מאמר שיטה

התבגרות של האדם גזע גזע נגזר Cardiomyocytes ב ביאוירס באמצעות גירוי חשמלי

DOI:

10.3791/55373

⸱

6 במאי 2017

 , 
1Toronto General Research Institute, University Health Network, 2Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering, University of Toronto, 3Heart & Stroke/Richard Lewar Centre of Excellence, University of Toronto, 4Laboratory of Medicine and Pathobiology, University of Toronto

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפלטפורמה biowire הלב היא שיטה חוץ גופית המשמשת להבשיל עובריים אנושיים cardiomyocytes הנגזרות תאי גזע מושרים (hPSC-CM) על ידי שילוב טיפוח התא תלת ממדי עם גירוי חשמלי. כתב יד זה מציג את ההגדרה המפורטת של פלטפורמת biowire לב.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גזע פלוריפוטנטיים האנוש cardiomyocytes התא נגזר (hPSC-CMS) היה מקור תא הבטיח ובכך עודד את החקירה של היישומים הפוטנציאליים שלהם במחקר לב, כוללים גילוי תרופות, דוגמנות מחלה, הנדסת רקמות, ורפואת רגנרטיבית. עם זאת, תאים המיוצרים על ידי פרוטוקולים קיימים להציג מגוון של בגרות לעומת cardiomyocytes חדרית בוגרי ילידים. מאמצים רבים נעשו כדי להבשיל hPSC-CMS, עם התבגרות מתונה בלבד שהושגה עד כה. לכן, מערכת מהונדסת, שנקראה biowire, כבר המציאה ידי מתן שני רמזים פיסיים חשמל להוביל hPSC-CMS למצב בשל יותר במבחנה. המערכת משתמשת בפלטפורמה microfabricated זרע hPSC-CMS מסוג קולגן אני ג'ל לאורך תפר תבנית נוקשה להרכיב לתוך רקמת לב מיושר (biowire), הכפופה גירוי שדה חשמלי בתדירות גוברת בהדרגה. בהשוואה לקבוצת ביקורת nonstimulated,מגורה biowired cardiomyocytes להפגין תואר משופר של התבגרות מבנית אלקטרו. שינויים כאלה הם תלויים שיעור הגירוי. כתב יד זה מתאר בפירוט את העיצוב והיצירה של biowires.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טיפול המבוסס על תא הוא אחת האסטרטגיות המבטיחות וחקרו ביותר להשיג תיקון / התחדשות לב. הוא נוצל בעזרת הנדסת רקמות לב ואת שיתוף המשלוח של חומרים ביולוגיים 1, 2. רוב המקורות סלולריים הזמינים נחקרו במודלים של בעלי חיים עבור והשפעתם הפוטנציאלית החיובית על פגום, חולה, או לבבות בגילאי 3. בפרט, מאמצים משמעותיים נעשו להשתמש בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSC) -derived cardiomyocytes (hPSC-CM), מקור תא עצמי בלתי מוגבל פוטנציאלי עבור הנדסת רקמות לב. hPSC-CMS ניתן להפיק באמצעות פרוטוקולים כמה הוקמו 4, 5, 6. עם זאת, התאים המתקבלים להציג פנוטיפים העובר דמוי, עם מגוון של מאפיינים בשלה לעומת cardiomyocytes חדרית בוגרים 7, 8. זה יכול להיות מכשול בפני יישום של hPSC-CMS כמודלים של רקמת הלב המבוגר במחקר גילוי סמים בפיתוח מודלים למחלות לב מבוגר 9.

על מנת להתגבר על מגבלה זו של בגרות פנוטיפי, גישות חדשות נחקרו באופן פעיל כדי לקדם התבגרות cardiomyocyte. מחקרים מוקדמים גילו תכונות פרו-בשלות יעילות cardiomyocytes עכברוש בילוד באמצעות 10 מכנים מחזוריים או 11 גירוי חשמלי. דחיסת ג'ל גירוי מכאני מחזורי הוצגו גם לשפר היבטים מסוימים של התבגרות hPSC-CM 12, 13, עם שיפור מזערי של נכסי טיפול אלקטרו וסידן. לכן, מערכת פלטפורמה בשם "חוט ביולוגי" (biowire) תוכננה על ידי מתן שני רמזים מבניים stimulatio שדה החשמליn על מנת לשפר את ההבשלה של hPSC-CMS 14. מערכת זו משתמשת בפלטפורמת microfabricated ליצור רקמת לב מיושרת כי ניתן גירוי שדה חשמלי. זה יכול לשמש כדי לשפר את הבגרות המבנית של אלקטרו hPSC-CMS. כאן, אנו מתארים את הפרטים של מה שהופך biowires כזה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. עיצוב מאסטר ייצור

