מאמר שיטה

מודלים חריפים כרוניים של היפרגליקמיה דג הזברה: שיטה להעריך את ההשפעה של היפרגליקמיה על נוירוגנזה ועל ביודיסטריבוצי של מולקולות Radiolabeled

12.5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55203

⸱

26 ביוני 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1UMR 1188 Diabète athérothombose Thérapie Réunion Océan Indien (DéTROI), Saint-Denis de La Réunion, France, Université de La Réunion, INSERM, 2RIPA (Radiochimie et Imagerie du Petit Animal), Cyclotron de la Réunion Océan Indien CYROI, 3CHU de La Réunion

במאמר זה

סיכום

עבודה זו מתארת ​​שיטות להקמת מודלים של היפרגליקמיה חריפה וכרונית בדג הזברה. המטרה היא לחקור את ההשפעה של היפרגליקמיה על תהליכים פיזיולוגיים, כגון נוירוגנזה מכוננת ופציעה המושרה. העבודה גם מדגיש את השימוש דג הזברה כדי לעקוב אחר מולקולות radiolabeled (כאן, [ 18 F] -FDG) באמצעות PET / CT.

תקציר

Hyperglycemia היא בעיה בריאותית מובילה שמוביל לב וכלי דם וליקוי מוחי. למשל, היא קשורה בבעיות נוירולוגיות מוגברות לאחר שבץ ומוצגת על מנת לפגוע בתהליכים נוירוגניים. מעניין, דג הזברה המבוגר התפתחה לאחרונה כמודל רלוונטי ושימושי לחקות היפרגליקמיה / סוכרת ולחקור נוירוגנזה מכוננת מחדש. עבודה זו מספקת שיטות לפתח מודלים דג הזברה של hyperglycemia לחקור את ההשפעה של hyperglycemia על התפשטות תאים במוח תחת homeostatic ותיקון המוח תנאים. היפרגליקמיה חריפה נוצרת באמצעות הזרקת intraperitoneal של גלוקוז D (2.5 גרם / ק"ג bodyweight) לתוך דג הזברה מבוגר. היפרגליקמיה כרונית נגרמת על ידי הטמנת דג הזברה מבוגר ב- D גלוקוז (111 מ"מ) המכיל מים במשך 14 ימים. מדידות ברמת גלוקוז בדם מתוארות עבור גישות שונות אלה. שיטות לחקור את ההשפעה של היפרגליקמיה על מכונן אNd negengenesis משובי, על ידי תיאור של פגיעה מכנית של telencephalon, לנתח את המוח, הטבעה פרפין וחתך עם microtome, וביצוע הליכים אימונוהיסטוכימיה, הם הוכיחו. לבסוף, השיטה של ​​שימוש דג הזברה כמודל רלוונטי ללימוד biodistribution של מולקולות radiolabeled (כאן, [ 18 F] -FDG) באמצעות PET / CT מתואר גם.

מבוא

היפרגליקמיה מוגדרת ברמות גבוהות של גלוקוז בדם. למרות שזה יכול לשקף מצב של לחץ חריף, היפרגליקמיה היא גם מצב שלעתים קרובות מוביל לאבחון של סוכרת, הפרעה כרונית של הפרשת אינסולין ו / או התנגדות. בשנת 2016, מספר המבוגרים החיים עם סוכרת הגיע 422,000,000 ברחבי העולם, ובכל שנה, 1.5 מיליון בני אדם מתים ממחלה זו, מה שהופך אותו בעיה בריאותית גדולה 1 . ואכן, סוכרת בלתי מבוקרת מובילה למספר הפרעות פיזיולוגיות המשפיעות על מערכת הלב וכלי הדם, הכליות ומערכות העצבים ההיקפיים והמרכזיים.

מעניין, היפרגליקמיה חריפה כרונית עשויה לשנות את הקוגניציה ולתרום הן דמנציה ודיכאון 2 , 3 , 4 , 5 , 6 . בנוסף, הודאה של חולים wהיפרגליקמיה ith קשורה לתפקוד תפקודי, נוירולוגי והישרדות גרוע יותר לאחר שבץ איסכמי 7 , 8 , 9 , 10 , 11 . כמו כן, הוכח כי היפרגליקמיה / סוכרת משפיעה על נוירוגנזה מבוגר, תהליך המוביל לדור של נוירונים חדשים, על ידי השפעה על פעילות תאי גזע עצביים ועל בידול נוירונים, הגירה והישרדות 2 , 12 .

