Method Article

הערכה של רקמת שומן אנושי הפונקציה Microvascular באמצעות Videomicroscopy

DOI:

10.3791/56079

⸱

September 29th, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Medicine and Whitaker Cardiovascular Institute, Boston University School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Videomicroscopy מערכות משמשות כדי לבחון מאפיינים פונקציונליים של רקמת שומן מבודדת רבים בתגובה לגירויים פיזיולוגיים ולא תרופתי. טכניקה זו ניתן לבחון פנוטיפים microvascular בתחומים שונים רקמת שומן בבני מהשמנת יתר.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בעוד השמנה קשורה קשר הדוק להתפתחות מחלה מטבולית, לב וכלי דם, מעט מאוד ידוע על המנגנונים המפקחים על תהליכים אלו. זה המשוערות כי מתווכים פרו-atherogenic שוחרר רקמות שומן במיוחד בשיתוף עם השמנה מרכזית/ויסצרלית עשוי לקדם שינויים בכלי הדם פתוגניים באופן מקומי, מערכתית, הרעיון כי מחלות לב וכלי דם עשוי להיות תוצאה של חוסר תפקוד רקמת שומן ממשיכה להתפתח. כאן, אנו מתארים שיטה ייחודית של videomicroscopy זה כרוך ניתוח של תגובות מרחיב כלי דם ומצר את כלי הדם של שלם רבים אנושי קטן יוסר בתחנה אדיפוז מהנושאים אנושי חי. Videomicroscopy משמש כדי לבחון מאפיינים פונקציונליים של microvessels מבודדים בתגובה לגירויים פיזיולוגיים או תרופתי באמצעות מערכת לחוץ המחקה תנאים ויוו . הטכניקה היא גישה שימושית כדי להשיג הבנה של פתופסיולוגיה ואת המנגנונים המולקולריים שתורמים בתפקוד כלי הדם באופן מקומי בתוך חצרו רקמת שומן. יתר על כן, חריגות בתוך microvasculature רקמת שומן גם קושרו עם מחלות מערכתיות. אנחנו מוחלים בטכניקה זו כדי לבחון תגובות וסקולרית דיפו ספציפיים בנושאים מהשמנת יתר. אנחנו העריכו אנדותל תלוית vasodilation הזרימה המוגברת והן אצל רבים אדיפוז (50-350 קוטר פנימי מיקרומטר, 2-3 מ מ אורך) מבודד שני מחסני אדיפוז שונים במהלך ניתוח בריאטרי מ באותו הפרט. להדגים כי רבים מן השומן מהבטן התערוכה vasodilation אנדותל תלוית לקוי לעומת כלי מבודד בתחנה תת עורית. הממצאים מראים כי הקרביים microenvironment קשורה בתפקוד אנדותל כלי הדם אשר עשוי להיות רלוונטי תצפיות קליניות קישור מהבטן השמנה מוגברת למנגנונים מחלה מערכתית. הטכניקה videomicroscopy יכול לשמש כדי לבחון פנוטיפים כלי דם מן המחסנים שומן שונים, כמו גם משווים ממצאים בין אנשים עם דרגות שונות של השמנת יתר, חוסר תפקוד מטבולי. השיטה יכולה לשמש גם כדי לבחון תגובות כלי הדם longitudinally בתגובה התערבויות קליניות.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Videomicroscopy היא טכניקה שימושית מנוצל כדי לבחון את תפקוד עושות קטנים רבים מן החי ניסויים ex-vivo. המעבדה שלנו התמקדה לנתח את microvessels הקטן של תאי רקמת שומן שונים כדי לאפיין את ההשפעות של אדיפוז שונים microenvironments על microvasculature. היתרון העיקרי של טכניקה זו היא כי כלי הדם של הגוף האנושי להישאר פונקציונלי יכולים להיבדק בקלות בתוך דקות עד שעות בעקבות ביופסיה. מצבים פיזיולוגיים הן חיקה ויציבה transmural הלחץ נשמר בשטח intraluminal באמצעות קנולות מיקרו-זכוכית אשר מסכם את הדברים מאפיינים רבים ויוו . 1 , 2 . בנוסף, מלכודת videomicroscopy אמין עם תוכנת זיהוי קצה אוטומטית מאפשרת עבור הערכה כמותית והן איכותית של אנדותל תלוית ועצמאית - מרחיב כלי דם, מצר את כלי הדם קיבולת של בודדים כלי ב בזמן אמת, המתיר הערכת פיזיולוגיים מהירה בתגובה לגירויים פיזיים ולא תרופתי. 3 טכניקות אחרות microvascular הינם גם זמינים כגון חוט myography, אשר נוטה להיות פחות זמן רב ולמדוד את המתח התגובות אגוניסטים שונים על ידי כוח מתמר.

