תארנו פרוטוקול לביצוע חלקי hepatectomy (PHx), השתלת תא באמצעות הטחול ב במנוד ראש. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) עכברים. ב פרוטוקול זה, חתך לחשוף ולאחר נכרות האונה השמאלית של הכבד, ואחריו עוד חתך השתלת intrasplenic של תאים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
השתלת intrasplenic של Hepatocytes לאחר Hepatectomy חלקית ב במנוד ראש. SCID עכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
Hepatectomy חלקית היא שיטה לשחזור רב-תכליתי ללמוד התחדשות הכבד ואת השפעת התא מבוסס הרפוי בתנאים פתולוגיים שונים. Hepatectomy חלקית מקלה גם engraftment מוגבר של התפשטות התאים המושתלים על ידי מאיץ כורוידאלית ואת נדידת תאים לכיוון הכבד. כאן, אנו מתארים פרוטוקול פשוט עבור מבצע 30% hepatectomy והשתלת תאי הטחול של שאינו שמנים סוכרת/חמור בשילוב הנד immunodeficient. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) העכבר.
בהליך זה, מתבצעים שני חתכים קטנים. החתך הראשוני היא לחשוף ולאחר נכרות האונה השמאלית של הכבד, והוא חתך קטן אחר עשוי לחשוף את הטחול כבר intrasplenic של תאים. הליך זה אינו דורש כל כישורים מיוחדים, ניתן להשלים אותו תוך 5-7 דקות עם פחות לחץ, כאב, התאוששות מהירה יותר של הישרדות טוב יותר. הראו את השתלת של hepatocytes מבודד של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) המבטאת העכבר (הטרנסגניים C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), כמו גם hepatocyte כמו תאים ממקור אנושי (NeoHep) ב חלקית hepatectomized במנוד ראש. SCID עכברים.
מבוא
כיום, השתלת hepatocyte מוצע כחלופה השתלת איברים כל בטיפול בחולים לאחר הפרעות כבד קשות. הוא האמין כי זה יכול לגשר בין חולים השתלת איברים כל1. בנוסף allogenic hepatocytes2, xenogenic hepatocytes3 ו hepatocytes שמקורם בתאי גזע4 גם נחקר במודלים של בעלי חיים. בהקשר זה, יונת, engraftment הפוטנציאל של התאים המושתלים של הנמען הוא קריטריון חשוב עבור טיפול בתאי מבוסס על כשל של הכבד חריפה (AHF).
עבור חוקרים את השתלת hepatocytes או תאים דמויי hepatocyte5, AHF נוצרת במודל חיה כירורגי6 או תרופתי7 נהלים, ואחריו משתילים תאים. כדי להפוך מודל חיה AHF על ידי ריאגנטים תרופתי, hepatotoxins רבים כגון d-galactosamine8, פרצטמול9, פחמן tetrachloride10, thioacetamide11, Concanavalin A12, ליפופוליסכריד13 , ועוד., היו בשימוש. מתוך רשימה זו, כל ריאגנט יוצר קבוצת תכונות ייחודיות עבור AHF, אך למרבה הצער לא מגיב יחיד מחקה את AHF האנושית. יתר על כן, AHF שנגזרות hepatotoxins אורכת זמן רב, אשר מעמידה חיות תחת מתח כרוני, ויש תוצאות לשחזור קשה להשיג.
מצד שני, ההליך הכירורגי של חלקי hepatectomy (PHx) היא מיומנות התלויים, תוצאות לשחזור קל להשיג לאחר פיתוח הכישורים הנדרשים. כדי לגרום AHF על ידי התערבות כירורגית לבד, נדרשת כריתה של יותר מ 70% של הכבד; עם זאת, פחות ממה hepatectomy 70% עדיין יכול להיות מנוצל כדי ללמוד engraftment והתפשטות של מושתלים תאי הכבד לניתוח יכולת טיפולית שלהם במהלך פגיעה בכבד14. ההשתלה של hepatocytes כבר hepatectomy פוסט שבוצעו דרך ה צפק15, וריד הזנב16, וריד הכבד17או את הטחול18. כיום, וריד הכבד אינפוזיה והשתלות intrasplenic של hepatocytes הן ההליכים מועדף, הם יותר קל להתרבות.
