מאמר שיטה

בדיקת רפלקס נוירו-התפתחותי ב- Neonatal עכברוש Pups

DOI:

10.3791/55261

⸱

24 באפריל 2017

 ,  , 
1Department of Pediatrics, University of Alberta

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בדיקות התנהגותיות הוא תקן הזהב להחלטה התוצאות הבאות פגיעה מוחית, והוא יכול לזהות נוכחות של נכויות התפתחותיות בתינוקות וילדים. רפלקסים נוירו-התפתחותי הם אינדיקטור מוקדם של ליקויים אלה. שורה של בדיקות רפלקס התפתחותי מושגת בקלות המכרסמת בילוד פותחו מתואר כאן.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בדיקות רפלקס נוירו-התפתחותי הוא נפוץ בפרקטיקה הקלינית להעריך את ההתבגרות של מערכת העצבים. רפלקסים נוירו-התפתחותי גם מכונים רפלקסים פרימיטיביים כמו. הם רגישים עקביים עם תוצאות מאוחר יותר. רפלקסים לא תקינים אינם מתוארים היעדרות, התמדה, הופעתו מחדש, או שהייה של רפלקסים, אשר הנם מדדי ניבוי של תינוקות שנמצאים בסיכון גבוה להפרעות התפתחותיות. מודלים בבעלי חיים של מוגבלויות התפתחותיות, כגון שיתוק מוחין, לעתים קרובות להציג רפלקסים התפתחותי סוטה, כפי שניתן היה לצפות בתינוקות אנושיים. הטכניקות המתוארות להעריך מגוון רפלקסים התפתחותיות אצל חולדות ילודות. בדיקות רפלקס נוירו-התפתחותי מציע החוקר שיטת בדיקה שאינה זמינה אחרת בחיות כל כך צעיר. המתודולוגיה המוצגת כאן נועד לסייע לחוקרים בבחינת אבני דרך התפתחותיות אצל חולדות בילוד כשיטת br התחלה מוקדמת לגילויפציעת עין ו / או בקביעה האפקטיבית של התערבויות טיפוליות. המתודולוגיה המוצגת כאן נועדה לספק הנחיה כללית עבור חוקרים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

רפלקסים נוירו-התפתחותי, או אבני דרך התפתחותיות, הם אחד להערכות המוקדמות בשימוש על תינוקות ופעוטות אנושיים. רפלקסים נוירולוגיות הן תנועות רצוניות וחוזר על עצמו כי להפגין גזע המוח ורפלקסים חוט השדרה. יישון של רשתות מוח עליונות מאופיינות מתפתח הגירה, מעטפת המיאלין, ו synaptogenesis לקדם שליטת רצונית ועיכוב קליפת המוח. שינויים בהתקדמות נורמלי של התפתחות מערכת העצבים המרכזית יכולים לשבש את התפתחות המוח, וכתוצאה מכך חיווט קליפת המוח נורמלי, התפקוד, וכן מעטפת המיאלין, גרימת עיכובים רפלקס התפתחותיות או היעדרויות. תינוקות אדם בסיכון גבוה עבור נכות נוירו-התפתחותיות לעתים קרובות להציג רפלקסים מוקדם נורמלים. רפלקסים תקינים יכולים להציג כמו עיכוב ברכישה, בהעדר, נוכחות ממושכת, או הופעתו מחדש בשלב מאוחר יותר בחיים, והם חזויים של נכויות התפתחותיות. 1, 2 לכןחשוב לחקות עיכובים רפלקס במודל ניסיוני של מוגבלויות התפתחותיות.

מכרסמים מועסקים בכינויו דגמים ניסיוניים. גורי חולדה הם חובשים קן כאשר נולדו, ולכן בשלה מדי להתחייב מנוע ספציפי או מורכב, חושיות ו / או משימות התנהגותית קוגניטיבית. בהקשר זה, בגרות התפתחותי שלהם מתייחסות הוא ההתפתחות הגופנית איבר שלהם. חולדות נולדות ללא שיער עם חוסר יכולת לווסת את חום גופו, עיוורות, ולא מסוגל ללכת. בהתייחס להתפתחות המוח, התבגרות קליפת המוח משמעותית מתרחשת לאחר הלידה. גורי חולדת יילוד (יום לידה המכונים ביום לידת 1; PD1) הוצע כדי להגיע לרמת הבשלת מוח דומה למוח אנושי פג של 23 - הריון 28 שבועות, בעוד PD7-10 גורים שקולי הכמעט מוחלט המוח האנושי מונח. 3, 4, 5, 6מתאם זה מבוסס על ניתוחי ברוטו אנטומיים, לעומת זאת, אמצעים אחרים של הבשלת המוח כגון פעילות מוח משולבת מעטפת המיאלין ואת משרעת גם תוארו. 5, 7 לדוגמה, טרום oligodendrocytes הם תאים השולט במוח העובר האנושי המתפתח מצינור 23 - 32 שבועות ברחם, ועל הבמה הבשלתית זו תואמת מכרסם PD1-3. 5, 8, 9, 10 יתר על כן, מעטפת המיאלין ברחם אצל בני אדם בעוד גורי חולדה נראה במוח הקדמי סביב PD7-10; מוח מכרסם היילוד נותר בלתי myelinated ברובו. 11, 12 טאקר ואח. נמצא כי דפוס אלקטרואנצפלוגרם משולב משרעת של חולדת P1 להיות דומה עלילות 23 שבועותהעובר האנושי tion, ואילו גור PD7 ו PD10 משול 30 - תינוק 32 שבוע ארוך, בהתאמה. 7 מסיבות אלה, בדיקות רפלקס היילוד ב גורי חולדה בילוד מספק הזדמנות עבור לכידת ontogeny ו / או שיבוש של התפתחות המוח.

