מאמר שיטה

הקלטה הפלסטיות הסינפטית בפרוסות בהיפוקמפוס חריפה, בהשתתפות של מיחזור - בנפח מצומצם, זלוף- ומערכת ועלייתו-סוג תא

DOI:

10.3791/55936

⸱

1 בינואר 2018

 ,  ,  , 
1The Institutes of Brain Science, the State Key Laboratory of Medical Neurobiology, the Collaborative Innovation Center for Brain Science, Fudan University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר את הייצוב של רמת החמצן נפח קטן של מאגר ממוחזר, היבטים מתודולוגיים של הקלטה פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות המשוקע פרוסות בהיפוקמפוס חריפה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אף-על-פי ניסויים על פרוסות המוח כבר בשימוש מאז 1951, בעיות להישאר זה לצמצם את ההסתברות להשגת ניתוח יציב וטוב של אפנון הסינאפסית בעת ביצוע הקלטות שדה פוטנציאלי או תאיים. כתב יד זה מתאר היבטים מתודולוגיים שיכול להועיל בשיפור תנאי ניסיוני עבור שמירה על פרוסות המוח חריפה, הקלטה שדה פוטנציאל postsynaptic סינאפסות בתוך תא צלילה זמינים מסחרית עם יחידת תזרים-carbogenation. יצוא-carbogenation מסייע לייצב את רמת החמצן בניסויים המסתמכים על מיחזור של מאגר מאגר קטן כדי לשפר את העלות-יעילות התרופה ניסויים. בנוסף, כתב היד מציג ניסויים נציג זה לבחון את ההשפעה של מצבים שונים carbogenation, גירויים פרדיגמות על הפלסטיות הסינפטית פעילות תלוית של ההעברה הסינאפסית.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בשנת 1951, דיווח ראשון המוח חריפה פרוסה שהניסוי היה מתנהל1. ב-1971, לאחר מוצלחת במבחנה הקלטות מתוכנות piriform קליפת2,3 , הגילוי. נוירונים בהיפוקמפוס מחוברים באופן רוחבי לאורך ציר septotemporal של ההיפוקמפוס4, לאחד במבחנה הקלטות הראשונה של פעילות עצביים בהיפוקמפוס היתה מושגת5. הדמיון של הפרמטרים neurophysiological או neurostructural של נוירונים בתנאים בתוך vivo ו- in vitro לקשרי הם עדיין הנושא של הדיון מספר6, אבל בשנת 1975, Schwartzkroin7 עולה כי הבסיס מאפיינים של נוירונים נשמרים במבחנה ומשרה את גירוי בתדירות גבוהה (קרי: tetanization) של afferents במערך בהיפוקמפוס הקלה לטווח ארוך של סינאפטיים8. אלקטרופיזיולוגיות הקלטה של פעילות. עצבית במבחנה הרחיב את חקר המנגנונים הסלולר של פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות9,10, אשר התגלה בשנת 1973 על ידי בליס et al. 11 in vivo ניסויים עם ארנבונים.

