי. לאחר הזריקה במקום העכבר ישירות לתוך הכלוב שלה.
    3. לחלופין, למדוד את קוטר הקרסול של כל הקרסול, לפני זריקות א.ב. ולהגדיר "ניקוד מפרקי" ( איור 1 א ). המשך המדידה של נפיחות בקרסול יומי עד יום 6 לאחר הסרום GPI באמצעות מכשיר מדידה מכני (מיקרומטר).
    4. להזריק את הצבע oi activatable (שלב 1.1 - 1.2), כדי למדוד vivo MMP פעילות IV לתוך הווריד הזנב של עכברים RA ביום 5 לאחר הזרקת GPI-serum לתוך וריד הזנב של עכברים שליטה. בצע ניסויים הדמיה אופטי 24 שעות לאחר הזרקת הווריד הזנב.
  2. תגובה רגישות תגובה:
    1. עבור רגישות של C57BL / 6 עכברים, להכין פתרון TNCB 5% מומס תערובת של 4: 1 של אצטון / שמן.
    2. להרדים C57BL / 6 עכברים באמצעות 1.5% isoflurane vaporized ב 100% חמצן (1.5 L / min). לאחר עכברים מורדמים, למקם אותו עצמית מטורף חרוט האף (חתך 5 מ"ל פוליאתילן מזרק, המחובר צינור 1.5% isoflurane%) ולשמור על הרדמה. החל משחת עיניים וטרינר על בעלי חיים הרדים כדי למנוע יובש בעיניים בזמן הרדים.
    3. לגלח את הבטן בזהירות (2 x 2 ס"מ) באמצעות גוזם שיער קטן חיה. הימנע מפגיעה בעור, שכן זה יכול להוביל אותות ניאון ספציפיים בתוך החיה והוא יכול להשפיע על תוצאות המחקר.
    4. החל 80 μL של פתרון TNCB 5% באיטיות באזור הבטן מגולח באמצעות פיפטה 100 μL כדי לרגש את החיה. מניחים את העכבר בעדינות בחזרה לתוך הכלוב שלה דואג להבטיח כי העיניים של העכבר לא באים במגע עם מצעים כדי למנוע פגיעה בקרנית ולהימנע טמפרטורות גוף נמוך במהלך שלב ההחלמה.
    5. שישה ימים לאחר רגישות, להכין פתרון TNCB 1% (מומס בתערובת של 9: 1 של אצטון / שמן) ולהחיל 20 μL באוזן ימין באמצעות פיפטה כדי לעורר CHSR חריפה כרונית."> 1
      1. התחל עם האתגר 1 st משני צידי האוזן הימנית עם 20 μL של פתרון 1% TNCB בעזרת פיפטה 100 μL וחזור האתגר מדי יום שני עד חמש פעמים (יום 15 לאחר סנסיטיזציה) כדי לעורר CHR (איור 1B) . למדוד עובי האוזן יומי, באמצעות מכשיר מדידה מיקרומטר.
    6. להזריק את צבע OI activatable (בדיקה מסחרית עם עירור ב 680 ננומטר) (שלב 1.1-1.2) כדי למדוד את פעילות MMP in vivo בעכברי CHR 12 שעות לאחר האתגר. בצע ניסויי הדמיה אופטית 24 שעות לאחר זנב וריד להזרקה (iv).

