הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

תת עורית נוירוטרופין 4 עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות או הזרקת שרירים ישירה משפר הזדקנות עכברים שרירי הלוע.

8.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/55837

⸱

13 ביוני 2017

 ,  ,  , 
1Department of Rehabilitation Sciences, University of Kentucky, 2Department of Physiology, University of Kentucky

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לתאר את השימוש של neurotrophin 4 (NTF4) באופן שיטתי ישירות כדי לשפץ עכברוש ההזדקנות שרירים הגרון.

תקציר

תפקוד לקוי של הגרון אצל קשישים הוא גורם עיקרי לחולי נכות, מהפרעות קוליות ועד לקשיי ראייה ואובדן רפלקסים מגנים על דרכי הנשימה. מעטים, אם בכלל, קיימים טיפולים כי המטרה גיל הקשורים לתפקוד שרירים בגרון. נויטרופונים מעורבים בעצב שרירים ובידול של צמתים ניירומוסקולריים (NMJs). הוא חשב כי neurotrophins לשפר את העברת neuromuscular על ידי הגדלת שחרור נוירוטרנסמיטר. הצמתים הניירומוסקולריים (NMJ) הופכים קטנים יותר ופחות בשפע בשרירי הגרון העכברים המזדקנים, עם ראיות לשימור תפקודי. בחנו את ההשפעות של NTF4 לשימוש קליני עתידי כטיפול לשיפור תפקוד ההזדקנות בשרירי הגרון האנושיים. כאן, אנו מספקים את פרוטוקול מפורט עבור יישום מערכתי הזרקת ישירה של NTF4 לחקור את היכולת של הזדקנות חולדה עכברוש הגרון לשפץ בתגובה יישום NTF4. בשיטה זו, חולדות או קיבלו NTF4 או באופן שיטתי דרך oמשאבה סמוטית או על ידי הזרקה ישירה דרך קפל ווקאלי. שרירי הלוע היו אז גזור ומשמש לבדיקת היסטולוגית של מורפולוגיה ושימור הקשורים לגיל.

מבוא

שרירי הגרון מתכווצים במהירות ועקביות, והם פגיעים לתופעות הלוואי של ההזדקנות. פעילות מתמדת זו נחשבת לתורמת לבעיות קוליות או לדיספגיה שנצפתה אצל אנשים מעל גיל 65 שנים , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . מספר מנגנונים מולקולריים ו פתופיזיולוגיים תורמים לתפקוד לקוי הקשור לגיל. מנגנונים אלה יכולים לכלול שיפוץ של רירית הגרון, ניוון שריר או אובדן, חוסר סיבים שריר התחדשות או ניוון אשר גורם קשת של קפל ווקאלי חוסר יכולת של הסגר 8 , 9 , 10 , 11 . אין טיפול רפואי מוכח בשלב זה יכול comלמנוע או לשקם שינויים אלה הקשורים לגיל אלה שרירים.

אפנון האפקטיביות של שידור neuromuscular יכול להשפיע מאוד על הביצועים neuromotor. משפחת הנוירוטרופים כוללת גורם לגדילה עצבית (NGF), גורם גדילה עצבי המופק על ידי המוח (BDNF), נוירוטרופין 3 (NTF3) ו- NTF4 12 , 13 . נוירוטרופים הוכחו כדי לווסת את יעילות הסינפטי 1 , 4 . גורם הצמיחה hepatocyte, הפיכת גורם גדילה ביתא גורם הגידול fibroblast לאחרונה נעשה שימוש בבני אדם לטיפול הצטלקות קפל 15 - 17 . NTF4 גם מסדיר את יעילות NMJ; עכברים חסרים NTF4 להראות מפורקים NMJs 11 , 18 , 19 . מחקרים אלה מובילים להשפעות מבטיחות של מטפליםT של הזדקנות שרירים הגרון ואת שימור עם גורמי גדילה.

