שיטה לבחינת ההשפעה של רמזים סביבתיים על התנהגות ההזדווגות ב<em&gt; תסיסנית מלנוגאסטר</em

סיכום

אנו מדגימים assay לנתח את רמזים סביבתיים וגנטיים המשפיעים על התנהגות ההזדווגות של זבוב הפירות תסיסנית melanogaster .

תקציר

הדחף המיני של האדם מושפע מגנוטיפ, מניסיון ותנאי סביבה. איך גורמים אלה אינטראקציה כדי לווסת התנהגויות מיניות נשאר מובן. ב תסיסנית melanogaster , רמזים סביבתיים, כגון זמינות מזון, משפיעים על פעילות ההזדווגות המציע מערכת דקדנית לחקור את מנגנונים modulating מינית התנהגות. ב ד melanogaster , רמזים סביבתיים הם חשו לעתים קרובות באמצעות chemosensory gustatory ומערכות חוש הריח. כאן, אנו מציגים שיטה לבחון את ההשפעה של רמזים כימיים סביבתיים על התנהגות ההזדווגות. Assay מורכב הזירה הזדווגות קטן המכיל בינוני מזון זוג מזדווגים. תדירות ההזדווגות עבור כל זוג הוא פיקוח מתמיד במשך 24 שעות. כאן אנו מציגים את תחולת assay זה כדי לבדוק תרכובות סביבתיות ממקור חיצוני באמצעות מערכת אוויר דחוס כמו גם מניפולציה של רכיבים סביבתיים ישירות בזירה ההזדווגות. USe של מערכת האוויר בלחץ שימושי במיוחד כדי לבדוק את ההשפעה של תרכובות נדיפים מאוד, תוך מניפולציה רכיבים ישירות בזירה ההזדווגות יכול להיות בעל ערך כדי לוודא נוכחות של המתחם. Assay זה יכול להיות מותאם לענות על שאלות לגבי ההשפעה של רמזים גנטיים סביבתיים על התנהגות ההזדווגות ואת פוריות, כמו גם אחרים התנהגות הרבייה זכר ונקבה.

מבוא

התנהגויות פוריות בדרך כלל יש עלויות אנרגיה גבוהות, במיוחד עבור הנקבות, אשר מייצרים gametes גדול יותר מאשר גברים חייב בזהירות בחר את התנאים להעלות את צאצאיהם המתפתחים. בגלל עלות האנרגיה, אין זה מפתיע כי רבייה קשורה לתנאים תזונתיים. זה נכון ברוב, אם לא כל, חיות כולל יונקים, התבגרות אשר יכול להתעכב על ידי תת תזונה, ואשר דחף מיני יכול להיות מושפעת לרעה על ידי מזון הגבלה ^1.

רפרודוקציה של אורגניזם מודל גנטי תסיסנית melanogaster מושפע גם בתנאים תזונתיים. גברים בבית המשפט ברמה גבוהה יותר בנוכחות מזון נדיפים ² , ....

פרוטוקול

1. תיבת הזיווג בשליטת הסביבה

1. כדי להבטיח אזור בדיקה מבוקר וקל לניקוי, הגדרת ארון מטבח נירוסטה של ​​120 ס"מ x 64 ס"מ x 85 ס"מ כפי שמוצג באיור 1A.
   1. מקדחה חור אחד בחלק האחורי של ארון ממש מתחת לתקרה ארבעה סטים של ארבעה חורים לתוך הצדדים, כל אחד עם קוטר של 2 ס"מ. מקדחה את שתי קבוצות הראשון של ארבעה חורים, על כל צד של הקופסה בגובה של 7 ס"מ מהחלק התחתון של התיבה עם 12.5 ס"מ בין חורים. מקדחה את שתי קבוצות אחרות בכל צד של הקופסה בגובה של 35 ס"מ ....

תוצאות

שימוש זה assay רציפה, התנהגות ההזדווגות, תדירות ההזדווגות בפרט, ניתן לקבוע בתנאים סביבתיים ניסיוניים. כדי לשלוט בתנאים סביבתיים, שינינו ארון מטבח נירוסטה לתוך אזור הבדיקה, עם מקור האור שלה דיפוזיה, אשר מבטיח שפע גבוה של אור כמות מינימלית של בוהק מלמעלה של זירות ההזדווגות ( איור 1 א ) . אזור הבדיקה הפנימי הוא עטוף לחלוטין על ידי נירוסטה וזכוכית, אשר מאפשר ניקוי עם ממיסים אורגניים, כגון הקסאן או אתנול. בנוסף, הממשלה מצויד חורים לשמש .......

