מדידת פונקציונליות צומת עצב-שריר

צומת עצב-שריר (NMJ) היא סינפסה כימית שהוקמה על ידי הקשר בין את motor endplate של סיבי השריר הדנדריטי לאקסון מוטור נוירון מסוף. NMJ הוכח לשחק תפקיד מכריע כאשר התקשורת בין שריר עצב הוא לקוי, כמו הזדקנות או נוירודגנרטיביות (ALS). כמו שריר ועצב לתקשר דו-כיוונית דרך^1,2, היכולת למדוד פגמים NMJ בנפרד מן השריר פגמים עשויים לספק תובנות חדשות הגומלין physiopathological שלהם. אכן, הערכה תפקודית זו עשוי לעזור כדי להעריך אם שינויים מורפולוגיים או ביוכימי להפחית עצבית איתות פונקציונליות.

ההשוואה של שריר כויץ תגובה שהפיק גירוי עצבי ואת התגובה של אותו שריר עורר על ידי גירוי ישיר של הממברנה שלו הוצע כמו מדידה עקיפות של NMJ פונקציונליות. ואכן, מאז ממברנה גירוי על ידי עובר עצבית איתות, ייתכן ולשייך כל ההבדלים ביומן שתי התגובות כויץ לשינויים ב- NMJ. גישה זו יש בהרחבה תעצומ חולדות^3,4,5,6,7, והוא משמש גם כדי לאסוף מידע על העכבר מודלים^8,9,10,11,12.

כאן, אנו מתארים בפרוטרוט הליך בלו ולבדוק שני שריר-עצב ההכנות, כלומר את ההכנות הסוליה-פציעה, דיאפרגמה-הסרעפת. שימוש של מחוייט תוכנה, עיצבנו פרוטוקול בדיקה רציפה המשלבת את המדידה של מספר פרמטרים המאפיינות פונקציונליות NMJ והן שריר, ובכך מניב הערכה מקיפה של נזק NMJ בנפרד מזה של השריר. בפרט, הפרוטוקול מודד הכוח עווית, קינטיקה של שרירים, עקומת כוח-תדירות עבור ישיר, עצב stimulations, כשל עצבית¹³ פיטורים ואת התדרים tetanic, וגם את עייפות intratetanic⁷.

כל הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה של אוניברסיטת סאפיאנצה ברומא - היחידה להיסטולוגיה ואמבריולוגיה רפואית ובוצעו בהתאם לגרסה הנוכחית של החוק האיטלקי להגנת בעלי חיים.

1. מערך ניסיוני

1. הגדר את המערכת הניסיונית המורכבת ממפעיל/מתמר אחד, 2 ממריצים, 1 מכשיר שרירים במבחנה, 1 אמבט רקמות מכין, 1 אלקטרודת יניקה, 1 אוסצילוסקופ דיגיטלי, 1 סטריאומיקרוסקופ, 1 תאורת אור קר, 1 לוח רכישה, 1 בלוק מחברים ומחשב אישי.< /> הערה: כאן תוכנת הפקודה תוכנתה ב-LabView ותוכננה להבטיח גמישות גבוהה, דיוק וחזרתיות של הגירויים. עבור כל גירוי, המשתמש יכול לבחור את רוחב הדופק, תדירותו, משך הזמן ולהחליט אם הוא מועבר לממברנה או דרך העצב. המשתמש יכול גם לבחור את משך תקופת המנוחה לפני כל גירוי.

