כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לתאר את השימוש של neurotrophin 4 (NTF4) באופן שיטתי ישירות כדי לשפץ עכברוש ההזדקנות שרירים הגרון.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
תת עורית נוירוטרופין 4 עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות או הזרקת שרירים ישירה משפר הזדקנות עכברים שרירי הלוע.
במאמר זה
סיכום
תקציר
תפקוד לקוי של הגרון אצל קשישים הוא גורם עיקרי לחולי נכות, מהפרעות קוליות ועד לקשיי ראייה ואובדן רפלקסים מגנים על דרכי הנשימה. מעטים, אם בכלל, קיימים טיפולים כי המטרה גיל הקשורים לתפקוד שרירים בגרון. נויטרופונים מעורבים בעצב שרירים ובידול של צמתים ניירומוסקולריים (NMJs). הוא חשב כי neurotrophins לשפר את העברת neuromuscular על ידי הגדלת שחרור נוירוטרנסמיטר. הצמתים הניירומוסקולריים (NMJ) הופכים קטנים יותר ופחות בשפע בשרירי הגרון העכברים המזדקנים, עם ראיות לשימור תפקודי. בחנו את ההשפעות של NTF4 לשימוש קליני עתידי כטיפול לשיפור תפקוד ההזדקנות בשרירי הגרון האנושיים. כאן, אנו מספקים את פרוטוקול מפורט עבור יישום מערכתי הזרקת ישירה של NTF4 לחקור את היכולת של הזדקנות חולדה עכברוש הגרון לשפץ בתגובה יישום NTF4. בשיטה זו, חולדות או קיבלו NTF4 או באופן שיטתי דרך oמשאבה סמוטית או על ידי הזרקה ישירה דרך קפל ווקאלי. שרירי הלוע היו אז גזור ומשמש לבדיקת היסטולוגית של מורפולוגיה ושימור הקשורים לגיל.
מבוא
שרירי הגרון מתכווצים במהירות ועקביות, והם פגיעים לתופעות הלוואי של ההזדקנות. פעילות מתמדת זו נחשבת לתורמת לבעיות קוליות או לדיספגיה שנצפתה אצל אנשים מעל גיל 65 שנים , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . מספר מנגנונים מולקולריים ו פתופיזיולוגיים תורמים לתפקוד לקוי הקשור לגיל. מנגנונים אלה יכולים לכלול שיפוץ של רירית הגרון, ניוון שריר או אובדן, חוסר סיבים שריר התחדשות או ניוון אשר גורם קשת של קפל ווקאלי חוסר יכולת של הסגר
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
השתמש זכר Fischer 344-Brown חולדות נורבגיה בגיל 6 ו 30 חודשים של גיל עבור פרוטוקול זה. חולדות התקבלו מן המכון הלאומי של זקנה מכרסמים המושב. השתמשנו עכברושים עבור מחקר זה, כי המבנה של הגרון חולדה דומה לזו של האדם, פונקציונלית המשרתים להגנה על דרכי הנשימה ו vocalizations המין המיוחד מחקר זה בוצע בהתאם למדיניות PHS על טיפול הומאני ושימוש בחיות מעבדה, מדריך NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה, וחוק רווחת בעלי חיים (7 USC et seq); פרוטוקול השימוש בבעלי חיים אושר על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש (IACUC) של אוניברסיטת קנטקי.