הסוללה של רפלקסים המתוארים להלן מותאמת ממחקרים ידי WM פוקס וא Lubics 13, 14 WM פוקס היה אחד החוקרים המוקדמים ביחס ontogeny של רפלקסים את העכבר. 13 רפלקסים אלה כוללים, אך אינם מוגבלים, אחיזה הגפה הצבת, הימנעות צוק, ליישר, מואצת ליישר, ההליכה, בהלה שמיעתי, היציבה, ופתיחת העין. שניהם אחיזה forelimb ו hindlimb (המכונה אחיזה כַּפִי ו plantar בבני אדם, בהתאמה) הם הקלו על ידי רפלקסים השדרה ועיכוב corticospinal מאזורים מנוע שאינם ראשיים. 15, 16 הצבת Hindlimb (רפלקס בבינסקי) משקף הבשלה של מערכת corticospinal. 16, 17, 18 קליף הימנעות (תגובות מגן), ליישר (מבוך), מואצת ליישר לערב אינטגרציה ותקשורת בין קלט חושי ופלט מנוע (כגון המעורבים vibrissae ומערכות שיווי המשקל). 19, 20, 21 הילוך משקף תנועה. 14 בהלה שמיעתית מעריך גירוי אקוסטי קשרים סינפטיים של נוירונים ענקים בגרעין reticularis caudalis פונטיס. 21 יציבה כרוכה תחזיות קליפת מוח-שדרה מתאימות / שדרה-קליפת מוח, כוח שריר, עצבוב תוקף. 22, 23 מאturation של קולטנים -aminobutyric חומצת גאמא להיות מתואם עם פתיחת עין. 24 חשוב לזכור כי רפלקסים לשקף רשת הרבה יותר מסובכת הניתנים כאן הוא מתאם כללי. יתר על כן, רפלקסים אלה מספקים שיטה קלה ומהירה של הערכת התפתחות נוירולוגית בגיל צעיר ביותר שבו יותר מורכבות בדיקות התנהגותיות הן לא ריאליות.

מטרת מאמר זה היא לספק הנחיה כללית לבדיקות רפלקס התפתחותיות כי ניתן לשלב בקלות לתוך מחקרי עכברוש בילוד ניסיוני. המתודולוגיה המתוארת בוצעה גורי חולדה בילוד הארוך אוונס וכימות של התוצאות התבססה על היום הראשון של הופעה. היום זה רפלקס בדיקות יוזמות ומפעיל את הציוד המנוצל ניתן לשנות יותר כדי להתאים מודל ניסיוני שונה (כגון עבור זנים ומינים שונים). על ידי הקמת ההתקדמות הפיזיולוגית התקינה של שופטהתבגרות לקס במודל חיה ספציפית, החוקרים יכולים להעריך את ההשפעות של גורמי לחץ חיצוניים, מניפולציות אנדוגניים, ו / או התערבויות טיפוליות על התפתחות המוח במודלים של עכברים בילוד. בסך הכל, את השימוש רפלקסים כמו קביעה של בגרות המוח הוא יתרון בחיזוי פגיעה מוחית סביב הלידה, והוא משקף תוצאות התפתחותיות מאוחר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טיפול בבעלי חיים ועדת שימוש, למדעי הבריאות באוניברסיטת אלברטה אישרה את כל הניסויים בבעלי חיים.

הערה: בעוד פרוטוקול זה יכול להיות מותאם מינים וזנים אחרים, פרוטוקול זה נכתב עבור חולדות לונג-אוונס. חולדות אלה הוכחו יש הופעות מנועות מעולות חדת ראייה לעומת זנים אחרים של מכרסמים. 25, 26 הפרוטוקול עבור הריונות מתוזמן, תוספי תזונה, דלקת אימהית, ורפלקסים התפתחותיות הוא כדלקמן.