בנייר זה, תארנו הליך של hepatectomy חלקי 30% ב במנוד ראש. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) שבו טוחנות האונה השמאלית של הכבד הוא עכברים. זה ואחריו השתלת hepatocytes העכבר (6/C57BL-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J) לביטוי GFP 0.2 מיליון וכן מקור אנושי NeoHep19 של הטחול. הליך זה מוביל engraftment של התאים המושתלים בכבד. ההליך זה לפחות פולשני, טכניקה כואב מינימלית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
נהלים הוצג פרוטוקול זה אושרו על ידי ועדת אתיקה מוסדית חיה של המכון הלאומי לאימונולוגיה, ניו דלהי. מספר האישור הפניה טורי הוא IAEC #319/13.
הערה: ישנם משאבים מעולה על נהלים כירורגיה כללית20 ופרוטוקולים ספציפיים עבור ניתוח מכרסמים21. אלה עושים את הניתוח בעלי חיים בפעם הראשונה, מומלץ לתרגל בהרחבה ניתוחים על בובות ההפעלה על בעלי חיים.
1. הכנה
- לפני הניסוי, שמור תמיסת מלח סטרילית פוספט buffered (PBS) או מוכן מלוחים.
- להרכיב ערכה ניתוח המכיל מספריים מלקחיים משוננות, רקמות מלקחיים, כותנה, צמר גפן, חוטי ניילון, מחט מיקרו שונים. אוטוקלב ערכת ניתוח. טיפול מיוחד יש לנקוט אם הנהון החיסון-לסיכון. SCID העכבר נכלל בפרוטוקול.
- בצע את ההליך ניסיוני מלאה, משלב הכנת בסוף הניתוח, הביו-הבטיחות מחלקה אני ארון.
- שוקלים הנהון. SCID בעכבר של 6-8 שבועות לפני הניתוח. עכברים במשקל בין 14-18 גרם משמשים במחקר זה.
- לגלח העליון המרכזי, היפוכונדרית אזור הבטן של העכבר הקוצץ שיער. להחיל שיער הסרת קרם אחיד בכל רחבי האזור עם מרית כדי להסיר לחלוטין את השערות החתוך. להסיר את השיער בעדינות בעזרת פיסת צמר גפן סטרילי רטוב אחרי 2-5 דקות.
- הנח את העכבר בתא איזופלוריין ולפתוח את הברז של הגליל חמצן. לשמור על זרימת חמצן בשיעור של 4 L/דקה את אידוי איזופלוריין ב 4% כדי לגרום הרדמה.
- ודא כי העכבר יש כבר מורדם כראוי על ידי הבוהן עדין לצבוט.
- להציב לוח ניתוח בפנים אבטחה בארון. במקום החיה על ניתוח הלוח, כך פונה מעלה, בחלק הבטני של העכבר ואת החלק הקדמי של העכבר ממוקם בתוך אצטרובל האף מחובר את איזופלוריין ואת אספקת החמצן.
- להפחית את אידוי איזופלוריין ל- 2%, לשמור עליו לאורך כל הליך כירורגי.
- לחטא את העור של העכבר ולחטא אותו על ידי מנגב עם ספוג אתנול 70% כותנה סטרילי.
2. ניתוח
-
Hepatectomy חלקית
- לבצע חתך רוחבי של 1 ס מ של העור מתחת החזה, בניצב תהליך מצאתי ואת במקביל בית החזה, בעזרת מספריים הפעלה ישר.
- נפרדים בעדינות את העור המצורפת עם השכבה שריר הבטן בקרבת האזור חרות עם מלקחיים או ניתוח סטרילי כותנה בטעימת טיפים כדי להבחין בין העור לבין שכבת שריר הבטן. משרים את האזור intradermal עם PBS באמצעות צמר גפן סטרילי טיפים כדי להתחמק לייבוש.
- לחשוף את האזור של האונה השמאלית בצורה חלקה על ידי ביצוע חתך רוחבי דרך השכבה הצפק מתחת מצאתי. השתמש בעצות כותנה בטעימת שני לחשוף ולהרים האונה השמאלית של הכבד.
- מקום אחד הטיפים כותנה בצד הבטן של החתך, ולמקם עוד טיפ כותנה בצד הסרעפת. בעדינות את הטיפ להציב כלפי הסרעפת ואת לתת דחיפה הזזה. על ידי אחרים כדי להרים את האונה השמאלית של הכבד.
