פרוטוקול להקמת מודל עכבר מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס על ידי זיהום adeno-cre קטע ו מעקב שלה באמצעות קולונוסקופיה ברזולוציה גבוהה מוצג.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
למרות היתרונות של תחולת קל ויעילות עלות, מודלים של סרטן המעי הגס המעי הגס המבוססים על הזרקת תאים סרטניים יש מגבלות חמורות ולא מדויק המדמה גידול ביולוגיה גידול תאים סרטניים. מודלים עכבר מהונדסים גנטית הוכנסו כדי להתגבר על מגבלות אלה; עם זאת, מודלים כאלה דורשים מבחינה טכנית, במיוחד באיברים גדולים כגון המעי הגס שבו רק גידול אחד הוא הרצוי.
כתוצאה מכך, פותח מודל עכבר מהונדס גנטית, מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס, אשר מפתחת גידולים אחידים מאוד וניתן להשתמש בו ללימודי ביולוגיה של הגידול, כמו גם ניסויים טיפוליים. פיתוח הגידול הוא יזמה על ידי זיהום כירורגי, מקטעי של המעי הגס דיסטלי עם וירוס adeno-cre בעכברים מוטציה מותנה מותנה. גידולים ניתן לזהות בקלות ובקרה באמצעות קולונוסקופיה. אנו מתארים כאן את הטכניקה הכירורגית של זיהום אדגנו-קריטיאת המעי הגס, את מעקב אחר הגידול באמצעות קולונוסקופיה ברזולוציה גבוהה ולהציג את גידולים המעי הגס וכתוצאה מכך.
מבוא
סרטן המעי הגס (CRC) ממשיך להיות אחד הגורמים המובילים למוות הקשור לסרטן במדינות המערב. 1 בעוד שהפרוגנוזה של מטופלים בשלב מוקדם של המחלה טובה, גידולים רבים מאובחנים בשלבים מאוחרים יותר, שלמרות אפשרויות הטיפול הרבות, הפרוגנוזה מוגבלת. 2 , 3 , 4 , 5
רוב המודלים עכבר הנוכחי של CRC מבוססים על ההשתלה של תאים סרטניים נגזר שורות תאים או גידולים החולה לעכברים immunodeficient. 6 , 7 , 8 זה מוביל המקומי, בהתאם לאתר ההזרקה ואת תאים סרטניים המשמשים להזרקת, לפעמים גידולים גרורתי. 9 , 10 עם זאת, מודלים xenograft וכתוצאה מכך יש majoR מגבלות. הם חייבים להיות הוקמה בעכברים immunodeficient, ובכך לחסל את האינטראקציה המורכבת בין הגידול לבין המערכת החיסונית המארחת. בנוסף, כמו stroma הגידול נגזר תאים המארח, האינטראקציה בין parenchyma הגידול האנושי stroma הגידול הוא פגום ולכן לא נציג של המחלה. ליקויים אלה ניתן להימנע על ידי שימוש שורות תאים Murine עבור הזרקת. עם זאת, רק כמה תאים Murine תא CRC זמינים, בדומה לקווים התא האנושי CRC ביותר זמינים, הם חד שבטיים ו anaplastic. 11 לסיכום, רוב הדגמים עכבר CRC זמין כיום הם מלאכותיים מאוד ולא נציג מלא של המחלה האנושית.
מודלים עכבר מהונדסים גנטית (GEMM) של CRC יכולים למנוע את החסרונות הללו כאשר הם מכילים גידולי עכבר אמיתיים אשר נוצרים באמצעות אינדוקציה של מוטציות מפתח של CRC במעי הגס. 12 , 13 ,14 זה יכול להיות מושגת על ידי הפעלת מוטציות גרמלין מותנה (floxed) germline ידי recombinase cre בתוך רירית המעי הגס. בעוד GEMMs של גופים רבים אחרים של הגידול germline (inducible) ביטוי ביטוי מונע על ידי מקדמי רקמה ספציפי משמש, germline cre לא ניתן להשתמש במעי הגס כמו זה מוביל למספר רב של אדנומות ברחבי המעי הגס גרימת מוות על ידי עומס הגידול שפיר ב גיל צעיר מאוד. לכן, במודל המתואר כאן וקטור adenoviral להביע Cre משמש להדביק קטע המעי הגס קצר. זה מוביל את אינדוקציה של tumorigenesis בתוך קטע זה של רירית בנקודת זמן שהוגדר על ידי החוקר, וכתוצאה מכך אדנומות בסופו של דבר מתקדמים קרצינומה פולשנית וגרורות. הגידולים הם גידולים אמיתיים של העכבר, לגדול microenvironment שלם ולכן הם מסוגלים לדמות את מכלול של oncogenesis המעי הגס כולל אינטראקציה המארח הגידול ואת מפל גרורתי. מודל זה הואולכן פלטפורמה אטרקטיבית למחקרים על ביולוגיה של סרטן ומחקרים פרה-קליניים.