1. בחיות מעבדה

  1. כאשר חולדות מגיעות למתקן דיור בעלי החיים, להימנע מכל אינטראקציה למשך יום או ימים כדי לאפשר להם להסתגל לסביבה החדשה שלהם. בעקבות התאקלמות, להתמודד עם חולדות בכל יום למשך כחמישה ימים, או כאשר החולדות הם כבר לא מראה סימנים של מתח. אדם בעקבות לחץ יכול לשנות את תוצאות הבדיקה ואת leמודעה לאובדן הריון.
  2. לאחר החולדות הן נוחות, רבייה מתחילה. מניחים שתי נקבות עכברים זכרים אחד בכלוב הרבייה קומתיים (h = 38 ס"מ, 1800 שטח רצפה ס"מ 2) לילה (3 PM - 8 בבוקר). כלובים אלה למנוע מתח צפיפות. בבוקר, בעזרת פיפטה העברה, לשטוף את הנרתיק של חולדות נקבות עם כ 0.25 מ"ל של תמיסת מלח. מעבירים את הפתרון לתוך צינור microcentrifuge.
  3. מניחים את שתי נשים וגבר בחזרה לתוך הכלובים קונבנציונאלי שלהם.
  4. הצגת הפתרון שנאסף בסעיף 1.2 תחת מיקרוסקופ אור (100X) כדי לקבוע באיזה שלב של מחזור ייחום החולדה חווה והאם זרע נוכח. אם יש זרע, להקליט את וחזרת היום עוברי (E1) (איור 1). אם בהריון, לתת הנקבה הכלוב שלה על E14.
    הערה: התאים למרוח נרתיקית ברורים, ולכן משתמשים בהגדרה תאורה חלשה. ודא כי המעבה מותאם ההגדרה הנמוכה ביותר שלה. מוֹדָעָהרק שליטת הבהירות כדי לעמעם את האור. אם חיוג בהירות זמין, ולהגדיר אותו 1.

2. תוספי תזונה

הערה: פרוטוקול זה נועד להעריך את ההשפעות הטיפוליות של צריכה ניבט ברוקולי התזונתי במהלך השבוע האחרון של הריון. לגדל את הנבטים פי ואח 'וו. 27.

  1. משרים את הזרעים נבטי ברוקולי עבור 2 - h 3. מורחים את הזרעים על קופסת נבטים משטח זרע ולהגדיר על משטח חם עבור הנביטה.
  2. להשקות את הזרעים פעם ביום, פעם אחת בבוקר (8 - 9 בבוקר) ופעם בערב (3 - 4 PM).
  3. ביום חמש, למקם את נבטי ידי חלון ליום (צריך נבטים שני עלים בכל ויהפוך ירוק במהלך היום).
  4. בסוף היום, לקצור את הנבטי בעדינות על ידי משייכת נבטי ברוקולי מהקופסה המנופית ולהניח על משטח שטוח לייבוש.
  5. לאחר נבטים הם יבשים לחלוטין, wEigh מתוך 200 מ"ג ומכניסים לשקית ניילון אטומה.
  6. החל על E14, להאכיל כל מ"ג בהריון עכברוש 200 של נבטי ברוקולי יבשים מדי יום עד השעה PD21 (היום הגורים נגמלים).

3. דלקת

  1. כדי לגרום לדלקת לשכפל פגיעה בחומר הלבן בצאצאים, להזריק חולדות הרות עם lipopolysaccharide (LPS) כל 12 h על E19 ו E20. ביום הזרקת, להביא את הכלוב למעבדה ממתקן הדיור. אפשר חולדה בהריון להסתגל ולהיות רגוע עבור שעות לפחות 1. אם עכברוש מראה סימנים קליניים של ניזק מערכתי או כליות קבע, זה יהיה מורדם מייד והוציא מן המחקר.
  2. לשקול את הסכר בהריון.
  3. ממיסים 200 מיקרוגרם / ק"ג של LPS (סרוטיפ 0127: B8) ב 100 μL של מלוחים. לשאוב את הפתרון לתוך מזרק 1 מ"ל מצויד 30 G ½ מחט.
    1. שימוש במחט חדשה עבור כל זריקה. אפשר הפתרון להתחמם במשך כמה דקות כדי למזער אי נוחות.
  4. הקלט את הזמן להזריק הסכר בהריון intraperitoneally. זריקות חלופיות בין צדדים כדי להבטיח חלוקה שווה.
    הערה: Machholz ואח. מתאר נהלי איפוק הזרקה נכונים. 28

