מאמר שיטה

Organotypic תרבויות פרוסה בהיפוקמפוס כמודל מחקר Neuroprotection, Invasiveness של תאים סרטניים

12.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55359

⸱

27 באוגוסט 2017

 ,  ,  , 
1Department of Anatomy and Cell Biology, Martin Luther University Halle-Wittenberg, 2Department of Anatomy, University of Otago

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

Organotypic פרוסה בהיפוקמפוס תרבויות (OHSC) מייצגים במבחנה דגם המדמה את המצב ויוו היטב. כאן נתאר מבוסס-vibratome משופרת עם פרוסות פרוטוקול כדי לקבל פרוסות באיכות גבוהה לשימוש בהערכת הפוטנציאל neuroprotective של חומרים חדשניים או ההתנהגות הביולוגית של תאים סרטניים.

תקציר

בתרבויות organotypic פרוסה בהיפוקמפוס (OHSC), המאפיינים פונקציונלי מורפולוגיים של שני נוירונים ותאי גלייה הם השתמרה היטב. מודל זה מתאים פונה שאלות מחקריות שונות הכרוכות מחקרים על neuroprotection, אלקטרופיזיולוגיות ניסויים הנוירונים, רשתות עצביים או גידול הפלישה. האדריכלות בהיפוקמפוס ואת פעילות. עצבית ב מעגלים multisynaptic הם טוב שמור ב OHSC, למרות הנוהל עם פרוסות עצמה בתחילה נגעים ומובילה היווצרות צלקת גליה. היווצרות צלקת משנה יש להניח את תכונות מכניות וההתנהגות דיפוזיה של מולקולות קטנות, וכו '. פרוסות לאפשר פיקוח על תהליכי תלויות זמן לאחר פגיעה מוחית ללא ניתוח בעלי חיים, וכן מחקרים על אינטראקציות בין סוגי תאים במוח-derived שונים, כלומר האסטרוציטים, מיקרוגלייה ו נוירונים תחת פיזיולוגיים ופתולוגיים תנאים. היבט אמביוולנטי של מודל זה הוא העדר זרימת דם ותאי דם חיסוניים. במהלך ההתקדמות של הפגיעה העצבית, העברת תאים חיסוניים מהמחזה דם תפקיד חשוב. כאשר תאים אלה חסרים לפרוסות, התהליכים מהותי בתרבות ייבחנו ללא הפרעה חיצונית. יתר על כן, ב- OHSC ההרכב של הסביבה בינוני-חוץ נשלטת בצורה מדויקת. יתרון נוסף של שיטה זו הוא המספר הנמוך יותר של חיות שהקריבה עצמה לעומת סוגי הפינויים הסטנדרטיים. ניתן להשיג את מספר OHSC מחיה לחיה ביצוע מחקרים בו זמנית עם מספר טיפולים אפשריים חיה אחת. מסיבות אלו, OHSC מתאימים היטב כדי לנתח את ההשפעות של הרפוי מגן חדש לאחר נזק לרקמות או במהלך הפלישה הגידול.

פרוטוקול שהוצג כאן מתאר שיטת הכנה OHSC המאפשרת יצירת מאוד לשחזור, ישמרו פרוסות יכול לשמש למגוון רחב של מחקר ניסיוני, כמו מחקרים הפלישה neuroprotection או גידול.

מבוא

OHSC הם מודל מאופיין היטב במבחנה ללמוד מאפיינים פיזיולוגיים ופתולוגיים של נוירונים, האסטרוציטים מיקרוגלייה1. קל יותר לשלוט בסביבה חוץ-תאית ולעקוב אחר השינויים הסלולר מורפולוגי אחרי גירויים שונים. הארגון של נוירונים בהיפוקמפוס והקשרים שלהם הם שנשתמרו לאחר הכנה2,3. מתוך מספר יתרונות, OHSC לאפשר פיקוח על הפלישה פציעה, גידול במוח ללא ניתוח בעלי חיים. 6-8 OHSC ניתן להשיג מוח מכרסמים יחיד. OHSC ולכן הם מסייעים באופן משמעותי להפחית את מספר בעלי החיים ולאפשר בדיקות סמים ריכוזים מרובים, שינויים גנטיים או מודלים שונים הנגע אותה חיה. במבחני המבוסס על פרוסה, תנאים ניסיוני יכול להיות דווקא נשלט. בנוסף, זמן פיתוח תלות של מצבים פתולוגיים כמו נזקים משניים יכול בקלות יהיה פיקוח על ידי הדמיה בצילום מואץ.

