מודלים מסורתיים של חסימת מוצא השלפוחית חלקית במכרסמים טומן בחובו התמותה של בעלי חיים. פציעת denervation לנתיחה סביב צוואר השופכה ושלפוחית שתן הפרוקסימלי היא גם דאגה גדולה. פיתחנו ומוערכת מודל חסימה באמצע השופכה בטוח ואמין, הימנעות החסרונות של המודל המסורתי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
עצב-מקמץ חסימת אמצע שופכה (Nemo) ב הנקבה קטנה מכרסם
במאמר זה
סיכום
תקציר
שקע חסימת שלפוחית חלקית (pBOO) יש שכיחות גבוהה, גורמת ניטל חולה משמעותי, ועלויות בריאות עצומות. מודל החיה הנפוץ ביותר לחקור שיפוץ שלפוחית שתן ב pBOO הם מכרסמים נשיים עוברים חסימה חלקית על השופכה הפרוקסימלי. השתנות מידת החסימה והתמותה חייה הן סוגיות מרכזיות עם חסימה הפרוקסימלי. יתר על כן, לנתח סביב צוואר שופכה ושלפוחית שתן הפרוקסימלי מסכן עצבוב שלפוחית שתן.
פיתחנו מודל עצב-חוסך חסימת אמצע השופכה (Nemo) עבור pBOO הימנעות החסרונות של המודל המסורתי. ניגשנו השופכה פשוט נחותה תִצמוֹדֶת הערווה, ולכן אין ההכרח עבור פיום וכן לנתיחה בתחום זה; גם, הסוגר של השופכה תילומית נותר מיותם. ביצענו את נמו בחולדות נקבות ספראג-Dawley (12 חסימות, 6 חיות דמה) וכן הנקבה C57 / עכברים BL6 (20 חסימתהים, 18 חיות דמה). לאחר שבועיים, החוקרים העריכו תפקוד שלפוחית השתן, המוני שלפוחית השתן, ואת מסת הגוף.
לא היו לנו mortalities בקרב חולדות נקבות obstructed- או דמה מופעל; כמתואר עבור הפרוקסימלי pBOO-השיטה המסורתית, קשרנו את תפר סביב השופכה הפרוקסימלית ו להציב באופן זמני מוט מתכת 0.9 מ"מ. נמו שהגדילה 85% במסת שלפוחית השתן לאחר שבועיים, נפח שתן שיורית הממוצע היה 0.4 מ"ל בחולדות חסום חלקית ואילו רק 0.03 מ"ל בחיות בלוף. בעכברים, בדקנו 3 גדלים של קנולות כי הנחנו לאורך השופכה כאשר קשירת התפר. מצאנו כי באמצעות צינורית 27-מד הביא בחלופיותה חיה 50%; הצבת צינורית 25-המד לא הניבה את התגובה הרצויה מונית שלפוחית הגדלה; ניצול צינורית 26-מד הניב תוצאות חיוביות עם תמותה בבעלי חיים מינימאלית (1/8) עדיין עלייה של פי 2 משמעותית במסת שלפוחית שתן.
מבוא
יש לשקע חסימת שלפוחית חלקית (pBOO) שכיחות גבוהה והוא יכול לגרום בעיות בתפקוד השלפוחית חמורה 1; הספקטרום נע בין מומים מולדים כגון שסתומים השופכה האחורית או היפוספדיאס, מעל מגבלות השופכה רכשה היפרפלזיה שפירה של הערמונית. האחרון להשפיע על יותר מ 30% של שישים שנה גברים מבוגרים 2. ניטל חולה גדול ועלויות בריאות עצומות הקשורים pBOO להצדיק את מאמץ מחקר רב מכניס שיפוץ שלפוחית לומד בתגובת התנגדות יצוא מוגבר 3. מ 2006 עד 2015, מעל 220 PubMed באינדקס המאמרים שפורסמו בנוגע להשפעת pBOO על שלפוחית השתן.
