הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מיצוי וטיהור של פוליפנולים מאבקת ברי מיובשים בהקפאה לטיפול בתאי שריר חלקים וסקולריים

18.9K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55605

⸱

5 ביולי 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Dietetics and Nutrition, University of Arkansas for Medical Sciences, 2Department of Nutrition, Food and Exercise Sciences, Florida State University, 3Center for Advancing Exercise and Nutrition Research on Aging (CAENRA), Florida State University

במאמר זה

סיכום

עבודה זו מפרטת שיטה שלב אחר שלב להכנת תמציות פוליפנול עשיר מאבקת יער מיובש בהקפאה. בנוסף, הוא מספק תיאור יסודי של איך להשתמש אלה poliphenol עשיר תמציות בתרבית תאים בנוכחות של הפפטיד הורמון אנגיוטנסין II (Ang II) באמצעות כלי דם וסקולרים חלקות (VSMCs).

תקציר

מחקרים אפידמיולוגיים מצביעים על עלייה בצריכת פלבנואידים עם ירידה בתמותה כתוצאה ממחלות לב וכלי דם (CVD) בארה"ב (ארה"ב) ובאירופה. פירות יער נצרכים באופן נרחב בארה"ב ויש להם תוכן פוליפנולי גבוה. פוליפנולים הראו אינטראקציה עם מטרות מולקולריות רבות כדי להפעיל פונקציות ביולוגיות חיוביות רבות, כולל נוגדי חמצון, אנטי דלקתיות, ואפקטים cardioprotective. פוליפנולים המבודדים מאוכמניות (BL), פטל (RB) ופטל שחור (BRB) מפחיתים את הלחץ החמצוני ואת הזיהום הסלולרי בתגובה לאנגיוטנסין II (Ang II). עבודה זו מספקת תיאור מפורט של הפרוטוקול המשמש להכנת תמציות פוליפנול מ גרגרים יבשים להקפיא. תמציות פוליפנול מ אבקת ברי יבשים להקפיא בוצעו באמצעות אתנול מימית 80% ושיטת מיצוי קולי. התמצית הגולמית היתה מטוהרת ומנותקת באמצעות כלורופורם ואתיל אצטט,בהתאמה. ההשפעות של תמציות גס ו מטוהרים נבדקו על כלי הדם חלקות תאים (VSMCs) בתרבות.

מבוא

פוליפנולים הם תרכובות המכילות לפחות טבעת פנולית אחת במבנה שלהם נמצאים בשפע בממלכת הצמח 1 . בני אדם כבר לצרוך צמחים אלפי שנים למטרות רפואיות מבלי להיות מודע לקיומם של תרכובות כאלה 2 . פירות וירקות רבים יש כמה תרכובות פוליפנוליות משותפות, אם כי עם כמויות שונות, כולל פלבנואידים, stilbenes, וחומצות פנוליות 3 . למרות polyphenols קשורות לעיתים קרובות עם פירות וירקות צבעוניים, זה לא נכון לחלוטין. לדוגמה, zeaxanthin ו xanthine נמצאים בירקות שאינם צבעוניים מאוד, כגון בצל ושום, אשר ממשפחת scallions והם קשורים עם יתרונות בריאותיים רבים 4 . מלבד היותו קשור למספר יתרונות בריאותיים 5 , polyphenols גם לשרת צמחים על ידי הגנה עליהם מפני חרקיםקרינה אולטרה סגולה. פוליפנולים נמצאים בדרך כלל בתזונה האנושית ונחשבים לחומרים נוגדי חמצון רבי עוצמה, שכן הם יכולים לסקור את מימן החמצן (ROS) 6 , 7 , 8 . יש להם גם אנטי דלקתיות 9 , מיקרוביאלית 10 , נגד יתר לחץ דם 11 , ו אנטי מסרטנים 12 , 13 נכסים.

