הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

פרוטאין tRNA Agarose ג'ל מבחני פיגור לניתוח של

9.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55638

⸱

21 ביוני 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Physical Chemical Biology, Center for Biological Research (CIB-CSIC), Spanish National Research Council (CSIC), 2Department of Immunology, Complutense University School of Medicine, 3Abvance Biotech srl

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול מוצג לייצור tRNA (UUU) וניתוח של tRNA (UUU) במורכבות עם TDAA אנזים ידי מבחני ג 'ל agarose פיגור.

תקציר

אנו מדגימים שיטות הביטוי וטיהור של tRNA (UUU) ב Escherichia coli ואת הניתוח על ידי מבחני ג'ל פיגור של הכריכה של tRNA (UUU) כדי TcdA, N 6- threonylcarbamoyladenosine (לא 6 א) דהידראטאז, אשר cyclizes threonylcarbamoyl בצד שרשרת A37 ב לולאה גזע anticodon (ASL) של tRNAs כדי מחזורי לא 6 A (Ct 6 A). תמלול של גנים סינתטיים קידוד tRNA (UUU) הוא המושרה ב coli עם 1 מ"מ isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) ואת התאים המכילים tRNA נקצרים 24 שעות שלאחר אינדוקציה. חלק RNA הוא מטוהרים באמצעות שיטת חומצה פנול החילוץ. טהור tRNA מתקבל על ידי כרומטוגרפיה סינון ג'ל כי ביעילות מפריד את מולקולות tRNA בגודל קטן מחומצות גרעין שלם שלם או מקוטעת. כדי לנתח TCDA מחייב tRNA (UUU), TcdA מעורבב עם tRNA (UUU) ומופרדים על ג'ל agarose יליד על 4 מעלות צלזיוס.TRNA חופשי (UUU) נודדת מהר יותר, בעוד TCDA-tRNA (UUU) מתחמי עוברים פיגור ניידות כי ניתן לצפות על מכתים של ג 'ל. אנו מראים כי TcdA הוא אנזים tRNA (UUU) מחייב. זה assay פיגור ג'ל ניתן להשתמש כדי ללמוד מוטציות TCDA ואת ההשפעות של תוספים וחלבונים אחרים על הכריכה.

מבוא

Assay ג'ל פיגור 1 (הידוע גם בשם assay ניטור אלקטרופורטי ניידות, EMSA) היא שיטה אלקטרופורטית שנועדה ללמוד ולאפיין אינטראקציות חומצה חלבון-חלבון. זה מאפשר ניתוח של DNA- חלבון כמו גם אינטראקציות חלבון- RNA ובמיוחד, אינטראקציות בין tRNA ו tRNA מחייב חלבונים, תוך שימוש ברכיבים מטוהרים או תערובות מורכבות של חלבונים ( למשל , lysates התא) או חומצות גרעין ( למשל , tRNA בריכות). יש לנו להחיל מבחני פיגור ג'ל לחקר האינטראקציה בין tRNA מטוהרים (UUU) ו TcdA, N 6- threonylcarbamoyladenosine (לא 6 A) dehydratase, אשר cyclizes את שרשרת הצד threonylcarbamoyl המצורפת A37 ב לולאה גזע ליקוד (ASL) של tRNAs למחזורי t 6 (ct 6 A) 2 , 3 . TcdA ידוע גם בשם CsdL 3 ,F.> 4. הגן tcdA / csdL יוצר אשכול עם csdA ו- csdE גנים 5 , אשר לקודד את desulfurase ציסטאין ואת acceptor גופרית של מערכת cystinase desulfinate cystinase (CSD) מערכת והוא נדרש כדי לשמור על פונקציית TCDA ב vivo 3 .

הרציונל מאחורי מבחני הפיגור ג'ל הוא, בעוד מולקולות חומצות גרעין חופשי נודדות במהירות לחזית של ג'ל acrylamide או agarose מכוח המטען השלילי הגדול שלהם, את הניידות האלקטרופורטית של קומפלקסים חלבונים של חומצות גרעין אותו מופחת באופן דרמטי. צמצום הניידות הוא דמיינו כמו "משמרת" של קומפלקס חומצות גרעין, אשר לפתור כמו להקות נפרדות. טעון חיוביים גדול מורכבים חומצה גרעין מורכבים להראות שינוי גדול יותר או ירידה ניידות על ג'ל.