החסרון העיקרי של מודלים עכבר מהונדסים גנטית של CRC הוא המורכבות הטכנית שלהם. לידה מקומית באמצעות חוקנים אדקטו-קיציים בעכברים שנשאו אללים של Apc מתפוררים תוארה בעבר; עם זאת, שכיחות, ריבוי ומיקום של גידולים המעי יכול להיות משתנה מאוד עם טכניקה זו. 15 לכן, הטכניקה של הגבלת זיהום adeno-cre ידי הידוק כירורגית של קטע להיות המושרה פותחה. 13 שינינו את הנוהל הזה כדי לשפר את רווחת בעלי החיים, כמו גם להפחית את התמותה ואת מספר הגידולים שהתקבלו. עם פרוטוקול זה, כל המעבדות עם ניסיון ניתוח מכרסמים קטנים צריכים להיות מסוגלים לשכפל את המודל לייצר גידולים אשר לשחזור מאוד נגיש בקלות קולונוסקופיה. בהתאם מ מותנהUtations המשמשים tumorigenesis, הספקטרום המלא של אדנומה, קרצינומה פולשנית וגרורות ניתן לראות. כמו גידולים ממוקמים המעי הגס דיסטלי, הערכה אנדוסקופית טורית הוא אפשרי בקלות במודל זה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
ניסויים בבעלי חיים שהוצגו כאן נבדקו ואושרו באופן עצמאי על ידי גוף מוסדי וועדת טיפול בבעלי חיים ושימוש בבעלי חיים ונערכו על פי הנחיות הפדרציה של מעבדות מדענים בבעלי חיים (FELASA). כל האמצעים האפשריים נלקחו כדי למזער את הסבל כולל הרדמה משכך כאבים או, אם יש צורך, המתת חסד מוקדמת.
1. אינדוקציה מקומית הגידול באמצעות זיהום כירורגי Adeno-Cre
- הכנת בעלי חיים לניתוח
הערה: כמעט כל מותנה ("floxed") מוטציה יכול להיות המושרה באמצעות השיטה המתוארת כאן. מומלץ להשתמש במוטציות בגנים הרלוונטיים לסרטן המעי הגס, כגון Apc, Kras או Tp53. היעילות של רקומבינציה CR תלוי בגודל של המבנה להיות נכרת. רצפים גדולים floxed הם נכרת פחות יעיל. רקומבינציה של כל אללים צריך להיות מאושרים על ידי גידולים PCר- לצורך פיתוח של גידולי המעי הגס, השתמש בחצות של אללים מותנים עבור מודל בסיסי של CRC (מספר מסד נתונים MGI בסוגריים):
Apc tm2Rak (MGI: 3688435) 16
Kras tm4Tyj (MGI: 2429948) 17
Tp53 tm2Tyj (MGI: 3039263) 18 - אם אלל כתב פלואורסצנטי נדרש ( למשל , כדי לזהות micrometastases), השתמש האלל הבא:
Gt (ROSA) 26Sor tm6 (CAG-ZsGreen1) Hze (MGI: 3809522) 19
הערה: כל הזנים לעיל זמינים באמצעות מאגר העכבר NCI או מעבדה ג 'קסון. אין צורך בצום כמו כל החומר הנותר צואה ניתן סומק לפני זיהום אדנוביראלי. צום לפני הניתוח מוביל לתמותה perioperative גבוה ומהווה לחץ עצום עבור מכרסמים קטנים. - השתמש sevoflurane ב 3 - 3.5% כרך עבור הרדמה כללית. הפסד של tהוא קמצוץ רפסלקס מציין הרדמה מספקת.
- לפני החתך הראשון, להזריק 0.05 מ"ג / ק"ג של בופרנורפין תת עורי.
- לכסות את העיניים של העכבר הרדים עם משחה עיניים כדי למנוע התייבשות של הקרנית.