המעבדה שלנו הוחל videomicroscopy שבחן את הקשר בין תפקוד כלי הדם, התמקדות השפעת תחומים שונים רקמת שומן על להערכת השמנה. השמנה מרכזית עם הצטברות שומן מהבטן התוך בבטן נקשרה הקרוב ביותר adipocytokine ייצור, חילוף חומרים לקוי של הסיכון cardiometabolic. זה הניחו כי תפקוד רקמת שומן עם ייצור יתר של pro-atherogenic dysregulation ציטוקינים ו adipokine הם בחריפות מעורבים תהליכים אלה, אך מולקולות ספציפיות רגולטוריות ומטרות הטיפול נותרו במידה רבה לא ידועות. 4 . זאת ועוד, רקמת שומן מקומית ברמה rarefaction נימי, זלוף לקוי קושרו רקמת שומן pseudohypoxia ו- dysregulation מטבולית. ההשערה כי מחלות לב וכלי דם עשוי להיות התוצאה של בעיות בתפקוד רקמת שומן הוא מתפתח. מתווכים פרו-atherogenic שוחרר שומן, במיוחד בשיתוף עם מרכז/מהבטן השמנה, סביר לקדם בתפקוד אנדותל, שינויים בכלי הדם פתוגניים שניתן להתבטא באופן מקומי להערכת אדיפוז וזוהה באמצעות במסמך זה תיאר מתודולוגיה. 5

הערכה תפקודית של רקמת שומן מבודדת רבים היא גישה שימושית כדי להשיג הבנה של פתופסיולוגיה ואת המנגנונים המולקולריים שתורמים בתפקוד כלי הדם האנושי ההשמנה. לחקור מנגנונים שתורמים תפקוד ספציפי דיפו השמן, פיתחנו שיטות לבחון אנדותל תלוית ותגובות - עצמאית vasodilatory של microvasculature, ולהעריך את הביטוי רגולטוריות שונות מועמדים לזווג הקרביים ו התת-עורית (SC) רקמת שומן דגימות המתקבל הנושאים כרסתן בזמנו של ניתוח בריאטרי.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול ואת דוגמאות המתוארים כאן אושרו על ידי בוסטון אוניברסיטת הנהלת בית הספר של רפואה מוסדיים סקירה (IRB, פרוטוקול #H-25644), נערכו בהתאם הצהרת הלסינקי. כל הנושאים הניתנים בכתב הסכמה מדעת לפני השתתפות.