2. הערכות של תכונות ההתכווצות NMJ של שרירי הסוליה והסרעפת

1. חימום מערכת
   1. הכן את Krebs Ringer buffer¹⁴ והנח אותו באמבטיה של מנגנון ההרכבה ואמבט הרקמות המכין. מניחים צלחת 60 מ"מ שהוכנה עם 4 מ"ל סיליקון באמבט הרקמות המכין.
   2. הפעל את אמבט המים במחזור והגדר את הטמפרטורה ל-30 מעלות צלזיוס עבור שריר הסוליה ול-27 מעלות צלזיוס עבור שריר הסרעפת.
   3. אפשר לתערובת 95% O₂ - 5% CO₂ לזרום לשתי האמבטיות.
   4. הפעל את המפעיל/מתמר ואת שני ממריצי הדופק והגדר את הערכים הנוכחיים ל-300 mA לגירוי הממברנה ול-5 mA לגירוי עצבי.
      הערה: הוכח בעבר כי ערך הזרם של 300 mA אינו גורם להתכווצות משמעותית בענפי העצב כאשר D-tubocurarine מתווסף לתמיסה¹⁵. ערך הזרם של 5 mA תואם את כמות הזרם הנדרשת כדי לעורר את השריר דרך העצב מבלי ליצור חפיפה עם גירוי הממברנה המושרה באמצעות התמיסה. מכיוון שהמרחק בין אלקטרודת היניקה לשריר תלוי באורך העצב, יש להתאים בקפידה את הערך הנוכחי הזה לפני כל ניסוי, כמתואר להלן.
2. דיסקציה של סולאוס וסרעפת
   1. הקריבו את העכבר על ידי פריקת צוואר הרחם כדי למזער את הסבל, וכרו מיד את השרירים לבדיקה כדלקמן.
   2. הכנה, דיסקציה והגדרה סולאוס-סיאטית
      1. רססו 70% אתנול על רגל העכבר והסירו את העור המכסה את הרגל. בצעו חתך בחלק העליון של הרגל בעזרת מספריים ולאחר מכן משכו את העור בחוזקה. בודדו את גיד אכילס מהשוק ולאחר מכן חתכו את גיד אכילס בעזרת מספריים.
      2. מהדקים היטב את הגיד בעזרת זוג מלקחיים ומושכים בעדינות את שריר הגסטרוקנמיוס יחד עם הסוליה. לאחר שהגיד הפרוקסימלי של הסוליה נחשף, חתכו את כל השוק במספריים תוך כדי אחיזת גיד אכילס. הניחו מיד את דגימת הרקמה באמבט הרקמות המכין.
      3. הניחו את אמבט ההכנה מתחת לסטריאומיקרוסקופ וקבעו את העגל לצלחת הסיליקון באמצעות סיכות נירוסטה בקוטר 0.20 מ"מ. בעזרת זוג מלקחיים מהדקים את הגיד הפרוקסימלי של הסוליה ומושכים אותו בעדינות כדי לחשוף את העצבוב הסיאטי.
      4. ברגע שהעצבוב נחשף (איור 1), הסירו בזהירות את הרקמה שמסביב כדי לחשוף כ-5 מ"מ מהעצב. השתמש במספריים עדינים כדי לחתוך את העצב. תוך כדי הידוק חזק של הסוליה על הגיד הפרוקסימלי בעזרת זוג מלקחיים, משוך אותו שוב וכרת אותו על ידי חיתוך גיד אכילס במספריים.
      5. העבירו חוט ניילון דרך החור של זרוע המנוף של המפעיל/מתמר. צור חבל בקצה החוט ותפס את גיד אכילס לפני שתמשוך את החוט לאחור עד שהשריר יגיע לאמבטיה של מנגנון ההרכבה. מהדקים את הגיד הפרוקסימלי בתוך המהדק הקבוע וקושרים את חוט הניילון סביב זרוע המנוף. אפשר לשריר להתאזן בתמיסה.
      6. קבע את האורך האופטימלי הראשוני (L₀).
         1. ראשית, מתחו את השריר כדי לטעון אותו מראש ב-10 mN (ערך זה מבטיח את כוח העווית המרבי (בהתבסס על ניסיון)). לאחר מכן, מתחו בעדינות את השריר כדי לשנות את העומס המקדים ולעורר אותו בסדרה של פולסים בודדים. האורך האופטימלי מושג כאשר נמדד כוח העווית המרבי.
   3. הכנה, דיסקציה והגדרה של דיאפרגמה-פרנית
      1. ריססו 70% אתנול על עור העכבר. הסר את העור המכסה את שריר הסרעפת על ידי ביצוע חתך מעל עצם החזה בעזרת מספריים ועל ידי משיכת העור בחוזקה.
      2. בעזרת מספריים חותכים את הבטן אופקית מתחת לעצם החזה ומסירים בעדינות את המעי והאיברים בעזרת זוג מלקחיים. השתמש במספריים עבים כדי לחתוך את עמוד השדרה.
      3. חותכים את הצלעות כ -1 ס"מ מעל עצם החזה וממשיכים אופקית. הסר בעדינות את האיברים החיצוניים בעזרת זוג מלקחיים וחתוך את עמוד השדרה לקבלת טבעת צלעות עגולה המכילה את הסרעפת.
      4. שטפו את התכשיר בכלי המכיל את מאגר קרבס רינגר ולאחר מכן הניחו אותו בכלי הסיליקון בתוך אמבט הרקמות המכין, כשהצד העליון פונה כלפי מעלה ועצם החזה פונה קדימה.
      5. באמצעות הסטריאומיקרוסקופ, הסירו בזהירות את הריאות ואת האיברים הנותרים; העצב הפרני יהיה גלוי בצד ימין (איור 2A).
      6. חתוך את הצלעות כדי להשאיר טבעת של כ -2 מ"מ לאורך כל הסרעפת.
      7. בעזרת מלקחיים, קבע סיכת נירוסטה אחת בקוטר 0.20 מ"מ על הגיד המרכזי של הסרעפת בנקודה המתאימה לעצבוב העצב הפרני, וסיכה נוספת על הצלעות באותו ציר כדי לזהות את רצועת הסרעפת המעניינת.
      8. תקן שני סיכות נוספות על הגיד המרכזי ועוד שני סיכות על הצלעות משני צידי הרצועה שנבחרה כדי לפרוש את הסרעפת. במידת הצורך, יש לנקות את העצב הפרני מרקמת החיבור שמסביב באמצעות מלקחיים.
      9. בעזרת להב מעוקל, חותכים את הסרעפת משני צידי העצבוב כדי לזהות רצועת גיד-שריר-צלעות כפי שמוצג ב<מחלקה חזקה = "xfig">איור 2B.
      10. העבירו חוט ניילון דרך החור של זרוע המנוף של המפעיל/מתמר. צור חבל בקצה החוט ותפס את הגיד לפני משיכת החוט לאחור עד שהשריר מגיע לאמבטיה של מנגנון ההרכבה.
      11. מהדק את הצלעות בתוך המהדק הקבוע וקשר את חוט הניילון סביב זרוע המנוף.
      12. אפשר לשריר להתייצב בתמיסה ולקבוע את האורך האופטימלי הראשוני (L0).
          1. מתחו את השריר כדי לטעון אותו מראש ב-5 מ"ן. מתחו בעדינות את השריר כדי לשנות את העומס המקדים ולעורר אותו בסדרה של פולסים בודדים. האורך האופטימלי מושג כאשר נמדד כוח העווית המרבי.