בחקר פעילות. עצבית או איתות המסלולים פרוסות המוח, ועל במיוחד-פרוסות בהיפוקמפוס חריפה, הוא עכשיו כלי סטנדרטי. עם זאת, באופן מפתיע, ניסויים במבחנה טרם להיות סטנדרטית, כפי שמעידים הגישות מרובים עדיין קיימים הכנה ותחזוקה של פרוסות בהיפוקמפוס חריפה. ריד. et al. (1988) 12 סקרו את אתגרים מתודולוגיים לשם קיום פרוסות המוח חריפה סוגים שונים של צ'יימברס פרוסה, הבחירות של רחצה ברמה בינונית, pH, טמפרטורה וחמצן. פרמטרים אלה הם עדיין קשה לשלוט בבית הבליעה הקלטה בשל היסודות במבחנה פרוסה-הקלטה setups בהזמנה אישית. הפרסומים ניתן למצוא כי עשוי לעזור להתגבר כמה אתגרים מתודולוגיים וכי לתאר סוגים חדשים של צ'יימברס פרוסה ועלייתו, כגון מערכת של interstitial 3D microperfusion13, תא עם זרימה שכבתית משופרת וחמצן אספקה14, מערכת עם בקרת טמפרטורה ממוחשבת15, מערכת הקלטה רב קאמרית16. מאז התאים האלו לא קל לבנות, רוב המדענים להסתמך על פרוסה זמינים מסחרית צ'יימברס. התאים האלה יכול להיות מותקן על מערכת מיקרוסקופ, ובכך מאפשר עבור שילוב אלקטרופיזיולוגיה עם פלורסצנטיות הדמיה17,18,19. מאז התאים האלה לשמור את פרוסות המוח שקוע בתוך נוזל מוחי שדרתי מלאכותי (כלנית חדד), קצב זרימה גבוהה של הפתרון המאגר צריך להיות מתוחזק, הגדלת ההוצאות של יישום סמים. לשם כך, אנו שילבו מערכת זלוף מיחזור עם תזרים-carbogenation המספק יציבות מספקת עבור הקלטה לטווח ארוך של שדה פוטנציאל בחדר ועלייתו פרוסה באמצעות אמצעי אחסון יצחק גרגיר קטן יחסית. בנוסף, נוכל לסכם כיצד השימוש של מערכת carbogenation ניסויית/זלוף זו משפיעה על התוצאה של פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות10 , איך עיכוב של התארכות האיקריוטים פקטור-2 קינאז (eEF2K) ממיקרו סינפטית שידור20.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

החיות היו נשמרים על פי הוקמה בסטנדרטים של טיפול בבעלי חיים ונהלים של המכון למדעי המוח, מפתח מעבדה של הרפואה נוירוביולוגיה של פודאן סטייט, שנגחאי, סין.

1. פתרון הכנה

הערה: ראה טבלה של חומרים.

  1. הכנת המאגר עם פרוסות (פתרון של Gey ששונה): 92 מ מ NaCl, 2.5 מ מ אשלגן כלורי, 1.25 מ"מ NaH2PO4, 30 מ מ NaHCO3, גלוקוז 25 מ מ, 20 מ מ HEPES, 3 מ מ נה+-פירובט, 10 מ מ MgSO4ו- 0.5 מ מ CaCl2.
  2. להתאים את ה-pH ל 7.6 באמצעות NaOH M 1 ללא carbogenation.
  3. חנות המאגר ב 4 º C.
    הערה: טיטרציה מבהיר את הנוזל מעונן. Osmolality הוא mOsm 305-310. Carbogen21 מכיל 5% פחמן דו-חמצני ו- 95% חמצן.
  4. הכן את כלנית חדד על ידי דילול 10 x פתרון מניות של חנה המבר שאינו מכיל ביקרבונט, גלוקוז, נותן הרכב הסופי של: 124 מ"מ NaCl, 2.5 מ מ אשלגן כלורי, CaCl 2.5 מ מ2, 2 מ מ MgCl2ו- 1.25 מ מ ח'2PO4.
  5. הוסף ביקרבונט גלוקוז כדי להגיע 10 מ מ גלוקוז ו 26 מ מ NaHCO3.
  6. Carbogenate חנה המבר דרך צינור סיליקון מחורר עם קצה חסומות מיד לאחר הוספת את NaHCO3.
  7. למדוד את רמת החומציות תוך carbogenating (pH 7.3-7.4).
    הערה: קיבולת המאגר ניתן לכוונן מעט על ידי שינוי כמות NaHCO3. מאז ה-pH המתקבלת היא תלוית טמפרטורה, יש צורך לבדוק את רמת ה-pH הנוצרת בעת carbogenating בטמפרטורת עבודה (למשל, 30 מעלות צלזיוס).

2. הכנת פרוסות בהיפוקמפוס חריפה

הערה: ראה טבלה של חומרים.