- מניחים את העכבר במצב שכיבה על שולחן קטן. השתמש קלטות דבק שאינם טראומטיים כדי לרסן את העכבר.
- לגלח את הבטן עם מכונת גילוח חשמלית (קרם דפילציה ניתן להשתמש לחילופין) ולחטא עם אלכוהול swabs או יוד. השתמש בזמן המגע המומלץ על ידי היצרן.
- לכסות את שדה כירורגי עם וילונות סטריליים.
הערה: השימוש באנטיביוטיקה perioperative הוא אופציונלי ובכפוף להנחיות מוסדיות. - השתמש סטרילי לשימוש יחיד או מכשירים מעוקרים עבור כל הליכים כירורגיים.
- לצורך פיתוח של גידולי המעי הגס, השתמש בחצות של אללים מותנים עבור מודל בסיסי של CRC (מספר מסד נתונים MGI בסוגריים):
- Laparotomy midline וחשיפה של המעי הגס
- השתמש במספריים (אזמלים ניתן להשתמש לחילופין) לעשות חתך קו האמצע(~ 15 מ"מ) של העור על הבטן התחתונה.
- להרים את שרירי דופן דופן הבטן עם מלקחיים בזהירות לחתוך אותו במספריים, ובכך לפתוח את חלל הבטן.
- זהה את המעי הגס דיסטלי, רק לגעת בו עם מלקחיים atraumatic. מהדק את המעי הגס עם מהדק עדין ( למשל , מיקרו סרפינה כלי דם מהדק) כ 15 מ"מ פרוקסימלי של פי הטבעת.
הערה: תן תשומת לב מיוחדת הפגיעות של המעי הגס בכל עת. ניקוב מוביל בהכרח דלקת הצפק ואת אלח דם ודורש המתת חסד של החיה.
- זיהום המעי הגס עם וירוס Adeno-cre
- הכנס צינור טפלון גמיש transanally בקפידה לקדם אותו עד שהוא מגיע לחסימת לומן מושגת על ידי מהדק שהוצב בעבר ב 15 מ"מ מן השוליים אנאלי. אין להשתמש בכוח מופרז כמו זה עלול להוביל ניקוב.
- Cannulate את הצינור עם צינורית 30G, לחבר מזרק רגיל 1 מ"ל ולשטוף את קולוN עם מלוחים רגילים על מנת לפנות את החומר הצואה הנותר. זה עשוי לדרוש כמה מ"ל של תמיסת מלח.
- לאחר המעי הגס דיסטלי ריק להסיר את הצינור ולהחליף אותו עם צינור טפלון טרי ושוב למקם אותו דיסטלי ישירות על מהדק כמתואר לעיל.
- לחסום את המעי הגס עם מהדק השני ~ 3 מ"מ דיסטלי כדי מהדק הפרוקסימלי ( כלומר , מעל צינור מוכנס, ~ 12 מ"מ מן השוליים אנאלי), וכתוצאה מכך קטע מבודד 3 מ"מ להיות נגועים.
הערה: עבור חסימה דיסטלי של קטע Fogarty מחלת עורקים הכליליים הוכיחו המתאים ביותר כפי שהם rubberized, המוביל חסימה הדוק של המעי הגס למרות צינור intraluminal בין הענפים של מהדק. - השתמש מזרק השני (1 מ"ל רגיל עם צינורית 30G) בזהירות להזריק 50 - 80 μL של 0.25% טריפסין- EDTA לתוך קטע המעי הגס clamped ו דגירה של 10 דקות. השאירו את הצינורית ואת המזרק מחובר לצינור טפלון כדי למנוע את הנוזל דולף בחזרה.
הערה: המעי הגס חייב להיות מנופח כדי לשבור את מחסום הרירית להגיע לתאי גזע crypt, אך לא מנופח מדי כדי למנוע ניקוב של קטע clamped. - ראשית להסיר את מהדק דיסטלי, ולאחר מכן את צינור טריפסין.
- שטוף את המעי הגס דיסטלי עם μL 500 ~ של מלוחים רגילים להסיר טריפסין הנותרים.
- הכנס צינור טפלון חדש, לשים את מהדק דיסטלי בחזרה במקום לנפח את קטע המעי הגס עם 50 - 80 μL של פתרון אדנובירל (10 11 יחידות רובד להרכיב (PFU) / מ"ל ב מלוחים זרחן מלוחים) ו דגירה של 30 דקות ( איור 2 א ).