מחקרים אפידמיולוגיים מראים קשר הפוך בין צריכת הפלבנואידים לבין מחלות לב וכלי דם (CVD) , 16 , 17 ותמותה 14 , 15 . פירות יער הם נצרך נרחב בארה"ב יש כמויות גבוהות של פוליפנולים, כולל פלבנואידים. לדוגמה, צריכת מיץ (BL) מיץ (300) מ"ל / ד) במשך שמונה שבועות ירדה באופן משמעותי לחץ דם סיסטולי בחולים דיסליפידים 18 . Jeong et al. 19 דיווחו כי גברים ונשים לפני יתר לחץ דם, שצרכו 2.5 גרם של תמצית פטל שחור (BRB) ביום, היו בעלי לחץ דם נמוך יותר 24 שעות ולילה בהשוואה לאלו שצרכו פלסבו. פטל (RB) הוריד את לחץ הדם תוך הגברת הביטוי של superoxide dissutase (SOD) בעכברי יתר לחץ דם באופן ספונטני 20 . זה הוכח לאחרונה כי BL, RB, ו BRB להפחית את רמות ROS ו ההזדקנות המושרה על ידי אנגיוטנסין II (אנג II) ב וסקולרים חלקות תאי שריר (VSMCs) 21 . בנוסף, חלק האנתוציאנינים מתמצית BL הפחית את הביטוי של סינתזה חנקתית חנקתית (iNOS) ועכב את פעילותו של גורם גרעיני kappa B (NF-κB) ו- Kinase של תאית (ERK) תאית (ERK) ב- Lipopolysaccharide (LPS) J774 תאיםהתחת = "xref"> 22. תמציות BRB הפחיתו את ההפעלה NF-κB ו cyclooxygenase 2 (COX-2) ביטוי במבחנה 23 , שיפור פרופיל השומנים, ומניעת היווצרות טרשת עורקים בעכברים הזנת דיאטה דלת שומן 24 . אנתוציאנינים, אשר נחשבים flavonoids שופע ביותר של פירות יער, לווסת את התגובה דלקתיים LPS- מגורה RAW 264.7 מקרופאגים על ידי הפחתת הגידול פקטור אלפא (TNF-α) הייצור 25 ולהפחית את התפשטות והגירה של VSMCs 26 .

מאז יש כבר עניין הולך וגובר בהבנת התפקיד של polyphenols בבריאות האדם ואת המחלה, חשוב כדי לייעל את שיטת החילוץ. ממיסים ממס הוא בשימוש נרחב למטרה זו, שכן הוא חסכוני לשחזור בקלות. במחקר זה, מיצוי ממס שימש עם אתנול, יחד עם ultioasonic בסיוע extractioN, שהותאמה מקים ולי 27 . הטיהור והתפלגות התמציות הגולמיות (CE) תוך שימוש בכלורופורם ובאתיל אצטט בוצעו כדי להשיג את החלק המופק מטחון (PE) שהותאם מקוויירס ואח ' . כמו כן, הושוו היעילות של תמציות פוליפנול גולמיות לעומת מטוהרים מ- BL בהפחתת הזירחון הבסיסי של ERK1 / 2, ודוגמאות מייצגות של ההשפעה המעכבת של תמצית פוליפנול BL מטוהרת על הפחתת אותות המושרה על ידי Ang II ב- VSMCs סופקו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הכנה של ריאגנטים