1. ההכנה של פתרונות, מיקרו-זכוכית קנולות

  1. הכן הפתרון מלוחים חומצי 4-2-hydrosyethyl-1-piperazineethanesulfonic (HEPES). עבור 1 ליטר, להמיס 8.059 g NaCl, 0.298 גרם אשלגן כלורי, 0.296 g MgSO 4 • 7 שעות 2 O, 0.235 g CaCl 2 • 2 H 2 O. 0.16 g ח' 2 PO 4, 0.01 גרם EDTA, 1.081 g D-גלוקוז ו- 2.383 g HEPES חומצה ב- 950 מ"ל של יונים . מים. לבצע את עוצמת הקול 1 ליטר מים יונים. להתאים את ה-pH ל 7.4 באמצעות NaOH. HEPES מאגר ניתן לאחסן 7 ימים ב- 4 מעלות צלזיוס
  2. להכין את 20 x מלאי מאגר מלח. עבור 1 ליטר, להוסיף 143.8 g NaCl, g 7.0 אשלגן כלורי, 5.9 גרם MgSO 4 ו- g 7.4 CaCl 2 • 2 H 2 O לתוך 900 מ ל מים מזוקקים. לבצע הווליום 1 ליטר מים יונים. לאחסן פתרון מניות ב- 4 מעלות צלזיוס
  3. להכין את 20 x מלאי מאגר. 1 ליטר, הוסיפו 26.8 g NaHCO 3 ו- 0.2 גר' EDTA·2H 2 O לתוך 900 מ ל מים יונים. לבצע הווליום 1 ליטר מים יונים. לאחסן פתרון מניות ב- 4 מעלות צלזיוס
  4. להכין את הפתרון קרבס לשמש במהלך הניסויים פיזיולוגיים. 1 ליטר, להוסיף 900 מ ל מים יונים, 50 מ של 20 x מלאי מאגר, 50 מ של 20 x בופר מלח, 0.99 g D-גלוקוז ו- 0.16 g ח' 2 PO 4. להתאים את ה-pH ל 7.4 באמצעות HCl. כדי לשמור על רמת החומציות של המאגר, מערבבים כל הזמן, לכסות עם פרפין או בועה ברציפות.
    1. סימון ה-pH בכל 20 דקות להפוך את הפתרון קרבס טריים מדי יום.
  5. להפוך קנולות מיקרו-זכוכית עם קוטר פנימי של 40-240 מיקרומטר באמצעות של פולר המחט זמינים מסחרית/פיפטה. הגודל של זכוכית קנולות נקבע לפי גודל הקוטר הפנימי של כלי הדם מבודדים (50-350 מיקרומטר). לחלופין, לרכוש מיקרו-זכוכית קנולות של גודל שנקבע מראש.

2. הכנה של ריאגנטים

  1. הכן האצטילכולין (אחח, 10 -2 מ', פתרון מניות). להמיס 18.29 g ביונים 10 מ"ל מים. חנות aliquots 1 מ"ל של מניות פתרון (10 -2 מ') ב- 80 ° c ביום של הניסוי באופן סדרתי לדלל להשיג ריכוז העבודה הבאות: 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8, 10 -9 מ'
  2. להכין את papaverine (2 x 10 -2 מ', פתרון מניות). להמיס 0.07517 g ביונים 10 מ"ל מים. הכינו 10 aliquots µL של פתרון מניות וחנות ב-80 ° ג באופן סדרתי לדלל כדי לקבל 10 -4, 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8 מ' ביום של הניסוי-
  3. להכין את endothelin-1 (ET-1, 2 x 10 -5 מ', פתרון מניות). להמיס 50 µg endothelin 1-1 מ של 1% BSA/PBS. לאחסן 1 מ"ל aliquots של פתרון מניות (2 x 10 -5 מ') ב- 80 ° c ביום של הניסוי לדלל בריכוז העבודה 10 -10 מ' ביום של ניסוי.
  4. לאחסן ריאגנטים גם-20 ° C או עד-80 מעלות בהתאם לסוג מקפיא זמין, אך לא יותר מ 6 חודשים.