הערה: אין לשפוך פתרון ויראלי כמו מגע עם adeno-cre עשוי להוביל להתפתחות הגידול בכל רקמה של עכברים מוטציה מותנית. - הסר את מהדקי ואת הצינור.
- סגירת הבטן והתאוששות לאחר הניתוח
- סגור את דופן הבטן עם 6-0 במהירות absorbable su( למשל , polydioxanone (PDS)).
- סגור את העור עם קליפ הפצע כירורגי.
- מניחים את העכבר על כרית חימום להגדיר 38 מעלות צלזיוס עד שהוא התאושש לחלוטין מן ההרדמה.
- ניהול עוד בולוס של 0.05 מ"ג / ק"ג IP buprenorphine 12 שעות לאחר הניתוח, ואחריו בולוסים נוספים של בופרנורפין כל 12 שעות אם יש צורך.
- לפקח על העכברים לפחות פעם אחת ביום עבור סימנים של מצוקה בשל הגידול בגידול.
2. קולונוסקופיה
הערה: בהתאם למוטציות מותנות בשימוש, זיהום adenoviral מוביל לגידולים נראים אנדוסקופיים בתוך 2 - 4 שבועות. לכן, בצע את קולונוסקופיה לאחר הניתוח הראשון 2 שבועות לאחר האינדוקציה adenoviral לחזור כל שבועיים. מערכת זמינה מסחרית מומלץ קולונוסקופיה Murine. 20
- הכנת בעלי חיים לקולונוסקופיה
הערה: אין צורך בצוםEd. החומר הצואה הנותר הוא בדרך כלל טוב בצורת המעי הגס דיסטלי ניתן לדחוף מעבר לגידול במהלך קולונוסקופיה, ובכך להפוך את תהליך מלחיץ של צום חוזר מיותר.- השתמש sevoflurane ב 3 - 3.5% כרך עבור הרדמה כללית. אובדן רפלקס קמצוץ הבוהן מעיד על הרדמה מספקת.
- לכסות את העיניים של עכברים הרדים עם משחה עיניים כדי למנוע התייבשות של הקרנית.
- לרסן את העכברים במצב שכיבה על שולחן קטן.
- קולונוסקופיה
- הכנס את היקף (קוטר 1.9 מ"מ, אורך 10 ס"מ) לתוך מערכת העיכול דרך פי הטבעת בזהירות האוויר לדפוק תחת שליטה חזותית כדי להקטין את המעי הגס. אין לדחוס יותר אוויר מאשר נדרש לבדיקה.
הערה: לאינפוזיה של האוויר, ניתן להשתמש במשאבת אוויר נגד ערפל של מערכת קולונוסקופיה. אם אין משאבת אוויר אנטי ערפל זמין, כל משאבת אוויר אחרת עם הגדרות לחץ נמוך מאוד ניתן להשתמש, או מראשאוויר סנסורי עם שסתום עדין להורדת לחץ. פחמן דו חמצני (CO 2 ) בקלות מוביל acidosis במכרסמים קטנים ולכן יש להימנע. - בזהירות לדחוף את היקף קדימה עד הנגע רירית המעי הגס הדיסטלי ניתן לזהות ( איור 1A - 1D ).
- שמור תמונות אנדוסקופיות להערכה מאוחר יותר. מערכת ניקוב אנדוסקופית עבור גידולים תוך-פנימיים תוארה בעבר. 20
- בזהירות להסיר את היקף ומקום העכבר על כרית חימום להגדיר ל 38 מעלות צלזיוס עד שהוא התאושש לחלוטין מן ההרדמה.
- הכנס את היקף (קוטר 1.9 מ"מ, אורך 10 ס"מ) לתוך מערכת העיכול דרך פי הטבעת בזהירות האוויר לדפוק תחת שליטה חזותית כדי להקטין את המעי הגס. אין לדחוס יותר אוויר מאשר נדרש לבדיקה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
אם מתבצע כראוי,> 85% מהחיות לפתח גידולים. התמותה של הניתוח המוצג כאן הוא <5%, התמותה של קולונוסקופיה הוא כמעט לא קיים. ברוב העכברים, נגע בודד מזוהה; ב 30% - 2 - 3 אדנומות קטנות ניתן לזהות אשר בדרך כלל נתיך לגידול אחד בתוך 2-3 שבועות לאחר אינדוקציה הגידול.