הערה: השתמש ליתוגרפיה רך עבור ייצור המכשיר. הפוך מאסטר דו שכבתי SU-8 עבור polydimethylsiloxane דפוס (PDMS).

  1. עיצוב המכשיר באמצעות עיצוב וניסוח תוכנה (איור 1A, שמאל). צייר כל שכבה של המאסטר בנפרד. הדפס את עיצוב המכשיר על שני photomasks ב 20,000 dpi, בהתאם לשתי שכבות של המאסטר 15. הגדר את תבנית התקן כפי שקוף וסביבתה כפי כהה; המסכות תשמשנה את התבנית כדי להעביר את תבנית ההתקן אופטי על SU-8 על ידי ליתוגרפיה (כמתואר על ידי אחרים 15).
  2. לוותר על 4 מ"ל של SU-8 50 על מרכז של פרוסות סיליקון 4 אינץ. מעיל SU-8 50 שווה על פרוסות סיליקון באמצעות coater ספין על ידי ספינינג ב 2000 סיבובים לדקה (RPM) עבור 30 s. אופים את פרוסות על פלטה חמה C 95 ° עבור 10 דקות. לחשוף את פרוסות אולטרה סגול (UV) light ב 200 mJ / ס"מ 2.
  3. יוצקים על 4 מ"ל של SU-8 2050 על גבי במרכז רקיק ועל ספין ב 2500 סל"ד במשך 30 s. אופה על הפלטה החשמלית C ° 95 במשך 15 דקות. מצננים לטמפרטורת החדר (RT).
  4. חזור על שלב 1.3 פעמים נוספות.
  5. מכסה את הפרוסות המצופות עם photomask השקיפות-השכבה הראשונה. לחשוף את פרוסות לאור UV ב 270 mJ / ס"מ 2 על מנת להפוך את השכבה הראשונה. אופה על הפלטה החשמלית C ° 95 במשך 15 דקות.
  6. הפוך את השכבה השנייה של SU-8 2050 על ידי חזרה על שלב 1.3 פעמים.
  7. יישר את המסכה בשכבה השנייה לתכונות על השכבה הראשונה באמצעות aligner מסכה. ואז, לחשוף לאור UV ב 240 mJ / 2 ס"מ. אופים בחום של 95 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.
    הערה: זמן החשיפה נקבע לפי מינון UV כולל נדרש ואת עוצמת פלט UV האור נמדדה ביום לפני השימוש.
  8. פיתוח רקיק ידי והשקיע אותה אצטט אתר monomethyl פרופילן גליקול (PGMEA) ו רועד ב 200 סל"ד במשך 30 דקות על שייקר מסלולית.
  9. מקוםאת המאסטר לתוך צלחת פטרי בזהירות לשפוך את התערובת PDMS (בסיס כדי crosslinker ביחס של 10: 1 לפי משקל) על מרכז רקיק. לכסות את כל התכונות ולהימנע בועות אוויר.
  10. מחממים בתנור ב 70 מעלות צלזיוס למשך 2 שעות. השתמש להב חד לחתוך סביב קצה תבנית biWire PDMS ( איור 1 א, מימין). לקלף את PDMS מן המאסטר. חתוך את המכשיר עם הלהב. שים את תבנית biWire PDMS ב עיקור עיקור חיטוי אדים ב 121 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות.
  11. בתוך ארון biosafety (BSC), במקום את תבנית PDWW PDMS לתוך צלחת פטרי. השתמש פינצטה להחזיק ואת הר פיסת תפר משי סטרילי סטרילי (6-0) במרכז הערוץ של micrustell PDMS על ידי ישיבה אותו החריצים בשני הקצוות של הערוץ ( איור 1B-I ).