טיפול הזרקה ישירה לרקמות של קפל ווקאלי הם לא תקדים בבני אדם. לדוגמה, זריקות מקומיות של toxin botulinum משמשים כיום כטיפול יעיל להפרעות תנועה נוירולוגיות המשפיעות על השרירים בגרון, כגון דיספוניה של עוויתות ושיתוק עצבי חוזר דו-צדדי חוזר 20 , 21 . חומצה היאלורונית הידרוגנית נוספת היא זריקה, המשמשת לטיפול מפחיד ווקאלי קיפול וחסר glutal 22 , 23 . הזריקה laryngoplasty ניתן להשתמש כדי לטפל במגוון של הפרעות בתקשורת 24 . שיטות הזרקה ישירה אלו מקיימות הבטחה לשיפור תפקוד הקול והבלעה באוכלוסיות ההזדקנות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

השתמש זכר Fischer 344-Brown חולדות נורבגיה בגיל 6 ו 30 חודשים של גיל עבור פרוטוקול זה. חולדות התקבלו מן המכון הלאומי של זקנה מכרסמים המושב. השתמשנו עכברושים עבור מחקר זה, כי המבנה של הגרון חולדה דומה לזו של האדם, פונקציונלית המשרתים להגנה על דרכי הנשימה ו vocalizations המין המיוחד מחקר זה בוצע בהתאם למדיניות PHS על טיפול הומאני ושימוש בחיות מעבדה, מדריך NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה, וחוק רווחת בעלי חיים (7 USC et seq); פרוטוקול השימוש בבעלי חיים אושר על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש (IACUC) של אוניברסיטת קנטקי.

1. הרדמה של חולדות

  1. הכן את ההרדמה על ידי ערבוב קטמין הידרוכלוריד (הרדמה דיסוציאטיבית) ו xylazine hydrochloride (הרגעה משכך כאבים) ב שנאגרו מלוחים. ריכוז ketamine ו xylazine בפתרון הסופי הם 100 מ"ג / 8 מ"ג לק"גמשקל הגוף בהתאמה.
  2. להזריק את הרדמה לתוך החולדה על ידי הממשל intraperitoneal באמצעות מזרק עם מחט 25 G.
  3. לקבוע כי החולדה הוא הרדים מספיק על ידי צביטה הבוהן או הרגל עם מלקחיים. אם החולדה לא מגיבה על קמצוץ, ואז הניתוח יכול להתחיל. אם החולדה מגיבה על קמצוץ הבוהן עם התכווצויות רפלקס או שריר, ואז לחכות 1-2 דקות לחזור על מבחן קמצוץ. אם החולדה מגיבה שוב, להחליף את החולדה עם בעל חיים חדש הליך חוזר החל מ שלב 1.2.
  4. להחיל משחה עיניים לעיניים של חולדה, לאחר החולדה הוא נייח, כדי למנוע את הקרניות להתייבש.

2. אוסמוטי משאבת ההשתלה

  1. מניחים את החולדה הגחון על אזור כירורגי aseptic. ניהול meloxicam כתרופה preanesthetic. ניהול intraperitoneally במינון של 1-4 מ"ג / ק"ג של משקל הגוף באמצעות מזרק עם מחט 25 G.
  2. השתמש בקוצץ כדי להסיר קירובTale 1 "x 1" מרובע פרווה מגב הצוואר, וכ 1 "הזנב של שטח בין כתפיים. להתגלח קרוב ככל האפשר לעור.
  3. רטוב את הגב והצוואר עם אתנול חיטוי (70%).
  4. לאחר גילוח, לשפשף את היבט הגב של הצוואר עם 3 מקרצף ברצף של אלכוהול האלכוהול הגמר עם אלכוהול.
  5. לשמור על טמפרטורת הגוף של החולדה על ידי הנחת אותו על כרית חימום מוגדר 34 מעלות צלזיוס.
  6. ממלאים משאבות אוסמוטי מוכן aseptically עם או 50 μL של NTF4 או מלוחים עבור טיפול NTF4 מערכתית ( איור 1 ).
    1. השתמש באזמל כדי לבצע חתך אופקית כ 2 ס"מ רחב דרך העור, רק גולגולתי לחלל בין scapulae. הרם את הקצה האחורי של החתך עם מלקחיים עם יד אחת תוך החדרת קצה hemostats בעדינות דוחף אחורי החתך.
    2. לאחר קצה hemostats הוא כ 2 ס"מ cרץ את החתך, לפתוח את הידיות על hemostats, הרחבת הקצות כדי ליצור חלול "כיס" תת עורית לאתר החתך. זה יהיה המיקום מיקום המשאבה.
  7. אוריינט את המשאבה משלוח הפורטל בסוף הראשון עם הכניסה כדי למזער כל אינטראקציה של NTF4 ואת הריפוי של אתר החתך כיס.
  8. ספק 50 μL של מלוחים NTF4 עבור 7 או 7 ימים. קבוצת 7 ימים קיבלה 6.72 מ"ג ליום של NTF4 במינון כולל של 47.04 מ"ג. קבוצת הגיל 14 קיבלה 6.72 מ"ג ליום עבור מינון כולל של 94.08 מ"ג של NTF4 25 .
  9. השתמש חוט 5-0 ניילון תפר, hemostats ו מלקחיים כדי לסגור את החתך עשה עבור מיקום המשאבה.
  10. שים לב חולדות במשך מינימום של 30 דקות כפי שהם להתאושש מהרדמה. הקריטריונים להשלמת הניטור כוללים את החיה להיות פעיל, נע על הכלוב, מי שתייה, ומתחילים פעילויות רגילות אחרות כגון טיפוח.
  11. צג חיות היומיבשבוע הראשון על ידי התבוננות בריפוי של אתר כירורגי, תזונה נורמלית וצריכת מים וחולפת שתן / צואה, וכל סימנים התנהגותיים חריגים של לחץ, כאב או סיבוכים לאחר הניתוח.
  12. אם חולדה נראה כואב או מצוקה, לספק חולדה עם 5 מ"ג / ק"ג הזרקת תת עורית של carprofen פעם כל 24 שעות עד 5 ימים כדי להקל על הכאב.
  13. אם יש זיהום, להתייעץ עם וטרינר כדי לגרום כי הפצע מרפא כראוי.
  14. בהתאם קבוצה ניסיונית החולדה ב, להסיר את תפר 5-0 ניילון 7-10 ימים לאחר הניתוח כדי למנוע גירוי מהחוט.