בניגוד יונקים, דגים teleost, כמו דג הזברה, להציג פעילות נוירוגנית אינטנסיבי לאורך המוח כולו ולהציג יכולת יוצאת דופן לתיקון המוח במהלך בגרות 13 , 14 , 15 , 16 . יש לציין, יכולות כאלה אפשריות בשל ההתמדה של neuRal גזע / בתאים, כולל גליה רדיאלי ו neuroblasts 17 , 18 , 19 . בנוסף, דג הזברה התגלה לאחרונה כמודל לחקר הפרעות מטבוליות, כולל השמנה היפרגליקמיה / סוכרת 20 , 21 , 22 .

למרות דג הזברה הוא מודל מוכר היטב של hyperglycemia ו neurogenesis, כמה מחקרים חקרו את ההשפעה של היפרגליקמיה על הומאוסטזיס המוח תפקוד קוגניטיבי 12 , 23 . כדי לקבוע את ההשפעה של hyperglycemia על התפשטות תאים במוח מכונן פציעה המושרה, מודל של היפרגליקמיה חריפה נוצר באמצעות הזרקת intraperitoneal של גלוקוז D. בנוסף, מודל של hyperglycemia כרונית היה לשכפל באמצעות טבילה של דגים במים בתוספת Wדלית גלוקוזה 12 . דג הזברה התערוכה יתרונות רבים במחקר. הם זולים, קל להעלות, שקוף במהלך השלבים הראשונים של הפיתוח, הגנום שלהם כבר רצף. במסגרת עבודה זו, הם מציגים מספר יתרונות נוספים: (1) הם חולקים תהליכים פיזיולוגיים דומים עם בני אדם, מה שהופך אותם לכלי קריטי למחקר ביו-רפואי; (2) הם מאפשרים חקירה מהירה של ההשפעה של היפרגליקמיה על הומאוסטזיס המוח neurogenesis, בהתחשב בפעילותם הנפוצה והחזקה neurogenic; ו (3) הם מודל חלופי, המאפשר הפחתת מספר היונקים המשמשים במחקר. לבסוף, דג הזברה יכול לשמש מודל לבדיקת biodistribution של מולקולות radiolabeled וסוכני טיפול פוטנציאליים באמצעות PET / CT.

המטרה הכוללת של ההליך הבא הוא ויזואלי לתעד כיצד להגדיר מודלים של היפרגליקמיה חריפה כרונית דג הזברה, להשתמש zebדגים כדי להעריך remodeling המוח בתנאים hyperglycemic, ולפקח על מולקולות radiolabeled (כאן, [ 18 F] -FDG) באמצעות PET / CT.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

דג הזברה מבוגר למבוגרים ( Danio rerio ) נשמר תחת photoperiod תקן (14/10 שעות אור / כהה) וטמפרטורה (28 מעלות צלזיוס) תנאים. כל הניסויים נערכו על פי הנחיות הקהילה האירופית והאירופית לשימוש בבעלי חיים במחקר (86/609 / EEC ו 2010/63 / EU) ואושרו על ידי ועדת האתיקה המקומית לניסוי בבעלי חיים.

1. הקמת מודל של היפרגליקמיה חריפה דג הזברה

  1. הכן פתרון המניות של tricaine (MS-222) על ידי המסת 400 מ"ג של אבקת tricaine ב 97.9 מ"ל מים ו 2.1 מ"ל של 1 M טריס / חיץ HCl (pH 9). התאם את ה- pH ל 7 ו aliquot לאחסון ב -20 מעלות צלזיוס.
  2. הכן הרדמה דג הזברה מבוגר על ידי הצבת 5 מ"ל של tricaine (פתרון המניה) לתוך 100 מ"ל של מים דגים (ריכוז tricaine הסופי: 0.02%).
  3. מעבירים דג הזברה אחד (3 עד 6 חודשים) מן הטנק שלו להרדמה עד שהוא מפסיק לזוז.
  4. מִחָדָשׁלהזיז את הדג באמצעות פיפטה לחתוך במהירות לייבש אותו על נייר רקמות סופג.
  5. שקלו את הדג.
  6. הכן מזרק של גלוקוז D מומס 1X PBS ולהזריק 50 μL של גלוקוז D (2.5 גרם / ק"ג bodyweight).
    הערה: לדוגמה, דג 0.6 גרם יקבלו 50 μL של 3% D גלוקוז / פתרון PBS.
  7. שים את הדג על הגב והכניס את המחט של המזרק לתוך חלל intraperitoneal.
  8. לאט לאט להזריק את D- גלוקוז / PBS פתרון ולאחר מכן למקם את הדג בחזרה למים.
  9. בדוק על הדג עד שהוא מתאושש לחלוטין. החזירו אותו למיכל עד שיגיע הזמן הנדרש לביצוע המדידה של גלוקוז הדם.
    הערה: גלוקוז הדם נמדד 1.5 שעות לאחר ההזרקה.