בפרוטוקול נתון, שנוסדה במקור על ידי Stoppini. et al. 4, ההכנה המתוארת, ציוני מורפולוגי החשובים לבחירת פרוסות המתאים מודגשים. אנו ממליצים על הכנת כמחנכת יום 7-9 חולדות או עכברים כמחנכת ביום 4-5. בתקופות אלה, OHSC מראים התנגדות חזקה טראומות מכני ובעל פוטנציאל גבוה רה-ארגון של מעגלים עצביים. לעומת זאת, גלמי חולדות עובריים או למבוגרים במהירות לשנות את המבנה שלהם מאבדים מורפולוגיה organotypic שלהם במהלך הטיפוח-תרגול ואת ולכן מתאימים פחות לימוד לטווח ארוך בתהליכי מחקר בסיסי5,6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. עוד נקודה קריטית עבור שיעור הישרדות של OHSC הוא עובי הפרוסה עצמה כמו דיפוזיה ובכך אספקת מזונם הם מוגבלים12,13,14.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הניסויים בוצעו על פי מדיניות של האתיקה ומדיניות השימוש בבעלי חיים במחקר מדעי המוח כפי שאושר על-ידי באירופה קהילות המועצה דירקטיבה 2010/63/האיחוד האירופי של הפרלמנט האירופי, מועצת האיחוד האירופי בנושא ההגנה על בעלי חיים משמשים למטרות מדעיות.

1. הכנה של מכשירים ומדיה תרבות

  1. עבור הכנת OHSC להשתמש בערכת הבאה של מכשירים: שני מספריים קטנים, שני פינצטה מעוקל, פינצטה אחד עם טיפ בסדר, שלושה להבים (שניים בגודל 11, אחד בגודל 15), שלושה בעלי אזמל, לעגל מסנן המסמכים (קוטר: 35 מ מ), אגר, סכין גילוח אחד, אחד יבוצעו בהם שינויים פסטר פיפטה, 1 שונה פסטר פיפטה ללא טיפ. לעקר את כל החומרים ב החיטוי לפני השימוש ( איור 1).
  2. שוקל 5 g אגר, להמיס במים 100 מ ל מזוקק. לעקר את הפתרון עבור 20 דקות ב 121.7 ° C ב kPa 210.8 ב החיטוי. להפיץ את הפתרון אגר נוזלי 3 מ"ל ב 60-מ מ פטרי באמצעות פיפטה של זכוכית סטריליים, לאפשר לו לחזק עבור 5 שעות, לכסות עם פרפין פלסטיק הסרט כדי למנוע זיהום ולאחסן ב 4 ° C עד להמשך השימוש. קוביות אגר יש צורך לייצב את המוח במהלך ההליך עם פרוסות.
  3. מדיה
    1. להפוך 200 מ"ל של המדיום הכנה (pH 7.35) המורכב מ ל 198 בינוני חיוני מינימלי (מאמ) ו- 2 מ לגלוטמין פתרון (ריכוז סופי 2 מ מ). להכין את הפתרון ביום של מדיה הכנה ואחסן אותו ב-4 מעלות צלזיוס
    2. להכין 100 מ של המדיום תרבות המורכב מ ל 49 גברתי, 25 מ ל הנקס ' מאוזנת פתרונות מלח (HBSS), 25 מ ל (v/v) סוס רגיל סרום (NHS), 1 מ לגלוטמין פתרון (ריכוז סופי 2 מ מ), אינסולין µg 100, 120 מ"ג גלוקוז, סטרפטומיצין 10 מ ג , 10,000 U פניצילין, µg 800 ויטמין C כפי שדווח בעבר. לחמם את המדיום (37 מעלות צלזיוס), התאם את ערך ה-pH pH 7.4 וסטרילי מסנן (0.2 µm גודל הנקבוביות). חזור על הפעולות (מתחמם, התאמת חומציות, וכו ') בכל יומיים לפני שינוי המדיום. השתמש המדיום לכל היותר שבוע אחד כאשר הוא מאוחסן ב- 4 מעלות צלזיוס
  4. למלא אחד 35 מ מ צלחת פטרי עם הכנה בינונית כדי לאחסן את המוח. במקום שתי צלחות פטרי ריק עבור איסוף הרקמה על חבילת קירור באזור העבודה.