3. רקמת שומן איסוף והכנת כלי

  1. לגייס גברים שמנים ונשים (מדד מסת הגוף (BMI) ≥ 35 kg/m ², גיל ≥ 18 שנה) שהשתתפו בתוכנית ניתוח בריאטרי ב בוסטון רפואי מרכז (BMC). סך של נושאים 40 השתתפו בניסויים אלה.
  2. לאסוף דגימות רקמת שומן תת עורית של הקרביים במהלך ניתוחים בריאטרי המתוכנן על ידי המנתח מבצע את.
    1. הקציר תת עורית רקמות adipose מ לקיר הבטן התחתונה, מהבטן שומן שנשאב omentum greater, בהתאמה. גודל המדגם טיפוסי רקמת שומן משתנה בין 3-10 מ ג של רקמת.
    2. המקום רקמות באופן מיידי תוך קר HEPES מאגר פתרון עם pH של 7.4 וחנות ב 4 ° C עבור עד 24 ח'
      הערה: בנוסף, אדיפוז רבים ניתן לקבל מאנשים רזה כמו גם במהלך סוגים אחרים של ניתוחים כגון בקע תיקונים או ניתוח פלסטי, וניתן גם ביופסיה מן בתחנה תת עורית באמצעות ביופסיה טרנס-עורית כרית שומן בטן < מה המצב class = "xref" > 6.
  3. באמצעות מיקרוסקופ לנתיחה רקמות, ומספריים מיקרו מיקרו-מלקחיים, הסר בזהירות שמסביב שומן ורקמות רבים אדיפוז קטן (50-350 מיקרומטר intraluminal קוטר, 2-3 מ מ אורך).
  4. לקשור את כל הענפים על רבים באמצעות ניילון קטנה או התפרים משי לפני cannulating על מכשור ניסוי ברטט נימי זכוכית. בזהירות לנתח רבים מאז נזק אפילו מזערי של הקיר arteriole גורם משמעותי לשינויים פונקציונליים.
    1. מזער חשיפה כלי אור וחום כפי שהוא עלול לגרום vasodilation. מכיוון שזה יכול להיות לפעמים קשה להבחין רבים מן venules, לזהות את הטון הגודל של שריר חלק של כלי על ידי קטיעת את הטיפים של כלי. רבים הם בדרך כלל קטנים יותר ומדגימים צליל גדול יותר בהשוואה venules.
  5. להכין את החדר אורגן. לאט לאט למלא פיפטות נימי זכוכית של צינורות גומי עם הפתרון קרבס באמצעות מזרק 10 מ ל-
  6. פעם אבובים מגומי מלא פיפטות נימי זכוכית טובע בפתרון קרבס בתוך תא איברים, נקרר רבים וישבו לבטח על פיפטות מאובטחת ו לקשור בשני קצוות arteriole עם ניילון או משי תפר קשרים בזהירות.
  7. למלא תא איברים עם פתרון קרבס עד 2 מ"ל.
  8. לאבטח לחדר עוגב על הבמה עם המיקרוסקופ הפוכה (הגדלה 10 X / 0.25 המטרה), מצלמת וידאו-
  9. להפעיל בתוכנת איתור קצה המוזרם ב בזמן אמת בקצב דגימה של 1 קילו-הרץ (מסגרות לשנייה 1).
  10. לחבר צד אחד של הצנרת מווסת הפתרון קרבס לחץ מילוי מאגרי חינם של microbubbles, כמו בועות ניתן להציג שגיאה ניסיוני. להתחבר לצד השני של צינורות בלחץ תא איברים.
  11. להתחבר קרבס פתרון מלא לחץ המאגרים מתמר לחץ עם אבובים נקי.
  12. לשלוט זרימה אינטרה-luminal על ידי ויסות הגובה של אלה שני מאגרים; לכן, כאשר מאגרי ממוקמים באותו גובה, אין זרימת אינטרה-luminal תתרחש.
  13. לאחר כל התהליכים האלה, הושלמו, להפעיל חימום לחסום תוכנית תוכנה כדי לשמור על טמפרטורה 37 ° ג ברציפות perfuse את הכלי עם פתרון קרבס, לאוורר עם תערובת גז של 5% CO 2, 21% O 2 ו- 74% N 2 7 , 8 לאורך כל תהליך ניסיוני.
  14. כדי להשיג את הלחץ הרצוי בתוך מעבד הדה לומן של כלי מבודד להגדיל בהדרגה את הלחץ intraluminal (5 מ מ כספית, כל 5 דקות) באמצעות יחידת בקרת לחץ בחלונית ' myo ממשק, כך בקצב איטי כדי למנוע נזק שכבת אנדותל.
    הערה: לאחר הלחץ מגיע ל- 60 מ מ כספית, תקופה equilibration 20-30 דקות נדרשת כדי לייצב את הספינה. כל תפקוד כלי הדם מחקרים מבוצעים ב 60 מ מ כספית ל 37 ° C ב- pH 7.4. 7