למרות במודלים של בעלי חיים עבור pBOO כבר המציאו בכמה מינים 4, כגון חולדה 5, הארנב 6, חזיר 7, ו mousדואר 8, 9, שיש הטוענים כי מודל החיה הנפוצה ביותר אך הן בחולדות נקבות עוברות חסימה חלקית של השופכה הפרוקסימלי; גישת בטן החיות, exteriorizing של שלפוחית השתן, ו לנתיחה סביב צוואר שלפוחית השתן הן בלתי נמנעות עם הטכניקה מחסימה חוזרת הפרוקסימלי המסורתית הזה. השתנות מידת החסימה ותמותת חיה הם רק כמה מן החששות הקשורים בהליך זה 10, 11; הראינו כי בחיות דמה מופעל, דיסקציה סביב השופכה הפרוקסימלי מובילה לשינויים פיסיולוגיים המתואמים עם אובדן של סיבי עצב בצוואר שלפוחית השתן 12. ממצא זה מצביע, כי במודל חית pBOO הנפוץ ביותר, אשר כרוך בגישת השופכה הפרוקסימלי במכרסמים נשיים, מוביל לפגיעת denervation עם שינויים מבניים ותפקודיים נלווים של שלפוחית השתן, המשפיעאחיזת עיניים ובעלי חיים חסומים. לכן, פציעת denervation הימנעות גישה חלופית הייתה צורך. המעבדה שלנו פתחה ומוערכת עצב-מקמץ אמצע שופכת חסימה (Nemo) גישה, יעיל בזירוז שינויים צפויים הקשורים מאוטם שריר שלפוחית השתן כגון עלייה המונית איבר ושתנו שיורית, בעוד חיות דמה מופעל היו נבדלות מבעלי חיים מלאי unoperated . כמו כן, הסוגר של השופכה תילומית נותר מיותם כפי שהיא שוכנת בקרבה לרמה לנתיחה. יתר על כן, השתנות עלייה מושרת חסימת מונית שלפוחית היו נמוכות משמעותי מאשר מחסימה חוזרת הפרוקסימלי מסורתית ותמותת חיה הייתה אפס.
אנחנו גם בהצלחה מיושמים נמנו אצל נקבות עכברים עם תמותה פחות מ 10% בחיות חסומות, בעוד כל דגמי pBOO עבור עכברים שתוארו עד כה היו קשורים עם תמותה סביב 50%. לימוד שיפוץ שלפוחית בהקשר של pBOO בעכברים ייהנה applicability של הספקטרום השלם של שינויים מהונדסים.
ביתור סביב אמצע השופכה אצל מכרסמים נשיים לא לגרום לשינויים המבניים או תפקודיים הרצויים ומדהימים בשלפוחית השתן שנצפתה מודל החסימה הפרוקסימלי המסורתי. אף על פי כן, גרימת חבלה חלקית ברמת אמצע השופכה עדיין גורמת היפרטרופיה שלפוחית שתן מוגברת שיורית, כצפוי מן במודל חיה עבור pBOO. חשוב לציין, ביצוע נמתי בעכברים פותחים בחקירה של שיפוץ שלפוחית השתן ב pBOO לשיטות מהונדסות, אשר באופן ווירטואלי זמינים ב מכרסמים גדולים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
פרוטוקול הניסוי הבא אושר על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים של המוסד.
1. נם בחולדות נקבות
- הכנה
- מניחים הנקבה ספראג-Dawley במשקל סביב 200 גרם בהרדמה isoflurane 3%, לשקול את החיה, ואת לגלח ולחטא את האזור prepubic 3 פעמים באמצעות שיחים כירורגית יוד.
- על כרית חימום, גפיים אחוריים קלטת וזנב למטה לצנתר שלפוחית עם angiocatheter 20-מד, אשר גם הוא מודבק למטה בעדינות כדי למנוע החלקה.
- Dissection
- השתמש אזמל לבצע חתך בעור אורך 8 מ"מ מן תִצמוֹדֶת הערווה המוחשית כלפי meatus השופכה. הרם את העור בכל צד כדי להקל סגירת הפצע מאוחר.
- לנתח בבוטות לזהות שופכת stented ידי הפצת אורך עם מספריים בסדר. מניחים ווים העור שמירה עצמית קנס כדי לשפר את החשיפהשל השופכה.