מאז ניטרול המטען של המתחם היא תופעה אוניברסליתעבור מתחמי חומצה גרעין חלבונים, assay פיגור ג'ל ניתן ליישם מגוון רחב של קומפלקסים סוגי חומצה גרעין. השיטה היא פשוטה, זול, והוא יכול להתבצע במעבדות עם ציוד מינימלי. זה דורש רק כמויות קטנות של חלבונים ו tRNA. זהו יתרון על פני טכניקות ביופיסיקליות חלופיות, שבדרך כלל צורכות כמויות גדולות יותר של מדגם.

Assay פיגור ג'ל כבר בשימוש נרחב לחקר גורמי שעתוק. Assay שימש כדי לנתח קינטיקה מחייב, כוח, וספציפיות של גורמי שעתוק עבור רצפי DNA שונים. זה היה באמת בתחום זה כי EMSA פותחה לראשונה 6 , 7 . ג'ל מבחני פיגור עם RNA 8 , 9 , 10 , 11 ו מולקולות tRNA שימשו גם במחקר ריבוזוםוכדי לנתח, כפי שאנו עושים כאן, האנזימים שמשנים נוקליאוזידים tRNA לאחר תעתיק.

פרמטרים שונים רבים משפיעים על התוצאה של assay פיגור ג'ל כגון טמפרטורה, איכות החלבון מדגם tRNA, ואת כוחו של הכריכה. תכנון וביצוע זהיר של הניסוי הוא קריטי עבור הפרשנות של התוצאות של חומצה גרעין חופשי מינים הקשורים חלבון. כאן, השתמשנו גנים סינתטיים קידוד tRNA (UUU) משובטים לתוך וקטור ביטוי אשר יזם חסר האתר Shine-Dalgarno ריבוזום מחייב, המוביל סינתזה של כמויות גדולות של tRNA 2 . פרוטוקול מפורט זה נועד לספק מדריך ברור לביצוע ניסויי tRNA ג'ל פיגור תוך הימנעות טעויות נפוצות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

זהירות: עיין בכל הגיליונות הרלוונטיים של נתוני בטיחות החומרים (MSDS) לפני השימוש. כמה מן הכימיקלים המשמשים בפרוטוקול זה רעילים ומאכל. השתמש בשיטות המתאימות בעת ביצוע החילוץ של tRNA באמצעות פנול, כולל שימוש במכסה אדים ובציוד מגן אישי (משקפי מגן, כפפות, מעיל מעבדה, מכנסיים באורך מלא, נעלי אצבע סגורות וכו ' ). פרוטוקול זה משתמש שאינו רעיל כתם חומצה גרעין. השימוש בכתמים חלופיים עשוי לדרוש אמצעי זהירות נוספים וסילוק מיוחד של סוכן מכתים אם רעילים ו / או מסרטנים ( למשל , ethidium bromide).

1. הכנת ג'ל Agarose

  1. לשקול 2 גרם של agarose ולהוסיף אותו בקבוק זכוכית להכין 2% w / v agelose ג'ל.
  2. הוסף 100 מ"ל של 1x tris-borate-ethylenediaminetetraacetic חומצה (EDTA) (TBE) פועל חיץ בקבוק המכיל agarose. ממיסים על ידי חימום במיקרוגל. במרווחים של 30 שניות, מערבולת את התוכן כדי לערבבגם לחזור על שלב זה עד agarose הוא מומס לחלוטין. אפשר פתרון agarose להתקרר עד כ 50-60 מעלות צלזיוס.
  3. קלטת את הקצוות הפתוחים של מגש ג'ל כדי ליצור עובש, במקום מסרק מתאים כדי ליצור את הבארות ולטיל את agarose מותכת לתוכו. הימנע היווצרות בועה ולתת לו לחזק בטמפרטורת החדר.
  4. לאחר מוצק, במקום מגש ג'ל ביחידה אלקטרופורזה ולמלא אותו עם חיץ TBE עד הג 'ל מכוסה לחלוטין.