3. הרדמה של חולדות להזרקת ישיר

  1. למנוע מזון מן החולדות בלילה לפני ההליך. זה מבטיח כי אין מזון לחסום את אנדוסקופ או מחט הזרקת.
  2. לשקול חולדות ולהכין acepromazine 1-2 מ"ג / ק"ג משקל גוף. להזריק intramuscularly (מיקום IM הואשריר thyroarytenoid שמאל).
  3. מניחים את החולדה בתיבה אינדוקציה. להשרות הרדמה בתיבה אינדוקציה עם 5% isoflurane ו 1 LO 2 .
  4. להעביר את החולדה על חרוט האף עם isoflurane 2% ו 600 מ"ל O 2 .
  5. לקבוע כי החולדה הוא הרדים מספיק על ידי צביטה הבוהן או הרגל עם מלקחיים. אם החולדה לא מגיבה על קמצוץ, אז פרוטוקול ההזרקה יכול להתחיל. אם החולדה מגיבה על קמצוץ הבוהן עם התכווצויות רפלקס או שריר, ואז לחכות 1-2 דקות לחזור על מבחן קמצוץ. אם החולדה מגיבה שוב, להחליף את החולדה עם בעל חיים חדש הליך חוזר החל מ שלב 3.4.

4. הזרקה ישירה ויזואליזציה

  1. מקום מוכן aseptically 50 μL מינונים המכילים NTF4 או מלוחים ב H 2 O אמבטיה להגדיר 25 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפני ההזרקה.
  2. מניחים את החולדה במצב שכיבה ו שכיבה על פלטפורמת פרספקס ( איור 2 ). סוסמכופפים את העכברוש בתנוחה השעורה מהחלק העליון של החותכות הקדמיות, דרך חוט תיל המתוח על החלק העליון של הרציף.
  3. צרף 50 מ"מ, 30 מד, 100 מזרק μL ל 1.9 מ"מ, 30 ° סינוס אנדוסקופ ( איור 3 ).
    הערה: מכלול המזרק מחובר באמצעות חפיפה המחזיקה את הצינורית בחוזקה לקיר החיצוני של האנדוסקופ. האנדוסקופ מאפשר הדמיה של קפל ווקאלי והכוונה של מזרק intraorally. המיקום של קצה צינורית מותאם לפני כל חיה כדי להבטיח את קצה במלואו וברור לעין באמצעות תצוגה אנדוסקופית ( איור 4 ).
  4. השתמש זוג מוטה גומי מורט להאריך את הלשון ולהזיז אותו רוחבית. לאחר מכן, הכנס משקולת פלסטיק כדי לשמור על הפטנט בעל פה. הפוך את speculum מ 5 מ"ל חבית פלסטיק חבית כי הוא חתך באורך של 1.5 עד 2 ס"מ, עם הקצוות לחתוך deburred ו מלוטש חלקה.
  5. כבה את האורות ברוומ 'ו לצרף מקור האור הלוגן ל אנדוסקופ. הפעל את מקליט הווידאו כדי ללכוד את ההליך.
  6. לטבול את הקצה הדיסטלי של אנדוסקופ במים חמים למשך כמה שניות כדי למזער את הפיתוח של עיבוי על קצה זכוכית כאשר מוכנס לתוך הפה של החולדה.
  7. באמצעות משוב חזותי מהצג, בקפידה להנחות את המחט לאזור הקפל השמאלי השמאלי.
  8. הזמן את הזרקת הפתרון עם השלב השראה של מחזור הנשימה של בעלי חיים כדי לגשת באופן מלא לקפל ווקאלי. במהלך שלב ההשראה של הנשימה, קפל הקול נחשף במלואו.
    1. לאחר קפל ווקאלי גלוי לחלוטין, הכנס את המחט לתוך thyroarytenoid שמאל, נמצא לרוחב קצה המדיאלי הלבן של קפל ווקאלי. עם המחט במקום, לספק את הזרקת דרך דיכאון של המזרק.
  9. כבה את מקור האור הלוגן על אנדוסקופ ונגן וידאו, ופנה בחזרה על roאורות אום.
  10. להחזיר את החולדה לכלוב הבית שלה במקום על כרית חימום.
  11. אפשר עכברוש להתאושש לפני הסרת כרית החימום. החלף מזון ומים בכלוב.
  12. מעקב חולדות במשך 7 ימים לאחר ההזרקה ולאחר מכן להרדים. הסר את הגרונות עבור cryosectioning 24 .

5. הרדמה של חולדות

  1. להרדים חולדות עם קטמין הידרוכלוריד ו xylazine hydrochloride (100 מ"ג / 8 מ"ג לכל ק"ג משקל גוף מוזרק זריקה intraperitoneal).
  2. להרדים על ידי exsanguination לאחר thoracotomy המדיאלי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

חולדות היו מורדמים לאחר שבועיים של עירוי משאבת אוסמוטי או 1 שבוע לאחר הזרקה ישירה של NTF4. Larynges נקצרו, הניח cryoprotectant (סוכרוז 30% ו 70% פוספט שנאגרו מלוחים) ולאחר מכן מקוטע סדרתי ברוחב 10 מיקרומטר עם cryostat. הזדקנות שרירי הגרון מושפעים על ידי הממשל של NTF4 25 . בנוסף חולדה צעירה וישנה, ​​השווה את הצד מוזרק ולא מוזרק של השרירים thyroarytenoid. בדרך כלל אנו רואים שינוי בגודל סיבי עם הגיל, אשר משתנה בהתאם לתוואי של נ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