4. הערכה של אדיפוז פונקציה Microvascular

הערה: באופן כללי, יכול להיות elicited arteriole אדיפוז תלויי-אנדותל vasodilation בתגובה פיזיולוגית (זרימה-induced), גירויים תרופתי (Ach-induced).

  1. Vasodilation בתיווך זרימה, תלויי-אנדותל
    1. בעקבות לחץ, להקליט את הקוטר של arteriole אדיפוז במנוחה (Di). זה נקרא קוטר הבסיס מנוחתו.
    2. מראש מתכווצים כלי הדם ~ 55% מקוטר בסיס המנוחה (Dp) על-ידי הוספת 1 µL של endothelin-1 (ET-1, 10 − 10 מ') ישירות אל אמבט ואל חכה 5 דקות לקבלת אפקט. חזור על תהליך זה עד להגיע % ~ 55 להזמנה מראש מכווץ המדינה.
    3. בעקבות ההתכווצות קדם, זירוז זרימה רציפה לתוך מרחב intraluminal של רקמת שומן רבים, שוויון, בכיוונים מנוגדים כך הבדל לחץ יכול להתפתח ברחבי הספינה מבלי לשנות את הלחץ intraluminal רשע של 60 מ מ כספית.
      הערה: לדוגמה, אם מאגר אחד עולה על ידי 10 ס מ גובה, השני צריך להיות ירדו על ידי 10 ס מ לשנות מעברי צבע בלחץ, ובכך לשנות את קצב הזרימה intraluminal. אם מדידת קצב זרימה מדויקים יותר הם הרצויה, מערכת זרימה כמותית-מד ניתן ליישם את הסידור ניסיוני.
    4. למדוד התארכות בתיווך זרימה 3-5 דקות לאחר אתחול של אינדוקציה זרימה. רמות intraluminal זרימה (לחץ מעברי צבע) יכולים להיות בטווח של 0 - 100 cmH 2 O. להגדיל כל תוספת לחץ שיפוע על-ידי Δ10 cmH 2 O כל 5-6 דקות, עד למקסימום של 100 cmH 2 O.
      הערה: על מנת לזרז את הלידה זרימה שכבתית יציב ב לומן, בשני גדלים עצה בצינורית זכוכית מיקרו צריכה להיות מאוד קרובה הקוטר הפנימי של רבים; אחרת, היא לייצר תזרים מערבולות בתוך לומן, זירוז שגיאות מדידה לא רצויים.
    5. בעקבות זרימה-מתווכת המבדק התארכות, להחזיר את הלחץ מאגרים לאותו גובה (60 מ מ כספית).
    6. לאחר מכן, לשטוף arteriole קאמרית מאת מיד הסרת פתרון קאמרית ולהחליף עם פתרון קרבס טריים. פעולה זו מתבצעת בזהירות כדי לא לשבש את arteriole על תנאי בתוך התא.
    7. חזור על תהליך זה 3 - 4 פעמים במשך 20-30 דקות, או עד הספינה מבודדת מחזירה עד לקוטר בסיסית מנוחתו.
  2. Vasodilation בתיווך אצטילכולין, תלוית אנדותל,
    1. כאשר arteriole אדיפוז חזר עד לקוטר בסיסית מנוחתו, מראש מתכווצים כלי ~ 55% על-ידי ניהול endothelin-1 (ET-1, 10 − 10 מ') ישירות אל האמבטיה, כפי שתואר לעיל בסעיף 4.1.2.
    2. בעקבות ההתכווצות קדם, לנהל ברצף הגדלת מינון (2 µL) של אצטילכולין שהוא קולטן בתיווך, תחמוצת החנקן אגוניסט (אחח, 10 -9 עד 10 -5 מ') ישירות אל בית המרחץ. להקליט את השינוי arteriolar קוטר 5 דקות לאחר מתן של מנה לכל.
    3. פעם כלי הקיבול הגיעה מישור בעקבות ניהול של המנה הסופית Ach, לשטוף את כלי הקיבול 3 - 4 פעמים עם פתרון קרבס. לאפשר 20-30 דקות על הכלי להתאושש ולחזור נח בסיסית בקוטר. כדי לסייע לשמור על pH של קאמבר איברים, לשנות קרבס פתרון כל 15 דקות
  3. דגירה של arteriole עם N w - ניטרו - l-ארגינין מתיל אסטר (L-שם, 10 -4 מ'), מעכב של תחמוצת החנקן סינתאז למשך 30 דקות, ואז אני חוזר 4.2.1 ו 4.2.2 לאפיין את התרומה היחסית של תחמוצת החנקן כדי vasodilation בתיווך אוה.
  4. להעריך vasodilation אנדותל-עצמאית (הפונקציה השריר החלק בכלי הדם) ואת הכדאיות כלי מאת המינהל רציפים של מינונים הגוברת של papaverine (10 -8 עד 10 -4 מ') ישירות אל בית המרחץ. אם קוטר הכלי לא לחזור, או יעלה על הקוטר בסיסית (Di) מנוחתו בתגובה papaverine (דהיינו vasodilation המתאים), שקול את כלי הקיבול כלכלית ולמחוק נקודות נתונים.