  1. במקום רשת החזקת פרוסה לתוך חדר הדגירה פרוסות המוח חריפה, למלא את החדר עם כלנית חדד, carbogenate (4-6 L/h) לפחות 30 דקות22 -28-30 מעלות צלזיוס.
  2. מגניב מכשירי הניתוח ל 2-4 מעלות צלזיוס.
  3. המקום גביע זכוכית מלא קר carbogenated חותך מאגר (2-4 מעלות צלזיוס), בהשתתפות תערובת קרח/מים, ליד vibratome.
  4. עזים ומתנגד חולדות או עכברים עד הקרנית הרפלקסים נעלמים (30-50 s) באמצעות איזופלוריין על ידי לקיחת 500 µL לתוך צנצנת זכוכית 2 ל' או µL 12.5 לתוך צינור 50 מ ל.
  5. לבודד את המוח בשיטה המתוארת, דמיינו בפירוט הפרסומים של מאטיס. et al. (2011) 23 ו. Yuanxiang et al. (2014) 24.
  6. מגניב המוח ל 2-4 ° C במאגר עם פרוסות כקרח (למשך לפחות 2 דקות) לפני לנתח את המוח הקטן ומפריד את ההמיספרות.
  7. להשתמש בלהב כירורגי קר לנתח פיסת קליפת המוח הגבי בזווית של 70° לאורך הקצה הגבי של כל חצי הכדור25 כדי לקבל פרוסות רוחבי הגחוני / את החלק ביניים של ההיפוקמפוס, כפי שמוצג באיור 1C Eו....
  8. עם מרית מלט שיניים קר, העברה של האונה מסנן נייר להתייבש בקצרה את המשטח שנוצר (s 1-2).
  9. לטעון את שתי ההמיספרות במשטחים טריים חתוכים על הרציף עם פרוסות כקרח באמצעות דבק דבק משחק מהיר; יש בסוף סימטרית הפנים ההמיספרות גילוח (איור 1D).
  10. למקם את הפלטפורמה עם פרוסות לתא הקירור של vibratome ולמלא את החדר עם המאגר עם פרוסות (2-4 מעלות צלזיוס). Carbogenate באמצעות צינור סיליקון מחורר.
  11. חותכים פרוסות מיקרומטר 350 באמצעות הגדרות vibratome נאותה (למשל, מהירות קדימה להב: 1.2 מ מ/s, משרעת להב: 1 מ מ).
  12. לבודד את היווצרות בהיפוקמפוס את subiculum, את cortices entorhinal באמצעות קנולות להזרקת שני (> 28 גרם) כמו מספריים.
  13. הסר את הבועות הרשת פרוסה החזקת החדר הדגירה מוכן קודם לכן באמצעות פיפטה של פסטר.
  14. להעביר את הפרוסות שיש קצת שקיפות-הרובד pyramidale מן הרציף עם פרוסות על רשת השינוי לשכת הדגירה. להימנע כל קיפול, מתיחות, חופפים, צף על-ידי כ רפה בעברית כלנית חדד, הפרוסה לתוך פיפטה פסטר פה-גדול.
    הערה: כל התהליך (שלב 2.5-2.14) יכול לקחת 5-10 דקות; לכן חשוב לבדוק את הטמפרטורה של הפתרון מאגר לאורך זמן כדי לתחזק אותו ב 4 º C.
  15. את הפרוסות ב 30 מעלות צלזיוס במשך לפחות 1.5-2 h בחדר דגירה דגירה, מספקים carbogen ב 4-6 L/h.
    הערה: להתאים את קצב הזרימה של carbogen הפיצו את המאגר בחממה, אלא למנוע את הפרוסות צף.