4. בדיקות רפלקס התפתחותית

  1. ביום PD1 (יום הלידה), להסיר את הגורים מן משקלי לידה הסכר שיא. מניחים את הגורים בחזרה לתוך הכלובים שלהם ולהעביר אותם למתקן חיה עד PD3. הדבר מבטיח את קשר אימהי בין סכר גור.
    1. רשום את בדיקות רפלקס לאמידה אמינה. כוון את מצלמת וידאו כך שזה במהירות תריס מקסימלית עבור ניתוחים מסגרת לפי מסגרת (1/1000 ימים). מקם את מצלמת וידאו כך שזה ממש מעל או ליד גור עכברים וכל החומרים המשמשים עבור כל רפלקס. לדוגמא, עבור צבת hindlimb, למקם את המצלמה ליד גור החולדה כדי להבטיח את הרמה ואת הצבת hindlimb נלכדה.
    2. "פיצוי מואץ, למקם את המצלמה מעל גור חולדה מנחת כדי להקליט את היכולת של הגור ימני באוויר.
  2. משקולות שיא יומי עד לסוף הניסוי. ביום PD3, להתחיל בדיקות רפלקס התפתחותיות (איור 4). הזז הכלובים לחדר שקט למשך תקופה מינימלית של 1 שעות לפני הבדיקה, כדי לאפשר התאקלמות לסביבה.
  3. בצע בדיקות רפלקס התפתחותיות בכל פעם עקבית בכל יום כמו חולדות הם ליליות. לדוגמה, מבחן בין 9 AM - 12 PM יומי. שמור את הגורים ישירות תחת מנורת חימום או על גבי משטח חום בכל העת, כדי לשמור על טמפרטורת גוף יציבה של 36.5 מעלות צלזיוס; גורי חולדה בגיל זה לאבד חום בקלות. למדוד עם בדיקת טמפרטורה רקטלית. אם נעשה ביעילות, טמפרטורות גוף גורים אינן משנים כיוון שהם אינם מוסרים מן הסכר ההמלטה מספיק זמן. הערה: צג הטמפרטורה של מנורת חום כדי לוודא שהוא אינו עולה על 37 מעלות צלזיוס.
    1. רשמו את התוצאה של כל רפלקס בכל יום עד תשובה חיובית הוא ציין. תגובת רפלקס חיובית מתרחשת כאשר הגור הוא מסוגל לבצע משימה על ימים רצופים. התאריך של המופע הראשון של תשובה חיובית משמש כימות. אין בדיקות נוספות נדרשות בעקבות התשובה החיובית. מכאן תאריך סיום עבור כל רפלקס הוא משתנה.
  4. forelimb אחזה
    1. החל על PD3, לבצע את הבדיקה רפלקס הלפיתה forelimb. מניח מוט בוטה נגד כל כף רגל קדמית ו להפעיל לחץ קל באופן ידני. לחץ האור צריך מעט לעקור בכפו כדי להבטיח מגע כי הוא עשוי ואת הגורים יכולים להרגיש את המוט. תאחז יופיע כמו כפיפה של כל הספרות סביב המוט. רכישה מוצלחת של רפלקס זה מתרחש כאשר רגליו הקדמיות הן לתפוס את מוט במשך יומיים ברציפות.
    2. ציון מאחיזתם forelimb:
      0 ללא אחיזה
      1 עבור אחיזה מוצלחת ידי בכפו אחד (שמאלה או right בכפו ניתן לציין כאן)
      2 עבור אחיזה מוצלחת על ידי שתי כפות רגליו הקדמיות
  5. hindlimb אחזה
    1. החל על PD3, לבצע את הבדיקה רפלקס הלפיתה hindlimb. מניח מוט בוטה נגד הבלעדי של כל hindpaw ואת להפעיל לחץ קל באופן ידני. לחץ האור צריך מעט לעקור את hindpaw כדי להבטיח מגע כי הוא עשוי ואת הגורים יכולים להרגיש את המוט. אחיזה מוצלחת של המוט מופיעה כפיף של הספרות סביב המוט. רכישה מוצלחת של רפלקס זה מתרחש כאשר הן hindpaws לתפוס את מוט במשך יומיים ברציפות.
    2. ציון מאחיזתם hindlimb:
      0 ללא אחיזה
      1 עבור מוצלח אוחזת ידי hindpaw אחד (שמאלה או hindpaw תקין ניתן לציין כאן)
      2 עבור אחיזה מוצלחת על ידי שני hindpaws
  6. "פיצוי
    1. החל על PD3, להתחיל בבדיקה רפלקס ליישר. היטב להחזיק את הגור במצב שכיבה, עם ארבע רגליים זקופה. עזוב oF הגור ומיד להפעיל את הטיימר. ליישר מושגת כאשר הגור הוא מסוגל להעיף / להתהפך על ארבע הרגליים, וכל כפה היא בניצב לגוף. תן לכל גור מקסימום של 15 s כדי להשיג מטרה זו.