2. הקמת מודל של היפרגליקמיה כרונית דג הזברה

  1. הכן טנק 2 L של מים דגים נקיים.
  2. ממיסים 40 גרם של גלוקוז D לתוך 2 L של מים דגים עבור ריכוז D גלוקוז הסופי של111 מ"מ.
  3. לטבול 5 עד 7 דג הזברה למבוגרים במים המכילים D- גלוקוז.
  4. החלף את D- גלוקוז מים דגים כל יומיים על מנת למנוע את הצמיחה של חיידקים או מיקרו אורגניזמים אחרים.
  5. לאחר 14 ימי טיפול, הניחו את הדג במים קצרים כדי להסיר את גלוקוז ה- D מחוץ לגוף לפני ביצוע המדידה ברמת הגלוקוז בדם.

3. מדידת רמות גלוקוז בדם דג הזברה

  1. מכסים את הדג עם קרח עבור המתת חסד מהיר.
    הערה: אין להשתמש מנת יתר של tricaine, כמו זה גורם וריאציות רחב ברמות הסוכר בדם. אין להשאיר את הדג בקרח זמן רב מדי, כמו זה יגרום הדם קריש.
  2. נגבו את הדגים עם נייר רקמה סופג כדי להסיר את כל המים כדי למנוע דילול דם במהלך מדידת הגלוקוז בדם.
  3. הסר את העין באמצעות מלקחיים לנתח ולהמתין עד חלל העין מלא בדם.
  4. שים רצועת בדיקה על glucometer ואניNsert את הרצועה לתוך חלל העין.
  5. למדוד את רמות הגלוקוז בדם.