  1. הכן אתנול 80% (100 מ"ל) על ידי ערבוב 80 מ"ל של אתנול מוחלט (ביולוגיה מולקולרית כיתה) ו 20 מ"ל של תא תרבות כיתה מים סטריליים.
  2. כדי להכין תמצית פוליפנול (10 מ"ג / מ"ל), לשקול 10 מ"ג של CE או PE. הוסף 1 מ"ל של רגיל Dulbecco השתנה בינוני הנשר (DMEM) תחת מכסה המנוע בתרבות התא. וורטקס הפתרון. Aliquot ב 200 חלקים μL ולאחסן ב -20 מעלות צלזיוס.
  3. הכן חיץ תמוגה.
    1. הוסף 5 מ"ל של פתרון M 1 HEPES המניה (pH 7.4, 50 מ"מ הסופי), 1 מ"ל של 5 מ 'פתרון NaCl המניה (50 מ"מ הסופי), 1 מ"ל של פתרון 0.5 M EDTA המניות (5 מ"מ הסופי), 2 מ"ל של 0.5 M NaF פתרון המניה (10 מ"מ הסופי), 286 μL של 700 מ"מ Na 3 VO 4 פתרון המניה (2 מ"מ הסופי), 5 מ"ל של 200 מ"מ Na 4 P 2 O פתרון 7 המניה (10 מ"מ הסופי), ו 5 מ"ל של 20% Triton-X-100 פתרון המניות מוכן במים (1% הסופי). הוסף מים כדי להגיע נפח של 100 מ"ל. שמור על 4 מעלות צלזיוס.
    2. הוסף 10 μL / מ"ל ​​של קוקטייל מעכב פרוטאז. הוסף טרי כאשר התאים מוכנים תמוגה.
  4. הכנת למאגר מדגם Laemmli (4x).
    1. הוסף 31.25 מ"ל של פתרון 2 מ 'טריס המניה (pH 6.8), 100 מ"ל של גליצרול, 50 מ"ל של 20% נתרן Dodecyl Sulfate (SDS) פתרון מוכן במים, 50 מ"ל של β-mercaptoethanol. מוסיפים מים עד 250 מ"ל. שמור על 4 מעלות צלזיוס.
  5. כדי להכין למאגר טריס שנאגרו מלוחים (TBS), לשקול 3 גרם של Tris (25 מ"מ הסופי), 0.18 גרם של KCl (2.5 מ"מ הסופי), ו 8.76 גרם של NaCl (150 מ"מ הסופי). להתאים את ה- pH 7.4 ולהוסיף מים עד 1 L. שמור על RT.
  6. כדי להכין TBS-T, להוסיף 997.5 מ"ל של TBS ו 2.5 מ"ל של פתרון 20% Triton-X-100 מוכן במים. שמור על RT.

