חיזוי השתקת ג &#39;ין באמצעות שליטה Spatiotemporal של siRNA שחרור מ תגובה תגובה פולימרית פולימרית

Chad T. Greco; Thomas H. Epps, III; Millicent O. Sullivan

doi:10.3791/55803

מאמר שיטה

חיזוי השתקת ג 'ין באמצעות שליטה Spatiotemporal של siRNA שחרור מ תגובה תגובה פולימרית פולימרית

6.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55803

⸱

21 ביולי 2017

Chad T. Greco¹ , Thomas H. Epps, III¹^,² , Millicent O. Sullivan¹

¹Department of Chemical and Biomolecular Engineering, University of Delaware, ²Department of Materials Science and Engineering, University of Delaware

במאמר זה

סיכום

אנו מציגים שיטה חדשנית המשתמשת קופולימרים לחסום צילום תגובה עבור שליטה יעילה יותר spatiotemporal של השתקת הגן ללא תופעות לזיהוי מחוץ לגילוי. בנוסף, שינויים בביטוי גנים ניתן לחזות באמצעות מבחני שחרור siRNA פשוטים מודלים קינטיים פשוטים.

תקציר

חומרים חדשים ושיטות נדרשים כדי לשלוט טוב יותר מחייב לעומת שחרור של חומצות גרעין עבור מגוון רחב של יישומים הדורשים את הרגולציה המדויקת של פעילות הגן. במיוחד, חומרים חדשים עם תגובה לגירויים עם שליטה משופרת spatiotemporal על ביטוי גנים היה לפתוח פלטפורמות translatable של גילוי תרופות וטכנולוגיות רפואה משובי. יתר על כן, יכולת משופרת לשלוט על שחרור חומצות גרעין מחומרים תאפשר פיתוח של שיטות יעילות לחזות יעילות nanocarrier מראש , מה שמוביל לסקירה מואצת של כלי הלידה. להלן, אנו מציגים פרוטוקול לחיזוי יעילות השתקת גנים והשגת שליטה spatiotemporal על ביטוי גנים באמצעות מודולרי תגובה תגובה nanocarrier המערכת. RNA קטן המפריע (siRNA) הוא מורכב עם mPEG- b- פולי (5- (3 (אמינו) propoxy) -2-nitrobenzyl methacrylate) (mPEG- b -P (APNBMA)) פולימרים כדיRm יציב nanocarriers כי ניתן לשלוט עם אור כדי להקל על מתכוונן, on / off לשחרר siRNA. אנו מתאר שתי מבחני משלימים המעסיקים ספקטרוסקופיה מתאם פלואורסצנטי ג 'ל אלקטרופורזה עבור כימות מדויק של שחרור siRNA מ פתרונות חיקוי סביבות תאיים. מידע שנצבר מבחני אלה שולב לתוך הפרעה פשוטה RNAi (מודל RNAi) מודל קינטי לחזות את התגובות דינמי השתקה לתמונות שונות תמריצים התמונה. בתורו, אלה בתנאי הקרנה אופטימיזציה אפשרה חידוד של פרוטוקול חדש לשליטה spatiotemporally השתקת גנים. שיטה זו יכולה ליצור דפוסים סלולריים בביטוי גנים עם רזולוציה תאית לתא ולא תופעות לזיהוי היעד. יחדיו, הגישה שלנו מציעה שיטה קלה לשימוש לניבוי שינויים דינמיים בביטוי גנים ובדיוק שליטה על פעילות siRNA בחלל ובזמן. קבוצה זו של מבחני יכול להיות מותאם בקלות לבחון מגוון רחב של otשלה מגיבים מערכות הגירוי על מנת להתמודד עם אתגרים מרכזיים רלוונטי שפע של יישומים במחקר ביו רפואה ורפואה.

מבוא

קטן RNAs להפריע (siRNAs) לתווך שלאחר השתעת גן השתקה דרך מסלול RNAi קטליטי כי הוא ספציפי מאוד, חזק, ומותאם לכל גן יעד כמעט ¹ . המאפיינים המבטיחים הללו אפשרו לתרופה siRNA להתקדם בניסויים קליניים בבני אדם לטיפול במחלות רבות, כולל מלנומה גרורתית ומופיליה ² ^, ³ . עם זאת, בעיות משלוח משמעותיות נמשכות כי יש הפרעה תרגום ⁴ . בפרט, כלי אספקה צריך להישאר יציב ולהגן על siRNAs מ השפלה תאיים, אך גם לשחרר את המטען לתוך הציטופלסמה ⁵ . יתר על כן, יישומים רבים RNAi דורשים שיטות משופרות כדי להסדיר השתקת גנים בחלל וב....