4. ניתוח פרוליפרציה תא המוח בעקבות היפרגליקמיה

  1. פתרונות ומאגרים: דרישות והכנה
    1. הכן 1 L של 1x PBS ידי הוספת 100 מ"ל של 10x PBS 900 מ"ל של מזוקקים H 2 O (dH 2 O) ומערבבים.
    2. הכן 1x PBS עם דטרגנט 0.2% (PBS-T, לראות את טבלת החומרים).
      הערה: כדי להכין 1 L של PBS-T, להוסיף 2 מ"ל של חומר ניקוי (ראו את טבלת חומרים ) ל 1 L של PBS.
    3. הכן אתנול סדרה (100% x 2, 95%, 85%, 70%, 50%, ו -30%) ו 0.85% NaCl.
    4. הכן חיץ חסימה: PBS-T המכיל 0.5% אבקת חלב 1%.
      הערה: כדי להכין 200 מ"ל של חיץ חסימת, להוסיף 2 גרם של אבקת חלב ל 200 מ"ל של PBST.
    5. הכן חיץ אחזור אנטיגן, ציטרט נתרן.
      הערה: כדי להכין 1 L למאגר ציטראט נתרן, להוסיף 2.94 גרם של נתרן ציטראט שלושנתרן מלח להתייבש ל 1 L של dH 2 0. להתאים את ה- pH ל -6 לפני מילוי ל 1 ל.
    6. הכן 4% paraformaldehyde-PBS חיץ, הוספת 4 גרם של paraformaldehyde ל 100 מ"ל של 1x PBS. חם זה תחת תסיסה ב 58-60 מעלות צלזיוס עד שהוא מתמוסס לחלוטין.
  2. לדוגמא הכנה עבור אימונוהיסטוכימיה: קיבוע והתייבשות
    1. לאחר מדידת רמת הגלוקוז בדם, הפרד את הראש מהגוף על ידי חיתוך הראש מאחורי הזימים.
      הערה: לחלופין, המוח יכול להיות מופק ישירות וקפא עבור ניסויים אחרים, כגון מיצוי mRNA.
    2. תקן את הלילה לילה ב 4 מעלות צלזיוס paraformaldehyde 4% מומס PBS (PFA-PBS).
    3. למחרת, לשטוף בקצרה את ראשי PBS.
    4. לנתח את המוח בזהירות באמצעות מיקרוסקופ. שוטפים את הראש קבוע עם PBS ולהשתמש מחט כדי לאבטח את הראש תחת מיקרוסקופ לנתח. הסר את העיניים ואת החלק העליון של הגולגולת עם מלקחיים. CarefuLly לחלץ את המוח ולמקם אותו 1x PBS.
    5. לשטוף את המוח קבוע עם 1x PBS במשך 30 דקות, 0.85% NaCl למשך 30 דקות, 70% EtOH / 0.85% NaCl (v / v) במשך 15 דקות, EtOH 70% עבור 15 דקות (פעמיים), EtOH 85% עבור 20 דקות, EtOH 95% במשך 20 דקות, ו 100% EtOH במשך 20 דקות (פעמיים). דגירה לילה פתרון סופי 100% EtOH.
      הערה: המוח מיובש יכול להישאר במשך מספר חודשים EtOH 100% ב 4 ° C לפני הטבעת פרפין.
  3. הכנה לדוגמא עבור אימונוהיסטוכימיה: הכנת רקמות עבור הטבעה פרפין
    1. מניחים את המוח בכוס זכוכית קטנה.
      הערה: אין להשתמש בכלי קיבול מפלסטיק, שכן טולואן עלול לגרום נזק לחלק מהפלסטיק.
    2. הסר את אתנול ולהחליף אותו עם טולואן, כמו המוח חייב להיות התאושש לחלוטין על ידי טולואן. בצע שתי דקות 30 אמבטיות של טולואן.
    3. הסר את טולואן ומניחים את המוח בקלטת הטבעה. שים את הקלטת הסגורה של כוסות פרפין מותך בסדרה 58-60 ° C (30 דקות בכל כוס פרפין). הפעל את מלקחיים הכללה ההתחממות. בסוף אמבטיות הפרפין, מוציאים את הקלטת ויוצקים קצת פרפין נוזלי לתוך תבנית.
    4. יוצקים את פרפין מותך לתוך עובש ומכניסים את המוח פנימה. אוריינט את המוח באמצעות מלקחיים הכללה ההתחממות, באמצעות אוריינטציה anteroposterior של המוח כמדריך. תן את הפרפין להקשות על החלק הקירור של מכונת הטבעת.