2. הכנת תמציות Blackberry

  1. הכנת תמצית גרגרי אבקת ברי מיובשת בהקפאה.
    1. לשקול 10 גרם של אבקת פטל שחור מיובש להקפיא (או 5 גרם של אבקה טרייה). אם פירות קפואים משמש, לחתוך אותו אניN כדי חתיכות קטנות מאוד לפני תחילת החילוץ.
    2. מערבבים את אבקת פירות עם 100 מ"ל של 80% אתנול מימי ב 1 ליטר עגול ארלנמאייר בקבוק.
    3. Sonicate את התערובת במשך 20 דקות ב 42 קילוהרץ, 135 W באמצעות אמבטיה קולי על 25 מעלות צלזיוס, ללא מרווח זמן בין לבין. בצע את sonication עם טיהור חנקן מתמשך באור מאופק. לקבלת פירות קפואים, להגדיל את זמן הדגירה עד 4 שעות.
    4. סינון תערובת באמצעות נייר מסנן # 2 באמצעות משפך Buchner צונן עם יניקה ואקום.
      הערה: בסוף שלב זה, שאריות המדגם מופיעות על נייר הסינון; זה נקרא עוגת סינון.
    5. יש לשטוף את העוגה סינון עם 50 מ"ל של אתנול 100%. שמור את תסנין ולהוסיף את העוגה מסנן ל 1 ליטר בקבוקון תחתית המכיל 100 מ"ל של 80% אתנול מימית.
    6. חזור על תהליך החילוץ עבור שאריות (צעדים 2.1.2 - 2.1.4).
    7. שלב את שני filtrates לתוך בקבוקון בתחתית עם תוספת 50 מ"לשל 80% אתנול מימית.
      הערה: נפח הסופי צריך להיות כ 300 מ"ל.
    8. השתמש מאייד סיבובית ב 62 ° C ו 50 סל"ד להתאדה הממס. המשך תהליך זה עד אתנול אינו מתאדות יותר.
      הערה: תהליך זה אורך כ -45 דקות.
    9. מעבירים את המדגם לצינור חרוטי 50 מ"ל. התאדות אתנול ידי הזרקת גז חנקן בחלק העליון של הצינור במשך 10 דקות.
      הערה: צעד זה נדרש כדי להבטיח את ההתאיידות המלאה של אתנול. נפח המדגם בשלב זה הוא כ 20 מ"ל.
    10. להקפיא את המדגם ב -80 מעלות צלזיוס לפחות 24 שעות.
      הערה: שלב זה נחוץ כדי לאפשר תהליך יעיל יותר להקפאת הייבוש.
    11. להקפיא לייבש את המדגם ב -50 מעלות צלזיוס למשך כ 8 שעות. חנות דגימות ב -20 מעלות צלזיוס.
      הערה: המייבש להקפיא יוצר ואקום חזק ב -50 מעלות צלזיוס בתוך החדר לייבש את הדגימות אבל משמר את רוב התרכובות, כגון פוליפNols.
  2. הכנת תמציות פוליפנול מטוהרות מתמציות נפט גולמיות.
    1. לשקול את דגימות מיובשות בהקפאה.
      הערה: נפח תמצית בשלב זה הוא כ 10 מ"ל.
    2. הוסף שני כרכים (~ 20 מ"ל) של כלורופורם כדי תמצית גולמי לנער את הפתרון במשך 5 דקות בצלחת ומערבבים.
    3. יוצקים את התערובת למשפך המפריד. תנו את תמצית תמצית גס עבור 1 שעה ב RT כדי לקבל את החלק מטוהרים.
      הערה: בשלב זה, תערובת דו פאזי תיווצר.
    4. מחק את השכבה התחתונה (שלב כלורופורם) מן המשפך המפריד ולאסוף את השכבה מימית לתוך כוס נקייה.
    5. מוסיפים שני כרכים של אתיל אצטט לשבר מימי ולהשתמש בסרגל מגנטי ומערבבים לערבב את התערובת במשך 5 דקות ב RT.
    6. סינון תערובת באמצעות מסנן # 2 נייר באמצעות משפך Buchner מקורר עם יניקה ואקום.
    7. לאסוף את המדגם מסונן ולהעביר אותו בקבוקון בתחתית להיות לנואד עם המאייד סיבובית.
    8. הגדר את המאייד סיבוב כדי 62 ° C ו 50 סל"ד להתאדות אתיל אצטט למשך כ 30 דקות.
    9. להקפיא לייבש את המדגם ב -50 מעלות צלזיוס למשך כ 8 שעות. מעבירים את המדגם לצינור 50 מ"ל חרוטי ולאחסן אותו ב -20 מעלות צלזיוס.