2. הכנת tRNA

  1. אקספרס tRNA (UUU) ב E. coli
    1. בבוקר, השתמש בבקבוקון של E. coli BL21 קפוא (DE3) שהפך עם וקטור הביטוי pET23d-EcUUU 2 (הנמל קידוד גנים E. coli tRNA (UUU)), כדי להקטין את מלח לוריא נמוך מלח (LB) צלחת בתוספת 100 מיקרוגרם / מ"ל ​​ampicillin. להפוך את הצלחת ומניחים אותו לתוך 37 ° C חממה עד מושבות להופיע (מאוחר אחר הצהרייםOon).
    2. לחסן אחד גדל היטב, מושבה אחת ב 5 מ"ל LB בתוספת 100 מיקרוגרם / mL ampicillin ולגדול לילה בסל"ד 220 ב 37 מעלות צלזיוס.
    3. למחרת בבוקר, גלולה התאים (6,500 XG במשך 10 דקות ב 4 ° C), להחליף בינוני עם 5 מ"ל טרי LB בתוספת 100 מיקרוגרם / mL ampicillin ו resuspend. השתמש ההשעיה לחסן 200 מ"ל LB בתוספת 100 מיקרוגרם / mL ampicillin. לגדול במשך 5 שעות ב 220 סל"ד ב 37 מעלות צלזיוס.
    4. כאשר צפיפות אופטית של התרבות ב 590 ננומטר (OD 590 ) הגיע 0.6 - 0.8, להוסיף 1 mM IPTG לתרבות כדי להפעיל את הביטוי של הגן tUNA (UUU). לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 3 שעות.
    5. קציר התאים על ידי centrifuging את התרבות ב XG 6,500 במשך 10 דקות ב 4 מעלות צלזיוס.
  2. תמוגה ומיצוי
    1. Resuspend תא גלולה במאגר 5 תמוגה מ"ל (0.3 M אצטט אצטט, 10 מ"מ EDTA). מנקודה זו ואילך, מאגרים autoclaved בשימוש ולשמור את כל דגימות המכילות tRNA ב 4 ° C כדי למנוערנ"א השפלה.
    2. הוסף נפח 1 של פנול חומצה (pH 4.3) כדי גל גלולה resuspended במכסה המנוע קטר. מערבבים במשך 1 דקות על ידי היפוך lyse התאים צנטריפוגות ב XG 10,000 (10 דקות, 4 ° C).
    3. לאסוף את השלב מימית העליון המכיל את tRNA מסיסים (UUU) (וריכוזים קטנים יותר של בריכות tRNA אחרים) באמצעות פיפטה מקפיד לא לשאוב את השלב האורגני (התחתון). מחק את השכבה התחתונה ואת גלולה, אשר מורכב השלב אורגני פסולת התא, לתוך מיכל הולם.
    4. לזרז את tRNA על ידי ערבוב יסודי של המסיסים (מימית) שלב עם נפח 2.5% 100 / V אתנול v על ידי היפוך במשך שעה 1 ב 4 ° C. צנטריפוגה התערובת ב XG 15,000 (30 דקות, 4 ° C).
    5. למזוג את supernatant בזהירות resuspend גלולה עשיר tRNA ב 4 מ"ל חיץ סינון ג'ל (20 מ"מ נתרן פוספט או אשלגן פוספט, pH 7.4, 0.1 מ"מ EDTA). הפעל 5 μL של הבריכה tRNA resuspended על 2% w / v agelose ג'ל.
      הערה:איכות טובה tRNA מופיע כלהקה אחת (גודל מולקולרי בין 50-100 bp).
  3. טיהור של tRNA (UUU)
    1. לאחר תרגול כרומטוגרפי סטנדרטי 12 , לטעון את tRNA resuspended (UUU) על עמודה סינון ג'ל המכינה ברזולוציה גבוהה (מידות: 16 x 600 מ"מ, נפח המיטה: 120 מ"ל, טווח רזולוציה: 1,000-70,000 דה) בעבר equilibrated ב חיץ סינון ג'ל (שלב נייד). הגדר את קצב הזרימה 1 מ"ל / דקות כדי elute דגימות.
      הערה: נקודת השיא של ה- tRNA (UUU) משתרעת על 75.5 מ"ל. בדרך כלל, תשואה של 0.5-1.0 מ"ג / L tRNA של התרבות ניתן להשיג.
    2. לנתח את דגימות בנפחים אלוטי נציג ידי electrophoresing 5-10 μL של כל מדגם על 2% w / v agelose ג'ל.