3. הכנת בעלי חיים עבור דימות אופטי

  1. עכבר חלף צ'או (לפחות הדמית 3 ימים לפני כן) צ'או נמוכה או שאינו פלואורסצנטי (למשל, מנגן חינם) כדי למנוע את ההפרעה של קרינה אוטומטית (סביב 700 ננומטר) עם אות הקרינה של סוכני OI בשימוש.
  2. מניח את החיהכדי הרדמה תיבת להרדים באמצעות 1.5% ISO% isoflurane vaporized עם חמצן (1.5 L / min) (חמצן יכול להיות מוחלף על ידי אוויר אבל צריך להיות סטנדרטי בתוך ניסוי אחד).
  3. כאשר העכבר הוא הרדים בעליל, למקם אותו חרוט האף עצמו (לבנות על ידי לחתוך 5 מזרק פוליאתילן מ"ל, מחובר צינור 1.5% isoflurane%) ולשמור על הרדמה.
  4. לגלח את החיה בזהירות באתר היעד (2 ס"מ x 2 ס"מ) באמצעות גוזם שיער קטן חיה. הימנע מפגיעה בעור, שכן זה יכול להוביל אותות ניאון ספציפיים בתוך החיה והוא יכול להשפיע על תוצאות המחקר.
    הערה: השיער יכול לספוג את האות הקרינה במהלך OI (תלוי בלחץ העכבר, ספיגה פחות או יותר הוא ציין) בהתאם לאזור של ריבית (החזר ROI).
  5. עבור הזרקת iv , מניחים את זנב העכבר במים מחוממים, כדי לעורר vasodilation, בעדינות לטהר את העור באתר ההזרקה עם אלכוהול, ולהתחיל על ידי הצבת catheter בבאתר הדיסטלי של הזנב. מניח את "לחתוך" קצה המחט, בזווית של 20 מעלות לתוך וריד הזנב ולבדוק את הנחת הנכון של הקטטר על ידי מחדש השעיית המזרק.
  6. אם את הקטטר ממוקם כראוי, להחליף את המזרק ולהזריק את החללית OI (2 ננומול). לאחר הזרקה, להחליף את המזרק להזריק 25 μL של תמיסת מלח 0.9% ל מלא ברור הנפח המת של צינור פוליאתילן.
    הערה: בפעם מחצית חי הרקמות של צבע OI בשימוש (בדיקה מסחרית עם עירור ב 680 ננומטר) למדידת פעילות MMP in vivo היא 72 h. כדי להבטיח אישור מלא, מחדש הזרקה של הצבע אינה מומלצת לפני 7 ימים לאחר הזרקה מוקדמת.

4. דימות אופטי

  1. מניחים פלסטיק שחור או גיליון נייר את הקופסה השחורה של הסורק-OI במרכז שדה הראייה (FOV).
  2. הגדרת פרוטוקול מדידה ולבחור את הגל הנכון (עירור: 680 ± 10 ננומטר ו eמשימה: 700 ± 10 ננומטר) ופרמטרים הדמיה.
    הערה: במערכות OI מסוימות, ההגדרה עבור מספר צבעי הדמיה מוגדרת מראש.
  3. כדי לבחור את הפרוטוקול הנכון עבור הדמיה פלואורסצנטי, לפתוח את תוכנת הדמיה (המסופקים על ידי היצרן) ולאתחל את המערכת. רוב מצלמות CCD צריך להתקרר לטמפרטורת העבודה שלהם, וזה יכול לקחת 10 דקות. לקבלת תוצאות אמינות, המתן עד שהמערכת תהיה מוכנה.
  4. שים לב ב vivo מערכת הדמיה רכישת לוח הבקרה צצים למעלה וכל זוג מסנן נבחר ייצג תמונה אחת ברצף. במקרה זה, לרכוש תמונה אחת עם זוגות המסנן עבור צבע מסחרי עם גירוי ואת פליטת אורך גל של 680 ± 10 ננומטר ו 700 ± 10 ננומטר, בהתאמה, ולהתחיל את המדידה (לחץ על "רצף רכישת"). לקבלת הוראות מפורטות יותר, עיין במדריך של היצרן.
  5. לייבל את התמונות כראוי ולשמור את המידע "ערוך תמונהתוויות "חלון, אשר יהיה לצוץ בעקבות" רצף לרכוש ".
  6. קח סריקה בסיסית של כל חיה לפני ההזרקה של צבע OI, או להשתמש בחיות שליטה נאיבי כדי להבדיל את הרקע האות.
  7. H לאחר הזרקת הווריד הזנב של צבע OI, במקום החיות במרכז של FOV, בעמדה כדי למדוד את האות הגבוהה ביותר במערכת OI, ולהתחיל את המדידות.
    הערה: חשוב: היפותרמיה יכולה להשפיע באופן משמעותי על התפלגות חומרי ההדמיה. ודא כי הבמה מחומם עד 37 ° C, כדי למנוע היפותרמיה של החיה. הדמיה יכולה להתבצע בו זמנית עם בעלי חיים בקבוצות של 1 עד 5 עכברים. בחר את הגודל של FOV בהתאם למספר בעלי חיים למדוד בו זמנית. באפשרותך לצלם תמונת שדה בהירה כדי לבדוק אם כל עכבר גלוי.