3. שינויים Carbogenation עבור חנה המבר מיחזור של מאגרים קטנים

  1. להוסיף מחבר 3-דרך צינור זרימה יוצאת של מערכת מיחזור (איור 2B).
  2. לחבר את הזרוע האמצעי של המחבר 3-דרך צינור עם צינור אספקת carbogen, לווסת את קצב הזרימה עם מד זרימת אוויר (3-4 L/h, איור 2D ו- איור 4C).
  3. להוסיף מחבר 3-דרך הצינור השני מהזרימה של מערכת מיחזור. לחבר את הזרוע האמצעי ברכבת התחתית מול התנור מוטבעת הזרוע כדי צינור סיליקון דק (10 ס מ אורך), היד אל הצינור תזרים מן המאגר (מסנן נמוך לעבור; איור 4 C).
  4. במקום של מסחטת צינור על צינור סיליקון דק (OD: 2 מ מ) במיקום לאורך הצינור איפה pulsation של יצחק גרגיר בבית הבליעה פרוסה, שנוצר על ידי משאבת סחרור, לכל הפחות שלה.
    הערה: יצוא-carbogenation (יצוא-פחמימות.) שינוי מפחית את הרגישות של רמת carbogenation לנפח של המאגר כלנית חדד, חנה המבר מיחזור קצב, וממקם צינור היחסי בתוך מאגרי יצחק גרגיר קטן (< 50 מ ל; איור 3). לגבי המסנן נמוך לעבור, כמות מסוימת של אוויר בצינור סיליקון דק מפחית את pulsation של הזרם כלנית חדד; לפיכך, הצינור צריך להיות מלא בעיקר אוויר.

4.הקלטה סינפטית תגובות בחדר פרוסה צלילה

הערה: ראה טבלה של חומרים.