איור 1 - הכנת עצב סולאוס-סיאטיק. עצב סולאוס-סיאטי במהלך פעולה כירורגית לבדיקות התפקודיות. הסיאטיק נחשף באמצעות זוג מלקחיים. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 2 - הכנת עצב סרעפת-פרני. התמונה מציגה שלב של כריתת הכנת העצב הסרעפת-פרני (A) והרצועה שיש להרכיב לבדיקות תפקודיות (B). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

3. מדידת תכונות NMJ בנפרד מהתכווצות השרירים
   1. הגדר את עוצמת הזרם הטובה ביותר עבור הגירוי דרך העצב וודא שפולסי הזרם המועברים דרך אלקטרודת היניקה אינם מעוררים התכווצות שרירים על ידי התפשטות הזרם באמבטיה.
      1. הנח את אלקטרודת היניקה ליד השריר ומשוך את העצב פנימה. תוך כדי הגדלת עוצמת הזרם בעדינות (החל מ- 5 mA), עורר את השריר בסדרה של פולסים בודדים. ערך הזרם האופטימלי נקבע כאשר כוח העווית הוא מקסימלי.
      2. דחוף את העצב החוצה מהאלקטרודה והעביר כמה פולסים בודדים. ודא שהשריר אינו מתכווץ עקב חפיפה עם גירוי הממברנה באמצעות התמיסה. משוך את העצב פנימה שוב.
   2. הפעל את התוכנית ובחר את קובץ הקלט כדי להפעיל את פרוטוקול הבדיקה הרצוי.
      הערה: קובץ הקלט כולל את כל פרמטרי הגירוי הדרושים להפעלת הפרוטוקול כולו. למרות שאותו מבנה פרוטוקול משמש לשני השרירים, פרמטרי הגירוי שונים בהתאם לפרוטוקול המתייחס לשרירי הסוליה או הסרעפת.
      1. גירוי עצבי סולאוס-סיאטי (ראה טבלה 1)
         1. השתמש ברוחב הדופק הבא עבור כל הגירויים החשמליים: 1.4 אלפיות השנייה לגירוי עצב סיאטי ו-0.1 אלפיות השנייה לגירוי ישיר של הסוליה. הפרוטוקול המלא נמשך כ-65 דקות.
      2. גירוי עצבי סרעפת-פרני (ראה טבלה 2)
         1. השתמש ברוחב הדופק הבא עבור כל הגירויים החשמליים: 1.8 אלפיות השנייה לגירוי עצבי פרני ו-0.2 אלפיות השנייה לגירוי ישיר של הסרעפת. הפרוטוקול המלא נמשך כ-55 דקות.
      3. בסוף פרוטוקול הניסוי, מדדו את אורך ומשקל השריר הרטוב באמצעות קליפר אנלוגי עם דיוק של 0.05 מ"מ וסולם דיוק עם דיוק של 0.1 מ"ג, בהתאמה.
         1. חשב את שטח החתך (CSA) על ידי חלוקת מסת השריר במכפלה של אורך סיבים אופטימלי (L_f) וצפיפות שריר השלד של יונקים (1.06 מ"ג/מ"מ³)¹⁶.
            הערה: L_f מתקבל על ידי הכפלת L₀ ביחס אורך הסיבים/אורך השריר (0.71 עבור שריר הסוליה¹⁶ ו<1 עבור שריר הסרעפתsup class="xref">17).