5. ניתוח נתונים וחישוב

  1. חשב תגובתיות כלי הדם. השתמש vasodilation אחוז לביטוי נתונים כדי להסביר הבדלים בסיסית בקוטר כלי ולחשב באמצעות המשוואה הבאה:
    % vasodilation = (DT-Dp/Di-Dp) × 100
    איפה DT הקוטר מוקלטות בנקודת זמן נתון (מקסימום קוטר), Dp הוא בקוטר שנרשם לאחר התוספת של סוכן vasoconstriction (כלומר. ET-1 המושרה קוטר הכיווץ), והוא די הקוטר נרשם מיד לפני התוספת של סוכן vasoconstriction (קוטר הבסיס בזמן מנוחה). 9
  2. מגדירים רגישות vasodilation ו- vasoconstriction (מנה-תגובה) כדי אגוניסט הריכוז של Ach, papaverine או ET-1 ולחושים 50% של התגובה מקסימלי (EC 50) אשר יכולה להיות מוגדרת על-ידי הפרמטר sigmoidal, המותווים, כפי שתואר לעיל. 10
    הערה: לימודי בין הצופה הפארמצבטית vasodilation של אדיפוז microvessels יש מקדם המתאם (CC) גבוהה של 0.99 (n = 10 ניסויים כלי) במעבדה שלנו.