    5. מסיבות טכניות, למקם את המוח לאורך הציר anteroposterior. לאחר unmolding בלוק פרפין, לחתוך אותו ולתקן אותו על קלטת, עם פרפין מותך בכיוון הנכון כדי לאפשר חתך רוחבי.
    6. הכנס את גוש פרפין לתוך הזרוע של microtome. חותכים 50 חלקים מיקרומטר עבה עד רמת מדגם המוח הוא הגיע. חתוך את גוש פרפין כדי להשיג טרפז ולהתאים את עובי החתך עד 7 מיקרומטר. לאסוף את סרטי פרפין באמצעות מכחול ומניחים אותם על pap שחורEr. חותכים אותם בעדינות כל 3 עד 4 חלקים.
    7. שים שקופית על צלחת ההתחממות לכסות אותו עם מים DH 2 O.
    8. בעדינות את הסרט לחתוך סרטים על המים. הסר את המים עם נייר רקמה סופג כאשר סרטים פרפין מתפשטים מספיק / נפרש. הסר את הטיפות האחרונות מכנית. הסר את המים מן השקופיות ולתת להם להתייבש לפחות 3 שעות על צלחת ההתחממות בסביבות 30-40 מעלות צלזיוס.
  4. נוהל אימונוהיסטוכימיה
    1. הסר את השעווה פרפין ידי הצבת חלקים בשלושה מיכלים של קסילן במשך 7 דקות כל אחד.
    2. Rehydrate את החלקים על ידי לשים את השקופיות בשתי מכולות של EtOH 100% עבור 2 דקות כל אחד, ואחריו אמבטיות של EtOH 95%, EtOH 85%, EtOH 70%, 30% EtOH עבור 30 s כל אחד. לבסוף, בקצרה את השקופיות ב DH 2 O ו פעמיים PBS במשך 5 דקות כל אחד.
    3. ביצוע אחזור אנטיגן על ידי דוגרים את הקטעים במאגר ציטראט במיקרוגל (2 דקות ב 500 W) עדהמאגר מתחיל לרתיחה. בואו השקופיות להתאושש בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות.
    4. לשטוף שלוש פעמים PBST, 5 דקות כל אחד, לחסום את הקטעים במשך 45 דקות PBST המכיל חלב 1%. דגירה לילה עם נוגדנים ראשוניים ( למשל תאים מתרבים גרעיני תאים (PCNA) עבור מכתים תאים שגשוג, 1/100) מדולל לחסום חיץ ( כלומר PBST, חלב 1%).
    5. לשטוף שלוש פעמים ב PBST, 5 דקות כל אחד, דגירה הקטעים במשך 90 דקות עם נוגדנים משני מתאים ( למשל נגד עכבר Alexa פלואור 488, 1/200) מדולל חסימת חיץ עם DAPI (1/500).
    6. לשטוף שלוש פעמים PBST, 5 דקות כל אחד, ואת הר שקופיות עם המדיום הרכבה ניאון (ראה את טבלת החומרים).
    7. לנתח את מכתים באמצעות מיקרוסקופ epifluorescence ו / או confocal.
    8. לכמת את התפשטות תאים במוח על לפחות שלושה חלקים רצופים במוח של אזור עניין לפחות שלושה מובחניםאימלס.
      הערה: לחלופין, הטבעה המוח יכול להיעשות agarose להמשיך חתך vibratome ו-צף חינם אימונוהיסטוכימיה, כפי שתואר לעיל 24 .
  5. לימוד השפעת היפרגליקמיה על מנגנוני תיקון המוח
    הערה: לחלופין, החקירה של תיקון המוח תחת היפרגליקמיה חריפה כרונית יכולה להתבצע לאחר פגיעה פציעה דקירה של telencephalon, כפי שתואר לעיל 24 , 25 , 26 . בקצרה:
    1. להרדים דג הזברה מבוגר עם tricaine.
    2. מניחים את הדגים תחת מיקרוסקופ לנתח עם אור.
    3. להחזיק את הדג ביד אחת.
    4. מצד שני, הכנס מזרק 30 G אנכית דרך הגולגולת לתוך האזור המדיאלי של חצי הכדור הימני telesphalere.
    5. מניחים את הדג בחזרה למים דגים טריים, מים בתוספת גלוקוז (111)MM), או לשלוט במים דגים. אפשר לדגים לשרוד במשך 7 ימים לאחר הפציעה.
      הערה: עיין בשלב 4 עבור שאר ההליך.