טבלה 1 - פרוטוקול גירוי עצבי סולאוס-סיאטי הטבלה מפרטת את רצף הבדיקות המהוות את הפרוטוקול המלא לבדיקת תכשירים עצביים סוליים-סיאטיים.

טבלה 2 - פרוטוקול גירוי עצבי דיאפרגמה-פרני. הטבלה מפרטת את רצף הבדיקות המהוות את הפרוטוקול המלא לבדיקת תכשירים עצביים סרעפתיים-פרניים.

3. ניתוח נתונים

הערה: בסוף הפרוטוקול חשב את כל הפרמטרים הרצויים כדלקמן.

1. מגירוי דופק בודד
   1. חשב כוח עווית (mN; כוח פעיל מקסימלי שנוצר במהלך עווית) וכוח עווית ספציפי (mN/mm²). חשב אותו על ידי הפחתת ערך העומס הראשוני לכוח המרבי שנוצר על ידי השריר. חשב את כוח העווית הספציפי ככוח עווית חלקי CSA של השריר.
   2. חשב את הזמן לשיא המתח (TTP) (ms) כזמן משחרור הדופק לכוח העווית.
   3. חשב חצי זמן הרפיה (1/2RT) (ms) כזמן מכוח העווית ל-50% מכוח העווית.
   4. חשב dF/dt (mN/ms) כערך המקסימלי של נגזרת הכוח במהלך שלב ההתכווצות.
   5. חשב -dF/dt (mN/ms) כערך המקסימלי של נגזרת הכוח במהלך שלב ההרפיה.
2. מגירויים של רכבת דופק
   1. חשב כוח לא מותך (mN) וכוח לא מותך ספציפי (mN/mm²). חשב אותו על ידי הפחתת ערך העומס הראשוני לכוח המרבי שנוצר על ידי השריר. חשב את הכוח הלא מותך הספציפי ככוח הלא מותך חלקי השריר CSA.
      הערה: הכוח הבלתי מותך הוא הכוח הפעיל המרבי שנוצר במהלך רכבת דופק בתדר נמוך מתדר הטטניק.
   2. חשב כוח טטני (mN) וכוח טטני ספציפי (mN/mm2); הכוח המרבי הוא הכוח הפעיל המקסימלי שנוצר במהלך רכבת פולסים המועברת בתדר טטניק. חשב אותו על ידי הפחתת ערך העומס הראשוני לכוח המרבי שנוצר על ידי השריר. חשב את הכוח הטטני הספציפי ככוח הטטני חלקי CSA של השריר.
   3. חשב עקומת כוח-תדר. שרטט את ערך הכוח (או הכוח הספציפי) המתקבל עבור כל גירוי לעומת התדירות ההולכת וגדלה של הגירוי. בדרך כלל, זה מתחיל בגירוי הדופק הבודד ומסתיים בתדר הטטניק.
3. מפרדיגמות עייפות
   1. חשב כשל בהולכה עצבית (NF) כ:
      
      כאשר MF היא ירידת הכוח בעקבות גירוי השרירים ו-F היא ירידת הכוח בעקבות גירוי עצבי, הנמדדת ברכבת הדופק הראשונה לאחר גירוי השרירים.
   2. חשב עייפות אינטררטנית (IF) כ:
      
      כאשר F_lp הוא הכוח שנוצר על ידי השריר בדופק האחרון של הגירוי, ו- F_m הוא הכוח המרבי שנוצר על ידי השריר במהלך אותה רכבת דופק. לגבי הגירוי העצבי, חשב את העייפות האינטרטנית ברכבת הדופק הראשונה מיד לאחר הגירוי הישיר.