3. טיפול של VSMCs עם תמציות ברי

  1. תרבות VSMCs.
    1. לבודד VSMCs מן aortas החזה של חולדות Sprague-Dawley על ידי ביצוע עיכול אנזימטי, כפי שתואר לעיל 29 . תרבות VSMCs כמתואר 29 .
    2. הכן בינוני שלם לתרבות של VSMCs באמצעות DMEM המכיל 1 גרם / גלוקוז L ו בתוספת 10% בסרום עוברי בסרום (FBS), 100 פניקסילין U / מ"ל, סטרפטומיצין 100 מ"ג / מ"ל, ו 2 מ"מ L- גלוטמין. אחסן את המדיום המלא ב 4 ° C.
  2. דגירה של VSMCs עם תמציות פוליפנול.
    1. כדי לפצל את VSMCs, להשליך את cultuבינוני מחדש לשטוף את התאים פעמיים עם מלוחים פוספט שנאגרו (PBS). הוסף 4 מ"ל של PBS ו 2 מ"ל של טריפסין EDTA 0.25%. דגירה התאים 5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס CO 2 באינקובטור.
      1. איסוף התאים, לערבב אותם עם 2 מ"ל של המדיום המלא בצינור צנטריפוגות 15 מ"ל, צנטריפוגה ב 1,100 × גרם במשך 5 דקות. מחק supernatant ו resuspend גלולה התא עם 1 מ"ל של PBS. ספירת התאים באמצעות hemocytometer.
      2. זרעים 50,000 VSMCs לכל היטב 6-גם תרבות צלחות לגדל אותם בינוני מלא המכיל 10% FBS עד שהם מגיעים 90% confluency (כ 3 ד). לשמור על VSMCs ב 37 ° C בחממה 5% CO 2 humidified.
    2. הכן את המדיום לטיפול באמצעות מדיום DMEM המכיל 1 גרם / גלוקוז L, 100 U / מ"ל ​​פניצילין, סטרפטומיצין 100 מ"ג / מ"ל, 2 מ"מ L- גלוטמין, ו 0.5% FBS. אחסן את המדיום הטיפול ב 4 ° C.
      הערה: תמציות פוליפנול ו- Ang II מתווספות ישירות לתאים המשתמשים ביDium.
    3. הכן פתרון מלאי של 10 מ"ג / מ"ל ​​תמצית גולמי (CE) או טיהור מטוהרים (PE) של פוליפנולים על ידי המסת 10 מ"ג של תמצית ב 1 מ"ל של מדיום רגיל DMEM. שמור את המניות 200 aliquots μL ב -20 מעלות צלזיוס.
    4. דגירה VSMCs עם 2 מ"ל של המדיום טיפול המכיל 0.5% FBS ולהוסיף או CE או תמציות PE להשיג ריכוז של 50 - 500 מיקרוגרם / מ"ל. שנה את המדיום כל 24 שעות על ידי הוספת תמציות פוליפנול טרי. לטפל בתאים במשך 3 ד.
    5. לטיפול עם Ang II או הורמונים אחרים וגורמי גדילה, להרעיב את התאים לפחות 24 שעות על ידי דוגרים את התאים עם המדיום טיפול המכיל 0.5% FBS לפני תוספת של Ang II (100 ננומטר).
      הערה: דגירה עם ובלי CE ו PE ב בינוני 0.5% FBS טיפול לפני תוספת של Ang II מומלץ.
      1. לאחר 24 שעות של רעב, הוסף 100 nm Ang II. החלף את המדיום הטיפול עם לסה"נ טרי, PE, או אנג II כל 24 שעות במשך 3 ד.
  3. הכנת דגימות תאים.
    1. לשטוף את התאים שטופלו פעמיים PBS קר lyse אותם עם 200 μL של חיץ תמוגה על הקרח.