5. הדמיה ביודיסטריבוציות של מולקולות Radiolabeled ידי PET / CT דג הזברה: Fluorodeoxyglucose ([18F] -FDG) כדי לנתח את חילוף החומרים גלוקוז

  1. הכן מזרק 50 μL המכיל 20 MBq של תמיסת מלח של [18F] -FDG.
  2. מניחים את המזרק מאחורי המסך מגן קרינה.
  3. להרדים דג הזברה מבוגר עם tricaine.
  4. מניחים את הדגים מאחורי מסך הקרנה.
  5. להזריק [18F] -FDG לתוך חלל intraperitoneal. נגבו את אתר ההזרקה עם פיסת נייר קטנה כדי למנוע זיהוי של שרידי [18F] -FDG שיכולים לדלוף מתוך בטן הדגים.
  6. השתמש calisrator radioisotope למדוד את הפעילות הנותרים הכלולים על המזרק ואת הרקמה כדי לחשב את המינון המוזרק המדויק.
  7. מניחים את הדג עלEW, חתיכה קטנה של רקמות סופג ספוג עם tricaine בעדינות לעטוף אותו. מניחים את הדג עם רקמות סופג על המיטה של ​​PET / CT imager.
  8. הכנס את המיטה לתוך הדמיה PET / CT מערכת ולהתחיל את הרכישה.
  9. המשך לבצע את הרכישה PET / CT.
  10. בסוף ההליך, מניחים את הדג בחזרה לתוך כמות קטנה של מים דגים טריים.
    הערה: לחלופין, לאחר הזרקת [18F] -FDG, הדג יכול להיות מוחזר לכמות קטנה של מים מתוקים למשך 10 דקות עד 1 שעות כדי להקל על דיפוזיה של [18F] -FDG לפני הרדמה של הדג שוב עבור PET / CT הדמיה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