- להחליק חוט ניילון עם לולאה דרך האונה השמאלית המורמת והחלק הלולאה לעבר הבסיס של האונה השמאלית קרוב hilum בעזרת העצות מיקרו-מלקחיים או כותנה. לדחוף בעדינות את הלולאה בחוט ניילון בבסיס האונה השמאלית.
- לקשור שני קצוות של חוט ניילון מעל החלק העליון של האונה השמאלית באמצעות בעל מחט למיקרו המלקחיים מיקרו. לעשות שני קשרים נוספים בצד השני.
- שווייץ האונה קשור בעזרת מספריים. אל תנסו לחתוך מאוד קרוב החוט. למקרה ההליך נמשך יותר מ- 5 דקות, לשמור את חלל הצפק איברים לח עם PBS סטרילי כדי להימנע לייבוש בשל אובדן נוזלים.
- לתפור את הצפק באמצעות רציף הפתולוגיים בתפר לאללה 4-0. לאחר מכן, לסגור את העור על-ידי תפירת מקוטע מהר ככל האפשר.
-
השתלת תא
הערה: hepatocytes מבטאים ה-GFP הם בודדו אותנו מהמתרחש העכברים הטרנסגניים GFP (6/C57BL-Tg (UBC-GFP) 30 Scha/J), על-פי ההליך המתואר על ידי Lee ואח. 22 , שן ואח. 23 תאים, כמו hepatocyte (NeoHep) ממוצא האנושי תריז ומונוציטים24 שימשו גם השתלת. עם זאת, תאים שמקורם מקורות אחרים עשוי לשמש גם בפרוטוקול.- להשעות את התאים קיימא 0.2 מיליון ב בסביבות 50 µL של המדיום של Iscove שונה Dulbecco (IMDM), תשאף את זה בתוך מזרק אינסולין 1 מ"ל כתרים עם המחט 30 גרם. לשמור את המזרק קר על ידי הצבתו על קרח.
- הצב את העכבר בדרך בחלק הלטראלי השמאלי כלפי מעלה לכיוון האדם שמבצע ניתוח. לזהות את אזור הטחול ומנתחים באופן רוחבי על העור ליד האזור היפוכונדרית, ואחריו חתך קצר דרך השכבה הצפק רק כדי לחשוף את הטחול.
- בעדינות להרים את הטחול והחזק שאותו החוצה חלל הבטן בעזרת שני PBS לחלח טיפים כותנה.
- החזיקו הטחול בזהירות עם שתי עצות כותנה ביד אחת, ולמקם את המחט של המזרק בדיוק אנכית כדי הטחול. פירס הטחול ולדחוף את המחט בעדינות באיטיות פנימה; המחט לא צריך לקבל עמוקות יותר מ- 2 מ מ.
- לוחץ את הבוכנה של המזרק לאט כדי להזריק את התאים לתוך הטחול. לאחר ההשתלה, להשאיר את המחט של המזרק יציב ומסירים אותו לאט לאט הטחול כדי למנוע דימום או אובדן של תאים.
- לאחר הצבת הטחול בחזרה לתוך חלל הצפק עם העצות כותנה, לסגור את השכבה הצפק על ידי תפירת רציף 4-0 בתפר לאללה. לתפור את העור באורח מקוטע עם התפר אותו. הימנע משימוש הפצע קליפים לסגירת העור; במקום זאת, לסגור את זה על ידי בתפר 4-0. הקליפים הפצע להגביל את התנועה הטבעית של העכבר, לעיתים קרובות קליפים להיות משוחרר. וצא החוצה במהירות.
3. לאחר הניתוח טיפול
- לאחר סגירת העור, נגב את הסביבה של שני האתרים תפר עם יודיפלור תמיסה (betadine) באמצעות טיפ כותנה סטרילי.
- תזריק מנה של אנטיביוטיקה cefotaxime כמו 600 מ"ג/ק"ג משקל (בדרך כלל 12 מ"ג cefotaxime ב µL 100 של תמיסת מלח/עכבר) גוף intraperitoneally באמצעות מזרק 1 מ"ל.
- לתת במינון יומי של Meloxicam כאבים בתור 1 מ"ג/ק"ג משקל גוף (בדרך כלל 12 µg Meloxicam ב µL 100 של תמיסת מלח/עכבר) לחיה intraperitoneally, במשך שלושה ימים אחרי הניתוח.