1. הרדמה של חולדות
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
חולדות היו מורדמים לאחר שבועיים של עירוי משאבת אוסמוטי או 1 שבוע לאחר הזרקה ישירה של NTF4. Larynges נקצרו, הניח cryoprotectant (סוכרוז 30% ו 70% פוספט שנאגרו מלוחים) ולאחר מכן מקוטע סדרתי ברוחב 10 מיקרומטר עם cryostat. הזדקנות שרירי הגרון מושפעים על ידי הממשל של NTF4 25 . בנוסף חולדה צעירה וישנה, השווה את הצד מוזרק ולא מוזרק של השרירים thyroarytenoid. בדרך כלל אנו רואים שינוי בגודל סיבי עם הגיל, אשר משתנה בהתאם לתוואי של נ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שרירי הגרון חשופים להשפעות של הזדקנות. מחקרים קודמים הראו שינויים בשרירי הגרון המזדקנים הכוללים שינויים בגודל הסיבים, מספר הסיבים הכולל, יכולת התחדשות, גודל NMJ ושינויים בכמות, בנוסף לשינויים בתפקוד הקונסטרוקלי ובמיוסין איזופורם משמרות 4 , 11 , 27 , 30 , 31 . הזדקנות שריר הגרון ניתן לשנות על ידי יישום של נוירוטרופים. שי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמכון הלאומי לחירשות והפרעות תקשורת אחרות (R21DC010806 ל- CAM ו- JCS ו- R01DC011285 ל- CAM).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נוירוטרופין 4 | פפרו טק | 450-04 | 200 ננוגרם ב-50 μ L |
| Alzet משאבה אוסמוטית | DURECT Corporation | 2001D | |
| 30 ° אנדוסקופ | Stoltz | 61029D | |
| 50 מ"מ 30 מד 100-μ מזרק L | המילטון | 84850 ותמיסת מלח 201812 | |
| (תמיסת נתרן כלורי) | סיגמא-אולדריץ' | S8776 | |
| קטמין הידרוכלוריד | הנרי שיין | 56344 | |
| קסילזין הידרוכלוריד | הנרי שיין | 33198 | |
| 25 גרם 5/8 מחט | בקטון-דיקינסון | 305901 | |
| 1 מ"ל מזרק | בקטון-דיקינסון | ||
| משחת עיניים | הנרי שיין | 8897 | |
| קוצץ | אוסטר | 44-018 | |
| אתנול | דקון | 2716 | |
| יוד (בטאדין) | Purdue Pharma L.P. | ||
| 606404 כרית חימום | Sunbeam | 731-5 | |
| 5-0 חוט תפר ניילון | AD כירורגי | PMN-518R6 | |
| קריל המוסטט | Fine Science | Tools 13005-14 | |
| מלקחיים עדינים לקשירת תפרים | Fine Science Tools | 11063-07 | |
| מלוקסיקם | הנרי שיין | 49756 | |
| קרפרופן | Merritt Veterinary Supplies | 148700 | |
| משחה אנטיביוטית | הנרי שיין | 57110 | |
| acepromizine Aceproject | הנרי שיין | 3845 | |
| איזופלורן איזותזיה | הנרי שיין | 50033 | |
| תיבת אינדוקציה (קופסת הרדמה) | מכשיר הרווארד | 50-0116 | |
| מיכל דחוס חמצן | סקוט גרוס | UN1072 | |
| חלקים קטנים בע"מ (אמזון) | |||
| מלקחיים עם קצה גומי | מדע עדינים גומי | 11075-00 | |
| גומי נוזלי למלקחיים מעל | 42518 | של Lowe | |
| (מזרק BD חתוך לאורך) | Becton-Dickinson | 309659 | |
| מקור אור הלוגן קרנף-גרון סטרובוסקופ | Kay-Pentax | RLS 9100 B | |
| מקליט וידאו | Kay-Pentax | ||
| סוכרוז | Sigma-Aldrich | S0389-500G | |
| פוספט חוצץ מלח | Sigma-Aldrich | P4417-100TAB | |
| קריוסטט Mictotom HM525 | Thermo Scientific | HM 525 | |
| זימים 1 המטוקסילין | VWR | 10143-142 | |
| Shandon eosin-Y אלכוהולי | Thermo Fisher Scientific | 6766007 | |
| נוגדן אנטי נתרן Nav1.5 המיוצר בארנב | Sigma-Aldrich | S0819 | |
| טקסס אדום-X פלואידין | סיגמא-אולדריץ' | T7471 | |
| אלפא-בונגרוטוקסין אלקסה פלואור 488 מצומד | תרמו פישר סיינטיפיק | B-13422 | |
| הרדמה של בעלי חיים קטנים מכונה | סמיתס רפואי | CDS 9000 |
מקורות
- Trupe, E. H., et al. Correlates and consequences of eating dependency in institutionalized elderly. J. Am. Geriatrics Society. 34 (3), 192-198 (1986).
- Ward, P. H., Colton, R., McConnell, F., Malmgren, L., Kashima, H., Woodson, G. Aging of the voice and swallowing. Otolaryngol. Head Neck Surg. 100 (4), 283-286 (1989).
- Gay, E. ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