באמצעות ההליכים המתוארים במאמר זה, הזרקת intraperitoneal של גלוקוז D (2.5 גרם / ק"ג bodyweight) בוצעה על דג הזברה המבוגר והוביל לעלייה משמעותית ברמות הסוכר בדם 1.5 שעות לאחר ההזרקה ( איור 1 א ). 24 שעות לאחר הזריקה, רמות הגלוקוז בדם היו דומות בין D-glucose ו- PBS מוזרק דגים 12 . עבור טיפול כרוני, דג הזברה היו שקועים במים גלוקוז D (111 מ"מ) והופך היפרגליקמיה בסוף 14 ימים של טיפול (

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

עבודה זו מתארת ​​שיטות שונות כדי להקים מודלים חריפים כרוניים של היפרגליקמיה דג הזברה. היתרונות העיקריים של נהלים אלה הם: (1) הם מאפשרים הפחתת מספר היונקים המשמשים למחקר, (2) הם פשוט להקים ומהיר ליישם, (3) הם חסכוני. לכן, מודלים אלה מאפשרים לחקירת ההשפעה של היפרגליקמיה על מספר רב של בעלי חיים כדי לחקור את השפעתה על תהליכים פיזיולוגיים שונים, כולל אפקט של טרשת עורקים, הפרעות בתפקוד הלב וכלי הדם, רטינופתים, דליפת דליפת מוח בדם, ונוירוגנזה מכוננת ושיקומית. עבודה זו מתארת ​​כיצד להמשיך...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

לא נחשפו ניגודי אינטרסים אפשריים.

תודות

אנו מודים מאוד לכוון דז'ונס דו נומריק (DUN) מאוניברסיטת לה ראוניון לעריכת הסרטון (במיוחד ז'אן פרנסואה פברייה, אריק אסנוט וסילבאן דוקאסה), לינדה-רוזה מוטגאן על הקריינות, מרי אוסבורן-פלגרין להגהה את הקול מעל, ואת פלטפורמת CYROI. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מאוניברסיטת La Réunion (בונוס Qualité Recherche, Dispositifs incitatifs), המועצה האזורית של לה ראוניון, האיחוד האירופי (CPER / FEDER), ועמותת פילאנסיה. ACD היא מקבלת מענק המלגה מ Ministère de l'Education Nationale, de l'Enseignement Supérieur et de la Recherche, La Réunion University (Contrat Doctoral).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מזרק 1 מ"ל Luer-LokBD, ארה"ב309628
4',6'-diamidino-2-phenylindole (DAPI)סיגמא-אולדריץ', גרמניהD8417
7 מ"ל מיכל ביז'ו מעבדה רגילהדוטשר, צרפת080171
D-גלוקוזסיגמא-אולדריץ', גרמניה67021
מצלמה דיגיטליתמדעי החיים, יפןHamamatsu ORCA-ER
תבניות בסיס חד פעמיות Simport, קנדהM475-2
חמור נגד ארנב Alexa fluor 488Life Technologies, ארה"בA21206
מרכז הטמעהThermo Scientific, ארה"בShandon Histocentre 3
מיקרוסקופ פלואורסצנטיניקון, יפןEclipse 80i
Fluorodeoxyglucose (18F-FDG)ציקלוטרון, צרפת
רצועת בדיקת גלוקומטרLifeScan, צרפתOne-Touch 143 Ultra
Goat נגד עכבר Alexa fluor 594Life Technologies, ארה"בA11005
In-Vivo מערכת הדמיהTriFoil Imaging, קנדהTriumph Trimodality 
MicrotomeThermo Scientific, ארה"בMicrom HM 355 S
עכבר חד שבטי נגד PCNADAKO, ארה"בשיבוט PC10
Paraformaldehyde (PFA)סיגמא-אולדריץ', גרמניהP6148-500G
ארנב פוליקלונלי אנטי GPAPDAKO, ארה"ב
ספסל ייבוש שקופיותאלקטרותרמי, ארה"בMH6616
נתרן כלוריסיגמא-אולדריץ', גרמניהS9888
נתרן ציטראט מלח טריסודיום מיובש Prolabo, צרפת27833.294
מחט סטריליתBD Microlance 330 G 1/2 ; 0.3 מ"מ ופעמים; 13 מ"מ
Student Dumont #5 מלקחייםכלים מדעיים עדינים91150-20
מספריים כירורגיים לסטודנטיםכלים מדעיים עדינים91400-14
Superfros Plus Gold SlidesThermo Scientific, ארה"בFT4981GLPLUS
מיקרוסקופ כירורגילייקה, צרפתM320-F12
קלטות להטמעת רקמותSimport, קנדהM490-10
הטמעת רקמות בינוניותLeica Biosystems, ארה"ב39602004
טולואןסיגמא-אולדריץ', גרמניה244511
טריקאין MS-222סיגמא-אולדריץ', גרמניהA5040
טריטון X100סיגמא-אולדריץ', גרמניהX100-500 מ"ל
Vectashield בינוני מעבדות וקטור, ארה"בH-1000
קסילןסיגמא-אולדריץ', גרמניה534056 זן
דגיםAB
חזק>מאגר פוספט מלוח (10X PBS) pH 7.4 (עבור 1 ליטר)להכנת 10X PBS, הוסיפו את המלחים הבאים והשלימו לליטר אחד עם מים
מזוקקיםאשלגן כלורי (MM: 74.55 גרם/מול): 2.00 גרם>סיגמא-אולדריץ', גרמניה746436
אשלגן פוספט מונו-בסיסי (MM: 136,09 גרם/מול): 2.40 גרםSigma-Aldrich, גרמניה795488
נתרן כלורי (MM : 58.44 גרם/מול): 80.00 גרם  Sigma-Aldrich, גרמניהS9888
נתרן פוספט דו-בסיסי (MM: 141,96 גרם): 14,40 גרםSigma-Aldrich, גרמניה795410
Z033429 <