- לאחר סיום הניתוח, מפסיקים את זרימת הגז איזופלוריין ומניחים את העכבר חזרה לכלוב מאוורר בנפרד.
4. euthanization, אפיוני
- לאחר ניסיוני והגישור (יום 1 ו- 10 ימים לאחר הניתוח), המתת חסד העכברים על פי הנחיות מוסדיים אתיקה בעלי חיים.
- לאסוף דם על ידי סופני דימום החיות, ניקב את מקלעת מסוף עינית.
- לבודד נסיוב מהדם.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
Hepatocyte התפשטות לאחר hepatectomy חלקי 30%: התפשטות hepatocytes הנותרים הכבד לאחר 30% hepatectomy נבדק על ידי immunohistochemical (IHC) צביעת עבור סמן התפשטות תאים, Ki-67. פוסט יום אחד hepatectomy, העכברים היו מורדמים, האונות הכבד הנותרים היו טוחנות, פרפין מקטעים התקבלו. הסעיפים היו מוכתמים נוגדן Ki-67, ואחריו labelling עם חזרת peroxidase (HRP) נוגדנים משניים מצומדת. אמינו Di Benzidine (DAB) שימש המצע HRP לפיתוח של צבע חום כדי לזהות תאים מוכתם. הגרעין היה מונה מוכתם hematoxylin, מתחת למיקרוסקופ אובייקט...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
Hepatectomy חלקית היא טכניקה הוקמה עבור החקירה התחדשות הכבד, hepatectomy מוגזמת הוא דיווח כדי לחקות את מודל AHF. בין מודלים חייתיים של AHF, מכרסמים, עכברים במיוחד, הם המודל הכי חקר. כדי להשיג פגיעה בכבד מודל בעכברים, עד hepatectomy 70% דווח עם הישרדות טוב שיעור25,26. עם זאת בעירום, עכבר immunodeficient אחר, hepatectomy 70% נמסר בשם קטלנית, חיות מתו בתוך 24 שעות27.
מיטשל ו Willenbring28 הפ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי המענק הליבה קיבל את המחלקה לביוטכנולוגיה, ממשלת הודו על המכון הלאומי לאימונולוגיה, ניו דלהי. הכתובת הנוכחית של ד ר Bhattacharjee הוא חטיבת לגסטרואנטרולוגיה, Hepatology, תזונה, החולים בלוס אנג'לס לילדים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מערכת הרדמת גז | Ugo Basile; איטליה | 211000 | |
| מכונת שקילה | Goldtech ; | רכש מקומי | |
| ארון בטיחות ביולוגי (Class I) | Kartos International; | גוזם שיער רכש מקומי | |
| פנסוניק ; יפן | ER-GY10 | ||
| מספריים הפעלה ישרים עם להבים חדים / חדים | כירורגיות גדולות; הודו | לרכש מקומי | |
| עם שיניים | כירורגיות גדולות; רכש | מקומי | |
| מחזיקי מחטים מיקרו ישר ומעוקל | מרסיאן ; אנגליה | BS-13-8 | |
| מזרק אינסולין 1 מ"ל עם 30 גרם *5/16 מחטים | דיספו ואן; מזרק הודו | ||
| 1 מ"ל עם 26 גרם * 1/2 מחט | BD; ארה"ב | REF 303060 | |
| חוטי ניילון | אדיר; הודו( | 1-0) רכש מקומי | |
| MERSUTURES 4-0 תפר מחט כירורגי מעוקר | Ethicon, Johnson & ג'ונסון, הודו | NW 5047 | |
| TRUGUT 76 ס"מ 4-0 תפר כירורגי נספג | תפרים הודו Pvt. בע"מ; הודו | SN 5048 | תפר מחט כירורגי מעוקר catgut |
| ניצני כותנה | Pure Swabs Pvt Ltd ; הודו | רכש מקומי | |
| קלטת כירורגית | 3M הודו ; הודו | 1530-1 | מיקרופור קלטת כירורגית |
| מיקרו-טום | מעבדות היסטו-ליין, איטליה | MRS3500 | |
| Shandon Cryotome e Cryostat | Thermo Electron Corporation ; | ||
| קארל זייס ; גרמניה | LSM 510 META | ||
| מיקרוסקופ שדה בהיר | אולימפוס, יפן | LX51 | |