3. הכנת דגימה

  1. אקספרס ולטהר TcdA על פי López-Estepa et al . 2 .
    הערה: עד 250 מיקרומטרTCDA ניתן להשתמש עבור המחקר.
  2. פיפטה את הסכום המקביל של TcdA לפי טבלה 1 לתוך שכותרתו כראוי 1.5 צינורות צנטריפוגה מ"ל. הוסף 1.6 מ"מ טריס (2-carboxyethyl) פוספין (TCEP) (ריכוז סופי) ו לערבב בעדינות באמצעות פיפטה. סגור את המכסה לדגור את התערובת בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות.
  3. הוסף 10 מיקרומטר של טריפוספט אדנוזין (ATP) ו 50 מ"מ MgCl 2 (ריכוז סופי). מערבבים עם פיפטה לדגור את התערובת במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר.
  4. הוסף מטוהרים tRNA (UUU) (סעיף 2.3) לפי טבלה 1 , לערבב עם פיפטה ו דגירה בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות.
  5. הוסף פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) עד 100 נפח סופי μL. מערבבים כראוי ולהוסיף גליצרול לריכוז סופי של 10% v / v.
  6. וורטקס המדגם בקצרה לסובב את תוכן הצינור (10,000 xg, 1 דקות, 4 ° C).

4. ג'ל טוען ופיתוח אלקטרופורזה

  1. מניחים יחידת אלקטרופורזה לתוך מגש מלא קרח כתוש כדי לשמור על החדר ב 4 מעלות צלזיוס במהלך לרוץ אלקטרופורזה.
  2. בזהירות, פיפטה 5 μL של כל מדגם לתוך המקביל היטב. הוסף סמן מתאים DNA גודל.
  3. חבר את האלקטרודות לחריצים המתאימים של יחידת אספקת החשמל. הפעל את יחידת אספקת החשמל ולהגדיר את המתח ל 100 V ולהפעיל את הג 'ל במשך 90 דקות.

5. מכתים ג 'ל כדי לראות אינטראקציה חלבון tRNA

  1. הכן את הפתרון מכתים על ידי ערבוב 50 מ"ל של TBE עם 1x של כתם ה- DNA מתאים. הימנע חשיפת הפתרון מכתים לאור השמש על ידי כיסוי המכיל מכתים עם רדיד אלומיניום.
    הערה: כתמי ה- DNA מאוחסנים בדרך כלל כ -10,000 או 20,000 מניות מרוכזות.
  2. לאחר 90 דקות של אלקטרופורזה, להסיר בזהירות את הג'ל מהמגש ומניחים אותו במיכל עם פתרון מכתים. מניחים אותו על נדנדה במהירות נמוכה נדנדה בטמפרטורת החדרUre עבור 30 דקות.
  3. הסר את הג 'ל agarose מהמכל מכתים, הקש עליו בזהירות על פיסת תאית או נייר סינון כדי להסיר נוזלים עודפים, ומניחים אותו ישירות על transilluminator. להדליק את האור UV לדמיין להקות המכילות tRNA. צלם תמונה של הג'ל.
  4. חלבון מכתים (אופציונלי).
    1. מחק את הפתרון מכתים ה- DNA בבטחה (על פי נהלי הבטיחות) ולהחליף אותו עם 50 מ"ל CoLassie מבריק כחול (CBB) פתרון. מניחים את המגש על נדנדה בטמפרטורת החדר ואת הכתם לילה (> 12 שעות). מחק את הפתרון מכתים CBB ולהחליף אותו עם 50 מ"ל PBS להסיר צבע עודף. Destain עבור 1 שעות על נדנדה.
  5. לחזות חלבון המכילים מתחמי tRNA תחת transilluminator אור ולקחת תמונות של ג 'ל להשוות עם תמונה tRNA UV ג'ל.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כמויות גדולות של tRNA (UUU) ניתן להשיג על ידי להביע את הגן tRNA ב E. coli תחת שליטתו של מקדם T7 חזק inducible. TRNA לידי ביטוי (UUU) מצטבר בציטופלסמה מועשר מעל הבריכה של tRNAs בשפע טבעי. תהליך טיהור דו-שלבי הכולל שלב ללכידה / מיצוי וג'ל סינון / ליטוש צעד נוצל להשיג tRNA בכיתה EMSA. שלב הלכידה / החילוץ משתמש בפנול 4.3 pH כדי להשיג את המשקעים בו-זמנית של חלבון, פסולת התא, DNA, והפקת tRNA (ומולקולות רנ"א אחרות). בשלב זה, כמות הבריכה ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