2. יצירת לשכת גירוי חשמלי

  1. צור זוג חתיכות פוליקרבונט מלבניות (אורך x רוחב x עובי: 2 ס"מ x0.85 ס"מ x 0.35 ס"מ) ולהשתמש בהם המסגרת של תא גירוי חשמלי (איור 2).
  2. מקדחה השנייה 3 מ"מ חורים רחבים מזה 2 סנטימטר לאורך קו האמצע של כל פיסת מסגרת פוליקרבונט.
  3. חותכים שתי חתיכות של מוטות פחמן ארוך 1.5 ס"מ. לקדוח חור 1 מ"מ-רחב דרך מוט הפחמן על 3 מ"מ מהקצה. חוטי תיל פלטינה דרך חור מוט פחמן להדק את החוט על ידי לפפת אותה סביב מוט הפחמן. צרף קליפ אל הקצה השני של חוט פלטינה עבור חיבור מאוחר יותר עם ממריץ חשמלי.
  4. הכנס את מוטות פחמן לתוך חתיכות מסגרת פוליקרבונט. מניח את המסגרת התאספה עם מוטות פחמן לתוך באר של צלחת שש היטב.
  5. יוצקים 2 מ"ל של PDMS לתוך הבאר. לצלול התחתון של מסגרות פוליקרבונט ב PDMS, תוך שמירה על רמת השטח PDMS קרוב אבל לא להגיע לתחתית מוטות פחמן. מחממים בתנור על 70 מעלות צלזיוס למשך 2 h.
  6. קח את תא הגירוי החשמלי מתוך השישה- צלחת טובה והכניסו אותו שקיק עיקור עבור קיטור עיקור על 121 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות.

3. דיסוציאציה אנזימטית של hPSC-CMs

  1. לעורר hPSC כדי להבדיל cardiomyocytes באמצעות פרוטוקול הוקמה 4 .
    הערה: בקצרה, ליצור cardiomyocytes דרך גופים עובריים הוקמה (EB) ב בינוני פרו גזע באמצעות תוסף רציף עם חלבון morphogenetic העצם 4, גורם הצמיחה הבסיסית fibroblast, Activin, גורם צמיחה אנדותל כלי הדם, ו דיקופ הומולוג 1 4 . השתמש EBS מיום 20-34 של בידול לעשות biowires.
  2. איסוף EBS מצלחת מצורף נמוך עם קצה P1,000 פיפטה ולהעביר צינור חרוטי. גלולה על ידי צנטריפוגה במשך 5 דקות ב 125 xg ו RT. מחק supernatant ו resuspend גלולה עם מראש מחומם, 37 ° C collagenase סוג אני מכיל 1% deoxyribonuclease אני (DNAse אני). לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 2 שעותלעיכול.
  3. מוסיפים 5 מ"ל של מחומם מראש, 37 ° C לשטוף בינוני ו צנטריפוגות במשך 5 דקות ב 125 XG ו RT. בטל supernatant. Resuspend גלולה עם 2 מ"ל של טריפסין / חומצה ethylenediaminetetraacetic (EDTA) פתרון לדגור 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
  4. להוסיף 1 מ"ל של מדיום להפסיק המכיל 3% (v / v) I. DNase
  5. צרף מחט 20 G (0.9 מ"מ) כדי מזרק 5 מ"ל ולהעביר את ההשעיה EB דרכו 3-5 פעמים.
  6. להוסיף 7 מ"ל של מדיום לשטוף צנטריפוגות ב 280 XG במשך 5 דקות. בטל supernatant. Resuspend הגלולה (IMDM) הבינוני של השינוי של Iscove Dulbecco ולאחסן על קרח. קבע את מספר הסלולרי עם hemocytometer. קח 0.5 x 10 6 תאים גלולים ידי צנטריפוגה ב 280 XG במשך 5 דקות. הסר את supernatant.
  7. טרום מגניב כל הרכיבים ג'ל על קרח לפני ערבוב אותם בתוך שפופרת סטרילית. מערבבים את מרכיבי ג'ל קולגן הבאים (ריכוז סופי): 2.1 מ"ג / קולגן זנב עכברוש מ"ל סוג I, 24.9 גלוקוז מ"מ, 23.8 מ"מ לאא3 CO, 14.3 מ"מ NaOH, 10 HEPES מ"מ, ו מטריקס 10% בטווח הבינוני 1x M199. מוסיפים את הקולגן מטריקס האחרון. מערבבים על ידי pipetting למעלה ולמטה.
  8. Resuspend 0.5 x 10 6 תאים עם 3.5 μL של ג'ל קולגן ומערבבים היטב.
  9. השתמש קצה פיפטה P10 להוסיף 4 μL של ההשעיה התא לתוך התעלה 0.5 ס"מ באורך (איור 1B-II). התאם את המיקום של תפר עם מלקחיים סטרילית במידת הצורך.
  10. מכסים את תחתית צלחת פטרי עם שנאגרו מלוחים פוספט סטרילית (PBS), כדי לוודא שלא לגעת בג'ל. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
  11. החלף את PBS עם 12 מ"ל של מדיום תרבות (למשל, גזע Pro או בינוני המומלץ על ידי היצרן התא), מספיק כדי לכסות את התאים (איור 1B-III). תרבות באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס למשך 1 שבוע. שינוי המדיום פעם ביומיים.

4. גירוי חשמלי טיפוח Biowire

  1. בשנתBSC, להוסיף 2 מ"ל של PBS היטב בכל צלחת שש היטב כי יהיה בית קאמרית חשמלי. להשתמש בפינצטה סטרילי כדי למקם את מכשיר גירוי חשמלי לעקר בעדינות לתוך הבאר. בטל PBS מהבאר.
  2. מכסים את מוטות פחמן עם 5 מ"ל של מדיום התרבות מחומם מראש. להשתמש בפינצטה סטרילי כדי להרכיב את biowires בתא גירוי חשמלי לכוון אותם בניצב מוטות פחמן (איור 2).
  3. מניחים את המכסה על גבי צלחת שש היטב, אך להשאיר חוטי פלטינה מספיק לכת מחוץ לצלחת כדי להתחבר עם ממריץ האלקטרוני. מניחים את צלחת שש היטב בתוך תרבית תאים חממה ב 37 ° C ולחבר את חוט פלטינה על חשמלי.
  4. לעורר את biowires באמצעות חשמלי עם ההגדרה הבאה: דופק חוזר בי-פאזית, משך דופק 1-MS, 3 V / סנטימטר, ו 1 דופק לשנייה (PPS). הרם את PPS כל 24 h לערכים הבאים: 1.83, 2.66, 3.49, 40.82, 5.15, ו -6 שינוי המדיום פעם ביומיים.
  5. שים לב התכווצות cardiomyocyte בתגובת גירוי חשמלי תחת מיקרוסקופ בהגדלה 10X.
    הערה: לאחר שבוע אחד של גירוי, את biowires הופך בוגר (ראה סעיף התוצאות).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הרציונל לשימוש תפר את biowires הוא לשמש כתבנית ליצירת מבני 3D כי ליישר ב ציר אחד לחקות את הצורה של סיבי לב. אנו מראים כי לאחר שבעה ימים של תרבות biowire, תאים שופצו הג'ל ברחבי (איור 3 א) התפר. התאים נאספו לאורך הציר של התפר כדי ליצור מיושר ברקמת לב (איור 3). לאחר 7 ימים של preculture, את biowires נחשף 7 ימים של גירוי שדה חשמלי הציגו עוד תכונות תואמות התבגרות מבנית ותפקודית של שריר לב.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כתב יד זה מתאר את ההתקנה והטמעה של הפלטפורמה המהונדסת, biowire, כדי לשפר את ההבשלה של hPSC-CMS. המכשיר יכול להתבצע במתקני microfabrication סטנדרטיים, biowires יכול להיות מיוצר עם טכניקות תרבית תאים משותפות לממריץ חשמלי.