    2. דרג את ליישר:
      0 עבור שוכב על הגב (או 15 s בפעם שהוקצה מקסימלית)
      1 עבור שוכב בצד (ניתן לציין שמאלה או בצד ימין כאן) או את היכולת של הגור לימין אך בתנוחה לא נכונה (או 15 s בפעם שהוקצה מקסימלית)
      2 "פיצוי מוצלח יציבה מתאימה
  7. צבת hindlimb
    1. החל על PD4, להתחיל hindlimb הצבת מבחן רפלקס. החזק את הגור אנכי באוויר, על ידי פלג הגוף העליון. וליטף את dorsum של hindpaw עם משטח בוטה (כגון קצה של שולחן). רפלקס צבת נכון הוא כאשר גור העכברוש חזר בו hindlimb המגורה, ואחריו מיקום של hindlimb למטה באותו שטח.
    2. דרג את pl hindlimbacing רפלקס:
      0 ללא הצלחה
      1 עבור הצבת של hindpaw אחד (שמאלה או hindpaw תקין ניתן לציין כאן)
      2 עבור הצבת hindlimb מוצלח עבור שני hindpaws
  8. קליף הימנעות
    1. החל על PD4, להתחיל את בדיקות למניעת המצוק. מניח את גור העכברוש בקצה משטח שטוח, כך הרגליים הקדמיות חוטם של הגור הם מעבר לקצה. התוצאה הנכונה היא תגובה מגן, שבו הגור עכברוש הופך הרחק בקצה הצוק. היד של הנסיין או נחיתת קצף מושם מתחת למצוק לתפוס את הגור מהנפילה.
    2. ציון סר צוק:
      0 ללא תנועה או נפילה מהקצה
      1 עבור ניסיונות להתרחק הצוק אבל עם גפיים תלויים
      2 לתנועה מוצלחת מן הצוק
  9. הליכה
    1. בגין הערכת ההליכה על PD6. גורי מקום במרכז של diamet 15 סנטימטריםאה המעגל ולאפשר את הגור 30 s כדי להשלים את המשימה. 14 הילוך מוצלח מתבצע כאשר הגור החולדה הוא מסוגל לנוע שתי כפות רגליו הקדמיות מחוץ למעגל בפחות מ 30 s.
    2. דרג את ההליכה כמו הזמן בשניות שלוקח את גור העכברוש לנוע מחוץ למעגל. רשום את משך הזמן שלוקח את הגור לעבור שתי כפות רגליו הקדמיות מחוץ למעגל. שיא 30 s אם הגור אינו מסוגל להשלים את המשימה בתוך הזמן הנתון
  10. שמיעתי רתיעה
    1. בגין הניתוח של בהלה שמיעתית על PD10. הווה רעש חזק (פעמון) ישירות על הגור כדי להעריך אם תגובת בהלה נוכח. תגובה בהלה חיובית נצפתה כאשר הגור מציג תנועה "טלטול", הרחק את הצליל.
    2. דרג את הבהלה השמיעתית:
      (או לא) ללא תגובה בהלה
      (או כן) עבור תגובה בהלה חיובית
  11. יְצִיבָה
    1. בגין ניתוח יציב על PD12. גורי מקום על משטח פתוח שאינו חלקלק, ולבחון את היציבה את הגור יש בעת מעבר. ובתנוחה בשלה משתקפת על ידי גרירה של הבטן בעת ​​מעבר, ומצביעים עלי בניצב של שתי כפות רגליו הקדמיות ו hindpaws ביחס לגוף. תנוחת בוגרת נרכשת כאשר הגור יכול להרים את הבטן מפני השטח ואת שני כפות רגליו קדמיות ו hindpaws הצביעו ישר, או מקבילה לגוף, בעת מעבר.
    2. דרג את היציבה:
      0 ללא תנועה
      1 עבור יציבה בשלה בעת מעבר
      2 עבור יציבה בוגרת תוך כדי תנועה
  12. פותח עיניים
    1. בגין ניתוח מאיר עיניים על PD12. רשום את יום שני העפעפיים פתוחים:
      0 ללא עיניים גלויות
      1 עבור עין לעין אחת (ימין או שמאל ניתן לציין כאן)
      2 עבור שתי עיניים גלויות
  13. ליישר מואצת
    1. החל על PD14, להתחיל בדיקות ליישר מואצת. מניחים את הגור בתוך ג פרקדן עמדה 30.48entimeters מעל נחיתת קצף. זרוק את הגור ולבחון את יכולתו לתקן את עצמו. ליישר מתייחס כאשר הגור הוא מסוגל להתהפך למצב נוטה ולנחות על הכפות שלה.
    2. דרג את ליישר המואץ:
      0 עבור נופל על גבו
      1 עבור נופל על צידו (ימין או שמאל ניתן לציין כאן)
      2 לנחיתה על כפותיו