5. ניתוח נתונים

הערה: בצע ניתוח נתונים באמצעות תוכנת התמונה הבאההפרוטוקול של היצרן.

  1. עבור מדידות של RA, השתמש יחידת מכויל של פליטת הפוטון כפי שמוצג באיור 2 , בעוד CHSR כרונית הם בתמונה כמו עוצמת האות באחוזים (יעילות).
  2. כדי לצייר ROIs באופן ידני, השתמש בצלחת הכלי. לניתוח של תמונות RA להשתמש במעגל סטנדרטי, ממוקם סביב האות הגבוהה ביותר בכל הקרסוליים וכפות של כל חיה. כדי לנתח את CHSR, מניחים את החזרים ROI סביב האוזן הימנית והשמאלית בהתאם לתמונת השדה הבהיר.
  3. כדי למדוד את פליטת הפוטון או ערכי עוצמת האות בהחזר ROI המסוים, לחץ על "מדידה". המערכת תספק ערכים בהחזר על ההשקעה המתואר לניתוח סטטיסטי תיאורתי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כדי לגרום דלקת מפרקים שגרונית (RA) בעכברים BALB / ג נאיבי, חיות הוזרקו IP עם נוגדנים עצמיים (1: 1 דילול עם PBS 1x) נגד GPI ביום 0. הדלקת המרבי (הקרסול ונפיחות) ב GPI-סרום זה המושרה דגם RA הוא על הזרקה פוסט יום 6 11. לכן, 2 ננומול של צבע OI activatable הוכן והזריק iv ב וריד הזנב של עכברים מפרקים ובעלי חיים בריאים ביום 5. 24 שעות לאחר הזרקה (יום 6), עכברים היו מורדמים צלמו כמתואר בסעיף 3 ( איור 1A).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

OI הוא כלי מאוד שימושי, מהיר ולא יקר עבור פולשני בתחום ההדמיה המולקולרית vivo במחקר פרה-קליניים. חוסנה החברתי בפרט של OI הוא היכולת לנטר תהליכים דינמיים מאוד כמו תגובות דלקתיות. יתר על כן, OI מאפשר לעקוב אחר מהלך מחלה במשך תקופה ארוכה של זמן, החל מספר ימים עד שבועות.

יש OI מספר יתרונות על פני שיטות הדמיה vivo אחרים כגון טומוגרפיה פוזיטרונים-פליטה (PET) או הדמיה בתהודה מגנטית (MRI), כפי ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