4. ניתוח סטטיסטי

הערה: יש לבחור את מודלי הניתוח הסטטיסטי בהתאם להשוואה בין תגובת השרירים לגירוי עצבי וממברנה באותו מודל של בעלי חיים או בין 2 מודלים שונים של בעלי חיים^18,19.

1. השתמש במבחן t של הסטודנט עבור TTP, 1/2RT, dF/dt, -dF/dt אם משווים רק תגובות שרירים לגירויים ישירים ועקיפים. אם משווים תכשירי שרירים המתקבלים מ-2 זני עכברים שונים, השתמש ב-ANOVA דו-כיווני עם סוג גירוי ומתח עכבר כגורמים קבועים. כאשר ה-ANOVA הדו-כיווני מחזיר תוצאה משמעותית, השתמש במבחני השוואה מרובים כדי לחפש הבדלים סטטיסטיים.
2. עבור עקומת כוח-תדר (אם משווים רק תגובות שרירים לגירויים ישירים ועקיפים), השתמש ב-ANOVA דו-כיווני עם סוג הגירוי ותדירות הגירוי כגורמים קבועים. השתמש בבדיקות השוואה מרובות במידת הצורך.
   1. אם משווים תכשירי שרירים המתקבלים מ-2 זני עכברים שונים, השתמש ב-ANOVA תלת-כיווני עם סוג הגירוי, תדירות הגירוי ומתח העכבר כגורמים קבועים.
      1. כאשר ה-ANOVA התלת-כיווני מניב השפעה משמעותית של הגורמים מתח בעלי חיים וסוג גירוי, השתמש ב-ANOVA דו-כיווני כדי לזהות הבדלים משמעותיים בין 2 קבוצות בכל פעם. לדוגמה, ניתן להעריך הבדלים בין תגובת השרירים של 2 הקבוצות לגירוי ממברנה, או בין תגובת השרירים לגירויים ישירים ועקיפים בתוך קבוצה אחת.
3. עייפות אינטרטנית
   הערה: מכיוון שהפרוטוקול תוכנן לגרום לעייפות בתגובה לגירוי עצבי אפילו בעכברי ביקורת, ניתן להשתמש בפרמטר זה רק כדי לחקור הבדלים בין 2 זני עכברים, וניתוח סטטיסטי בתוך קבוצה אחת תמיד יניב הבדלים משמעותיים.
   1. כדי להשוות בין שתי קבוצות, השתמש ב-ANOVA תלת-כיווני עם סוג גירוי, זמן ועומס עכבר כגורמים קבועים. כאשר ה-ANOVA התלת-כיווני מניב השפעה משמעותית של הגורמים מתח בעלי חיים וסוג גירוי, השתמש ב-ANOVA דו-כיווני כדי לזהות הבדלים משמעותיים בין 2 קבוצות בכל פעם, כמו עבור עקומת הכוח-תדר.
4. עבור כשל בהולכה עצבית, השתמש ב-ANOVA דו-כיווני עם מתח וזמן של בעלי חיים כגורמים קבועים. אם הוא מחזיר תוצאות משמעותיות, השתמש בבדיקות השוואה מרובות כדי לחפש הבדלים סטטיסטיים.
   הערה: מכיוון שפרמטר זה מחזיר ערך אחד בלבד עבור כל זן עכבר, הוא מאפשר להשוות בין דגמי עכבר שונים.
5. עבור משקל שריר, אורך ו-CSA, השתמש במבחן t של סטודנט כדי לחקור הבדלים בעת השוואת תכשירים של שריר-עצב ממודלים שונים של בעלי חיים.

פרוטוקול שהסברנו מספק מידע על denervation פונקציונלי במספר מחלות נוירומוסקולריות או הזדקנות-sarcopenia. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לקבוע אם (, אם כן, באיזה רמה) שרירים המהווים עקב סלקטיבי שינויים המתרחשים בשריר עצמו או התמסורת neuromuscular. הנתונים המוצגים להלן הם תוצאה של עבודה קודמת מאת שלנו קבוצה18, שנערך על הדגם העכבר הטרנסגניים SOD1G93A של נוירודגנרטיביות בשלב הסופי של המחלה20. העכבר הטרנסגניים SOD1G93A overexpresses ubiquitously חמצון מוטציה האנזימים סופראוקסיד דיסמוטאז 1 (SOD1). דמויות 3 ו-4 מציגות את dF/dt ואת ערכי כוח tetanic על העצב הסוליה-פציעה (משמאל) ועל ההכנות עצב הסרעפת-הסרעפת (מימין). תוצאות אלה מדגימים את היכולת של השיטה המוצעת כאן כדי לזהות את הליקויים פונקציונלי הטרנסגניים שרירים הקשורים NMJ לעומת אלו הקשורים אך ורק השריר עצמו. אכן, dF/dt וגם כוח tetanic, שרירי הסוליה SOD1G93A מוצגים לתגובה כויץ מופחתת, לעומת שליטה שריר, כאשר ישירות מגורה, הפחתה נוספת אחרי גירוי דרך העצב. לעומת זאת, שינויים קלים נצפו באלה שני פרמטרים כאשר שריר הסרעפת רצועות היו מגורה דרך הממברנה, ואילו שינויים משמעותיים התגלו כאשר שריר הסרעפת זורז דרך העצב.