2. הכנה, Slicing עם Vibratome

  1. שימוש המוח בת 7-9 יום חולדות או 4-5 יום עכברים הישן להכנת OHSC על פי Stoppini et al. 4 אחרי עריפת ראש של בעלי חיים, מסירים את העור של הגולגולת עם מספריים.
  2. להציג את להב מספריים בסדר לתוך נקב המאגנום ופתח את הגולגולת על ידי גזירה לאורך הציר סימטרית (קבלה) rostral (חזרה). יצירת שני חתכים בניצב הראשונה, כך המספריים הצבע לכיוון האוזן ימינה ושמאלה, בהתאמה (" T-החתך ").
  3. פתח את הגולגולת בזהירות עם מלקחיים בסדר, תשומת לב לא לפגוע במוח. השימוש באזמל (גודל להב 11) לחתוך את החלק rostral ביותר של הקוטב חזיתית ואת המוח הקטן.
  4. אומר על ידי מריבה, מסירים את המוח ואז מניחים אותה בזהירות צלחת פטרי עם הכנה בינונית ( איור 2). מקם את המוח על המחזיק הדגימה ותקן אותה באמצעות דבק רפואי דבק מגע. להשתמש את החלקים של אגר כדי להבטיח מייצב מכני.
  5. לנתח את הרקמה אופקית על 350 מיקרומטר עבה OHSC באמצעות vibratome הזזה של.
  6. להעריך את פרוסות באמצעות מיקרוסקופ דו-עינית אופטית. להתעלם OHSC של איכות נמוכה באופן מיידי. חשוב לקחת רק את הפרוסות עם שלם cytoarchitecture מבודד מן החלק האמצעי של ההיפוקמפוס (ראה דמויות 3 ו- 4) בין מהראש ההיפוקמפוס הגחון.
  7. נפרדים של ההיפוקמפוס, קליפת entorhinal באמצעות אזמל (סיבוב הלהב גודל 15; איור 3). מסלול perforant קליפת המוח entorhinal חייב להישמר.
  8. OHSC 6-8 התקבלו כל המוח. להעביר 2-3 פרוסות לתוך תא אחד תרבות הוספה (נקבוביות בגודל 0.4 מיקרומטר) ולמקם אותו אחד טוב של מנה 6-ובכן תרבות המכיל 1 מ"ל בינוני תרבות לכל טוב.
  9. דגירה הכלים 6-ובכן 35 ° C באווירה humidified באופן מלא עם 5% (v/v) CO 2 ולשנות המדיום התרבות התא בכל יום שני-
    הערה: לנהל את הניסויים שלך ב 6 יום במבחנה (div). תגובות דלקתיות המשויך ההליך עם פרוסות נעלמים ביום 6. בשלב זה, תאים microglial להראות מורפולוגיה כחוד שוב, קשרים סינפטיים הבשילו.