| מנתח אוטומטי | טוליפ, אלטו סנטרקרוז, הודו | Maaster 3000 | לבדיקת תפקודי כבד |
| ציטומטר זרימה | BD ; ארה"ב | BD FACSverse | הערכת נוכחות תאים לאחר ההשתלה |
| קרם להסרת שיער Veet | רקיט בנקיזר , הודו | ||
| פוראן | אבוט ; איזופלורן בארה"ב | USP 99.9% | |
| טקסים | אלקם ; הזרקת | נתרן cefotaxime | |
| תמיסת פובידון-יוד | Win-Medicare; הודו | ||
| בטדין פרפורמלדהיד | הימדיה; הודו | GRM 3660 | |
| של Dulbecco's Modified Dulbecco (IMDM) | Life, Thermo Fisher Scientific ; ארה"ב | 12200-036 | |
| סוכרוז | סיגמא ; ארה"ב | S0389 | |
| Tissue-Tek | Sakura; ארה"ב | 25608-930 | O.C.T מתחם |
| DAPI | Himedia; הודו | MB 097 | |
| עז אנטי-אלבומין Polyclonal | Thermo Scientific, פירס, ארה"ב | PA126081 | |
| אנטי-קונקסין 32/GJB1 פוליקלונל | אבקאם, בריטניה | ab64609-500 | |
| antiGFP ארנב פוליקלונל | ביוטכנולוגיה של סנטה קרוז; ארה"ב | SC 8334 | |
| Alexa Fluor 594 חמור נגד עזים | בדיקות מולקולריות , תרמו פישר סיינטיפיק ; ארה"ב | A11058 | |
| Alexa Fluor 488 חמור נגד כבשים | בדיקות מולקולריות , תרמו פישר סיינטיפיק ; ארה"ב | A11015 | |
| Alexa Fluor 594 עוף נגד ארנב | בדיקות מולקולריות , תרמו פישר סיינטיפיק ; ארה"ב | A21442 | |
| עז נגד ארנב IgG HRP | Invitrogen, תרמו פישר מדעי; ארה"ב | 65-6120 | |
| נוגדן נגד Ki67 | abcam, בריטניה | ab15580 | |
| תמיסת חשיפת אנטיגן, בסיס חומצת לימון | מעבדות וקטור, ארה"ב | H-3300 | |
| ProLong יהלום נוגדן הרכבה | חיים, תרמו פישר מדעי; ערכת | P36966 | |
| מערכת | קלינית אלמוגים, הודו | ||
| ערכת SGPT (ALAT) | מערכת קלינית אלמוגים, ערכת | ||
| DEA) | מערכת קלינית אלמוגים, | ||
| של מאייר | ; תמיסת | US MHS16 | |
| Eosin Y, סיגמא אלכוהולית | ; | HT110132 | |
| סיגמא; ארה"ב | 6522 | ||
| מלונקס (משכך כאבים) | אינטס פרמצבטיקה בע"מ; | הזרקת מלוקסיקם | |
| מערכת מצע נוזלי משופרת DAB טטרה-הידרוכלוריד | סיגמא; ארה"ב | D3939 |
מקורות
- Nussler, A., et al. Present status and perspectives of cell-based therapies for liver diseases. J. Hepatol. 45 (1), 144-159 (2006).
- Ponder, K. P., et al. Mouse hepatocytes migrate to liver parenchyma and function indefinitely after intrasplenic transplantation. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88 (4), 1217-1221 (1991).
- Kokudo, N., Horimoto, H., Ishida, K., Takahashi, S., Nozawa, M. Allogeneic hepatocyte and fetal liver transplantation and xenogeneic hepatocyte transplantation for Nagase's analbuminemic rats. Cell Transplant. 5 (5 Suppl 1), S21-S22 (1996).
- Christ, B., Bruckner, S., Stock, P. Hepatic transplantation of mesenchymal stem cells in rodent animal models. Methods Mol. Biol. 698, 315-330 (2011).
- Fox, I. J., Roy-Chowdhury, J. Hepatocyte transplantation. J. Hepatol. 40 (6), 878-886 (2004).
- Glanemann, M., et al. Transplantation of monocyte-derived hepatocyte-like cells (NeoHeps) improves survival in a model of acute liver failure. Ann. Surg. 249 (1), 149-154 (2009).