איור 3 - קינטיקה כויץ. התכוונתי ± SEM של dF/dt הסוליה (א) ודיאפרגמה (ב) ההכנות. הסוליה דגימות שכאשר האטה משמעותית למטה ישירות מגורה (-27%), לבין ירידה נוספת אחרי גירוי דרך העצב (-58%). דיאפרגמה דגימות המוצגים של האטה רק כאשר גירוי באמצעות העצב (-30%). חיבור מקורי ריזוטו et al. 18. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 4 - חיל tetanic. התכוונתי ± SEM של כוח מסוים tetanic הסוליה (א) ודיאפרגמה (ב) ההכנות. הסוליה דגימות שכאשר האטה משמעותית למטה ישירות מגורה (-26%), לבין ירידה נוספת אחרי גירוי דרך העצב (-50%). דיאפרגמה דגימות מוצגים ירידה בכוח רק כאשר גירוי באמצעות העצב (-44%). חיבור מקורי ריזוטו et al. 18. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

ההערכה עייפות intratetanic של הכישלון עצבית מותר NMJ פרמטרים ספציפיים שברצונך למדוד. איור 5 מציגה את הערכים הממוצע של עייפות intratetanic (אם) שנמדד במהלך הפרדיגמה tetanic עייפות שרירי הסוליה (איור 5A), הסרעפת רצועות (איור 5B). כפי שדווח במקטע פרוטוקול, הפרדיגמה עייפות שוהגשנו בקשה פותחה כך כדי להדגיש את NMJ. אבל לא את השריר. כתוצאה מכך, אם נמדד עבור גירוי השריר ישירה מעולם לא השתנה. אכן, אם שמחושב על הגירוי העצבי הוא הפרמטר להביא בחשבון להשוואות בין זנים שונים בעכבר. התוצאות שלנו להראות שאם היה נמוך באופן משמעותי הסוליה הטרנסגניים והן שרירי הסרעפת מאשר עמיתיהם שליטה. הבדל זה היה גדול יותר אצל הסרעפת, שבו זוהה פגם שריר קטן, קטן ב- הסוליה, שבו לנזק משמעותי כבר היה נמדד. זה כדאי לזכור כי מאז שריר הסוליה הטרנסגניים נפגע באופן משמעותי, ההערכה NMJ היה רק נכונות עבור עד 8 דקות של גירוי, אשר הוא הזמן שלוקח הטרנסגניים שרירים להחזיר את ערך null של כוח אחרי גירוי. הסוליה הטרנסגניים אם הערכים לאחר 8 דקות של גירוי בעיקרון אקספרס רעש.

איור 5 - עייפות intratetanic. עייפות intratetanic הסוליה (א) ודיאפרגמה (ב) שרירי להציג ירידה משמעותית הטרנסגניים NMJ פונקציונליות. ערכים הם זאת אומרת ± ב- SEM Adapted מ ריזוטו et al. 18. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 6 מראה הכשל עצבית בתדר tetanic נמדד על הסוליה (איור 6A) ועל דגימות הסרעפת (איור 6B). עולה בקנה אחד עם התוצאות אם, אין פגם בעצבית זוהה שריר הסוליה, ואילו דגימות שריר הסרעפת המוצגים עלייה משמעותית צומת עצב-שריר fatigability.

איור 6 -עצבית כשל. כשל עצבית לא להציג שינויים הסוליה השרירים (A), בעוד מודגש ירידה משמעותית NMJ פונקציונליות בהטרנסגניים הסרעפת רצועות (ב). ערכים הם זאת אומרת ± ב- SEM Adapted מ ריזוטו et al. 18. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

המחברים אין לחשוף.