הפנוטיפ וההתנהגות הביולוגית של הגידולים המתקבלים תלויים מאוד במוטציות המותנות של החיות. ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בעוד הם בדרך כלל קל ליצור ולתחזק, מודלים קלאסיים עכבר CRC מבוסס על הזרקת קו התא הם מלאכותיים ולא מסוגלים לשחזר באופן מלא את המחלה האנושית. כתוצאה מכך, GEMMs פותחו. ה- CRC GEMM הראשון היה עכבר ה- Apc Min , המוטבע במוטציה מוטורית הטרוזיגוטית בגן ה- Apc, ולכן מחקה את המחלה ההומאנית האנושית המשפחתית (FAP). עם זאת, עכברים Apc מיני תמיד לפתח אדנומות מעיים מרובים לא מוגבל המעי הגס; כמו כן, הזמן והמיקום המדויק של היווצרות אדנומה היא אקראית הגידולים לעתים נדירות להתפת...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לגלות.
תודות
עבודה זו מוקדשת לזכרו של פרופ 'מוריץ קוך.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>ריאגנטים / חומרים מתכלים | |||
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | Life Technologies GmbH | 14190169 | |
| Trypsin-EDTA (0.25%, פנול-אדום) | Life Technologies GmbH | 25200072 | |
| תמיסת מלח רגילה 0.9% (E154) | Serumwerk Bernburg AG | 10013 | |
| Aqua ad injectabilia | B. Braun Melsungen AG | 235144 | |
| Ad5CMV-Cre (adenovirus, c = 2E+11 PFU/mL) | Gene Transfer Vector Core אוניברסיטת איווה | ||
| 15 מ"ל, 50 מ"ל צינורות צנטריפוגה | Greiner Bio-One GmbH | 188271/227270 | |
| צינורות Eppendorf 1.5 מ"ל/2 מ"ל | Sarstedt AG & Co. | 72,695,400 | |
| צלחת פטרי PS 100/15 מ"מ (סטרילי, Nuclon) | מזרק Fisher Scientific GmbH | 10508921/ NUNC150350 | |
| 1 מ"ל (ללא נפח מת) - Injekt-F SOLO | Braun/neoLab | 194291661 | |
| מחט הזרקה 30G | BECTON DICKINSON | 304000 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| >Analgesia / anesthesia | |||
| Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie) | AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Medical | ||
| oxygen | Air Liquide Medical GmbH-Buprenorphine | ||
| (Temgesic) | Indivior Eu Ltd. | - | |
| Bepanthen - משחת עיניים | Bayer Vital GmbH | 10047757 | |
| מכונת הרדמה מחקר שולחני x/O2 שטיפה w/ Sevoflurane Vaporizer | Parkland Scientific | V3000PS/PK | |
| strong>Name | Company | Catalog Number | Comments |
| <ציוד כירורגי חזק> | |||
| ספוגיות תאית | Lohmann & Rauscher Deutschland | 13356 | |
| מזרק אינסולין EMG 1 מ"ל (עם צינורית 30G) | B. Braun Melsungen AG | 9161627S | |
| צינורות קדח עדין (קדח: 0.28 מ"מ / קוטר: 0.61 מ"מ) | Smiths Medical Deutschland | 800/100/100 | |
| Micro-Adson | Forceps Fine Science | Tools 11018-12 | |
| מספריים איריס - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| מחזיק מחט Olsen-Hegar | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| ערכת AutoClip | כלי מדע עדינים | 12020-00 | |
| PDS Z1012H 6/0 C1 (תפר כירורגי) | Johnson & ג'ונסון מדיקל GmbH | Z1012H | |
| מעוקל מיקרו Serrefine מהדק כלי | דם Fine Science Tools | 18055-05 | |
| Fogarty Spring Clips | Edwards | CDSAFE 6 | |
| Hot Plate 062 | Labotect | 13854 | |
| Isis - מכונת גילוח | לשיער Aesculap - בראון | - | |
| <חזק>שם | <חזק>חברה | >Catalog Number | Comments |
| >Colonoscopy | |||
| Cold Light Fountain XENON 175 SCB | Karl Storz | 20132101-1 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| כבל אור סיבים אופטיים | Karl Storz | 69495NL | Karl Storz Coloview System Mainz |
| TRICAM ראש מצלמה תלת-שבבי | קארל סטורץ | 20221030 | קארל סטורץ קולוview מערכת מיינץ |
| TRICAM SLII יחידת בקרת מצלמה | קארל סטורץ | 20223011-1 | קארל סטורץ Coloview System מיינץ |
| צג מסך שטוח 15 אינץ' EndoVue | Karl Storz | 9415NN | Karl Storz Coloview System Mainz |
| טלסקופ HOPKINS Straight Forward קוטר 1.9 מ"מ; אורך 10 ס"מ העברת אור סיבים אופטיים ניתנת לחיטוי משולבת | Karl Storz | 64301AA | |
| נדן הגנה ובדיקה | Karl Storz | 61029C |
מקורות
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2016. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
- Weitz, J., et al. Colorectal cancer. Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).