הערה: סוגים שונים של כימות של רפלקסים זמינים תלוי בשאלת החוקרים. כימות של רפלקסים יכולה להיעשות כמו תצפית ראשונית של רפלקס, היום הראשון של הופעה עד להיעלמות של רפלקס, זמן שנדרש כדי לבצע את המשימה בהצלחה, מהירות ביצוע, ו / או שיפור של ביצועים לאורך זמן. 13, 14, 29, 30, 31 עבור גמחקר urrent, יום ההופעה הראשון שמש ציון. בעת שימוש במודלים חוזרים, גורים מאותה ההמלטה בדרך כלל מתנהגים באופן דומה בשל ההרכב הגנטי שלהם, ברחם וסביבה לאחר לידה, וזמינויות תזונתיות. 32 לכן, גור אחד לא יכול להיות היוו כ n = 1 עקב הטית המלטה. גורים בדקו בתוך חול יכולים להיות בממוצע, כך שכל המלטה מייצגת n = 1. 32, 33 לחלופין, כמה גורים בתוך אותה ההמלטה ניתן לנתח באמצעות מודל השפעות המעורבות, הלוקח בחשבון את גורים בתוך אותה ההמלטה. 32, 33

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ציר הזמן של תכנון הניסוי הזה מוצג באיור 2. 30 השיטות והתוצאות פורסמו בעבר. 30 מטרת המחקר הייתה להעריך האם תוספי תזונה עם נבטי ברוקולי במהלך הריון ותקופת preweaning מוגנים לצאצאים מן העיכוב התפתחותיות מושרה על ידי בחשיפה ברחם כדי LPS. חולדות הרות מתוזמן קיבלו זריקות intraperitoneal של מלוחים (שליטה, 100 μL) או LPS (200 מיקרוגרם / ק"ג מדולל 100 μL של ת...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בדיקות רפלקס נוירו-התפתחותי היא מדד חזוי של התפתחות קליפת מוח נורמלית והתבגרות, אשר עשוי להיות בעל משמעות בנסיבות שבן בנוירופתולוגיה הגלויה אינה ברורה. במהלך בדיקות התפתחותיות, הוא קריטי כדי להבטיח כי גורים נבחנים באותו הזמן יומי. חולדות הם ליליות ולכן, קצב היממה שלהם עלול לשנות את ביצועים אם בדיקות מתבצעות בזמנים שונים במהלך היום. 34 הבדיקה צריכה להתבצע בחדר שקט כמו רעשים חזקים יכולים להוסיף מתח על הגורים. 35 הגורים דורשים מינימום ש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

החוקרים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מבקשים להודות סוכנויות מימון שלנו, הכוללים NeuroDevNet (א מרכזי לאומי של מצוינות), קרן ALVA, של נשים ושל המכון לחקר בריאות ילדים, ואת אוניברסיטת אלברטה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Breeding
Transfer פיפטותפישרברנד12-711-9AMמשמש לשטיפות נרתיקיות.
הוספירהסטרילית עם מי מלח7983254התמיסה המשמשת לאיסוף תאים במהלך שטיפות בנרתיק.
400 ומיקרו; L צינורות מיקרוצנטריפוגהפישרברנד05-408-120משמש להחזקת תמיסת המלח.
מיקרוסקופ אורLeicaLeica ATC 2000לתצפית על תמיסת המלח. יכול להיות כל מיקרוסקופ אור המשמש במעבדה.
שקופיותפישרברנד12-552-5תמיסת המלח מונחת על המגלשה. יכול להיות כל שקופית המשמשת במעבדה.
CoverslipsFisherbrand12-545-Fכדי לכסות את המגלשות. יכול להשתמש בכל כיסויים המשמשים במעבדה.
<הם>תזונתי  תוספי תזונה
זרעי נבטי ברוקוליזרעינבטי ברוקולי של אמא מזמינים וגדלים במעבדה.
קופסת נביטת זרעים על השישהנבטה של אמאקופסה משמשת להנבטה וגידול הזרעים לפני הקציר.
250 מ"להכוס משמשת להשריית הזרע. ניתן להשתמש בכל בגודל שתתאים.
דלקת אימהית
Lipoplysaccharide (LPS)SigmaL3129האנדוטוקסין המשמש לחיקוי דלקת אימהית.
מזרק BD 1 מ"למזרק 309659משמש להזרקת החולדה ההרה.
מד (30 גרם x 1/2)BD מחט PrecisionGlide305106השתמש במחט הקטנה ביותר כדי למנוע כאב ואי נוחות.
תמיסת מלח סטרילית (0.9% נתרן כלורי, USP)הוספירהמלח משמשת להמסת LPS.
Weights
ScaleDenver Instrumentלהקלטת המשקולות. יכול להיות בכל קנה מידה עם 2 מקומות עשרוניים המשמשים במעבדה.
רפלקסים נוירו-התפתחותיים
מוטיכול להיות מהדק נייר או קיסם. זה מיועד לאחיזה בגפיים הקדמיות והאחוריות.
נייר סינון עגולWhatman1001 150נייר בקוטר 15 ס"מ המשמש לניתוח הליכה.
טיימרפישר סיינטיפיק06-662-51לתזמון הזמן המוקצה ליישור ולהליכה.
משטחיכול להיות קצה שולחן. זה מיועד להצבת גפיים אחוריות והימנעות מצוקים.
נחיתתכאשר הגורים מבצעים יישור מואץ.
מקליט וידאוSonyVCT-D580RMכדי להקליט את כל הרפלקסים שנבדקו. חייב להיות מסוגל להקליט ב-1/1,000 פריימים לשנייה
פעמוןלהבהלה שמיעתית. 
מנורת חום או כריתלשמירה על טמפרטורת הגוף של הגורים הנבדקים.
זרעי קהה דק קהה קצף