    2. איסוף lysates התא באמצעות מגרדים תא ולהעביר את lysates ל 1.5 צינורות microcentrifuge מ"ל. דגירה סך lysates התא 20 דקות על הקרח ו מערבולת כל 5 דקות.
    3. סוניקטה התאים שואבת עם שלוש התפרצויות ב 125 וואט לכל 10 שניות, עם הפסקה של 2 בין לבין. שמור את דגימות על הקרח לאורך sonication.
    4. למדוד את ריכוז החלבון באמצעות מגיב assay חלבון ב 595 ננומטר.
    5. חנות דגימות ב -20 מעלות צלזיוס לניתוח על ידי כתם המערבי.
  4. כתם המערבי.
    1. מערבבים כמויות שוות של חלבון (כ 50 מיקרוגרם) מ שליטה שאינם מטופלים polyphenol מטופלים או Ang II שטופלו דגימות עם חיץ תמוגה להשיג נפח כולל מקסימלי של 50 μL. הוסף 16 μL של חיץ מדגם 4x Laemmli. מחממים את הדגימות 5 דקות ב 75 ° C.
    2. הפרד את הדוגמהEs ב 10% SDS-PAGE ג'לים ולהעביר אותם קרום PDVF ב 10 V במשך 75 דקות במעבר חצי יבש מערכת ניתוח כתם המערבי עם נוגדנים ספציפיים.
    3. לחסום את הממברנה עם חלב 2% ב TBS 0.05% חיץ Triton-X100 (TBS-T) במשך 20 דקות.
    4. הסר את החלב על ידי שטיפת הממברנה לפחות שלוש פעמים עם TBS (5 דקות כל אחד) ו דגירה עם נוגדנים ראשוניים עבור שעה 1 ב RT או O / N ב 4 ° C.
    5. לשטוף את הממברנה שלוש פעמים, 10 דקות כל אחד, עם TBS-T ו דגירה עם נוגדן משני HRP קשורה במשך 45 דקות.
    6. לשטוף את הממברנה שלוש פעמים, 10 דקות כל אחד, עם TBS-T ולפתח על ידי chemiluminescence משופר (ECL).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הוכח בעבר שתמציות פוליפנול המבודדות מ- BL, RB ו- BRB הפחיתו את ההזדקנות של VSMCs בתגובה ל- Ang II 21 . זה הוכח כי אלה מטוהרים פוליפנול שואבת לווסת את אנג II איתות על ידי הפחתת זרחון של Akt, P38 מיטוגן המופעל חלבון קינאז (MAPK), ו ERK1 / 2. BL מונע הזיהום על ידי הפחתת הביטוי של NADPH oxidase (NOx) 1, אנזים המייצר אניס סופרוקסיד והוא upregulated חזק על ידי אנג II. לעומת זאת, RB ו- BRB מונעים הזיהום על ידי מנגנון שאינו תלוי בנו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פוליפנולים מבודדים מהגרגרים מכילים קומפוזיציות שונות. פרוטוקול החילוץ המבוסס על אתנול המתואר כאן מאפשר זיהוי של רמות שונות של חומצות פנוליות ופלבונואידים המצויים בתמציות פוליפנול גולמיות ומטוהרות של BL ( טבלה 1 ). CE הועשר בחומצה גאלית, חומצה פרולית, חומצה 4-O-caffeoylquinic, וחומצה 5-O-caffeoylquinic. תהליך הטיהור לא שינה משמעותית את רמות החומצה הגאלית וחומצה p-coumaric. עם זאת, היא הגדילה את רמות של חומצה O- caffeoylquinic מ 170.5 - 235.3 ppm ו querceti...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לגלות.