שרירי הגרון חשופים להשפעות של הזדקנות. מחקרים קודמים הראו שינויים בשרירי הגרון המזדקנים הכוללים שינויים בגודל הסיבים, מספר הסיבים הכולל, יכולת התחדשות, גודל NMJ ושינויים בכמות, בנוסף לשינויים בתפקוד הקונסטרוקלי ובמיוסין איזופורם משמרות 4 , 11 , 27 , 30 , 31 . הזדקנות שריר הגרון ניתן לשנות על ידי יישום של נוירוטרופים. שי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמכון הלאומי לחירשות והפרעות תקשורת אחרות (R21DC010806 ל- CAM ו- JCS ו- R01DC011285 ל- CAM).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
נוירוטרופין 4פפרו טק450-04200 ננוגרם ב-50 μ L
Alzet משאבה אוסמוטיתDURECT Corporation2001D
30 ° אנדוסקופStoltz61029D
50 מ"מ 30 מד 100-μ מזרק Lהמילטון84850 ותמיסת מלח 201812
(תמיסת נתרן כלורי)סיגמא-אולדריץ'S8776
קטמין הידרוכלורידהנרי שיין56344
קסילזין הידרוכלורידהנרי שיין33198
25 גרם 5/8 מחטבקטון-דיקינסון305901
1 מ"ל מזרקבקטון-דיקינסון
משחת עינייםהנרי שיין8897
קוצץאוסטר44-018
אתנולדקון2716
יוד (בטאדין)Purdue Pharma L.P.
606404 כרית חימוםSunbeam731-5
5-0 חוט תפר ניילוןAD כירורגיPMN-518R6
קריל המוסטטFine ScienceTools 13005-14
מלקחיים עדינים לקשירת תפריםFine Science Tools11063-07
מלוקסיקםהנרי שיין49756
קרפרופןMerritt Veterinary Supplies148700
משחה אנטיביוטיתהנרי שיין57110
acepromizine Aceprojectהנרי שיין3845
איזופלורן איזותזיההנרי שיין50033
תיבת אינדוקציה (קופסת הרדמה)מכשיר הרווארד50-0116
מיכל דחוס חמצןסקוט גרוסUN1072
חלקים קטנים בע"מ (אמזון)
מלקחיים עם קצה גומימדע עדינים גומי11075-00
גומי נוזלי למלקחיים מעל42518של Lowe
(מזרק BD חתוך לאורך)Becton-Dickinson309659
מקור אור הלוגן קרנף-גרון סטרובוסקופKay-PentaxRLS 9100 B
מקליט וידאוKay-Pentax
סוכרוזSigma-AldrichS0389-500G
פוספט חוצץ מלחSigma-AldrichP4417-100TAB
קריוסטט Mictotom HM525Thermo ScientificHM 525
זימים 1 המטוקסיליןVWR10143-142
Shandon eosin-Y אלכוהוליThermo Fisher Scientific6766007
נוגדן אנטי נתרן Nav1.5 המיוצר בארנבSigma-AldrichS0819
טקסס אדום-X פלואידיןסיגמא-אולדריץ'T7471
אלפא-בונגרוטוקסין אלקסה פלואור 488 מצומדתרמו פישר סיינטיפיקB-13422
הרדמה של בעלי חיים קטנים מכונהסמיתס רפואיCDS 9000
309659 פלטפורמת פרספקס כלי ספקטולה פלסטיק