6. ניתוח סטטיסטי

  1. אקספרס רציפה מדידות אומר ± ב- SEM... אלה נוטים בדרך כלל להיות מופץ. לנתח את כלי הדם תגובתיות של אדיפוז רבים על ידי אמצעים חזר ANOVA דו-כיווני.
  2. . לחלופין, להשוות בין השטח מתחת לעקומה (AUC) של העלילה עבור vasodilation המצטבר מינון-תגובות בין קבוצות הטיפול. בכל המקרים, שקול P < 0.05 סטטיסטית.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המעבדה שלנו השתמשה videomicroscopy כדי לבחון אנדותל תלוית ו- vasodilation עצמאיים, וכן תפקוד vasocontractile של רקמת שומן רבים מבודד שומן תת עורית ואת הקרביים של בני אדם שמנים. הסידור ניסיוני האופיינית מוצג איור 1A. רקמת שומן רבים מושעה בין שני פיפטות נימי זכוכית, מאובטחת במקום עם תפרים בתוך החדר אורגן כפי שמוצג באיור 1B. כפי שתואר לעיל בסעיף 5.1, arteriolar תגובות אז יכול להידרש על ידי בחינת הכלי בנקודת ההתחלה (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הקרע ובידוד של אדיפוז רבים מן הרקמות הסובבות יכול להיות תהליך מהגידולים ועתירת זהיר תשומת לב לכל פרט טכני פרוטוקול. ההליך microdissection דורש מוקפד מיומנויות וכלי ניתוח מיוחדים כדי למנוע נזק אפשרי של שריר חלק או אנדותל תא שכבות microvasculature. דקירות מקרית קטנה בקיר arteriolar יכול למנוע intraluminal לחץ ותוצאות ניסוי לא מוצלח. בנוסף, תעלות של רבים ניצול התפרים חיוני להבטיח רבים בין קצות פיפטה נימי זכוכית בכל קצה של כלי השיט.

Microvessels מבודד האנושי יכול לפתח הטון myogenic ספונטנית לאחר 3...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לעורכים יש אין גילויים או ניגודי עניינים לדווח.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים רוצה להודות המתנדבים בשל השתתפותם מחקרים אלה ואת הצוות הכירורגי במרכז הרפואי בבוסטון למתן ביופסיות רקמת שומן. ד ר Gokce נתמך על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) מענקים HL081587, HL114675 ו- HL126141. ד ר Farb נתמך על-ידי NIH להעניק K23 HL135394.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<חזק>שם כימי
אצטילכוליןסיגמא אולדריץ'A6625
סידן כלורי (CaCl<תת>2)סיגמא אולדריץ'223506
D-(+)-גלוקוזסיגמא אולדריץ'G5767
אנדותלין-1סיגמא אולדריץ'E7764
אתילן גליקול-ביס(2-אמינואתילאתר)-N,N,N',N'-טטרה חומצה אצטית (EGTA)סיגמא אולדריץE3889
אתילן דיאמין טטרה חומצה אצטית (EDTA)סיגמא אולדריץ'E9884
HEPESסיגמא אולדריץ'H3784
N<תת>w-nito-L-ארגינין מתיל אסטר הידרוכלורידסיגמא אולדריץ'N5751
מגנזיום גופרתי (MgSO4)Sigma AldrichM7506
אשלגן כלורי (KCL)Sigma AldrichP3911
אשלגן פוספט (KH2PO4)Sigma AldrichP5655
PapaverineSigma AldrichP3510
סודיום ביקרבונט (NaHCO 3 )סיגמא אולדריץ'S6014
נתרן כלורי (NaCl)סיגמא אולדריץ'S7653
נתרן פוספט מונוהידראט מונוהידראט (NaH2Po4)סיגמא אולדריץ'S9638
<חזק>שם<חזק>חברה<חזק>מספר קטלוגי<חזק>תגובות
<חזק>ציוד
מלקחייםכלי מדע עדין15000-08
מיקרוסקופ הפוךצייס Achromat
צינורות מעבדהיורו-פארם250100306F999
מושך מחט/פיפטהמכשירי דיוויד קופף720
תפר ניילון מונופילמנט עינייםהתמחויות כירורגיותA7756N
מספרייםכלי מדע עדין150000-08
תא כליDMTVAS v.2.1
'