- בצע כמה מתפשטת אורך עדין באמצעות מספריים מעוקלים גב אל השופכה לפתח המטוס בין השופכה ונרתיק. ואז, בבוטות לעבור תפר משי 4-0 מאחורי השופכה ולהכין את הזריקה הכפולה של הקשר של מנתח.
- מחסימה חוזרת חלקית
- הסר את angiocatheter, להציב במקביל מוט מתכת 0.9 מ"מ אל השופכה, ואז להדק את הקשר סביב מוט השופכה ומתכת, כדי שהאחרון עדיין מחליק החוצה לאחר מכן בקלות.
- Secure את הקשר עם 3 יותר זריקות באמצעות מתח עדין לפני הסרת המוט. חותך את התפר מסתיים כ 3 מ"מ ארוך, או 4 מ"מ אם שחרור מאוחר של חסימה הוא חלק בניסוי.
- סגירת הפצע
- בקירוב את בלוטות paraurethral באמצעות תפר אחד קבור של תפר 4-0 קלוע נספג.
- סגור את העור עם תפר מזרן אופקי קבור באמצעות אותו sut נספגיור. הערה: למרות שזה אולי נראה בלתי שגרתי להשתמש תפר נספג עבור תפר חודר לעור, לא נתקלנו סיבוכים כגון דלקות פצעים, וכי הסרת התפר ניתן להימנע.
- לאחר טיפול
- להזריק עצירות 0.1 מ"ג / ק"ג תת עורית לפני הצבת חולדה בכלוב התאוששות.
- הציע מספר דיאטת התאוששות רכה עבור 24 h הראשון העכברוש השוכן היחיד. לאחר תקופה זו, חיות בית שוב באותו זוגות כמו לפני ההליך בתנאי שהם עושים טוב שייך לאותה קבוצת הטיפול.
- בדוק את החולדות יומיות עבור גודל שלפוחית ורווחה כללית; להקליט המשקל שלהם לפחות פעם בשבוע.
2. נם אצל נקבות עכברים
- הכנה
- מניחים עכברה C57BL / 6 במשקל סביב 18 גרם ולהמשיך כמפורט צעד 1.1.1.
- המשך כפי שמתואר בשלב 1.1.2, למעט להשתמש אנג 24-מדiocatheter.
- Dissection
- השתמש אזמל לבצע חתך בעור אורך 6 מ"מ מן תִצמוֹדֶת הערווה המוחשית כלפי meatus השופכה.
- לנתח בבוטות לזהות שופכת stented ידי הפצת אורך עם מספריים בסדר. הרם את הצרור וסקולרית-נוירו רץ ventrally על השופכה ידי דיסקציה הקהה המקביל.
- בצע כמה מתפשטת אורך עדין באמצעות מספריים מעוקלים גב אל השופכה לפתח המטוס בין השופכה ונרתיק. ואז, בבוטות לעבור תפר קלוע 5-0 לא נספג מאחורי השופכה ולהכין את הזריקה הכפולה של הקשר של מנתח.
- מחסימה חוזרת חלקית
- חבר את angiocatheter עם מזרק מ"ל 1 ו להזריק 0.1 מ"ל של תמיסת מלח רגיל לתוך שלפוחית השתן.
- מניחים במקביל צינורית 26-מד אל השופכה. בעדינות להדק את הקשר סביב השופכה צינורית תוך משיכת בחזרה את angiocaה.
- Secure את הקשר עם 3 יותר זריקות באמצעות מתח עדין לפני הסרת הצינורית.
- מבחן עבור שתן מופיע בחלק meatus על לחץ עדין על שלפוחית השתן של החיה; לשחרר את העניבה אם אין אפשרות להביע שתן. אחרת, לחתוך את התפר מסתיים כ ארוך 3 מ"מ.
- סגירת הפצע
- סגור את העור עם תפר מזרן אופקי קבור באמצעות תפר 5-0 קלוע נספג.
