בדיקה echocardiographic משמש לעתים קרובות בעכברים. מכשירי אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה יקר פותחו למטרה זו. פרוטוקול זה מתאר הליך echocardiographic סבירים בשילוב עם morphometric היסטולוגית ניתוחים כדי לקבוע מורפולוגיה לב.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
בבדיקה היסטולוגית ו echocardiographic של מורפולוגיה לב העכבר
במאמר זה
סיכום
תקציר
מספר גדל והולך של מודלים מהונדס גנטית העכבר הפך זמין בשנים האחרונות. יתר על כן, מספר מחקרים שבוצעו בעכברים הוא גבוה. אפיון פנוטיפי של מודלים אלה העכבר גם דורש הבחינה של תפקוד הלב ואת מורפולוגיה. אקוקרדיוגרפיה דימות תהודה מגנטית (MRI) גישות נפוצות כדי לאפיין מורפולוגיה בעכברים ותפקוד הלב בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. ציוד Echocardiographic ו- MRI המתמחה בשימוש מכרסמים קטנים הוא יקר ודורש שטח ייעודי. פרוטוקול זה מתאר מידות הלב בעכברים באמצעות מערכת echocardiographic קליניים גשש כלי דם אנושי 15 מגה-הרץ. המדידות מבוצעות על עכברים בוגרים מורדם. רצפי תמונות לפחות שלושה מוקלט, נותחו עבור כל בעל חיים במצב M בתצוגת ציר קצר מתחת. לאחר מכן מבוצעת בדיקה היסטולוגית הלב, קטרים cardiomyocyte נקבעים ב hematoxylin-agglutinin eosin - או נבט חיטה (WGA)-פרפין סעיפים מוכתמים. צפיפות כלי הוא נחוש morphometrically אחרי immunostaining Pecam-1. הפרוטוקול עבר בהצלחה שימושית ללימודים תרופתי ושונה גנטי מודלים בעלי חיים בתנאים בסיסית, כמו גם לאחר ניסיוני אוטם שריר הלב על ידי מצדו קבוע של השמאלי הקדמי היורד עורקים ( LAD). מניסיוננו, חקירה echocardiographic מוגבל לבעלי מרדימים, הוא ריאלי בעכברים בוגרים במשקל של פחות 25 גרם.
מבוא
מגוון רחב של מודלים מהונדס גנטית עכבר זמינים, מספר מחקרים בעכברים גבוהה1,2. אקוקרדיוגרפיה MRI הגישות הנפוצות עבור אפיון פנוטיפי מורפולוגיה של מודלים אלה עכבר3ותפקוד הלב בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. המטרה של פרוטוקול הציג היא לנתח את תפקוד הלב ואת מורפולוגיה בעכברים בוגרים. הוא משלב echocardiographic, היסטולוגית, מדידות immunohistochemical. בדיקה echocardiographic נעשה שימוש נרחב עכברים4,5,6,7,8,9....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הניסויים המתוארים כאן בוצעו בהתאם החוקים הרלוונטיים לרווחת בעלי החיים מוסדיים ו צרפתי, קווים מנחים ומדיניות. . הם אושרו על ידי ועדת האתיקה צרפתי (Comité Institutionnel d ' Ethique Pour l ' חיה de Laboratoire; מספר NCE/2012-106).
1. אקו
- לקבוע את משקל הגוף של העכבר באמצעות איזון מעבדה סטנדרטיים תוך החזקתה בקלילות בזנבו כדי להבטיח מיקום מתאים.