3. הערכת איכות רקמת

  1. יציבות, תיוג והדמיה של נוירונים המתנוונת ב- OHSC
    1. לאחר ביצוע הניסויים, דגירה של OHSC עם 5 יודיד propidium µg/mL (PI) כבר שעתיים לפני קיבוע, ב כדי להכתים את הגרעינים של נוירונים המתנוונת.
      התראה: פאי הוא קרצינוגן חשד, תמיד ללבוש ציוד מגן אישי (עיקרון השוויון הפוליטי) כגון כפפות.
    2. לרחוץ את OHSC עם מאגר פוספט 0.1 M (pH 7.4) ותקן אותן עם פתרון 4% (v/v) של paraformaldehyde (PFA) עבור ה 24
      התראה: PFA הוא קרצינוגן רעיל, החשודות. לעבוד תחת מכסה המנוע fume וללבוש את עיקרון השוויון הפוליטי.
    3. לרחוץ את OHSC ב מוסיף עם 1 מ"ל PBS ולהשתמש במברשת חבלה פרוסות להפריד הקרום.
    4. לתייג את OHSC עם צבע 4 ליברות לתוך צלחת 24-טוב ( איור 5).
  2. הולכה של הגידול הפלישה ניסויים באמצעות fluorescently שכותרתו תאים בודדים
    1. 24 שעןת לפני תחילת הניסוי, תווית לתאי הגידול באמצעות succinimidyl diacetate Carboxyfluorescein של הפלורסנט אסתר (CFDA SE).
    2. ניתוק ולספור את תאי הגידול באמצעות תא נויבאואר.
    3. Resuspend התאים מדיום, כך µL 10 של השעיה מכיל את מספר התאים הרצוי (בד כ 100,000-50,000 תאים).
    4. החל µL 10 של התליה תא אל התרבות פרוסה ולאפשר את התאים לפלוש במשך 3 ימים.
    5. בסוף הניסוי, לתקן את התרבויות פרוסה באמצעות 4% (v/v) מחברים עבור 24 שעות ולאחר תווית התרבויות שיתוף עם PI עבור עוד 24 שעות ביממה כדי להמחיש את cytoarchitecture.
      התראה: PFA הוא קרצינוגן רעיל, החשודות. לעבוד תחת מכסה המנוע fume וללבוש את עיקרון השוויון הפוליטי.
    6. הר התרבויות שיתוף על תגית כיסוי לצורך ניתוח נוסף באמצעות התקשורת הרכבה.

4. הערכה של ניסויים OHSC

לנתח את OHSC עם לייזר קונפוקלי סורק מיקרוסקופ (CLSM). זיהוי של פאי שכותרתו, מושחת נוירונים או החוקר הנקרא cytoarchitecture להשתמש אור מונוכרומטי λ אורך גל = 543 nm ו להקת פליטה לעבור סינון עבור אורכי גל λ = nm 585-615. עבור CFDA שכותרתו תאים סרטניים או מיקרוגלייה 4 ליברות, השתמש של גל עירור של λ = 488 ננומטר. לשני סוגי ניסיוני להקליט z-מחסנית עם 2 מיקרומטר אופטי פרוסות עבות ומשמש להערכה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מחקרים Neuroprotection: כדי לקבוע נזקים עצביים, מספר גרעינים חיובי PI ו ליברות4 חיובי נספר מיקרוגלייה בכל מקטע אופטי השלישי של השכבה תא גרגר (שזכתה) של הכישור משוננת (ג'י). לניסויים הפלישה הגידול, בעוצמה מירבית z-ההקרנה של הערימה שימש לחישוב השטח המכוסה תאים סרטניים, כאמצעי של הפלישה וכדי להמחיש דפוסים שונים הפלישה (איור 6).

הפקד אינו מטופל OHSC (CTL), נוירונים נשארו שהשת...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

בפרוטוקול הנוכחי מתאר את הכנת OHSC. דגם זה מאפשר בדיקה של תגובות של רקמת המוח ויכולות מהותי לאחר היישום של גירויים פיזיולוגיים ופתולוגיים. מלבד ניתוחים של פרמטרים אלקטרופיזיולוגיות, OHSC יכול להיות lesioned, ההשפעות של נזק על כל סוגי תאים יכול להיקבע. טיפול עם חומרים שונים על תיאור מפורט של תהליכי lesioning או ריפוי, בהעדר מאקרופאגים לימפוציטים אפשרי.