החלבון tRNA agarose ג'ל פיגור assay המתואר כאן ניתן לשנות במספר דרכים. ראשית, אחוז agarose בג'ל ניתן לצמצם על מנת לאפשר הפרדה והדמיה של מתחמי חלבון tRNA גדול באופן משמעותי מאשר אחד ניתח כאן (120 kDa). שנית, אם חלבון המטרה הוא thermolabile, יש לנקוט אמצעי זהירות נוספים כדי להבטיח כי הטמפרטורה נשמרת מתחת לטמפרטורה המקסימלית המקובלת על ידי הזזת מנגנון אלקטרופורזה לחדר קר או באמצעות חבילות קרח בתוך החדר אלקטרופורזה מיד להפיג את החום המיוצר במהלך הריצה. חיבורים אחרים חיץ ( ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

MCV הוא חבר של CIB Intramural תוכנית "מולקולרית מכונות לחיים טובים יותר" (MACBET). המחקר המוביל לתוצאות אלו קיבל מימון מהמוסד הספרדי של סאלוד קרלוס השלישי (PI12 / 01667 ל- MCV), ה- Ministerio de Economía y Competitividad (CTQ2015-66206-C2-2-R ו- SAF2015-72961-EXP ל- MCV ), הממשלה האזורית של מדריד (S2010 / BD-2316 ל MCV), ואת הנציבות האירופית (Framework Program 7 (FP7)) פרויקט ComplexINC (חוזה מס '279039 כדי MCV). למממנים לא היה תפקיד בתכנון המחקר, איסוף הנתונים וניתוחם, ההחלטה לפרסם או הכנת כתב היד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
E. coli BL21(DE3)Novagen70235DE3 lysogen מכיל T7 פולימראז עם השראת IPTG.
pET23dNovagen69748-3pET23d מעניק עמידות לאמפיצילין; מקדם T7.
ניתן להשתמש גם במרק LB, מלח נמוך (מרק לנוקס L), מלפורד מגורעןGL1703מרק LB קונבנציונאלי, מלח גבוה.
AmpicillinSigma-Aldrich10419313
אינקובטור שייקר (תרמוסטד)NBSExcella E24 ניתן להשתמש בכל חממת שייקר עם בקרת טמפרטורה.
איזופרופיל-בטא-D-תיוגלקטופירנוזיד (IPTG), >=99%Acros OrganicsBP1755
נתרן אצטט, נטול מים, >99%
אתילנדיאמינטטראצטית (EDTA), מלח דיסודיום, >99%Acros OrganicsAC327205000מזיק בשאיפה.
צנטריפוגה (מקוררת)Eppendorf5430
צנטריפוגה (מקוררת) רוטורEppendorf5430/5430P
צנטריפוגהSorvallRC5C
צנטריפוגה רוטורSorvallSLA-3000
תמיסת פנול, רוויה במאגר ציטראט 0.1 M, pH 4.3 ± 0.2Sigma-AldrichP4682רעילות חריפה (דרך הפה, העור, שאיפה),
אתנול קורוזיבי מוחלט לניתוח, 100% v/vMerck Millipore100983
נתרן פוספט דיביסיק דיהידרט, Na2HPO4, >=99%Sigma-Aldrich71643
אשלגן דימימן פוספט, KH2PO4Merck48,730,250
HiLoad 16/60 Superdex 75 GE Healthcare28989333
AgaroseMelfordMB1200
Tris [Tris(hydroxymethyl) aminomethane HCl]MelfordT1513
Boric AcidMelfordB0503
MicrowaveHaierHDA-2070M
TCEP [Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride]Sigma-AldrichC4706קורוזיבי למתכות ולעור.
ATP [אדנוזין 5&פריים;-טריפוספט דיסודיום מלח הידרט], דרגה I, >=99%סיגמא-אולדריץ'A2383
מגנזיום כלוריד (MgCl2), נטול מים, >=98%Sigma-AldrichM8266
נתרן כלורי (NaCl), >99%פישר ביוריאגנטיםBP358
אשלגן כלורי (KCl), >99%MelfordP0515
NZYDNA סולם VINZYtechMB8901
ספק כוחבן זוגEV261
יחידת אלקטרופורזהמעבדה אמיתיתRELSMINI10
בטוח צביעת חומצות גרעיןLaboratoryRBMSAFE20,000X מלאי
UV Transilluminator (G:Box/EF)Syngene2216498
Coomassie Brilliant Blue GSigma-AldrichB0770
נדנדה (ג'ירו-רוקר)סטיוארטSSL3
מיקסר מערבולת מותג פישר13214789
חומצה אמיתי Real