אנו מודים דניאל Bukala, נטלי Altmeyer ו Funda קיי לקבלת תמיכה טכנית מעולה. אנו מודים יונתן גפן, גרג באודן ופול Soubiran לעריכת כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי ורנר סימנס-קרן והפקולטה לרפואה של אוניברסיטת טובינגן אברהרד Karls ( "" Promotionskolleg "") ועל ידי DFG דרך 156 CRC (C3 הפרויקט).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
CornergelGerhard Mann GmbH1224635משחת עיניים 
ForeneAbbott GmbH4831850מזרק אינסולין איזופלורן
U40Becton Dickinson and Company324876
HeparinSintetica6093089
High-Med-PE 0.28 x 0.61 מ"מReichelt Chemietechnik GmbH+Co28460צינורות פוליאתילן, קוטר פנימי 0.28 מ"מ, קוטר חיצוני 0.61  מ"מ 
BD מחטי שיפוע רגילות, 30 גרםבקטון דיקינסון ושות' בע"מ305106 צינורית הזרקה 30 גרם
RTA-0011 איזופלורן וופורייזרVetland Medical Sales and Services LLC-Artagain
נייר ציורStrathmore ArtistPaper 446-8פחם
שחור IVIS ספקטרוםפרקין אלמר124262מערכת הדמיה אופטית
BD מחטי שיפוע רגילות, 25 GBecton Dickinson and Company305122
2-כלורו-1,3,5-טריניטרובנזןסיגמא אולדריץ' GmbH7987456FTNCB
MMPense 680פרקין אלמר NEV10126צבע הדמיה פלואורסצנטי
Oditest Koreplin GmbHC1X018מדידה מכנית
Miglyol 812SASOL-Oil
  BALB/C, C57BL/6מעבדות צ'ארלס ריבר -עכברים המשמשים להתנסויות
PBSSigma Aldrich GmbHלדילול סרום RA 
פיפטה (100 ומיקרו; L)Eppendorf משמש ליישום TNCB 
מכונת גילוח וואהל 9962גוזם שיער בעלי חיים
תמונה חיה פרקין אלמר תוכנת הדמיה למדידת OI