  1. לחמם את הפתרון חנה המבר באמבט מים עד כ 28-30 ° C (זה ימנע היווצרות בועה בתא ההקלטה).
  2. מערכת מיחזור (4-5 mL/min) ולהפעיל החימום בתוך השורה כדי equilibrate את המערכת. של פחות שעה.
  3. Presoak חתיכה קטנה של העדשה ניקוי נייר, רשת ניילון קבוע על חוט הפלטינה בצורת U בבית הבליעה פרוסה ועלייתו לכמה דקות (איור 4).
  4. הסר את הכבל הפלטינה בצורת U.
  5. . תכבה את מיחזור ומניחים פרוסה על העדשה ניקוי נייר.
  6. מיד מקום החזקת פרוסה רשת השינוי על הפרוסה, לעבור על המשאבה, והנח את הפרוסה equilibrate למשך 30 דקות ללא חיטט המטרה כלנית חדד.
  7. למלא את בורוסיליקט micropipette (קרי, האלקטרודה הקלטה) עם כלנית חדד (עצה ההתנגדות: 1-2 MΩ, מלא 1/3 עם חנה המבר) ואת בעיא זה המחזיק פיפטה.
  8. . בדוק את הבידוד של האלקטרודה מתכת גירוי על-ידי הצבתו בתוך תמיסת3 NaHCO (> 40 מ מ). להתחבר האלקטרודה הקוטב השלילי של מחולל מתח DC (1-2 V, הקוטב החיובי: חוט כסף או פלטינה), ולבחון את היווצרות בועות בקצה תחת מיקרוסקופ לנתיחה (> 60 x הגדלה).
  9. למקם את האלקטרודה גירוי שנבדקו טונגסטן בידודי אפוקסי בעל מניפולטור, ההפניה חוטים בבית הבליעה פרוסה.
  10. להוסיף על אלקטרודה ההפניה השנייה לתא וחבר אותו שקע הפניה של headstage של האלקטרודה הקלטה (איור 4א).
  11. בתוכנת שליטה של מגבר, לחץ על התיבה "מצב אפס קלאמפ" והמשך בלחיצה פעמיים על תיבת "פלט ירוויח רשימה". לבחור רווח של "100", פעמיים "גבוהה עוברים סינון תיבת הרשימה (Bessel)," לבחור '0.1 הרץ', ולחץ פעמיים על "יעברו סינון תיבת הרשימה (AC)" לבחור "3 kHz."
  12. בתוכנת הצריבה, לחץ על "רכוש | פתח פרוטוקול". בחר פרוטוקול הגדרות המאפשרות stimulations אפיזודי ותפעיל דיגיטיזציה של פוטנציאל מוגבר ב- 10-20 קילוהרץ ב 50-100 ms וזה אוטומטית isolator גירוי של 10 ms לאחר תחילת הקלטת אפיזודי.
  13. מניחים את גירוי ואלקטרודות הקלטה בתור, במקביל pyramidale הרובד, למשל (איור 4B ואיור 5).
  14. לחץ על "לרכוש | עריכת פרוטוקול", בחר בכרטיסייה"טריגר"(בחלון המוקפץ). לחץ על תיבת "מקור על ההדק", בחרו "שטח בר" כמקור על ההדק. לחץ על הלחצן "אישור". לחץ על לחצן "שיא" כדי להתחיל את רכישת הערה החלון המוקפץ עם כפתור על ההדק.
  15. תוכנה isolator הגירוי, לחץ על התיבה "בקרת מתח" והזן "0". לחץ על לחצן 'הורד'. לחץ על חלון "רישום תוכנה", הקש על מקש הרווח. חזור על מחזור זה על-ידי ברצף הזנת ערכים בין 1 ל- 8, לדוגמה, ב 1 שלבים mV בתיבת "בקרת מתח".
  16. לתאם את עוצמת גירוי עם ערכי השיפוע-fEPSP, לקבוע את עוצמת גירוי הנדרש כדי להביא 40% של המדרון-fEPSP המרבי. לחץ על "תיבת בקרת מתח" והזן את הערך שנקבע. לחץ על לחצן 'הורד'.
    הערה: isolator גירוי משמש להחלת מתח קצר או פולסים הנוכחי על רקמת המוח. הפולסים biphasic יכול להיות µs 100 לכל שלב.
  17. תוכנת הצריבה, לחץ על הלחצן ' עצור ', ולאחר מכן בתפריט "רכוש". לחץ על "עריכת פרוטוקול", בחר בכרטיסייה "טריגר" בחלון המוקפץ. לחץ על תיבת מקור על ההדק, בחרה "טיימר פנימי" כמקור על ההדק. לחץ על הלחצן "אישור". לחץ על לחצן הרשומה שמתחיל הקלטה אוטומטית של שדה פוטנציאל בכל 30 s, לדוגמה. לחץ על כפתור "עצור" לאחר 30-60 דקות.
  18. לחץ על תפריט "לרכוש", לחץ על "פרוטוקול פתוח", בחר בפרוטוקול הרצוי אינדוקציה של פלסטיות סינפטית, ולחץ על הלחצן "אישור". לחץ על לחצן "הקלט" הפעלה אוטומטית להקלטה ולניתוח בתדירות גבוהה. לחץ על כפתור "עצור".
    הערה: במקרה של מחקרים הנוגעים פלסטיות סינפטית, להחיל אחד של פרדיגמות אינדוקציה סטנדרטי הויסעגט או דיכאון לטווח ארוך לאחר הקלטה בסיסית ממושך. דוגמאות מייצגות של אפנון וכתוצאה מכך ההעברה הסינפטית מתוארים איור 7 , איור 8.
  19. תוכנת הצריבה, לחץ על "רכוש | לפתוח את פרוטוקול"ובחרו באותו הפרוטוקול כמו שלב 4.12. לחץ על הלחצן "אישור" ולאחר מכן לחץ על "שיא". השאר באופן אוטומטי פועל ההקלטות שדה פוטנציאלי עבור h 2-4, לדוגמה. לחץ על לחצן "stop" כדי לסיים את ההקלטה.
  20. במקרה של לימודי רוקחות, להחיל את המתחם ישירות על כלנית חדד מאגר אם קבע המינהל מתחם הרצוי (איור 6).

5. ניקוי את ההתקנה ורמזים

הערה: ראה להלן עצות כלליות.