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Farber, J. M., Shapiro, B. K., Palmer, F. B., Capute, A. J. The diagnostic value of the neurodevelopmental examination. Clin Pediatr (Phila. 24 (7), 367-372 (1985).
  2. Zafeiriou, D. I. Primitive reflexes and postural reactions in the neurodevelopmental examination). Pediatr. Neurol. 31 (1), 1-8 (2004).
  3. Clancy, B., Finlay, B. L., Darlington, R. B., Anand, K. J. S. Extrapolating brain development from experimental species to humans. Neurotoxicology. 28 (5), 931-937 (2007).
  4. Dobbing, J., Sands, J. Comparative aspects of the brain growth spurt. Early Hum. Dev. 3 (1), 79-83 (1979).
  5. Semple, B. D., Blomgren, K., Gimlin, K., Ferriero, D. M., Noble-Haeusslein, L. J. Brain development in rodents and humans: Identifying benchmarks of maturation and vulnerability to injury across species. Prog. Neurobiol. , (2013).
  6. Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch. Dis. Child. 48 (10), 757-767 (1973).
  7. Tucker, A. M., Aquilina, K., Chakkarapani, E., Hobbs, C. E., Thoresen, M. Development of amplitude-integrated electroencephalography and interburst interval in the rat. Pediatr. Res. 65 (1), 62-66 (2009).
  8. Dean, J. M., et al. Strain-specific differences in perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with. Dev. Neurosci. 33 (3-4), 251-260 (2011).
  9. Back, S. A., Riddle, A., McClure, M. M. Maturation-dependent vulnerability of perinatal white matter in premature birth. Stroke. 38, 724-730 (2007).
  10. Back, S. A., et al. Late oligodendrocyte progenitors coincide with the developmental window of vulnerability for human perinatal white matter injury. J. Neurosci. 21 (4), 1302-1312 (2001).
  11. Downes, N., Mullins, P. The development of myelin in the brain of the juvenile rat. Toxicol. Pathol. 42 (5), 913-922 (2014).
  12. Jakovcevski, I., Filipovic, R., Mo, Z., Rakic, S., Zecevic, N. Oligodendrocyte development and the onset of myelination in the human fetal brain. Front. Neuroanat. 3 (5), (2009).
  13. Fox, W. M. Reflex-ontogeny and behavioural development of the mouse. Anim. Behav. 13 (2), 234-241 (1965).
  14. Lubics, A., et al. Neurological reflexes and early motor behavior in rats subjected to neonatal hypoxic-ischemic injury. Behav. Brain Res. 157 (1), 157-165 (2005).
  15. Futagi, Y., Toribe, Y., Suzuki, Y. The grasp reflex and moro reflex in infants: hierarchy of primitive reflex responses. Int. J. Pediatr. , 191562(2012).
  16. Hashimoto, R., Tanaka, Y. Contribution of the supplementary motor area and anterior cingulate gyrus to pathological grasping phenomena. Eur. Neurol. 40 (3), 151-158 (1998).
  17. Isaza Jaramillo, S. P., et al. Accuracy of the Babinski sign in the identification of pyramidal tract dysfunction. J. Neurol. Sci. 343 (1-2), 66-68 (2014).
  18. Donatelle, J. M. Growth of the corticospinal tract and the development of placing reactions in the postnatal rat. J. Comp. Neurol. 175 (2), 207-231 (1977).
  19. Palanza, P., Parmigiani, S., vom Saal, F. S. Effects of Prenatal Exposure to Low Doses of Diethylstilbestrol, o,p'DDT and Methoxychlor on Postnatal Growth and Neurobehavioral Development in Male and Female Mice. Horm. Behav. 40 (2), 252-265 (2001).
  20. Pantaleoni, G. C., et al. Effects of maternal exposure to polychlorobiphenyls (PCBs) on F1 generation behavior in the rat. Fundam. Appl. Toxicol. 11 (3), 440-449 (1988).
  21. Yeomans, J. S., Frankland, P. W. The acoustic startle reflex: neurons and connections. Brain Res. Rev. 21 (3), 301-314 (1995).
  22. Vinay, L., Brocard, F., Clarac, F. Differential maturation of motoneurons innervating ankle flexor and extensor muscles in the neonatal rat. Eur. J. Neurosci. 12 (12), 4562-4566 (2000).
  23. Geisler, H. C., Westerga, J., Gramsbergen, A. Development of posture in the rat. Acta Neurobiol. Exp.(Wars. 53 (4), 517-523 (1993).