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Schubert, R., Mulvany, M. J. The myogenic response: established facts and attractive hypotheses. Clin Sci (Lond). 96 (4), 313-326 (1999).
  2. Jadeja, R. N., Rachakonda, V., Bagi, Z., Khurana, S. Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography. J Vis Exp. (101), e50997(2015).
  3. Gutterman, D. D., et al. The Human Microcirculation: Regulation of Flow and Beyond. Circ Res. 118 (1), 157-172 (2016).
  4. Fuster, J. J., Ouchi, N., Gokce, N., Walsh, K. Obesity-Induced Changes in Adipose Tissue Microenvironment and Their Impact on Cardiovascular Disease. Circ Res. 118 (11), 1786-1807 (2016).
  5. Farb, M. G., et al. Reduced adipose tissue inflammation represents an intermediate cardiometabolic phenotype in obesity. J Am Coll Cardiol. 58 (3), 232-237 (2011).
  6. Farb, M. G., et al. WNT5A-JNK regulation of vascular insulin resistance in human obesity. Vasc Med. 21 (6), 489-496 (2016).
  7. Durand, M. J., Phillips, S. A., Widlansky, M. E., Otterson, M. F., Gutterman, D. D. The vascular renin-angiotensin system contributes to blunted vasodilation induced by transient high pressure in human adipose microvessels. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 307 (1), H25-H32 (2014).
  8. Farb, M. G., et al. Cyclooxygenase inhibition improves endothelial vasomotor dysfunction of visceral adipose arterioles in human obesity. Obesity (Silver Spring). 22 (2), 349-355 (2014).
  9. Park, S. Y., et al. Impact of age on the vasodilatory function of human skeletal muscle feed arteries. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 310 (2), H217-H225 (2016).
  10. Ives, S. J., et al. Human skeletal muscle feed arteries studied in vitro: the effect of temperature on alpha(1)-adrenergic responsiveness. Exp Physiol. 96 (9), 907-918 (2011).
  11. Grizelj, I., et al. Reduced flow-and acetylcholine-induced dilations in visceral compared to subcutaneous adipose arterioles in human morbid obesity. Microcirculation. 22 (1), 44-53 (2015).
  12. Farb, M. G., et al. Arteriolar function in visceral adipose tissue is impaired in human obesity. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (2), 467-473 (2012).
  13. Tanner, M. J., et al. Dynamin-Related Protein 1 Mediates Low Glucose-Induced Endothelial Dysfunction in Human Arterioles. Am J Physiol Heart Circ Physiol. , (2016).
  14. Ives, S. J., et al. alpha1-Adrenergic responsiveness in human skeletal muscle feed arteries: the impact of reducing extracellular pH. Exp Physiol. 98 (1), 256-267 (2013).
  15. Dharmashankar, K., et al. Nitric oxide synthase-dependent vasodilation of human subcutaneous arterioles correlates with noninvasive measurements of endothelial function. Am J Hypertens. 25 (5), 528-534 (2012).
  16. Truran, S., et al. Adipose and leptomeningeal arteriole endothelial dysfunction induced by beta-amyloid peptide: a practical human model to study Alzheimer's disease vasculopathy. J Neurosci Methods. 235, 123-129 (2014).
  17. Karki, S., et al. Forkhead box O-1 modulation improves endothelial insulin resistance in human obesity. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (6), 1498-1506 (2015).
  18. Shahid, M., Buys, E. S. Assessing murine resistance artery function using pressure myography. J Vis Exp. (76), (2013).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Adipose Tissue MicrovasculatureVideomicroscopy TechniqueEndothelium Dependent VasodilationFlow Mediated DilationAcetylcholine ResponseVisceral Adipose ArteriolesSubcutaneous Adipose ArteriolesOrgan Chamber SetupPressure Control SystemHuman Blood Vessel Analysis

Related Articles