מקורות

  1. Trupe, E. H., et al. Correlates and consequences of eating dependency in institutionalized elderly. J. Am. Geriatrics Society. 34 (3), 192-198 (1986).
  2. Ward, P. H., Colton, R., McConnell, F., Malmgren, L., Kashima, H., Woodson, G. Aging of the voice and swallowing. Otolaryngol. Head Neck Surg. 100 (4), 283-286 (1989).
  3. Gay, E. G., Kronenfeld, J. J., Dettmann, F. G. A comparison on the effect of regulation on health care for the older American: a tale of two states. Gerontologist. 34 (6), 787-796 (1994).
  4. Hagen, P., Lyons, G. D., Nuss, D. W. Dysphonia in the elderly:diagnosis and management of age-related voice changes. South. Med. J. 89 (2), 204-207 (1996).
  5. Broniatowski, M., et al. Current evaluation and treatment of patients with swallowing disorders. Otolaryngol. Head Neck Surgery. 120 (4), 464-473 (1999).
  6. Lundy, D. S., et al. Aspiration: cause and implications. Otolaryngol. Head Neck Surg. 120 (4), 474-478 (1999).
  7. Schindler, J. S., Kelly, J. H. Swallowing disorders in the elderly. Laryngoscope. 112 (4), 589-602 (2002).
  8. Gambino, D. R., Malmgren, L. T., Gacek, R. R. Age-related changes in the neuromuscular junctions in the human posterior cricoarytenoid muscles: a quantitative study. Laryngoscope. 100 (3), 262-268 (1990).
  9. Sinard, R. J. The aging voice: how to differentiate disease from normal changes. Geriatrics. 53 (7), 76-79 (1998).
  10. Baker, K. K., Olson-Raming, L., Sapir, S., Luschei, E. S., Smith, M. E. Control of vocal loudness in young and old adults. J. Speech Lang. Hear Res. 44 (2), 297-305 (2001).
  11. McMullen, C. A., Andrade, F. H. Functional and morphological evidence of age-related denervation in rat laryngeal muscles. J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 64 (4), 435-442 (2009).
  12. Lai, K., Ip, N. Y. Postsynaptic signaling of new players at the neuromuscular junction. J. Neurocytol. 32 (5-8), 727-741 (2003).
  13. Huang, E. J., Reichardt, L. F. Neurotrophins: roles in neuronal development and function. Annu. Rev. Neurosci. 24 (1), 677-736 (2012).
  14. Gonzalez, M., et al. Disruption of Trkb mediated signaling induces disassembly of postsynaptic receptor clusters at neuromuscular junctions. Neuron. 24 (3), 567-583 (1999).
  15. Hirano, S., Kishimoto, Y., Suehiro, A., Kanemaru, S., Ito, J. Regeneration of aged vocal folds: first human case treated with fibroblast growth factor. Laryngoscope. 118 (12), 2254-2259 (2008).
  16. Branski, R. C., et al. Effects of transforming growth factor-beta 1 on human vocal fold fibroblasts. Ann. Oto. Rhinol. Laryngol. 118 (3), 218-226 (2009).
  17. Kishimoto, Y., et al. Effects of exogenous hepatocyte growth factor on vocal fold fibroblasts. Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 118 (8), 606-611 (2009).
  18. Belluardo, N., et al. Neuromuscular junction disassembly and muscle fatigue in mice lacking neurotrophin-4. Mol. Cell. Neurosci. 18 (1), 56-57 (2001).