  24. Heinen, K., et al. Gabaa receptor maturation in relation to eye opening in the rat visual cortex). Neuroscience. 124 (1), 161-171 (2004).
  25. Whishaw, I. Q., Gorny, B., Foroud, A., Kleim, J. A. Long-Evans and Sprague-Dawley rats have similar skilled reaching success and limb representations in motor cortex but different movements: some cautionary insights into the selection of rat strains for neurobiological motor research. Behav. Brain Res. 145 (1-2), 221-232 (2003).
  26. Prusky, G. T., Harker, K. T., Douglas, R. M., Whishaw, I. Q. Variation in visual acuity within pigmented, and between pigmented and albino rat strains. Behav. Brain Res. 136 (2), 339-348 (2002).
  27. Wu, L., et al. Dietary approach to attenuate oxidative stress, hypertension, and inflammation in the cardiovascular system. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (18), 7094-7099 (2004).
  28. Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and. J. Vis. Exp. (67), (2012).
  29. Rousset, C. I., et al. Maternal exposure to lipopolysaccharide leads to transient motor dysfunction in neonatal rats. Dev. Neurosci. 35 (2-3), 172-181 (2013).
  30. Nguyen, A. T., Bahry, A. M. A., Shen, K. Q., Armstrong, E. A., Yager, J. Y. Consumption of broccoli sprouts during late gestation and lactation confers protection against developmental delay induced by maternal inflammation. Behav. Brain Res. 307, 239-249 (2016).
  31. Black, A. M., Armstrong, E. A., Scott, O., Juurlink, B. J., Yager, J. Y. Broccoli sprout supplementation during pregnancy prevents brain injury in the newborn rat following placental insufficiency. Behav. Brain Res. 291, 289-298 (2015).
  32. Wainwright, P. E. Issues of design and analysis relating to the use of multiparous species in developmental nutritional studies. J. Nutr. 128 (3), 661-663 (1998).
  33. Lazic, S. E., Essioux, L. Improving basic and translational science by accounting for litter-to-litter variation in animal models. BMC Neurosci. 14, 14-37 (2013).
  34. Sergio, D. P., Sanchez, S., Ruben, V. R., Ana, B. R., Barriga, C. Changes in behaviour and in the circadian rhythms of melatonin and corticosterone in rats subjected to a forced-swimming test. J Appl Biomed. 1 (47), (2005).
  35. Castelhano-Carlos, M., Baumans, V. The impact of light, noise, cage cleaning and in-house transport on welfare and stress of laboratory rats. Lab. Anim. 43 (4), 311-327 (2009).
  36. Zimmerberg, B., Ballard, G. A., Riley, E. P. The development of thermoregulation after prenatal exposure to alcohol in rats. Psychopharmacology (Berl. 91 (4), 479-484 (1987).
  37. Fan, L. W., et al. Hypoxia-ischemia induced neurological dysfunction and brain injury in the neonatal rat). Behav. Brain Res. 165 (1), 80-90 (2005).
  38. Smart, J. L., Dobbing, J. Vulnerability of developing brain. VI. Relative effects of foetal and early postnatal undernutrition on reflex ontogeny and development of behaviour in the rat. Brain Res. 33 (2), 303-314 (1971).
  39. Fox, M. W. Neuro-Behavioral ontogeny: A synthesis of ethological and neurophysiological concepts. Brain Res. 2 (1), 3-20 (1966).
  40. Piper, M. C., Mazer, B., Silver, K. M., Ramsay, M. Resolution of neurological symptoms in high-risk infants during the first two years of life. Dev. Med. Child Neurol. 30 (1), 26-35 (1988).
  41. Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J. Neurosci. Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
  42. Vorhees, C. V., Williams, M. T. Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory. Nat. Protoc. 1 (2), 848-858 (2006).
  43. Walf, A. A., Frye, C. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents. Nat. Protoc. 2 (2), 322-328 (2007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים