הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הביטוי, טיהור, פעילות אנטי מיקרוביאלית של S100A12

8.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55557

⸱

13 במאי 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Life and Physical Sciences, Fisk University, 2Tennessee Valley Healthcare Systems, U. S. Dept. of Veterans Affairs, 3Department of Medicine - Division of Infectious Diseases, Vanderbilt University Medical School, 4Department of Biochemistry, Vanderbilt University

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים שיטה להביע ולטהר S100A12 (calgranulin C). אנו מתארים פרוטוקול למדידת פעילות אנטי מיקרוביאלית שלו נגד הפתוגן האנושי H. pylori .

תקציר

חלבונים Calgranulin הם מתווכים חשובים של חסינות מולדת הם חברי המעמד S100 של המשפחה EF יד של חלבונים מחייב סידן. כמה חלבונים S100 יש את היכולת לקשור מתכות המעבר עם זיקה גבוהה ביעילות לשלוף אותם מן הפתוג חיידקים פתוגנים בתהליך זה כינה "חסינות תזונתיים". S100A12 (EN-RAGE) מחייב הן אבץ והן נחושת, והוא שופע בתאי חיסון מולדים כגון מקרופאגים ונויטרופילים. אנו מדווחים על שיטה מעודנת לביטוי, העשרה וטיהור של S100A12 בתצורה הפעילה והמתכתבת. ניצול של חלבון זה בצמיחה חיידקים וניתוחי חיוניות מגלה כי S100A12 יש פעילות מיקרוביאלית נגד הפתוגן חיידק , Helicobacter pylori . הפעילות המיקרוביאלית מבוססת על פעילות מחייב אבץ של S100A12, אשר chelates אבץ מזין, ובכך רעב H. pylori אשר דורש אבץ לצמיחה pרוליפרציה.

מבוא

S100 חלבונים הם מחלקה של EF יד המשפחה של סידן מחייב חלבונים עם מגוון רחב של פונקציות 1 . הם באים לידי ביטוי באופן רקמות תא ספציפי, לווסת מגוון רחב של פונקציות הסלולר 2 , 3 . ייחודי חלבונים סידן מחייב, חלבונים S100 התערוכה הן פונקציות תאיים תאיים 4 , 5 . בתוך התא, Ca 2 + מחייב גורם לשינוי קונפורמציה החושפת משטח הידרופובי כי מטרות ספציפיות חלבון מחייב שותפים 6 . מנגנון תאיים זה מסדיר תהליכים חשובים כגון התפשטות תאים, התמיינות ואנרגיה מטבוליזם. בסביבה תאית, S100 חלבונים התערוכה שתי פונקציות 7 . באחד מהם, הם פועלים כנזק הנלווה לחלבון המולקולרי (DAMP) ויוצרים פרו-דלקתהתגובה החיסונית אטורי באמצעות אינטראקציה עם קולטנים הכרה דפוס 8 , 9 . בנוסף, כמה חברים של מחלקה S100 חלבון sequester המעבר מתכות, פונקציה המשמשת להרעב פתוגנים חיידקים בתהליך המכונה החסינות התזונתיים 10 , 11 .

S100A12 (הידוע גם בשם calgranulin C ו- EN-RAGE) מתבטאת מאוד מקרופאגים ונויטרופילים ו זוהו כסימן ביולוגי פוטנציאלי למחלות דלקתיות 12 , 13 . בנוסף סידן מחייב באתרי EF-Hand שלה, S100A12 יש שני זיקה גבוהה מתכת מחייב אתרים הממוקם בקצה השני של ממשק dimer 14 , 15 . כל אתר מחייב מורכב משלושה שאריות histidine ושאריות חומצה אחת aspartic והוא יכול chelate אבץ או נחושת 16 , 17 . לאחרונה, דיווחנו כי רעב אבץ תלוי S100A12 חשוב בויסות הצמיחה של הליקובקטר פילורי ופעילותם של גורמים ארסתיים דלקתיים 18 .

H. pylori מדביק את הבטן של כמחצית מאוכלוסיית האדם בעולם; מה שהופך אותו ללא ספק לאחד הפתוגנים החיידקים המצליחים ביותר 19 . זיהום עם H. pylori יכול להוביל לתוצאות משמעותיות של מחלת קיבה, כולל גסטריטיס, כיב פפטי ותריסריון, רירית לימפומה לימפומה (MALT), וכן אדנוקרצינומה קיבה פולשנית (סרטן הקיבה). סרטן הקיבה הוא הגורם המוביל למוות שאינו קשור לסרטן בסרטן בעולם, וגורם הסיכון הגדול ביותר הקשור לסרטן הקיבה הוא זיהום ב- H. pylori .

H. pylori נמשכת נישה קיבה למרות robuSt התגובה החיסונית הפתוגן, מדגיש את הצורך בהבנה טובה יותר של מנגנוני החיסון של שליטה זה זיהום חיידקי 20 , 21 , 22 , 23 . H. pylori - דלקת נלווה מאופיינת בחדירה עמוקה של תאים פולימורפונומיים, או נויטרופילים, המפקידים רפרטואר של חלבונים אנטי-מיקרוביאליים, כולל S100A12, באתר ההדבקה 18 , 24 , 25 . במאמץ להבין את הדיאלוג המורכב בין המארח לבין הפתוגן, ביקשנו לחדד את הטכניקה לטהר את S100A12 ולהשתמש בה כדי לחקור את המיקרוביאליות שמשפיעה על הפתוגן הרלוונטי מבחינה רפואית. פרוטוקול להלן מתאר טכניקה משופרת לטיהור S100A12 במצב פעיל ביולוגית שלה; המסוגל לחייב מתכות מזין עם אפיני גבוההTy ו chelating אותם מן הפולש מיקרואורגניזמים. יתר על כן, השיטות להלן מדגישות את התועלת של חלבון זה כמגיב קריטי כדי לחקור את המנגנון שבו מולקולות מולקולות מולדות להגביל את הצמיחה של פתוגנים חיידקיים.

S100A- חלבונים משפחתיים זכו להערכה כקבוצה חשובה של מולקולות מערכת החיסון המולדת אשר משתתפים איתות החיסון וכן ההגנה המארח 27 . המחקר הטוב ביותר של אלה הוא calprotectin (MRP-8/14, calgranulin A / B, S100A8 / A9) 28 , 29 , 30 . Calprotectin הוא נויטרופיל הקשורים חלבון אשר יוצר heterodimer של S100A8 ו S100A9 יחידות משנה אשר נקשר מתכות המעבר בממשק dimer 31 . Calprotectin הוכח להחזיק שני אתרי מחייב מתכת: אתר 1 יכול לקשור Zn 2 + , Mn 2 + , או Fe 2 + , ואת האתר 2 יכול כץ Zn 2+ 31 , 32 . דיווחים רבים הוכיחו שלקאלפרוקטין יש פעילות אנטי-מיקרוביאלית נגד גורמים שונים כגון Staphylococcus aureus , קנדידה אלביקנס , Acinetobacter baumannii , דלקת ריאות של קלבסילה , Escherichia coli ו- H. pylori , וכי ההשפעות המעכבות נובעות מפעולת הקלציה המתכתית של calprotectin 25 , 28 , חשוב

מחקרים קודמים הראו כי פעילות ה- Calprotectin מפעילה מספר רב של פעילויות על H. pylori, כולל שינוי השומנים מבנה בקרום החיצוני, הדחקה של מערכת הפרשת הטיפוס הרביעי (שהיא גורם ארסי פרו-דלקתני משמעותי בתוך H. pylori ), יצירת היווצרות ביופילם והדחקה H. pylori הצמיחה ואת הכדאיות באופן תלוי מינוןClass = "xref"> 25 , 33 . יתר על כן, בדיקות גנטיות וביוכימיות חשפו את הפעילות האנטיבקטריאלית של קלפרוטקטין כנגד H. pylori נבעה ברובה מיכולתה לקשור אבץ מזין 25 . H. pylori דורש אבץ, כפי שנקבע על ידי מחקר קודם אשר ניצל בינוני מוגדר כימית כדי לוודא את הדרישות micronutrient עבור הפתוגן הזה לגדול ולהתרבות 34 . בנוסף, קלפרוקטין היה שופע מאוד בתוך רקמות נגועות ב H. pylori , והוא קשור לחדירים נויטרופילים, דבר המצביע על כך שהמארח עשוי להעסיק את ה- Calprotectin כאסטרטגיה אנטי-מיקרוביאלית במהלך ההדבקה ודלקת שלאחר מכן , 25 , 35 .

עדויות חדשות מ טכניקות הקרנה proteomics unbiased עולה כי בתנאים בהם מינים חמצן תגובתי בשפע, calprotecפח עובר שינויים לאחר טרנסלוציאציה אשר משנים את האתר מחייב hexa histidine, ובכך מעכב את הפעילות מחייב מתכת של חלבון 36 . ככזה, שיערנו כי חלבונים אחרים של משפחת S100A בין הרפרטואר הרחב של המולקולות הללו עשויים לשמש ככלי עזר-מתכת עזר. בחרנו את S100A12 לצורך מחקר נוסף, משום שהוא לא זוהה במסך הנ"ל לתמורות פוסט-טרנסלציוניות, יש לו את היכולת לקשור אבץ, והוא שופע מאוד ברקמות אנושיות הנגזרות מאנשים של H. pylori- infected.

העבודה שלנו מצביעה על כך ש- S100A12 יכול לעכב את צמיחת ה- H. pylori ואת הכדאיות במינון תלוי במינון G27 של H. pylori , וכי פעילות מיקרוביאלית של חלבון זה יכולה להפוך על ידי תוספת של אבץ מזין עודף. עבודה זו משלימה את העבודה הקודמת שלנו המעידה על פעילות מיקרוביאלית של S100A12 נגד PMSS1 ו- 7.13 זנים של H. pylori , מדגים פעילות אנטיבקטריאלית רחבה נגד מבודדים קליניים רבים זנים מותאמים למעבדה של H. pylori 18 . יחד, תוצאות אלה מאשרות את החשיבות של S100A12 כמנגנון לבקרה על צמיחה וחיידקים בקטריאליים באמצעות חסינות תזונתיים. מחקרים עתידיים על אינטראקציה חשובה זו של חיידק מארח יכולים לכלול ניצול של הפעילות של S100A12 כדי להפחית את נטל החיידקים ברקמות המארחות, או לקבוע את תרומתו של חלבון זה לחיבור החיסון בהקשר של זיהום H. pylori .

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. ביטוי של S100A12

  1. המרה המוסמכת BL21 DE3 תאים עם pGEMEX-S100a12 פלסמיד באמצעות תקן סטנדרטי חום ההלם 18 . הוסף 1 עד 5 μL של פלסמיד ל 50 μL של חיידקים בצינור microcentrifuge על הקרח. דגירה במשך 20 דקות.
  2. הלם חום התאים ב 42 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות.
  3. דגירה התאים על הקרח במשך 2 דקות.
  4. הוסף 500 μL של מדיה SOC לתאים. דגירה על 37 מעלות צלזיוס עם רעד בסל"ד 250 על שייקר מסלולית עבור 1 ח.
  5. צלחת 150 μL של התגובה טרנספורמציה על בינוני LB- אגר (בתוספת 100 מיקרוגרם / מ"ל ​​אמפיצילין). לדגור על 12-16 שעות ב 37 ° C.
  6. בחר מושבה אחת. לחסן 2 מ"ל של LB (בתוספת 100 מיקרוגרם / mL ampicillin).
  7. דגירה עבור 4-6 שעות על 37 מעלות צלזיוס על שייקר מסלולית (300 סל"ד). OD 600 צריך לקרוא בין 1-3 ספיגת יחידות.
  8. הוסף 500 μL של תרבות Starter ל 50 מ"ל של ZYM-5052 autoinduהתקשורת ction 26 בתוספת 100 מיקרוגרם / מ"ל ​​של אמפיצילין. עבור אוורור הטוב ביותר ביטוי מקסימלי, להשתמש 250 מ"ל מבולבל בקבוק ארלנמאייר. לנער (300 סל"ד) עבור 24 שעות, על 37 מעלות צלזיוס.
  9. העברת ההשעיה חיידקי לצינור צנטריפוגות. גלולה התאים על ידי צנטריפוגה (4 XG, 10 דקות) ב 4 ° C.
  10. למזוג את המדיה, מדגם יומן, ואת הדבק לאחסן חנות ב -80 מעלות צלזיוס. המדגם יציב במשך שנים.

2. טיהור של S100A12 באמצעות כרומטוגרפיה בלחץ נמוך

  1. תאים Resuspend ב 30 מ"ל של 20 מ"מ טריס, pH 8.0.
  2. Sonicate ההשעיה על קרח לתאי lyse. השתמש ~ 20 W פלט, 5 על 5 ו 5 את מחזור 5 דקות.
  3. מעבירים את הפתרון צינורות צנטריפוגה במהירות גבוהה. להבהיר את lysate התא על ידי צנטריפוגה, 20,000 xg במשך 30 דקות ב 4 ° C.
  4. למזוג את supernatant ולהעביר כוס נקי 100 מ"ל פוליפרופילן. מגניב את הפתרון על ידי הנחת כוס על הקרח. מוסיפים מערבביםR ולאט לאט להוסיף 11.20 גרם של אמוניום סולפט. אפשר פתרון לערבב על קרח במשך 1 שעות נוספות. זה תיצור פתרון 60% של אמוניום גופרתי ו להאיץ את רוב E. חלבונים אנדוגניים. S100A12 יישאר מסיס.
  5. צנטריפוגה הפתרון ב 4 ° C, 20,000 xg במשך 20 דקות כדי גלולה החלבון זירז.
  6. למזוג את supernatant ולהעביר צינורות דיאליזה (MWCO 3,500 kDa). Dialyze נגד 1 L של 20 מ"מ טריס, pH 8.0 ב 4 ° C. לשנות את המאגר דיאליזה פעמיים. אפשר 4 שעות בין השינויים.
  7. אניון חילופי כרומטוגרפיה
    1. בצע כרומטוגרפיה על מערכת לחץ נמוך. קצב זרימה אופייני הוא 1 מ"ל / דקה.
    2. לאזן עמודה 5 מ"ל Sepharose עם 10 מ"ל של 20 מ"מ טריס, pH 8.0.
    3. טען את ~ 40 מ"ל של פתרון S100A12 באמצעות משאבת מדגם (לאסוף את הזרימה דרך).
    4. לשטוף את הטור עם 10 מ"ל של 20 מ"מ טריס, pH 8.
    5. לפתח את העמודה עם שיפוע 0-30% (BuFfer B הוא 20 מ"מ טריס, pH 8.0, 1 M NaCl) על 19 כרכים טור (קורות חיים, 95 מ"ל). איסוף 5 מ"ל שברים.
    6. קח aliquot 10 μL של כל חלק ולנתח באמצעות MES SDS PAGE עם מכתים Coomassie. הפעל ג'ל באמצעות מתח קבוע (20 V / cm) למשך 30 דקות.
    7. בריכת שברים המכילים S100A12. S100A12 פועל ב ~ 10 חלבון kDa על ג'ל denaturing.
    8. מרוכזים שברים ל 5 מ"ל באמצעות מכשיר ultrafiltration (MWCO 10 kDa). צנטריפוגה ב XG 3000 במשך 8 דקות ~. קח את החלק העליון.
  8. כרומטוגרפיה הדרת גודל
    1. לאזן את העמודה S75 עם 1 קורות חיים (120 מ"ל) של 20 מ"מ טריס pH 8, 100 mM NaCl.
    2. להזריק <5 מ"ל של שברים מרוכזים S100A12 (מתוך חילופי יונים כרומטוגרפיה).
    3. לפתח את הטור בקצב זרימה של 1 מ"ל / מ מעל 120 מ"ל. איסוף 5 מ"ל שברים.
    4. קח aliquot 10 μL של כל חלק ולנתח באמצעות SDS PAGE עם מכתים Coomassie. אימות זהות חלבון באמצעותכתם המערבי או ספקטרומטריית מסה (מחושב המסה המולקולארית של יחידת משנה monomeric 10,575.0 דה, נמדד 10575.4 דה).
  9. בריכת שברים
    1. למדוד את ספיגת החלבון 280 באמצעות ספקטרופוטומטר. השתמש במאגר ה- SEC כחסר. מקדם הכחדה מחושב עבור S100A12 homodimer הוא 5960 M -1 ס"מ -1 .
      הערה: תשואות אופייניות הם 35-45 מ"ג של S100A12 לכל 50 מ"ל של התרבות.
    2. Aliquot S100A12 לתוך צינורות microcentrifuge 1.5 מ"ל (1 מ"ג / צינור), הקפאה פלאש בחנקן נוזלי לאחסן ב -80 מעלות צלזיוס.

3. פעילות אנטי מיקרוביאלית Assays

  1. פס H. pylori זן G27 על לוחות אגר טריפטי אגר בתוספת 5% כבשים דם (צלחות אגר דם). לגדול 2-3 ימים ב 37 מעלות צלזיוס באוויר בחדר בתוספת 5% פחמן דו חמצני.
  2. לחסן H. pylori לתוך מרק ברוסלה בתוספת 1x כולסטרול. תרבות מעללילה רועד (250 סל"ד) ב 37 מעלות צלזיוס באוויר בחדר בתוספת 5% פחמן דו חמצני.
  3. לדלל H. pylori 1:10 לתוך 50% מרק ברוסלה, 50% חיץ calprotectin בתוספת 1x כולסטרול ותרבות בינונית או בתוספת של 100 מיקרומטר אבץ כלוריד פלוס 0, 100 או 1000 מיקרוגרם / מ"ל ​​של S100A12 מטוהרים. תרבות לילה רועד (250 סל"ד) ב 37 מעלות צלזיוס באוויר בחדר בתוספת 5% פחמן דו חמצני.
  4. למחרת, לבצע דילולים סדרתי צלחת על צלחות אגר דם. אפשר מושבות חיידקים לגדול במשך 2-3 ימים על 37 מעלות צלזיוס באוויר בחדר בתוספת 5% פחמן דו חמצני. למנות את המושבה להרכיב יחידות לחשב את הגידול החיידקי בנוכחות או היעדר של S100A12 ו / או אקסוגני אקס.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

S100A12 ביטוי וטיהור

טיהור שלושה שלבים המיוצר ~ 40 מ"ג של רקומביננטי S100A12 מ 50 מ"ל של תרבות חיידקים. הצעד הראשון היה משקעים סולפט אמוניום של חלבונים אנדוגניים E. coli . צעד זה היה ואחריו anion חילופי כרומטוגרפיה ( איור 1 א ). החלבון הוא במעקב על ידי SDS-PAGE מוכתם עם כחול מבריק Coomassie (

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול יעיל הן ביטוי וטיהור האדם S100A12 מוצג. מערכת ביטוי קולי קולי הוא הכלי הנפוץ ביותר המשמש לייצור חלבונים רקומביננטי, במיוחד כאשר כמויות מ"ג נדרשים מחקרים ביוכימיים וביופיסיקליים. שיפור המפתח של הנוהל המתואר כאן הוא השימוש של אוטומטי אינדוקציה מדיה 26 אשר מגדילה את התשואה של חלבון מטוהרים על ידי גורם של כמעט שלושים לעומת ביטוי עם תקן Luria-Media מדיה 18 . בנוסף, אוטומטי אינדוקציה התקשורת מאוד מפשט את העבודה ביטוי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי המחלקה לענייני יוצאי צבא קריירה פרס פיתוח 1IK2BX001701, CTSA פרס UL1TR000445 מהמרכז הלאומי לקידום מדעי התרגום, הקרן הלאומית למדע פרסים 1547757 ו 1400969, ומענק NIH GM05551. התוכן שלה הם באחריותם הבלעדית של המחברים ואינם מייצגים בהכרח דעות רשמיות של המרכז הלאומי לקידום מדעי התרגום או המכונים הלאומיים לבריאות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>S100A12 ביטוי
<חזק>תאי ביטוי
BL 21 (DE3) תאים מוכשריםניו אינגלנד ביולאבסC25271
רכיבי
תמצית שמריםמוצרי מחקר בינלאומייםY20020-250.0
NaClResearch Products InternationalS23020-500.0
TryptoneResearch Products InternationalT60060-250.0
FeCl3Sigma-AldrichF2877
MgSO4Products InternationalM65240-100.0
Na2HPO4מוצרי מחקר בינלאומייםS23100-500.0
KH2PO4Products InternationalP41200-500.0
NH4ClResearch Products InternationalA20424-500.0
Na2SO4Research Products InternationalS25150-500.0
מוצרי מחקרגליצרולG22020-1.0
מחקרD-גלוקוזG32040-500.0
לקטוזסיגמא-אולדריץ'L2643
<חזק>סוכן בחירה
אמפיציליןמוצרי מחקר בינלאומייםA40040-5.0<
חזק>S100A12 טיהור
AKTA התחל מערכת כרומטוגרפיהGE29-220-94
HiTrap Q זרימה מהירהGE17-5156-01
HiPrep 16/60 S-200 HRGE17-1166-01
ספקטרופוטומטר Nanodrop liteתרמו פישר מדעיND-LITE
Tris Base ResearchProducts InternationalT60040-1000.0
H. pylori Culture
Blood agar platesLab Supply CompanyBBL221261
מרק ברוצלהסיגמא-אולדריץ'B3051
כולסטרול (250x)Thermo Fisher Scientific12531018
NaClSigma-Aldrich793566
CaCl2Sigma-AldrichC4901
β-mercaptoethanolSigma-AldrichM6250
Tris BaseSigma-AldrichT1503
אבץ כלורידסיגמא-אולדריץ229997
מדיום אינדוקציה אוטומטיתResearch Research בינלאומי מוצרי בינלאומי '

מקורות

  1. Schiopu, A., Cotoi, O. S. S100A8 and S100A9: DAMPs at the crossroads between innate immunity, traditional risk factors, and cardiovascular disease. Mediators Inflamm. 2013, 828354(2013).
  2. Chen, B., et al. S100A9 induced inflammatory responses are mediated by distinct damage associated molecular patterns (DAMP) receptors in vitro and in vivo. PLoS One. 10 (2), e0115828(2015).
  3. Chernov, A. V., et al. The calcium-binding proteins S100A8 and S100A9 initiate the early inflammatory program in injured peripheral nerves. J Biol Chem. 290 (18), 11771-11784 (2015).
  4. Fanjul, M., et al. Presence of MRP8 and MRP14 in pancreatic cell lines: differential expression and localization in CFPAC-1 cells. Am J Physiol. 268 (5 Pt 1), C1241-C1251 (1995).
  5. Vogl, T., Gharibyan, A. L., Morozova-Roche, L. A. Pro-inflammatory S100A8 and S100A9 proteins: self-assembly into multifunctional native and amyloid complexes. Int J Mol Sci. 13 (3), 2893-2917 (2012).
  6. Smith, S. P., Shaw, G. S. A change-in-hand mechanism for S100 signalling. Biochem Cell Biol. 76 (2-3), 324-333 (1998).
  7. Bresnick, A. R., Weber, D. J., Zimmer, D. B. S100 proteins in cancer. Nat Rev Cancer. 15 (2), 96-109 (2015).
  8. Leclerc, E., Heizmann, C. W. The importance of Ca2+/Zn2+ signaling S100 proteins and RAGE in translational medicine. Front Biosci (Schol Ed). 3, 1232-1262 (2011).
  9. Goyette, J., Geczy, C. L. Inflammation-associated S100 proteins: new mechanisms that regulate function. Amino Acids. 41 (4), 821-842 (2011).
  10. Kehl-Fie, T. E., Skaar, E. P. Nutritional immunity beyond iron: a role for manganese and zinc. Curr Opin Chem Biol. 14 (2), 218-224 (2010).
  11. Zackular, J. P., Chazin, W. J., Skaar, E. P. Nutritional Immunity: S100 Proteins at the Host-Pathogen Interface. J Biol Chem. 290 (31), 18991-18998 (2015).
  12. Realegeno, S., et al. S100A12 Is Part of the Antimicrobial Network against Mycobacterium leprae in Human Macrophages. PLoS Pathog. 12 (6), e1005705(2016).
  13. Perera, C., McNeil, H. P., Geczy, C. L. S100 Calgranulins in inflammatory arthritis. Immunol Cell Biol. 88 (1), 41-49 (2010).
  14. Moroz, O. V., et al. Structure of the human S100A12-copper complex: implications for host-parasite defence. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 59 (Pt 5), 859-867 (2003).
  15. Moroz, O. V., Blagova, E. V., Wilkinson, A. J., Wilson, K. S., Bronstein, I. B. The crystal structures of human S100A12 in apo form and in complex with zinc: new insights into S100A12 oligomerisation. J Mol Biol. 391 (3), 536-551 (2009).
  16. Moroz, O. V., Dodson, G. G., Wilson, K. S., Lukanidin, E., Bronstein, I. B. Multiple structural states of S100A12: A key to its functional diversity. Microsc Res Tech. 60 (6), 581-592 (2003).
  17. Cunden, L. S., Gaillard, A., Nolan, E. M. Calcium Ions Tune the Zinc-Sequestering Properties and Antimicrobial Activity of Human S100A12. Chem Sci. 7 (2), 1338-1348 (2016).
  18. Haley, K. P., et al. The Human Antimicrobial Protein Calgranulin C Participates in Control of Helicobacter pylori Growth and Regulation of Virulence. Infect Immun. 83 (7), 2944-2956 (2015).
  19. Cover, T. L., Blaser, M. J. Helicobacter pylori in health and disease. Gastroenterology. 136 (6), 1863-1873 (2009).
  20. Tham, K. T., et al. Helicobacter pylori genotypes, host factors, and gastric mucosal histopathology in peptic ulcer disease. Hum Pathol. 32 (3), 264-273 (2001).
  21. Wotherspoon, A. C., Ortiz-Hidalgo, C., Falzon, M. R., Isaacson, P. G. Helicobacter pylori-associated gastritis and primary B-cell gastric lymphoma. Lancet. 338 (8776), 1175-1176 (1991).
  22. Correa, P., Piazuelo, M. B. The gastric precancerous cascade. J Dig Dis. 13 (1), 2-9 (2012).
  23. de Martel, C., Forman, D., Plummer, M. Gastric cancer: epidemiology and risk factors. Gastroenterol Clin North Am. 42 (2), 219-240 (2013).
  24. Algood, H. M., Gallo-Romero, J., Wilson, K. T., Peek, R. M., Cover, T. L. Host response to Helicobacter pylori infection before initiation of the adaptive immune response. FEMS Immunol Med Microbiol. 51 (3), 577-586 (2007).
  25. Gaddy, J. A., et al. The host protein calprotectin modulates the Helicobacter pylori cag type IV secretion system via zinc sequestration. PLoS Pathog. 10 (10), e1004450(2014).
  26. Studier, F. W. Stable expression clones and auto-induction for protein production in E. coli. Methods Mol Biol. 1091, 17-32 (2014).
  27. Gilston, B. A., Skaar, E. P., Chazin, W. J. Binding of transition metals to S100 proteins. Sci China Life Sci. 59 (8), 792-801 (2016).
  28. Corbin, B. D., et al. Metal chelation and inhibition of bacterial growth in tissue abscesses. Science. 319 (5865), 962-965 (2008).
  29. Kehl-Fie, T. E., et al. Nutrient metal sequestration by calprotectin inhibits bacterial superoxide defense, enhancing neutrophil killing of Staphylococcus aureus. Cell Host Microbe. 10 (2), 158-164 (2011).
  30. Liu, J. Z., et al. Zinc sequestration by the neutrophil protein calprotectin enhances Salmonella growth in the inflamed gut. Cell Host Microbe. 11 (3), 227-239 (2012).
  31. Damo, S. M., et al. Molecular basis for manganese sequestration by calprotectin and roles in the innate immune response to invading bacterial pathogens. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (10), 3841-3846 (2013).
  32. Nakashige, T. G., Zhang, B., Krebs, C., Nolan, E. M. Human calprotectin is an iron-sequestering host-defense protein. Nat Chem Biol. 11 (10), 765-771 (2015).
  33. Gaddy, J. A., et al. Helicobacter pylori Resists the Antimicrobial Activity of Calprotectin via Lipid A Modification and Associated Biofilm Formation. MBio. 6 (6), e01349-e01315 (2015).
  34. Testerman, T. L., Conn, P. B., Mobley, H. L., McGee, D. J. Nutritional requirements and antibiotic resistance patterns of Helicobacter species in chemically defined media. J Clin Microbiol. 44 (5), 1650-1658 (2006).
  35. Leach, S. T., Mitchell, H. M., Geczy, C. L., Sherman, P. M., Day, A. S. S100 calgranulin proteins S100A8, S100A9 and S100A12 are expressed in the inflamed gastric mucosa of Helicobacter pylori-infected children. Can J Gastroenterol. 22 (5), 461-464 (2008).
  36. Wilkie-Grantham, R. P., et al. Myeloperoxidase-dependent lipid peroxidation promotes the oxidative modification of cytosolic proteins in phagocytic neutrophils. J Biol Chem. 290 (15), 9896-9905 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

S100A12SDS PAGEH pylori
הביטוי, טיהור, פעילות אנטי מיקרוביאלית של S100A12
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.