The most שלבים קריטיים עבור הכנה מוצלחת ו culturing הן: 1) לעבוד בתנאים סטריליים, 2) להכין את המדיה בצורה נכונה, בהתחשב טמפרטורה, pH, ו 3) לפתח ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף

תודות

המחברים רוצה להודות כריסטין Auste לתמיכה שלה עם הקלטת וידאו, Chalid Ghadban לסיוע טכני מעולה שלו. אורסולה Grabiec נתמכה על ידי רו Programm FKZ 29/18.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
6-בארותפלקון35-3046
אגרפלוקה5040
AutoclavSystecDX-45
CFDA  Thermo FisherV12883
מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי (CLSM) LSM700Carl Zeiss
Eagle´ s בינוני חיוני מינימלי Invitrogen32360-034
פלואורסצאין שכותרתו גריפוניה (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin IVector LabsFL-1101
גלוקוזמרק1083371000
גלוטמיןInvitrogen25030-024
Hank´ s תמיסת מלח מאוזנת (עם Ca2+ ו-Mg2+)Invitrogen24020-133
Hank´ s תמיסת מלח מאוזנת (ללא Ca2+  ו-Mg2+)Invitrogen14170-138
אינסוליןסיגמא אולדריץ'I5500
L-חומצה אסקורביתסיגמא אולדריץ'A5960
L-גלוטמיןInvitrogen25030-024
LN229קווי שירות 300363
דבק ציאנואקרילט רפואי (דבק היסטואקריל)B.Braun1050052
מוסיף תרביתמיליאסל MilliporePICMORG50
NMDA N-methyl-D-aspartic acidSigma AldrichM3262
SeumInvitrogen26050-088
פניצילין סטרפטומיציןInvitrogen15140-122
צלחות פטרי (בכל הגדלים)גריינר627160/664160/628160
PFARoth0335.1רעיל
Propidium iodid (PI)Sigma Aldrich81845-25MGרעיל
U138ATCCHTB-14
VibratomeLeicaLeica VT 1200
רגיל סוס