  1. לנקות המערכת שבועית על-ידי מיחזור 10% H2O2 עבור לא יותר מ- 20 דקות, ואחריו כביסה עם יונים H2O.
    הערה: אתנול לא מומלץ לניקוי. כמו כן לא מומלץ לטבול את החוטים הפניה ואת המטרה H2O2.
  2. הסר זירז מלח על פני העדשה המטרה או הסביבה קאמרית עם 0.1 N HCl ולאחר מכן מים.
  3. לשטוף את bubbler carbogen מים מזוקקים או 0.1 N HCl.
  4. לטבול תא הדגירה פרוסה ב 10% H2O2 עבור 5 דקות פעם בשבוע, ואז לשטוף ביסודיות את התא הדגירה עם יונים H2O.
  5. במקרה של גירוי מתכת אלקטרודות, לשטוף את הטיפ אלקטרודה מגרה עם מים יונים לאחר ניסוי, נגב בעדינות את קצה האלקטרודה מגרה עם כדור צמר גפן טבול עם אתנול הרקמה שיורית.
  6. להקטין את ההתנגדות של גירוי מתכת מסחרית אלקטרודות על-ידי הסרת הבידוד בקצה דרך לסחוב זהיר עם נייר זכוכית.
  7. להפחית את אובדן carbogen מ חנה המבר תוך מיחזור דרך הצינורות על-ידי החלפת צינורות סיליקון עם צינורות טפלון.
  8. שמור את החוטים כסף של הקלטה אלקטרודה, הפניה אלקטרודה אקונומיקה במשך מספר ימים לטופס AgCl על פני תיל.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במקטע פרוטוקול, אנחנו תיאר את הכנת חריפה פרוסות בהיפוקמפוס מהחלק הבטני, ביניים של היווצרות בהיפוקמפוס (איור 1) זכר C57BL/6 עכברים וחולדות זכר Wistar (5-8 שבועות). המיקום של ההמיספרות על פלטפורמת מבצעה עוזר לשמור עליהם יציב, מסיר את הצורך של ייצוב עם אגר או agarose. זלוף עצמה מבוססת על משאבה סחרור המופעל על סיבוב גבוהה לתת קצב הזרימה הנדרש של הנוזל. לפיכך, הזדקנות מהירה של צינורות רגילים בתוך המשאבה יצר בעיה מהותית, כי התגברנו באמצעות צינורות שאינם צורן (ID: 1...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למרות ממשק פרוסה צ'יימברס התערוכה עמידים יותר תגובות סינפטית25,26,27,28, ועלייתו צ'יימברס לספק נוחות נוסף עבור תיקון-קלאמפ הקלטה של קרינה פלואורסצנטית הדמיה. לפיכך, שתיארנו מספר היבטים של הקלטות שדה פוטנציאל בפרוסות בהיפוקמפוס חריפה באמצעות תא פרוסה ועלייתו מסחרי זה ניתן להרחיב בקלות ההדמיה של הגששים פלורסצנטיות נוירונים17,18,

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים כי המחקר בוצע בהיעדר יחסים מסחריים או פיננסי שיכול להחשב בתור ניגוד אינטרסים פוטנציאליים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

וו. וו שנערך, ניתח, עיצב את הניסויים, כתב היד. D.X. סי בסיוע בהכנה איור, ערכו הניסויים. עבודה זו נתמכה על ידי NSFC (31320103906) ופרוייקט 111 (B16013) מתה משחפת