מקורות

  1. Scott, V., Clark, A. R., Docherty, K. The gel retardation assay. Methods Mol Biol. 31, 339-347 (1994).
  2. López-Estepa, M., et al. The crystal structure and small-angle X-ray analysis of CsdL/TcdA reveal a new tRNA binding motif in the MoeB/E1 superfamily. Plos One. 10 (4), e0118606(2015).
  3. Miyauchi, K., Kimura, S., Suzuki, T. A cyclic form of N6-threonylcarbamoyladenosine as a widely distributed tRNA hypermodification. Nat Chem Biol. 9 (2), 105-111 (2013).
  4. Bolstad, H. M., Botelho, D. J., Wood, M. J. Proteomic analysis of protein-protein interactions within the Cysteine Sulfinate Desulfinase Fe-S cluster biogenesis system. J Proteome Res. 9 (10), 5358-5369 (2010).
  5. Loiseau, L., Ollagnier-de Choudens, S., Lascoux, D., Forest, E., Fontecave, M., Barras, F. Analysis of the heteromeric CsdA-CsdE cysteine desulfurase, assisting Fe-S cluster biogenesis in Escherichia coli. J Biol Chem. 280 (29), 26760-26769 (2005).
  6. Fried, M. G., Crothers, D. M. Equilibrium studies of the cyclic AMP receptor protein-DNA interaction. J Mol Biol. 172 (3), 241-262 (1984).
  7. Garner, M. M., Revzin, A. A gel electrophoresis method for quantifying the binding of proteins to specific DNA regions: application to components of the Escherichia coli lactose operon regulatory system. Nucleic Acids Res. 9 (13), 3047-3060 (1981).
  8. Rio, D. C. Electrophoretic mobility shift assays for RNA-protein complexes. Cold Spring Harb Protoc. 2014 (4), 435-440 (2014).
  9. Ryder, S. P., Recht, M. I., Williamson, J. R. Quantitative analysis of protein-RNA interactions by gel mobility shift. Methods Mol Biol. 488, 99-115 (2008).
  10. Yakhnin, A. V., Yakhnin, H., Babitzke, P. Gel mobility shift assays to detect protein-RNA interactions. Methods Mol Biol. 905, 201-211 (2012).
  11. Ream, J. A., Lewis, L. K., Lewis, K. A. Rapid agarose gel electrophoretic mobility shift assay for quantitating protein: RNA interactions. Anal Biochem. 511, 36-41 (2016).
  12. Hagel, L. Gel-filtration chromatography. Curr Protoc Mol Biol. , Chapter 10, Unit 10.9 (2001).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

קישור חלבון-tRNAטיהור tRNAכרומטוגרפיית סינון ג'לאנזים TcdAאלקטרופורזה של RNA על ג'להשראה באמצעות IPTGמיצוי בחומצה-פנולג'ל אגרוז נטיביאנליזה של tRNA(UUU)
פרוטאין tRNA Agarose ג'ל מבחני פיגור לניתוח של
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.