מקורות

  1. Gähwiler, B. Organotypic slice cultures: a technique has come of age. Trends Neurosci. 20 (10), 471-477 (1997).
  2. Bahr, B. A. Long-Term Hippocampal Slices: A Model System for Investigating Synaptic Mechanisms and Pathologic Processes. J Neurosci Res. 42 (3), 294-305 (1995).
  3. Dailey, M. E., Eyo, U., Fuller, L., Hass, J., Kurpius, D. Imaging microglia in brain slices and slice cultures. Cold Spring Harbor Protoc. 2013 (12), 1142-1148 (2013).
  4. Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. Journal of Neurosci Methods. 37 (2), 173-182 (1991).
  5. Kleinberger-Doron, N., Schramm, M. Culture of mature hippocampus slices for 4 days in a newly developed medium: preservation of transmitter release and leucine incorporation into protein. Brain Res. 533 (2), 239-247 (1990).
  6. Legradi, A., Varszegi, S., Szigeti, C., Gulya, K. Adult rat hippocampal slices as in vitro models for neurodegeneration Studies on cell viability and apoptotic processes. Brain Res Bull. 84 (1), 39-44 (2011).
  7. Gähwiler, B. H. Organotypic Monolayer Cultures of Nervous Tissue. J Neurosci Methods. 4, 329-342 (1981).
  8. Gähwiler, B. H. Organotypic cultures of neural tissue. Trends Neurosci. 11 (11), 484-489 (1988).
  9. Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats. J Neurosci Methods. 130 (1), 19-32 (2003).
  10. Kim, H., Kim, E., Park, M., Lee, E., Namkoong, K. Organotypic hippocamal slice culture from the adult mouse brain: A versatile tool for translational neuropsychopharmacology. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 41, 36-43 (2013).
  11. Xiang, Z., Hrabetova, S., et al. Long-term maintenance of mature hippocampal slices in vitro. J Neurosci Methods. 98, 145-154 (2000).
  12. Adamchik, Y., Frantseva, M. V., Weisspapir, M., Carlen, P. L., Perez Velazquez, J. L. Methods to induce primary and secondary traumatic damage in organotypic hippocampal slice cultures. Brain rRes Brain Res Protoc. 5, 153-158 (2000).
  13. Cho, S., Wood, A., Bowlby, M. R. Brain slices as models for neurodegenerative disease and screening platforms to identify novel therapeutics. Curr Neuropharmacol. 5 (1), 19-33 (2007).
  14. Noraberg, J., Poulsen, F. R., et al. Organotypic hippocampal slice cultures for studies of brain damage, neuroprotection and neurorepair. Curr Drug Targets CNS Neurol Disord. 4 (4), 435-452 (2005).
  15. De Simoni, A., Griesinger, C. B., Edwards, F. a Development of rat CA1 neurones in acute versus organotypic slices: role of experience in synaptic morphology and activity. J Physiol. 550 (Pt 1), 135-147 (2003).
  16. Poindrom, P., Piguet, P., Förster, E. New Methods for Culturing Cells from Nervous Tissues. , BioValley Karger. Basel, Switzerland. (2005).
  17. Berger, T., Frotscher, M. Distribution and morphological characteristics of oligodendrocytes in the rat hippocampus in situ and in vitro: An immunocytochemical study with the monoclonal Rip antibody. J Neurocytol. 23 (1), 61-74 (1994).
  18. Haber, M., Vautrin, S., Fry, E. J., Murai, K. K. Subtype-specific oligodendrocyte dynamics in organotypic culture. Glia. 57 (9), 1000-1013 (2009).
  19. Bonde, C., Sarup, A., Schousboe, A., Gegelashvili, G., Zimmer, J., Noraberg, J. Neurotoxic and neuroprotective effects of the glutamate transporter inhibitor DL-threo-beta-benzyloxyaspartate (DL-TBOA) during physiological and ischemia-like conditions. Neurochem Int. 43 (4-5), 371-380 (2003).
  20. Derouiche, A., Heimrich, B., Frotscher, M. Loss of layer-specific astrocytic glutamine synthetase immunoreactivity in slice cultures of hippocampus. Eur J Neurosci. 5 (2), 122-127 (1993).
  21. Hailer, N. P., Jarhult, J. D., Nitsch, R. Resting microglial cells in vitro: analysis of morphology and adhesion molecule expression in organotypic hippocampal slice cultures. Glia. 18 (4), 319-331 (1996).
  22. Hailer, N. P., Wirjatijasa, F., Roser, N., Hischebeth, G. T. R., Korf, H. W., Dehghani, F. Astrocytic factors protect neuronal integrity and reduce microglial activation in an in vitro model of N-methyl-D-aspartate-induced excitotoxic injury in organotypic hippocampal slice cultures. Eur J Neurosci. 14 (2), 315-326 (2001).