- Rahman, T. M., Hodgson, H. J. Animal models of acute hepatic failure. Int. J. Exp. Pathol. 81 (2), 145-157 (2000).
- Zhang, L., et al. Granulocyte colony-stimulating factor treatment ameliorates liver injury and improves survival in rats with D-galactosamine-induced acute liver failure. Toxicol. Lett. 204 (1), 92-99 (2011).
- Gardner, C. R., et al. Role of nitric oxide in acetaminophen-induced hepatotoxicity in the rat. Hepatology. 27 (3), 748-754 (1998).
- Nardo, B., et al. Successful treatment of CCL4-induced acute liver failure with portal vein arterialization in the rat. Transplant Proc. 38 (4), 1187-1189 (2006).
- Sathyasaikumar, K. V., et al. Fulminant hepatic failure in rats induces oxidative stress differentially in cerebral cortex, cerebellum and pons medulla. Neurochem. Res. 32 (3), 517-524 (2007).
- Wu, J., et al. Laennec protects murine from concanavalin A-induced liver injury through inhibition of inflammatory reactions and hepatocyte apoptosis. Biol. Pharm. Bull. 31 (11), 2040-2044 (2008).
- Kaur, G., Tirkey, N., Chopra, K. Beneficial effect of hesperidin on lipopolysaccharide-induced hepatotoxicity. Toxicology. 226 (2-3), 152-160 (2006).
- Rupertus, K., et al. Major but not minor hepatectomy accelerates engraftment of extrahepatic tumor cells. Clin. Exp. Metastasis. 24 (1), 39-48 (2007).
- Selden, C., Casbard, A., Themis, M., Hodgson, H. J. Characterization of long-term survival of syngeneic hepatocytes in rat peritoneum. Cell Transplant. 12 (6), 569-578 (2003).
- Tang, T. H., et al. The role of donor hepatocytes and/or splenocytes pre-injection in reducing islet xenotransplantation rejection. Hepatobiliary. Pancreat. Dis. Int. 2 (3), 344-350 (2003).
- Goto, Y., Ohashi, K., Utoh, R., Yamamoto, M., Okano, T. Hepatocyte transplantation through the hepatic vein: a new route of cell transplantation to the liver. Cell Transplant. 20 (8), 1259-1270 (2011).
- Gabelein, G., et al. Intrasplenic or subperitoneal hepatocyte transplantation to increase survival after surgically induced hepatic failure? Eur. Surg. Res. 41 (3), 253-259 (2008).
- Bhattacharjee, J., et al. Autologous NeoHep Derived From Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of cMET Signaling. Stem Cells Transl. Med. , (2016).
- Basic surgical skills. Emergency and Essential Surgical Care (EESC) programme. , http://www.who.int/surgery/publications/s16383e.pdf (2017).
- Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. J. Vis. Exp. (47), (2011).
- Lee, S. M., Schelcher, C., Demmel, M., Hauner, M., Thasler, W. E. Isolation of human hepatocytes by a two-step collagenase perfusion procedure. J. Vis. Exp. (79), (2013).
- Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. Isolation and primary culture of rat hepatic cells. J. Vis. Exp. (64), (2012).
- Bhattacharjee, J., et al. Autologous NeoHep Derived from Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of c-MET Signaling. Stem Cells Transl. Med. 6 (1), 174-186 (2017).
- Hori, T., et al. Simple and sure methodology for massive hepatectomy in the mouse. Ann. Gastroenterol. 24 (4), 307-318 (2011).
- Hori, T., et al. Simple and reproducible hepatectomy in the mouse using the clip technique. World J. Gastroenterol. 18 (22), 2767-2774 (2012).
- Vidal, I., Richert, L. The nude mouse as model for liver deficiency study and treatment xenotransplantation. Int. J. Hepatol. , 1400147(2012).
- Mitchell, C., Willenbring, H. A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice. Nat. Protoc. 3 (7), 1167-1170 (2008).
- Ahmed, S. U., et al. Generation of subcutaneous and intrahepatic human hepatocellular carcinoma xenografts in immunodeficient mice. J. Vis. Exp. (79), e50544(2013).
- Krikri, A., et al. Laparoscopic vs. open abdominal surgery in male pigs: marked differences in cortisol and catecholamine response depending on the size of surgical incision. Hormones (Athens). 12 (2), 283-291 (2013).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