למיטב ידיעתנו, אין דיווח שיטה דומה biowires. אסטרטגיה זו מגלה כי מאפייני הבשלה משופרים היו תלויים במשטר הגירוי החשמלי, כפי שמעידים הרמה הבשלה יותר שהושגה biowires נתון המשטר כבש את שער גירוי הגבוה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי גרנט ב- סיוע מן הלב ושבץ הקרן של קנדה (G-14-0,006,265), מענקי הפעלה מהמוסד הקנדי לבריאות מחקר (137,352 ו 143,066), וכן מענק מקרן JP Bickell (1,013,821 ) ל SSN.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
L-Ascorbicacid SigmaA-4544hPSC-CM componet
AutoCAD Autodesk, Incתוכנה לתכנון מכשיר
מוטות פחמן, Ø 3 מ"מרכיב תא ממריץ חשמלי
קולגן, סוג 1, זנב עכברושBD Biosciences354249ג'ל קולגן: 2.1 מ"ג/מ"ל של קולגן זנב חולדה מסוג I ב-24.9 מ"מ גלוקוז, 23.8 מ"מ NaHCO<תת>3, 14.3 מ"מ NaOH, 10 מ"מ HEPES, ב-1x M199 מדיה עם 10% של מטריג'ל מופחת בגורם גדילה.
סוג קולגנאז I SigmaC01300.2% קולגנאז מסוג I (w/v) ו-20% FBS (v/v) ב-PBS עם Ca2+ ו-Mg2+. לעקר עם 0.22 μ מ 'מסנן ומכין 12 מ"ל אליקוטים. יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.
דאוקסיריבונוקלאז I (DNase I)EMD Millipore260913-25MUהכינו תמיסת מלאי של 1 מ"ג/מ"ל DNase I במים. סנן סטרילי ואחסן 0.5 מ"ל אליקוטים ב & מינוס; 20 מעלות; C
מקדחים ומקדחים (&אוסלאש; 1 מ"מ ו-2 מ"מ)Dremelקידוח חורים במסגרות פוליקרבונט
ממריץ חשמלידשאs88x
סרום בקר עוברי (FBS)WISENT Inc.080-450
D-(+)-גלוקוז SigmaG5767רכיב ג'ל קולגן
L-גלוטמיןתרמו פישר 25030081
H2OMilliQ18.2 MΩ · ס"מ ב-25 מעלות; C, אולטרה-טהור, כדי להפוך את כל הפתרונות
HEPESSigmaH4034רכיב ג'ל קולגן
פלטה חמהטורי פיינסHS40
Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)Thermo Fisher Scientific12440053
Maskaligner EVG EVG 620
Matrigel, מקדם גדילה מופחת Corning354230רכיב ג'ל קולגן
בינוני 199 (M199)Thermo Fisher Scientific11825015רכיב ג'ל קולגן
מונותיוגליצרול (MTG)SigmaM-6145hPSC-CM מרכיב מדיה תרבית
שייקר אורביטליVWR 89032-088
פניצילין/סטרפטומיצין (P/S)Thermo Fisher Scientific15070063
תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS) עם Ca2+ ו-Mg2+ Thermo Fisher Scientific14040133
Plate (6 בארות)Corning353046
Plate (6 בארות), חיבור נמוךCorning3471
חוטי פלטינה, 0.2 מ"מרכיב תא סטימולטור חשמלי
Polydimethylsiloxane (PDMS)Dow CorningSylgard 184
פרופילן גליקול מונומתיל אתר אצטט (PGMEA)איילה & אינגלס בע"מהוופל
ממיריםפתוחים לקלף92308לעיקור קיטור
פרוסת סיליקון, 4 אינץ'UniversityWafer Inc.
נתרן ביקרבונט (NaHCO3)SigmaS5761רכיב ג'ל קולגן
נתרן הידרוקסידSigmaS8045רכיב ג'ל קולגן
Sprin Coaterמערכות ציפוי מיוחדותG3P-8
StemPro-34 מדיום תרמופישר סיינטיפיק10639011מדיום תרבית hPSC-CM. להכנת 50 מ"ל, הוסף תוספת של 1.3 מ"ל, 500 μ L של 100 פעמים; L-גלוטמין, 250 ו-mu; ליטר של 30 מ"ג/מ"ל טרנספרין, 500 μ ליטר של 5 מ"ג/מ"ל חומצה אסקורבית, 150 μ L של 26 μ l/2 מ"ל מונותיוגליצרול (MTG), ו-500 μ L (1%) פניצילין/סטרפטומיצין.
עצור מדיהמדיום כביסה: FBS (1:1)
SU-8 50 MicroChem Corp.פוטו-רזיסט, רכיב ראשי
SU-8 2050 MicroChem Corp.photoresist, רכיב ראשי
TransferrinRoche10-652-202hPSC-CM componet מדיה תרבית
Trypsin/EDTA, 0.25%Thermo Fisher Scientific25200056hPSC-CM componet מדיה תרבית
שטיפהIMDM המכיל 1% פניצילין/סטרפטומיצין
לפיתוח נרתיק , מדיום