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<ריאגנטים חזקים>ריאגנטים נדרשים
NaClמגיב כימי סינופארם, סין10019318
מגיב כימי KClסינופארם, סין10016318
KH2PO4Sinopharm Chemical Reagent, סין10017618
MgCl2 · 6H2Oמגיב כימי סינופארם, סין10012818
CaCl2Sinopharm מגיב כימי, סין10005861
NaHCO3Sinopharm מגיב כימי, סין10018960
גלוקוזסינופארם, סין10010518
NaH2 PO4Sinopharm מגיב כימי, סין20040718
HEPESSigmaH3375
נתרן פירובטסיגמאA4043
MgSO4Sinopharm מגיב כימי, סין20025118
NaOHSinopharm מגיב כימי, סין10019718
<חזקים>כלים וחומרים לדיסקציה< / חזק>
עורפי ראשיםמכשיר הרווארד55-0012לעריפת ראש חולדה
מספריים תחבושתSCHREIBER12-4227לעריפת ראש עכבר
להב קצה כפולנשר מעופף, סין74-C
מספריים איריסRWD, סיןS12003-09
Bone RongeursRWD, סיןS22002-14
כפיתHammacher HSN 152-13
מרית צמנט דנטליHammacher HSN 016-15
מחפר שיניים כפול קצהנפח כירורגי, ארה"בBS-415-017
רוטט מיקרוטוםלייקה, גרמניהVT1200S
להב כירורגי RWD, סיןS31023-02
מחזיק כירורגיRWD, סיןS32007-14
<חזק>אלקטרופיזיולוגיה ציוד וחומרים
אנכי חולץ פיפטהNarishige, יפןPC-10
שולחן בידוד רעידותMeirits, יפןADZ-A0806
הקלטה מסוג שקוע chamberWarner InstrumentsRC-26GLP
4 צירים מיקרומניפולטורסאטר, ארה"בMP-285, MP-225
חוט פלטינהWorld Precision InstrumentsPTP406
מגברהתקנים מולקולריים, ארה"בMulticlamp 700B
מערכת רכישת נתוניםהתקנים מולקולריים, ארה"בDigidata 1440A
Anaysis תוכנהמכשירים מולקולריים, ארה"בClampex 10.2
מיקרוסקופ פלואורסצנטיניקון, יפןFN1
מקור אור LEDLumen Dynamics Group, קנדהX-cite 120LED
מיקרופיפטותהרווארד מכשירGC150TFהקלטה חוץ-תאית
בורוסיליקט מיקרופיפטותסאטר, ארה"בBF150-86מהדק תיקון
אלקטרודה טונגסטןA-M Systems, ארה"ב575500
משאבה פריסטלטיתארוכה יותר, סיןBT00-300T
צינורות למשאבה פריסטלטיתISMATEC, ורטהיים, גרמניהSC03091x זרימה, מזהה: צינורות 1.02 מ"מ
למשאבה פריסטלטיתISMATEC, ורטהיים, גרמניהSC03192x צינורות ליציאה, מזהה: 2.79 מ"מ
מצלמת CCDPCO, גרמניהpco.edge sCMOS
עדשה ניקוי ניירקודאק
50 מ"ל צינור צנטריפוגה חרוטיתרמו מדעי339652
Prechamberוורנר אינסטרומנטסBSC-PC
תנור חימום מוטבעוורנר אינסטרומנטסSF-28
בקר טמפרטורהוורנר אינסטרומנטסTC-324B
מגיב כימי