מקורות

  1. W. Diabetes. , Available from: http://www.who.int/diabetes/en (2016).
  2. Ho, N., Sommers, M. S., Lucki, I. Effects of diabetes on hippocampal neurogenesis: links to cognition and depression. Neurosci Biobehav Rev. 37 (8), 1346-1362 (2013).
  3. Cukierman, T., Gerstein, H. C., Williamson, J. D. Cognitive decline and dementia in diabetes--systematic overview of prospective observational studies. Diabetologia. 48 (12), 2460-2469 (2005).
  4. Gaudieri, P. A., Chen, R., Greer, T. F., Holmes, C. S. Cognitive function in children with type 1 diabetes: a meta-analysis. Diabetes Care. 31 (9), 1892-1897 (2008).
  5. Brismar, T., et al. Predictors of cognitive impairment in type 1 diabetes. Psychoneuroendocrinology. 32 (8-10), 1041-1051 (2007).
  6. Ojo, O., Brooke, J. Evaluating the Association between Diabetes, Cognitive Decline and Dementia. Int J Environ Res Public Health. 12 (7), 8281-8294 (2015).
  7. Capes, S. E., Hunt, D., Malmberg, K., Pathak, P., Gerstein, H. C. Stress hyperglycemia and prognosis of stroke in nondiabetic and diabetic patients: a systematic overview. Stroke. 32 (10), 2426-2432 (2001).
  8. Stead, L. G., et al. Hyperglycemia as an independent predictor of worse outcome in non-diabetic patients presenting with acute ischemic stroke. Neurocrit Care. 10 (2), 181-186 (2009).
  9. Kagansky, N., Levy, S., Knobler, H. The role of hyperglycemia in acute stroke. Arch Neurol. 58 (8), 1209-1212 (2001).
  10. Gilmore, R. M., Stead, L. G. The role of hyperglycemia in acute ischemic stroke. Neurocrit Care. 5 (2), 153-158 (2006).
  11. Desilles, J. P., et al. Diabetes mellitus, admission glucose, and outcomes after stroke thrombolysis: a registry and systematic review. Stroke. 44 (7), 1915-1923 (2013).
  12. Dorsemans, A. C., et al. Impaired constitutive and regenerative neurogenesis in adult hyperglycemic zebrafish. J Comp Neurol. , (2016).
  13. Schmidt, R., Strähle, U., Scholpp, S. Neurogenesis in zebrafish - from embryo to adult. Neural Dev. 8, 3(2013).
  14. Kizil, C., Kaslin, J., Kroehne, V., Brand, M. Adult neurogenesis and brain regeneration in zebrafish. Dev Neurobiol. 72 (3), 429-461 (2012).
  15. Grandel, H., Brand, M. Comparative aspects of adult neural stem cell activity in vertebrates. Dev Genes Evol. 223 (1-2), 131-147 (2013).
  16. Lindsey, B. W., Tropepe, V. A comparative framework for understanding the biological principles of adult neurogenesis. Prog Neurobiol. 80 (6), 281-307 (2006).
  17. März, M., et al. Heterogeneity in progenitor cell subtypes in the ventricular zone of the zebrafish adult telencephalon. Glia. 58 (7), 870-888 (2010).
  18. Chapouton, P., Jagasia, R., Bally-Cuif, L. Adult neurogenesis in non-mammalian vertebrates. Bioessays. 29 (8), 745-757 (2007).
  19. Lindsey, B. W., Darabie, A., Tropepe, V. The cellular composition of neurogenic periventricular zones in the adult zebrafish forebrain. J Comp Neurol. 520 (10), 2275-2316 (2012).
  20. Sarras, M. P., Intine, R. V. Use of Zebrafish as a Disease Model Provides a Unique Window For Understanding the Molecular Basis of Diabetic Metabolic Memory. Zebrafish. , 2611-2619 (2012).
  21. Oka, T., et al. Diet-induced obesity in zebrafish shares common pathophysiological pathways with mammalian obesity. BMC Physiol. 10, 21(2010).
  22. Capiotti, K. M., et al. Persistent impaired glucose metabolism in a zebrafish hyperglycemia model. Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 171, 58-65 (2014).
  23. Capiotti, K. M., et al. Hyperglycemia induces memory impairment linked to increased acetylcholinesterase activity in zebrafish (Danio rerio). Behav Brain Res. 274, 319-325 (2014).
  24. Schmidt, R., Beil, T., Strähle, U., Rastegar, S. Stab wound injury of the zebrafish adult telencephalon: a method to investigate vertebrate brain neurogenesis and regeneration. J Vis Exp. (90), e51753(2014).
  25. Diotel, N., et al. Effects of estradiol in adult neurogenesis and brain repair in zebrafish. Horm Behav. 63 (2), 193-207 (2013).
  26. Rodriguez Viales, R., et al. The helix-loop-helix protein id1 controls stem cell proliferation during regenerative neurogenesis in the adult zebrafish telencephalon. Stem Cells. 33 (3), 892-903 (2015).
  27. Kaslin, J., Ganz, J., Brand, M. Proliferation, neurogenesis and regeneration in the non-mammalian vertebrate brain. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 363 (1489), 101-122 (2008).
  28. Kroehne, V., Freudenreich, D., Hans, S., Kaslin, J., Brand, M. Regeneration of the adult zebrafish brain from neurogenic radial glia-type progenitors. Development. 138 (22), 4831-4841 (2011).
  29. Alunni, A., Bally-Cuif, L. A comparative view of regenerative neurogenesis in vertebrates. Development. 143 (5), 741-753 (2016).
  30. März, M., Schmidt, R., Rastegar, S., Strähle, U. Regenerative response following stab injury in the adult zebrafish telencephalon. Dev Dyn. 240 (9), 2221-2231 (2011).
  31. Wullimann, M., Rupp, B., Reichert, H. Neuroanatomy of the zebrafish brain: A topological atlas. , Birhaüser Verlag. Basel, Switzerland. 1-144 (1996).
  32. Pellegrini, E., et al. Identification of aromatase-positive radial glial cells as progenitor cells in the ventricular layer of the forebrain in zebrafish. J Comp Neurol. 501 (1), 150-167 (2007).
  33. Zupanc, G. K., Hinsch, K., Gage, F. H. Proliferation, migration, neuronal differentiation, and long-term survival of new cells in the adult zebrafish brain. J Comp Neurol. 488 (3), 290-319 (2005).
  34. Sarras, M. P., Intine, R. V. Use of Zebrafish as a Disease Model Provides a Unique Window For Understanding the Molecular Basis of Diabetic Metabolic Memory. iConcept Press. , 2611-2619 (2013).
  35. Connaughton, V. P., Baker, C., Fonde, L., Gerardi, E., Slack, C. Alternate Immersion in an External Glucose Solution Differentially Affects Blood Sugar Values in Older Versus Younger Zebrafish Adults. Zebrafish. , (2016).
  36. Prasad, S., Sajja, R. K., Naik, P., Cucullo, L. Diabetes Mellitus and Blood-Brain Barrier Dysfunction: An Overview. J Pharmacovigil. 2 (2), 125(2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

PET CT

מאמרים קשורים