  19. Johnson, A. M., Ciucci, M. R., Connor, N. P. Vocal training mitigates age-related changes within the vocal mechanisms in the old rat. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 68 (12), 1458-1468 (2013).
  20. Roscow, D. E., Parikh, P., Vivero, R. J., Casiano, R. R., Lundy, D. S. Considerations for initial dosing of botulinum toxin in treatment of adductor spasmodic dysphonia. Oto. HeadNeck Surg. 148 (6), 1003-1006 (2013).
  21. Benninger, M. S., Hanick, A., Hicks, D. M. Cricothyroid muscle botulinum toxin injection to improve airway for bilateral recurrent laryngeal nerve paralysis, A case series. J. Voice. 30 (1), 96-99 (2016).
  22. Coppoolse, J. M. S., et al. An in vivo study of composite microgels based on hyaluronic acid and gelatin for the reconstruction of surgically injured rat vocal folds. J. Speech Lang Hear Res. 57 (2), S658-S673 (2014).
  23. Hertegård, S., et al. Cross-linked hyaluronan used as augmentation substance for treatment of glottal insufficiency: Safety aspects and vocal fold function. Laryngoscope. 112 (12), 2211-2219 (2002).
  24. Walker, W. F. Jr, Homberger, D. G. Anatomy and dissection of the rat. , Third Edition, W.H. Freeman and Company. New York. (1997).
  25. Ohno, T., Hirano, S., Rousseau, B. Age-associated changes in the expression and deposition of vocal fold collagen and hyaluronan. Ann. Oto. Rhinol. Laryngol. 25 (1), 192-197 (2009).
  26. Stemple, J. C., et al. Enhancement of aging rat laryngeal muscles with endogenous growth factor treatment. Physiol. Rep. 4 (10), e12798(2016).
  27. McMullen, C. A., Andrade, F. H. Contractile dysfunction and altered metabolic profile of the aging rat thyroarytenoid muscle. J. Appl. Phys. 100 (2), 602-608 (2006).
  28. Engle, W. K., Cunningham, G. C. Rapid examination of muscle tissue. An improved trichrome method for fresh-frozen biopsy section. Neurology. (13), 919-923 (1963).
  29. Sheehan, D. C., Hrapchack, B. B. Theory and practice of histotechnology. Battelle. , Columbus, OH. (1980).
  30. Kulakowski, S. A., Parker, S. D., Personius, K. E. Reduced TrkB expression results in precocious age-like changes in neuromuscular structure, neurotransmission, and muscle function. J. Appl. Phys. 111 (3), 844-852 (2011).
  31. Nishida, N., et al. Age-related change in rat intrinsic laryngeal muscles: analysis of muscle fibers, muscle fiber proteins and subneural apparatuses. Eur Arch Otorhinolaryngol. 270 (3), 975-984 (2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

השתלה של משאבה אוסמוטיתשרירי גרון של חולדה מזדקנתהזרקה למיתרי הקולבדיקה היסטולוגיתניתוח של הצומת העצבית-שריריתמדידת גודל סיביםהערכת פיברוזיספרוטוקול להליך כירורגי
תת עורית נוירוטרופין 4 עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות או הזרקת שרירים ישירה משפר הזדקנות עכברים שרירי הלוע.
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.