תודות

עבודה זו מומנה על ידי איגוד הלב האמריקני (14GRNT20180028) ואת מדינת פלורידה מדינת המועצה על מחקר ויצירתיות (COFRS).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אנגיוטנסין IIסיגמא-אולדריץ', בע"מA9525-10MGטיפול ב-VSMCs
&-actinSigma-Aldrich, Inc.A2228נוגדן ראשוני (1:5000)
פרי פטל שחורMercer Foodsאבקת פטל שחור מיובש בהקפאה
קטלאז Calbiochem219010נוגדן ראשוני (1:1000)
ChloroformBiotech Grd, Inc.97064-678הכנת תמציות פוליפנול מטוהרות
מדיום הנשר המותאם (DMEM)Mediatech, Inc.10-014-CVתרבית של VSMCs
אתנול (דרגת ביולוגיה מולקולרית מוחלטת)סיגמא-אולדריץ', בע"מ.E7023-500MLהכנת תמציות פוליפנולים 
אתילאצטטסיגמא-אולדריץ', בע"מ439169הכנת תמציות פוליפנול מטוהרות
ERK1/2Cell Signaling Technology, Inc.9102Sנוגדן ראשוני (1:500)
EDTA, 500 מ"מ, pH 8.0Teknova, Inc.E0306מאגר ליזה
מייבש הקפאהLabconcoVirTis Benchtop Kהכנת תמציות פוליפנולים
סרום בקר עוברי (FBS)Seradigm1400-500תרבית תאים
HEPESSigma-Aldrich, Inc.H3375מאגר ליזה 
NaClEMD Millipore, Inc.7760מאגר ליזה
NaFJ.T.Baker, Inc.3688-01 מאגר ליזה
Na3VO4Sigma-Aldrich, Inc.450243מאגר ליזיס
Na4P2O7 , decahydrateSigma-Aldrich, Inc.S-9515מאגר ליזה
פוספו ERK1/2 טכנולוגיית איתות תאים, בע"מ9101Sנוגדן ראשוני (1:1000)
קוקטייל מעכב פרוטאזSigma-Aldrich, Inc.P8340-5 מ"למאגר ליזה
בדיקת חלבון מגיב צבעBio-Rad Laboratories, Inc.500-0006מדידת ריכוז חלבון
ממברנת העברת PVDFThermo Scientific, Inc.88518כתמים מערביים
מאייד סיבוביBuchi LabortechnikRotavapor
R3000		הכנת תמציות פוליפנולים
מים סטרילייםMediatech, Inc.25-055-CVהכנת תמציות פוליפנולים
SonicatorQSonica, LLCQ125הכנת תמציות תאים
SOD2Enzo Life Sciences, Inc.ADI-SOD-110-Fנוגדן ראשוני (1:1000)
Triton-X-100Sigma-Aldrich, Inc.X100כתמים מערביים
Whatman #2 נייר סינוןGE Healthcare, Inc.28317-241הכנת תמציות פוליפנולים