- לאחר טיפול
- להזריק 0.1 מ"ג / ק"ג עצירות תת-עורית לפני הצבת העכבר בכלוב התאוששות.
- הציע מספר דיאטת התאוששות רכה עבור 48 h הראשון העכבר שכנו יחיד. לאחר תקופה זו, חיות בית שוב באותו קבוצות כמו לפני ההליך בתנאי שהם עושים טוב שייך לאותה קבוצת הטיפול.
הערה: עכברים עם h 24 שלפוחית נפוחה מוחשי לאחר ההליך זה, אינו מבטל כאשר טפל הם יתר חסום וימות בתוך nשלוחה 1 - 2 ימים, אלא אם כן נלקח בחזרה בהרדמה להסרת המיתר שבתווך. - בדקו את העכברים יומיים עבור גודל שלפוחית ורווחה כללית; להקליט המשקל שלהם לפחות פעם בשבוע.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
עצב-מקמץ חסימה אמצע השופכה (Nemo) בחולדות נקבות
תמותה
בצענו חסימת שופכת אמצע על פני 40 חולדות נקבות עד כה לא הייתה תמותה.
המ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
התמותה של בעלי חיים היא אחת הדאגות הגדולות של המודל המסורתי של pBOO על השופכה הפרוקסימלי, ב 15% או יותר בדוחות רבים 10, 11, 13. נמו נראה שיש תמותה מינימלית כאשר מיושם חולדות נקבות. מחסימה חוזרת הפרוקסימלי בעכברים היא טכנית יותר מאתגר מאשר חולדות וכך גם מועדים יותר לסיבוכים. באמצעות צינורית 26-מד כמציין מיקום עבור אמצע שופכת הגישה שלנו, היו לנו תמותה של בעלי חיים מינ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
העבודה מומנה על ידי מענק תפעולי של CHIR (DJB).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| חולדה נקבה | צ'ארלס-ריבר קנדה | ספראג דולי ראט (Crl:SD); קוד זן: 400 | כ-200 גרם |
| וופורייזר איזופלורן | בנסון תעשיות רפואיות בע"מ | TEC III איזופלורן; קוד מוצר: 53-T3ISO | |
| איזופלורן | פרזניוס קאבי, איזופלורן לבריאות בעלי חיים | ; קוד מוצר: CP0406V2 | בקבוק 250 מ"ל |
| אזמל חד פעמי | טד פלה, בע"מ | #15 אזמלי נירוסטה סטריליים; מספר קטלוגי 549-9-15S | |
| מלקחיים מיקרוסקופיים | טד פלה, בע"מ | מלקחיים למיקרוסקופיה של Aesculap, Finepoint, 115 מ"מ; מספר מוצר 5443 | |
| מלקחיים של Adson | Ted Pella, Inc. | מלקחיים לדיסקציה של Aesculap Adson, מעוקלים, 120 מ"מ; מספר מוצר 5002-9 | |
| מספריים כירורגיים מעוקלים | Ted Pella, Inc. | מספריים כירורגיים, מעוקלים, S/S, 105 מ"מ; מספר קטלוגי 1376 | |
| מוט מתכת אינוקס 0.9 מ"מ | goodfellow.com | נירוסטה - AISI 316L קוטר חוט: 0.9 מ"מ; קוד הזמנה 911-684-65 | |
| ווי עור - מתוצרת עצמית מפלדת אינוקס | goodfellow.com | נירוסטה - AISI 316L קוטר חוט: 0.9 מ"מ; קוד הזמנה 911-684-65 | |
| 4-0 תפר משי | esutures.com | 4-0 גדיל שחור Sofsilk 98 אינץ'; מספר מוצר LS640 | |
| 5-0 תפר Vicry | esutures.com | 5-0 Vicryl לא צבוע 27 אינץ' RB-1 מתחדד; מספר מוצר J213H | |
| מחזיק מחט | Medsupplier.com | מחזיק מחט Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner - 5 1/2 אינץ'; קוד מוצר: מק"ט: NEE4484-8-40TC מק"ט: NEE4484-8-40TC מק"ט: NEE4484-8-40TC | |
| Temgesic (Buprenorphine) | אספקה וטרינרית ראשונה | Buprenex 0.3MG/ml inj amps; פריט #075701 | |
| מזרק 1 מ"ל עם מחט 27 גרם | פישר סיינטיפיק | BD מזרק טוברקולין, BD 309623 | |
| 20 גרם אנגיוקט | פישר סיינטיפיק | אנדווין סיינטיפיק אנגיוקט 20 GA; מס' קטלוגי | |
| NC9561906 דיאטת התאוששות | clearh2o | DietGel 31M; 72-08-5022 | |