- עזים ומתנגד החיה על ידי הזרקה בקרום הבטן (i.p.) של 50 מ"ג/ק"ג פנטוברביטל 25 , 26-
הערה: כל סוג אחר של הרדמה יכול לשמש אם באותו הפרוטוקול משמש לאורך כל המחקר. יתרונות וחסרונות יידונו להלן. - תחזיר העכב....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
איור 1, הקלטות echocardiographic נציג מדגימים את התועלת אקוקרדיוגרפיה כדי לזהות פנוטיפים הלב בעכברים מהונדסים. ניתן בקלות לזהות את ההבדל בין עכבר עם תפקוד הלב תקין (איור 1 א') חיה עם החדר השמאלי מורחבים, LV מופחתת פונקציה (איור 1B). איור 2 מציג ההשוואה של cardiomyocyte מידות קוטר בבעלי חיים בלי (איור 2 א) ועם היפרטרופיה (
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שיטות שונות פותחו כדי להעריך את מבנה הלב ותפקודו בעכברים, כולל אקוקרדיוגרפיה חדות משופרת MRI, מיקרו CT, סריקת PET. בשל העלות האפקטיביות שלה פשטות, אקו הוא הטכניקה הנפוצה ביותר לניתוח פונקציונלי עכברים11. באופן כללי, בגלל גודלו הקטן של הלב ואת תדירות גבוהה של קצב הלב בעכברים, מתמרים עם תדירות > 10 מגה-הרץ אמור לשמש, למרות מידות מוצלחת דווחו עם 8 או 9 מגה-הרץ מתמרים4,7 . כמו תפקוד הלב קשורה קשר הדוק טמפרטורת הגוף ותדירות לב, חשוב לשלוט פ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
העבודה נתמך על ידי הממשלה הצרפתית (סוכנות המחקר הלאומית, ANR) דרך התוכנית "השקעות עבור העתיד" LABEX SIGNALIFE (הפניה ANR-11-LABX-0028-01) ויוצקים על ידי מענקים ק' וו ד מ האגודה la Recherche sur le סרטן, Fondation דה פראנס, לתכנן Inserm סרטן. ד B. נ א קיבלו מלגות את Fondation pour la Médicale רשרש ומן העיר ניס, בהתאמה. Echocardiograph את המתמר היו מתבקשים המסופקים על ידי פיליפס. אנו מודים Borderie א, ס Destree, מ Cutajar-Bossert, א Landouar, א Martres, Biancardini א ו ס מ וגנר לסיוע טכני מיומן שלהם.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נבט חיטה אגלוטינין (WGA) מצומד טטרמתילרודמין | טכנולוגיות חיים, בדיקות מולקולריות | W849 | |
| עז ביוטינילציה אנטי-ארנב נוגדן IgG | Vectorlabs | BA-1000 | |
| אבידין / ביוטין ערכת חסימת | Vectorlabs | SP-2001 | |
| ערכת VECTASTAIN Elite ABC HRP (פרוקסידאז, סטנדרטי) | Vectorlabs | PK-6100 | |
| VECTASHIELD Antifade מדיום הרכבה עם DAPI | Vectorlabs | H-1200 | |
| SIGMAFAST 3,3'-Diaminobenzidine טבליות | Sigma | D4168 | |
| תמיסת מי חמצן | Sigma | H1009 | |
| Anti-Pecam-1 (CD31) נוגדן | Abcam | ab28364 | |
| ג'ל העברת אולטרסאונד, ג'ל Aquasonic 100 | Parker | ||
| בדיקת אולטרסאונד ליניארית, אקו לב L15-7io | Philips Healthcare | ||
| , IE33 xMATRIX | פיליפס | ||
| ערכת מסנני פלואורסצנציה Leica | |||
| TxR | Leica | 11525310 | |
| תוכנת הדמיית הדמיה | |||
| , SPOT 5.2 תוכנה מתקדמת ובסיסית | הדמיה | ||
| מספריים עדינים | |||
| מספריים גדולים | Fine Science Tools | 14501-14 | |
| להבי אזמל | Fine Science | Tools 10023-00 | |
| Graefe Forceps | Fine Science Tools | 11650-10 | |
| מכונת גילוח מכרסמים | מכשיר הרווארד | 34-0243 | |
| קלטות להטמעת פרפין | סאקורה | 4155F | |
| ניטרלי מאגר פורמלין | סאקורה | 8727 | |
| קסילן | סאקורה | 8733 | |
| Paraffine TEK III | סאקורה | 4511 | |
| מכשיר הטבעה אוטומטי, תחנת הטמעת פרפין Tissue-Tek VIP | Sakura | 6032 | |
| Tissue-Tek TEC 5 | Sakura | 5229 | |
| Accu-Edge S35 | Sakura | 4685 | |
| Tissue-Tek | Sakura | 9533 | |
| Tissue-Tek | Sakura | 9582 | |
| הרכבה בינונית Tissue-Tek | Sakura | 1408 | |
| קופסאות שקופיות | Sakura | 3958 | |
| תמיסת אאוזין | Sakura | 8703 | |
| תמיסת המטוקסילין | Sakura | 8711 | |
| מיקרוטום, אמבט | RM2125RT Leica | 720-1880 (VWR), | |
| Leica HI1210 | Leica | 720-0113 (VWR) | |
| אתנול | VWR | ACRO444220050 | |
| צינורות 15 מ"ל | VWR | 734-0451 | |
| צנצנות ויטראז' | VWR | MARI4220004 | |
| צנצנות מכתים | VWR | MARI4200005 | |
| אינקובטור | קלסר | 9010-0012 | |
| טבליות מי חמצן DAB ואוריאה, SIGMAFAST 3,3′-טבליות דיאמינובנזידין | סיגמא | D4293 | |
| PBS (10X) | תרמו פישר 70011044 |
מקורות
- Ormandy, E. H., Dale, J., Griffin, G. Genetic engineering of animals: ethical issues, including welfare concerns. Can Vet J. 52 (5), 544-550 (2011).
- Karl, T., Pabst, R., von Hörsten, S. Behavioral phenotyping of mice in pharmacological and toxicological resear....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