מקורות

  1. Morton, L. W., Abu-Amsha Caccetta, R., Puddey, I. B., Croft, K. D. Chemistry and biological effects of dietary phenolic compounds: relevance to cardiovascular disease. Clin Exp Pharmacol Physiol. 27 (3), 152-159 (2000).
  2. Sekirov, I., Russell, S. L., Antunes, L. C., Finlay, B. B. Gut microbiota in health and disease. Physiol Rev. 90 (3), 859-904 (2010).
  3. Manach, C., Scalbert, A., Morand, C., Remesy, C., Jimenez, L. Polyphenols: food sources and bioavailability. Am J Clin Nutr. 79 (5), 727-747 (2004).
  4. Griffiths, G., Trueman, L., Crowther, T., Thomas, B., Smith, B. Onions--a global benefit to health. Phytother Res. 16 (7), 603-615 (2002).
  5. Mazzoni, L., et al. The genetic aspects of berries: from field to health. J Sci Food Agric. 96 (2), 365-371 (2016).
  6. Wang, S. Y., Jiao, H. Scavenging capacity of berry crops on superoxide radicals, hydrogen peroxide, hydroxyl radicals, and singlet oxygen. J Agric Food Chem. 48 (11), 5677-5684 (2000).
  7. Choi, M. H., Shim, S. M., Kim, G. H. Protective effect of black raspberry seed containing anthocyanins against oxidative damage to DNA, protein, and lipid. J Food Sci Technol. 53 (2), 1214-1221 (2016).
  8. Forbes-Hernandez, T. Y., et al. The Healthy Effects of Strawberry Polyphenols: Which Strategy behind Antioxidant Capacity? Crit Rev Food Sci Nutr. 56, Suppl 1. S46-S59 (2016).
  9. Figueira, M. E., et al. Protective effects of a blueberry extract in acute inflammation and collagen-induced arthritis in the rat. Biomed Pharmacother. 83, 1191-1202 (2016).
  10. Daglia, M. Polyphenols as antimicrobial agents. Curr Opin Biotechnol. 23 (2), 174-181 (2012).
  11. Hügel, H. M., Jackson, N., May, B., Zhang, A. L., Xue, C. C. Polyphenol protection and treatment of hypertension. Phytomedicine. 23 (2), 220-231 (2016).
  12. Niedzwiecki, A., Roomi, M. W., Kalinovsky, T., Rath, M. Anticancer Efficacy of Polyphenols and Their Combinations. Nutrients. 8 (9), E552(2016).
  13. Kresty, L. A., Mallery, S. R., Stoner, G. D. Black raspberries in cancer clinical trials: Past, present and future. J Berry Res. 6 (2), 251-261 (2016).
  14. Hertog, M. G., et al. Flavonoid intake and long-term risk of coronary heart disease and cancer in the seven countries study. Arch Intern Med. 155 (4), 381-386 (1995).
  15. Peterson, J. J., Dwyer, J. T., Jacques, P. F., McCullough, M. L. Associations between flavonoids and cardiovascular disease incidence or mortality in European and US populations. Nutr Rev. 70 (9), 491-508 (2012).
  16. Cassidy, A., et al. High anthocyanin intake is associated with a reduced risk of myocardial infarction in young and middle-aged women. Circulation. 127 (2), 188-196 (2013).
  17. Jacques, P. F., Cassidy, A., Rogers, G., Peterson, J. J., Dwyer, J. T. Dietary flavonoid intakes and CVD incidence in the Framingham Offspring Cohort. Br J Nutr. 114 (9), 1496-1503 (2015).
  18. Aghababaee, S. K., et al. Effects of blackberry (Morus nigra L.) consumption on serum concentration of lipoproteins, apo A-I, apo B, and high-sensitivity-C-reactive protein and blood pressure in dyslipidemic patients. J Res Med Sci. 20 (7), 684-691 (2015).
  19. Jeong, H. S., et al. Effects of Rubus occidentalis extract on blood pressure in patients with prehypertension: Randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial. Nutrition. 32 (4), 461-467 (2016).
  20. Jia, H., et al. The antihypertensive effect of ethyl acetate extract from red raspberry fruit in hypertensive rats. Pharmacogn Mag. 7 (25), 19-24 (2011).
  21. Feresin, R. G., et al. Blackberry, raspberry and black raspberry polyphenol extracts attenuate angiotensin II-induced senescence in vascular smooth muscle cells. Food Funct. 7 (10), 4175-4187 (2016).
  22. Pergola, C., Rossi, A., Dugo, P., Cuzzocrea, S., Sautebin, L. Inhibition of nitric oxide biosynthesis by anthocyanin fraction of blackberry extract. Nitric Oxide. 15 (1), 30-39 (2006).
  23. Lu, H., Li, J., Zhang, D., Stoner, G. D., Huang, C. Molecular mechanisms involved in chemoprevention of black raspberry extracts: from transcription factors to their target genes. Nutr Cancer. 54 (1), 69-78 (2006).
  24. Kim, S., et al. Aqueous extract of unripe Rubus coreanus fruit attenuates atherosclerosis by improving blood lipid profile and inhibiting NF-κB activation via phase II gene expression. J Ethnopharmacol. 146 (2), 515-524 (2013).
  25. Wang, J., Mazza, G. Effects of anthocyanins and other phenolic compounds on the production of tumor necrosis factor alpha in LPS/IFN-gamma-activated RAW 264.7 macrophages. J Agric Food Chem. 50 (15), 4183-4189 (2002).
  26. Pascual-Teresa, S., Moreno, D. A., Garcia-Viguera, C. Flavanols and anthocyanins in cardiovascular health: a review of current evidence. Int J Mol Sci. 11 (4), 1679-1703 (2010).
  27. Kim, D. O., Lee, C. Y. Extraction and Isolation of Polyphenolics. Curr Protoc Food Analyt Chem. 1, John Wiley & Sons. New York. 2.1-2.12 (2002).
  28. Queires, L. C., et al. Polyphenols purified from the Brazilian aroeira plant (Schinus terebinthifolius, Raddi) induce apoptotic and autophagic cell death of DU145 cells. Anticancer Res. 26 (1A), 379-387 (2006).
  29. Griendling, K. K., Taubman, M. B., Akers, M., Mendlowitz, M., Alexander, R. W. Characterization of phosphatidylinositol-specific phospholipase C from cultured vascular smooth muscle cells. J Biol Chem. 266 (23), 15498-15504 (1991).
  30. Vuong, T., et al. Role of a polyphenol-enriched preparation on chemoprevention of mammary carcinoma through cancer stem cells and inflammatory pathways modulation. J Transl Med. 14, (2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

Western BlotERK
מיצוי וטיהור של פוליפנולים מאבקת ברי מיובשים בהקפאה לטיפול בתאי שריר חלקים וסקולריים
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.