  23. Bahr, B. A., Kessler, M., et al. Stable maintenance of glutamate receptors and other synaptic components in long-term hippocampal slices. Hippocampus. 5 (5), 425-439 (1995).
  24. Holopainen, I. E. Organotypic hippocampal slice cultures: A model system to study basic cellular and molecular mechanisms of neuronal cell death, neuroprotection, and synaptic plasticity. Neurochem Res. 30 (12), 1521-1528 (2005).
  25. Guy, Y., Rupert, A. E., Sandberg, M., Weber, S. G. A simple method for measuring organotypic tissue slice culture thickness. J Neurosci Methods. 199 (1), 78-81 (2011).
  26. Grabiec, U., Koch, M., et al. The endocannabinoid N-arachidonoyldopamine (NADA) exerts neuroprotective effects after excitotoxic neuronal damage via cannabinoid receptor 1 (CB 1). Neuropharmacology. 64 (4), 1797-1807 (2012).
  27. Daviaud, N., Garbayo, E., Schiller, P. C., Perez-Pinzon, M., Montero-Menei, C. N. Organotypic cultures as tools for optimizing central nervous system cell therapies. Exp Neurol. 248, 429-440 (2013).
  28. Ebrahimi, F., Hezel, M., Koch, M., Ghadban, C., Korf, H. W., Dehghani, F. Analyses of neuronal damage in excitotoxically lesioned organotypic hippocampal slice cultures. Ann Anat. 192 (4), 199-204 (2010).
  29. He, S., Shao, L. R., Wang, Y., Bausch, S. B. Synaptic and extrasynaptic plasticity in glutamatergic circuits involving dentate granule cells following chronic N-methyl-D-aspartate receptor inhibition. J Neurophysiol. 109 (6), 1535-1547 (2013).
  30. Kann, O., Taubenberger, N., et al. Muscarinic receptor activation determines the effects of store-operated Ca2+-entry on excitability and energy metabolism in pyramidal neurons. Cell Calcium. 51 (1), 40-50 (2012).
  31. Pérez-Gómez, A., Tasker, R. A. Enhanced neurogenesis in organotypic cultures of rat hippocampus after transient subfield-selective excitotoxic insult induced by domoic acid. Neuroscience. 208, 97-108 (2012).
  32. Raineteau, O., Rietschin, L., Gradwohl, G., Guillemot, F., Gähwiler, B. H. Neurogenesis in hippocampal slice cultures. Mol Cell Neurosc. 26 (2), 241-250 (2004).
  33. Pozzo Miller, L. D., Mahanty, N. K., Connor, J. A., Landist, D. M. D. Pyramidal Cell Death in Slice Cultures From Rat Hippocampus Is Prevented By Glutamate Receptor Antagonists. Neuroscience. 63 (2), (1994).
  34. Koch, M., Kreutz, S., et al. The cannabinoid WIN 55,212-2-mediated protection of dentate gyrus granule cells is driven by CB 1 receptors and modulated by TRPA1 and Ca v2.2 channels. Hippocampus. 21 (5), 554-564 (2011).
  35. Pukrop, T., Dehghani, F., et al. Microglia promote colonization of brain tissue by breast cancer cells in a Wnt-dependent way. Glia. 58 (12), 1477-1489 (2010).
  36. Kohl, A., Dehghani, F., Korf, H. W., Hailer, N. P. The bisphosphonate clodronate depletes microglial cells in excitotoxically injured organotypic hippocampal slice cultures. Exp Neurol. 181 (1), 1-11 (2003).
  37. Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model. Biochem Biophys Res Commun. 269 (2), 513-520 (2000).
  38. Aaberg-Jessen, C., Nørregaard, A., Christensen, K., Pedersen, C. B., Andersen, C., Kristensen, B. W. Invasion of primary glioma- and cell line-derived spheroids implanted into corticostriatal slice cultures. Int J Clin Exp Pathol. 6 (4), 546-560 (2013).
  39. Vinci, M., Box, C., Eccles, S. A. Three-dimensional (3D) tumor spheroid invasion assay. J Vis Exp. (99), e52686(2015).
  40. Hagemann, C., Fuchs, S., et al. Impact of MACC1 on human malignant glioma progression and patients ' unfavorable prognosis. Neuro Oncol. 15 (12), 1696-1709 (2013).
  41. Hohmann, T., Grabiec, U., Ghadban, C., Feese, K., Dehghani, F. The Influence of Biomechanical Properties and Cannabinoids on Tumor Invasion. Cell Adh Migr. 11 (1), 54-67 (2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Isolectin B4Propidium Iodide

מאמרים קשורים