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sun, X., Nunes, S. S. Overview of hydrogel-based strategies for application in cardiac tissue regeneration. Biomed Mater. 10 (3), 034005(2015).
  2. Sun, X., Altalhi, W., Nunes, S. S. Vascularization strategies of engineered tissues and their application in cardiac regeneration. Adv Drug Deliv Rev. 96, 183-194 (2016).
  3. Hastings, C. L., et al. Drug and cell delivery for cardiac regeneration. Advanced Drug Delivery Reviews. 84 (0), 85-106 (2015).
  4. Yang, L., et al. Human cardiovascular progenitor cells develop from a KDR+ embryonic-stem-cell-derived population. Nature. 453 (7194), 524-528 (2008).
  5. Zhang, J., et al. Extracellular matrix promotes highly efficient cardiac differentiation of human pluripotent stem cells: the matrix sandwich method. Circ Res. 111 (9), 1125-1136 (2012).
  6. Lian, X., et al. Robust cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells via temporal modulation of canonical Wnt signaling. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (27), E1848-E1857 (2012).
  7. Snir, M., et al. Assessment of the ultrastructural and proliferative properties of human embryonic stem cell-derived cardiomyocytes. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 285 (6), H2355-H2363 (2003).
  8. Dolnikov, K., et al. Functional properties of human embryonic stem cell-derived cardiomyocytes: intracellular Ca2+ handling and the role of sarcoplasmic reticulum in the contraction. Stem Cells. 24 (2), 236-245 (2006).
  9. Yang, X., Pabon, L., Murry, C. E. Engineering adolescence: maturation of human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes. Circ Res. 114 (3), 511-523 (2014).
  10. Zimmermann, W. H., et al. Tissue engineering of a differentiated cardiac muscle construct. Circ Res. 90 (2), 223-230 (2002).
  11. Radisic, M., et al. Functional assembly of engineered myocardium by electrical stimulation of cardiac myocytes cultured on scaffolds. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (52), 18129-18134 (2004).
  12. Schaaf, S., et al. Human engineered heart tissue as a versatile tool in basic research and preclinical toxicology. PLoS One. 6 (10), e26397(2011).
  13. Tulloch, N. L., et al. Growth of engineered human myocardium with mechanical loading and vascular coculture. Circ Res. 109 (1), 47-59 (2011).
  14. Nunes, S. S., et al. Biowire: a platform for maturation of human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes. Nat Methods. 10 (8), 781-787 (2013).
  15. Lake, M., et al. Microfluidic device design, fabrication, and testing protocols. Protocol Exchange. , (2015).
  16. Shiba, Y., Hauch, K. D., Laflamme, M. A. Cardiac applications for human pluripotent stem cells. Curr Pharm Des. 15 (24), 2791-2806 (2009).
  17. Yang, X., et al. Tri-iodo-l-thyronine promotes the maturation of human cardiomyocytes-derived from induced pluripotent stem cells. J Mol Cell Cardiol. 72, 296-304 (2014).
  18. Zhang, D., et al. Tissue-engineered cardiac patch for advanced functional maturation of human ESC-derived cardiomyocytes. Biomaterials. 34 (23), 5813-5820 (2013).
  19. Radisic, M., et al. Oxygen gradients correlate with cell density and cell viability in engineered cardiac tissue. Biotechnol Bioeng. 93 (2), 332-343 (2006).
  20. Reubinoff, B. E., Pera, M. F., Fong, C. Y., Trounson, A., Bongso, A. Embryonic stem cell lines from human blastocysts: somatic differentiation in vitro. Nat Biotechnol. 18 (4), 399-404 (2000).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

BiowirehPSC CMIPDMS

מאמרים קשורים