- Bork, U., et al. Prognostic relevance of minimal residual disease in colorectal cancer. World J Gastroenterol. 20 (30), 10296-10304 (2014).
- Steinert, G., Schölch, S., Koch, M., Weitz, J. Biology and significance of circulating and disseminated tumour cells in colorectal cancer. Langenbecks Arch Surg. 397 (4), 535-542 (2012).
- García, S. A., et al. LDB1 overexpression is a negative prognostic factor in colorectal cancer. Oncotarget. 7 (51), 84258-84270 (2016).
- van Noort, V., et al. Novel Drug Candidates for the Treatment of Metastatic Colorectal Cancer through Global Inverse Gene-Expression Profiling. Cancer Res. 74 (20), 5690-5699 (2014).
- Nanduri, L. K., García, S., Weitz, J., Schölch, S. Mouse Models of Colorectal Cancer-Derived Circulating Tumor Cells. Med Chem (Los Angeles). 6 (7), 497-499 (2016).
- Taketo, M. M., Edelmann, W. Mouse models of colon cancer. Gastroenterology. 136 (3), 780-798 (2009).
- Schölch, S., et al. Circulating tumor cells exhibit stem cell characteristics in an orthotopic mouse model of colorectal cancer. Oncotarget. 7 (19), 27232-27242 (2016).
- Schölch, S., et al. Radiotherapy combined with TLR7/8 activation induces strong immune responses against gastrointestinal tumors. Oncotarget. 6 (7), 4663-4676 (2015).
- Corbett, T. H., Griswold, D. P., Roberts, B. J., Peckham, J. C., Schabel, F. M. Jr Tumor induction relationships in development of transplantable cancers of the colon in mice for chemotherapy assays, with a note on carcinogen structure. Cancer Res. 35 (9), 2434-2439 (1975).
- Roper, J., Hung, K. E. Priceless GEMMs: genetically engineered mouse models for colorectal cancer drug development. Trends Pharmacol Sci. 33 (8), 449-455 (2012).
- Hung, K. E., et al. Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment. Proc Natl Acad Sci USA. 107 (4), 1565-1570 (2010).
- Sharpless, N. E., Depinho, R. A. The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development. Nat Rev Drug Discov. 5 (9), 741-754 (2006).
- Shibata, H., et al. Rapid colorectal adenoma formation initiated by conditional targeting of the Apc gene. Science. 278 (5335), 120-123 (1997).
- Kuraguchi, M., et al. Adenomatous polyposis coli (APC) is required for normal development of skin and thymus. PLoS Genet. 2 (9), e146(2006).
- Jackson, E. L., et al. Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of oncogenic K-ras. Genes Dev. 15 (24), 3243-3248 (2001).
- Olive, K. P., et al. Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li-Fraumeni syndrome. Cell. 119 (6), 847-860 (2004).
- Madisen, L., et al. A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain. Nature Neurosci. 13 (1), 133-140 (2010).
- Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. High resolution colonoscopy in live mice. Nat Protoc. 1 (6), 2900-2904 (2006).
- Moser, A. R., Pitot, H. C., Dove, W. F. A dominant mutation that predisposes to multiple intestinal neoplasia in the mouse. Science. 247 (4940), 322-324 (1990).
- de Wind, N., Dekker, M., Berns, A., Radman, M., te Riele, H. Inactivation of the mouse Msh2 gene results in mismatch repair deficiency, methylation tolerance, hyperrecombination, and predisposition to cancer. Cell. 82 (2), 321-330 (1995).
- Reitmair, A. H., et al. Spontaneous intestinal carcinomas and skin neoplasms in Msh2-deficient mice. Cancer Res. 56 (16), 3842-3849 (1996).
- Ayala, J. E., et al. Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice. Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).
- Jensen, T. L., Kiersgaard, M. K., Sørensen, D. B., Mikkelsen, L. F. Fasting of mice: a review. Lab Anim. 47 (4), 225-240 (2013).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