מקורות

  1. Veale, D. J., Ritchlin, C., FitzGerald, O. Immunopathology of psoriasis and psoriatic arthritis. Ann Rheum Dis. 64, 26(2005).
  2. Harris, E. D. Rheumatoid arthritis. Pathophysiology and implications for therapy. N Engl J Med. 322 (18), 1277-1289 (1990).
  3. Lee, D. M., Weinblatt, M. E. Rheumatoid arthritis. Lancet. 358 (9285), 903-911 (2001).
  4. Firestein, G. S. Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis. J Clin Rheumatol. 11, S39-S44 (2005).
  5. Pap, T., et al. Differential expression pattern of membrane-type matrix metalloproteinases in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 43 (6), 1226-1232 (2000).
  6. Firestein, G. S., Paine, M. M. Stromelysin and tissue inhibitor of metalloproteinases gene expression in rheumatoid arthritis synovium. Am J Pathol. 140 (6), 1309-1314 (1992).
  7. Schwenck, J., et al. In vivo optical imaging of matrix metalloproteinase activity detects acute and chronic contact hypersensitivity reactions and enables monitoring of the antiinflammatory effects of N-acetylcysteine. Mol Imaging. 13, (2014).
  8. Monach, P. A., Mathis, D., Benoist, C. The K/BxN arthritis model. Curr Protoc Immunol. 15, 22(2008).
  9. Zelmer, A., Ward, T. H. Noninvasive fluorescence imaging of small animals. J Microsc. 252 (1), 8-15 (2013).
  10. Kouskoff, V., et al. Organ-specific disease provoked by systemic autoimmunity. Cell. 87 (5), 811-822 (1996).
  11. Fuchs, K., et al. In vivo imaging of cell proliferation enables the detection of the extent of experimental rheumatoid arthritis by 3'-deoxy-3'-18f-fluorothymidine and small-animal PET. J Nucl Med. 54 (1), 151-158 (2013).
  12. Schwenck, J., et al. Fluorescence and Cerenkov luminescence imaging. Applications in small animal research. Nuklearmedizin. 55 (2), 63-70 (2016).
  13. Mahling, M., et al. A Comparative pO2 Probe and [18F]-Fluoro-Azomycinarabino-Furanoside ([18F]FAZA) PET Study Reveals Anesthesia-Induced Impairment of Oxygenation and Perfusion in Tumor and Muscle. PLoS One. 10 (4), 0124665(2015).
  14. Fuchs, K., et al. Oxygen breathing affects 3'-deoxy-3'-18F-fluorothymidine uptake in mouse models of arthritis and cancer. J Nucl Med. 53 (5), 823-830 (2012).
  15. Fuchs, K., et al. Impact of anesthetics on 3'-[18F]fluoro-3'-deoxythymidine ([18F]FLT) uptake in animal models of cancer and inflammation. Mol Imaging. 12 (5), 277-287 (2013).
  16. Liu, N., Shang, J., Tian, F., Nishi, H., Abe, K. In vivo optical imaging for evaluating the efficacy of edaravone after transient cerebral ischemia in mice. Brain Res. 1397, 66-75 (2011).
  17. Sheth, R. A., Maricevich, M., Mahmood, U. In vivo optical molecular imaging of matrix metalloproteinase activity in abdominal aortic aneurysms correlates with treatment effects on growth rate. Atherosclerosis. 212 (1), 181-187 (2010).
  18. Chen, J., et al. Near-infrared fluorescent imaging of matrix metalloproteinase activity after myocardial infarction. Circulation. 111 (14), 1800-1805 (2005).
  19. Wallis de Vries, B. M., et al. Images in cardiovascular medicine. Multispectral near-infrared fluorescence molecular imaging of matrix metalloproteinases in a human carotid plaque using a matrix-degrading metalloproteinase-sensitive activatable fluorescent probe. Circulation. 119 (20), e534-e536 (2009).
  20. Weissleder, R., Tung, C. H., Mahmood, U., Bogdanov, A. In vivo imaging of tumors with protease-activated near-infrared fluorescent probes. Nat Biotechnol. 17 (4), 375-378 (1999).
  21. Cortez-Retamozo, V., et al. Real-time assessment of inflammation and treatment response in a mouse model of allergic airway inflammation. J Clin Invest. 118 (12), 4058-4066 (2008).
  22. McIntyre, J. O., et al. Development of a novel fluorogenic proteolytic beacon for in vivo detection and imaging of tumour-associated matrix metalloproteinase-7 activity. Biochem J. 377, 617-628 (2004).
  23. Scherer, R. L., VanSaun, M. N., McIntyre, J. O., Matrisian, L. M. Optical imaging of matrix metalloproteinase-7 activity in vivo using a proteolytic nanobeacon). Mol Imaging. 7 (3), 118-131 (2008).
  24. Olson, E. S., et al. In vivo characterization of activatable cell penetrating peptides for targeting protease activity in cancer. Integr Biol (Camb. 1 (5-6), 382-393 (2009).
  25. Duijnhoven, S. M., Robillard, M. S., Nicolay, K., Grull, H. Tumor targeting of MMP-2/9 activatable cell-penetrating imaging probes is caused by tumor-independent activation). J Nucl Med. 52 (2), 279-286 (2011).
  26. Schafers, M., Schober, O., Hermann, S. Matrix-metalloproteinases as imaging targets for inflammatory activity in atherosclerotic plaques. J Nucl Med. 51 (5), 663-666 (2010).
  27. Wagner, S., et al. A new 18F-labelled derivative of the MMP inhibitor CGS 27023A for PET: radiosynthesis and initial small-animal PET studies. Appl Radiat Isot. 67 (4), 606-610 (2009).
  28. Waschkau, B., Faust, A., Schafers, M., Bremer, C. Performance of a new fluorescence-labeled MMP inhibitor to image tumor MMP activity in vivo in comparison to an MMP-activatable probe. Contrast Media Mol Imaging. 8 (1), 1-11 (2013).
  29. Vogl, T., et al. Alarmin S100A8/S100A9 as a biomarker for molecular imaging of local inflammatory activity. Nat Commun. 5, 4593(2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

In VivoMMP
לא פולשני
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.