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McIlwain, H. Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain. Biochem J. 48 (4), (1951).
  2. McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. Responses in vitro from the piriform cortex of the rat, and their susceptibility to centrally-acting drugs. J Neurochem. 14 (9), 937-938 (1967).
  3. Yamamoto, C., McIlwain, H. Electrical activities in thin sections from the mammalian brain maintained in chemically-defined media in vitro. J Neurochem. 13 (12), 1333-1343 (1966).
  4. Andersen, P., Bliss, T. V., Lomo, T., Olsen, L. I., Skrede, K. K. Lamellar organization of hippocampal excitatory pathways. Acta Physiol Scand. 76 (1), 4-5 (1969).
  5. Skrede, K. K., Westgaard, R. H. The transverse hippocampal slice: a well-defined cortical structure maintained in vitro. Brain Res. 35 (2), 589-593 (1971).
  6. Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. Slices have more synapses than perfusion-fixed hippocampus from both young and mature rats. J Neurosci. 19 (8), 2876-2886 (1999).
  7. Schwartzkroin, P. A. Characteristics of CA1 neurons recorded intracellularly in the hippocampal in vitro slice preparation. Brain Res. 85 (3), 423-436 (1975).
  8. Schwartzkroin, P. A., Wester, K. Long-lasting facilitation of a synaptic potential following tetanization in the in vitro hippocampal slice. Brain Res. 89 (1), 107-119 (1975).
  9. Reymann, K. G., Frey, J. U. The late maintenance of hippocampal LTP: requirements, phases, 'synaptic tagging', 'late-associativity' and implications. Neuropharm. 52 (1), 24-40 (2007).
  10. Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. Synaptic plasticity in health and disease: introduction and overview. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 369 (1633), 20130129(2014).
  11. Bliss, T. V., Gardner-Medwin, A. R. Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the unanaestetized rabbit following stimulation of the perforant path. J Physiol. 232 (2), 357-374 (1973).
  12. Reid, K. H., Edmonds, H. L., Schurr, A., Tseng, M. T., West, C. A. Pitfalls in the Use of Brain-Slices. Prog Neurobiol. 31 (1), 1-18 (1988).
  13. Rambani, K., Vukasinovic, J., Glezer, A., Potter, S. M. Culturing thick brain slices: an interstitial 3D microperfusion system for enhanced viability. J Neurosci Methods. 180 (2), 243-254 (2009).
  14. Hajos, N., et al. Maintaining network activity in submerged hippocampal slices: importance of oxygen supply. Eur J Neurosci. 29 (2), 319-327 (2009).
  15. Redondo, R. L., et al. Synaptic tagging and capture: differential role of distinct calcium/calmodulin kinases in protein synthesis-dependent long-term potentiation. J Neurosci. 30 (14), 4981-4989 (2010).
  16. Stopps, M., et al. Design and application of a novel brain slice system that permits independent electrophysiological recordings from multiple slices. J Neurosci Methods. 132 (2), 137-148 (2004).
  17. Behnisch, T., Matsushita, S., Knopfel, T. Imaging of gene expression during long-term potentiation. Neuroreport. 15 (13), 2039-2043 (2004).
  18. Karpova, A., et al. Encoding and transducing the synaptic or extrasynaptic origin of NMDA receptor signals to the nucleus. Cell. 152 (5), 1119-1133 (2013).
  19. Karpova, A., Mikhaylova, M., Thomas, U., Knopfel, T., Behnisch, T. Involvement of protein synthesis and degradation in long-term potentiation of Schaffer collateral CA1 synapses. J Neurosci. 26 (18), 4949-4955 (2006).
  20. Weng, W., Chen, Y., Wang, M., Zhuang, Y., Behnisch, T. Potentiation of Schaffer-Collateral CA1 Synaptic Transmission by eEF2K and p38 MAPK Mediated Mechanisms. Front Cell Neurosci. 10 (247), (2016).
  21. Meduna, L. J., Jackman, A. I. Carbon dioxide inhalation therapy. Res Publ Assoc Res Nerv Ment Dis. 31, 280-286 (1953).
  22. Edwards, F. A., Konnerth, A., Sakmann, B., Takahashi, T. A thin slice preparation for patch clamp recordings from neurones of the mammalian central nervous system. Pflugers Arch. 414 (5), 600-612 (1989).
  23. Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology. J Vis Exp. (49), (2011).
  24. Yuanxiang, P., Bera, S., Karpova, A., Kreutz, M. R., Mikhaylova, M. Isolation of CA1 nuclear enriched fractions from hippocampal slices to study activity-dependent nuclear import of synapto-nuclear messenger proteins. J Vis Exp. (90), e51310(2014).
  25. Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats. J Neurosci Meth. 130 (1), 19-32 (2003).
  26. Kloosterman, F., Peloquin, P., Leung, L. S. Apical and basal orthodromic population spikes in hippocampal CA1 in vivo show different origins and patterns of propagation. J Neurophysiol. 86 (5), 2435-2444 (2001).
  27. Thiemann, W., Malisch, R., Reymann, K. G. A new microcirculation chamber for inexpensive long-term investigations of nervous tissue in vitro. Brain Res Bull. 17 (1), 1-4 (1986).
  28. Shetty, M. S., et al. Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents. J Vis Exp. (103), (2015).
  29. Du, H., Lin, J., Zuercher, C. Higher efficiency of CO2 injection into seawater by a venturi than a conventional diffuser system. Bioresour Technol. 107, 131-134 (2012).
  30. Weinman, J., Mahler, J. An Analysis of Electrical Properties of Metal Electrodes. Med Electron Biol Eng. 2, 299-310 (1964).
  31. Fanselow, M. S., Dong, H. W. Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures. Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).
  32. Wang, M., et al. Translation of BDNF-gene transcripts with short 3' UTR in hippocampal CA1 neurons improves memory formation and enhances synaptic plasticity-relevant signaling pathways. Neurobiol Learn Mem. , (2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

ACSF

מאמרים קשורים