| C57Bl/6 עכברים נקבות | צ'ארלס-ריבר קנדה | C57BL/6 עכבר (C57BL/6NCrI); קוד זן: 027 | כ-18 גרם |
| 24 גרם אנגיוקט | פישר סיינטיפיק | חנה פרמצבטיקה אספקה ושות', בע"מ IV צאנט אנגיוקט 24GX3/4IN; מס' קטלוגי | |
| 5-0 Ethibond | esutures.com | 5-0 Ethibond ירוק 30 אינץ' RB-1 מתחדד; מספר מוצר X550H | |
| 26 G מחט מזרק | Sigma-Aldrich | BD Precisionglide, מד 26; z192392 | |
| תמיסת מלח רגילה | בקסטר | 0.9% הזרקת נתרן כלורי, USP, 100 מ"ל מיני שקית; קוד מוצר 2B0043 |
מקורות
- Andersson, K. E. Storage and voiding symptoms: pathophysiologic aspects. Urology. 62 (5), 3-10 (2003).
- Boyle, P., et al. The prevalence of lower urinary tract symptoms in men and women in four centres. The UrEpik study. BJU Int. 92 (4), 409-414 (2003).
- Coyne, K. S., Wein, A., Nicholson, S., Kvasz, M., Chen, C. I., Milsom, I. Economic burden of urgency urinary incontinence in the United States: a systematic review. J Manag Care Pharm. 20 (2), 130-140 (2014).
- Buttyan, R., Chen, M. W., Levin, R. M. Animal models of bladder outlet obstruction and molecular insights into the basis for the development of bladder dysfunction. Eur. Urol. 32 (Suppl 1), 32-39 (1997).
- Mattiasson, A., Uvelius, B. Changes in contractile properties in hypertrophic rat urinary bladder. J Urol. 128 (6), 1340-1342 (1982).
- Chang, S., et al. Alteration of the PKC-mediated signaling pathway for smooth muscle contraction in obstruction-induced hypertrophy of the urinary bladder. Lab Invest. 89 (7), 823-832 (2009).
- Moore, J. A., Brading, A. F. A porcine model of bladder outlet obstruction incorporating radio-telemetered cystometry. BJU Int. 100 (5), 1192-1193 (2007).
- Beamon, C. R., Mazar, C., Salkini, M. W., Phull, H. S., Comiter, C. V. The effect of sildenafil citrate on bladder outlet obstruction: a mouse model. BJU Inte. 104 (2), 252-256 (2009).
- Pandita, R. K., Fujiwara, M., Alm, P., Andersson, K. E. Cystometric evaluation of bladder function in non-anesthetized mice with and without bladder outlet obstruction. J Urol. 164 (4), 1385-1389 (2000).
- Kang, Y. J., et al. Early Sequential Changes in Bladder Function after Partial Bladder Outlet Obstruction in Awake Sprague-Dawley Rats: Focus on the Decompensated Bladder. Korean J Urol. 52 (12), 835-837 (2011).
- Schroeder, A., et al. Protective effect of an oral endothelin converting enzyme inhibitor on rat detrusor function after outlet obstruction. J Urol. 172 (3), 1171-1174 (2004).
- Sidler, M., Aitken, K., Jiang, J., Bijos, D., Bägli, D. "sometimes a sham is just a sham" - why the rodent model of partial bladder outlet obstruction needs adjustment. J Urol. 195 (4), e379(2016).
- Jin, L. H., et al. Persistent detrusor overactivity in rats after relief of partial urethral obstruction. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 301 (4), R896-R904 (2011).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