דיון

פרוטוקול זה מתאר assay כדי לבדוק התנהגות ההזדווגות מעל 24 שעות תוך שליטה רציפה על רמזים סביבתיים כי זוג הזדווגות משוער להשתמש כדי לקבוע תדירות ההזדווגות. ניתן להגדיל את תדירות ההזדווגות בתגובה האוויר שמרים נמסר באמצעות מערכת אוויר בלחץ כאשר המדיום מכיל שמרים גם ( איור 2 ב ). בנוסף, תגובה דומה בתדירות ההזדווגות ניתן לראות עם מדיום מזון פשוט המכיל רק אגר, פפטון, ריח חומצה אצטית ישירות במדיום ( איור 3 ב )

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
<חזק>ארון
ארון מטבח נירוסטה	Horecaworld	7412.0105
נוריות לבנות	Lucky Light	ll-583wc2c-001	לבן קר, 20 mAmp ו-2 V
נוריות אדומות	Lucky Ligt	ll-583vc2c-v1-4da	אורך גל בין 625 ננומטר, 20 mAmp ו-6 V
נגד	Royal Ohm	CFR0W4J0561A50	560 אוהם, 0.25 וואט, 250 וולט ו-5% סובלנות
אפליקציית מד אור לסמארטפון	פטריק ג'ודיצ'לי		אור / לוקס מטר חינם, גרסה 1.1.1
טיימר כוח	Alecto	TS-121
סוגרי			זווית חדה 5 על 5 מ"מ,   2 x 5450 ואורך 1 x 1100 מ"מ
צלחת			1190 x 545 x 5 מ"מ
נייר סינון יריעות	מסנני LEE	220	כפור לבן
מאוורר קטן	Nanoxia שקט עמוק	4260285292828	80 מ"מ מאוורר מחשב שקט במיוחד, 1200 סל"ד
מאוורר גדול	Nanoxia שקט עמוק	4260285292910	120 מ"מ מאוורר מחשב שקט במיוחד, מצלמת מצלמת אינטרנט 650-1500 סל"ד
	Logitech	950270	B910 HD WEBCAM OEM, זווית: 78 מעלות, רזולוציה: 5 מיליון פיקסלים
תוכנת מצלמה	DeskShare		צג אבטחה pro
שם	חברה	מספר קטלוגי	>Comments
Fly rearing
bottles	Flystuff	32-130	6oz מלאי Drosophila בקבוק
Flypad	Flystuff	59-114
זבובים			Canton-S
בקבוקוני גידול זבובים	דומיניק דוצ'ר	789008	צינורות דרוזופילה צרים 25x95 מ"מ
אינקובטור	Sanyo	MIR-154
פלטה חמה מגנטית	Heidolph	505-20000-00	MR Hei-Standard
Agar	Caldic רכיבים B.V.	010001.26.0
גלוקוז	גזונד & wel	1019155	דקסטרוז / Druivensuiker
סוכרוז	ואן גילזה		סוכר מגורען
קמח תירס	זבוב	62-100
נבט חיטה	Gezond & 1017683
קמח סויה	Flystuff	62-115
מולסה	Flystuff	62-117
שמרים יבשים פעילים	Red Star
Tegosept	Flystuff	20-258	100%
פפטון (בקטו)	BD	211677
חומצה אצטית	Merck	1000631000	קרחון, 100%
פטרידיש	קטן גריינר ביו-וואן		627102 35 x 10 מ"מ עם פתחי אוורור
סרט פרפין	Bemis NA		Parafilm
Name	Company	Catalog Number	Comments
>שמרים ואוויר בלחץ
גוסלין	ביג פטיריש	BP140-01	140 x 20.6 מ"מ
מים טהורים במיוחד	MiliQ של תאגיד
	BD	212750
אגר (טהור)BD		214530
בקטו גלוקוז (0(+)-גלוקוז מונוהידרט)	Merck	18270000004
Open caps	Schott	29 240 28	GL45
מחיצת סיליקון	VWR	548-0662
אביזרי מחיצה דוקרניים	Nalgene	6149-0002
צינורות			גדולים: חיצוני 1.2 ס"מ ופנימי 0.9 ס"מ
צינורות			קטנים: חיצוני 0.8 ס"מ ופנימי 0.5 ס"מ
צינור 15 מ"ל	משאבת אקווריום פלקון
	דיוק	סרה	Sera air 110 plus, AC 220-240 V, 50/60 הרץ, 3 W ולחץ >100 mbar
פחם פעיל	Superfish	A8040400	Norit פחם פעיל
יחידת מסנן חד פעמית	Whatman	10462100
פיפטות סרולוגיות	VWR	612-1600
מזרק	BD פלסטיפק	300013
דבק חם	Pattex
מסנן מזרק	Whatman		FP 30/נקבוביות גודל 0.45 מ"מ CA-S
שם	חברה	Catalog	Comment
Analysis
Statistics תוכנה	R		lme4

מתכת זכוכית חלבית Fly regaling מסוג פרא , , , , תמצית שמרים Millipore, , , קוטר PVC קוטר PVC