המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד הטכניקה של פולשנית רוחבי אבי העורקים הכיווץ (טק) בעכברים. על ידי חיסול של צנרור ואוורור אשר הכרחיות עבור הליך רגיל בשימוש נפוץ, טק פולשנית ומפשט את תהליך פעיל ומפחית את הלחץ על החיה.
מאמר שיטה
המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד הטכניקה של פולשנית רוחבי אבי העורקים הכיווץ (טק) בעכברים. על ידי חיסול של צנרור ואוורור אשר הכרחיות עבור הליך רגיל בשימוש נפוץ, טק פולשנית ומפשט את תהליך פעיל ומפחית את הלחץ על החיה.
התרחבות אבי העורקים רוחבי (טק) בעכברים הוא אחד של טכניקות כירורגיות הנפוץ ביותר עבור חקירה נסיונית של לחץ יתר-induced עזב חדרית היפרטרופיה (LVH) והתקדמות שלה כדי אי ספיקת לב. ברוב המכריע של החקירות שדווחה, הליך זה מבוצע עם צנרור ואוורור של החיה אשר הופך את תובעניים ולגזול ומוסיף הנטל כירורגי לחיה. המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר טכניקה פשוטה של טק פולשנית ללא צנרור ואוורור של עכברים. שלבים קריטיים של הטכניקה מודגשים על מנת להשיג התמותה נמוכה ויעילות גבוהה תוך גרימת LVH.
זכר עכברים C57BL/6 (בן שבוע 10, 25-30 g, n = 60) היו מרדימים עם זריקה אחת בקרום הבטן של תערובת של קטמין חריגות השירותים הווטרינריים. ב נושם באופן ספונטני בעלי חיים לאחר 3-4 מ מ העליון חלקית sternotomy, קטע 6/0 בתפר משי מושחל דרך עינו של מכשיר מצדו היה עבר מתחת לקשת אבי העורקים וקשר על מחט 27-מד קהות. חיות המופעלים המזויפים עברה הכנת כירורגי אותו אך ללא התרחבות אבי העורקים. היעילות של ההליך ב גרימת LVH כתביהם לעליה משמעותית יחס המשקל גוף/לב. יחס זה מתקבל ימים 3, 7, 14, ו- 28 לאחר הניתוח (n = 6-10 בכל קבוצה, בכל נקודת זמן). באמצעות הטכניקה שלנו, LVH נצפית בטק לעומת בעלי החיים המזויפים מיום 7 עד 28 יום. פעיל. ומאחר (מעל 28 ימים) בהירושימה הם שניהם מאוד נמוכה ב- 1.7%.
לסיכום, הטכניקה שלנו חסכונית של טק פולשנית בעכברים נושאת בהירושימה פעיל ואחרי הניתוח נמוך מאוד, יעיל ביותר ב גרימת LVH. זה ומפשט את תהליך פעיל, ומפחיתה את המתח על החיה. זה ניתן בקלות לבצע על-ידי ביצוע השלבים הקריטיים המתוארים פרוטוקול זה.
במהלך השנים האחרונות, המחקר של אי ספיקת לב נערכה ב קיימא החיה מודלים1. מודלים בעלי חיים קטנים לעומת מודלים בעלי חיים גדולים של אי ספיקת לב, יש יתרונות פוטנציאליים רבים. לצד העלויות הנמוכות של דיור ואחזקה, מודלים בעלי חיים קטנים נגישים לחוקרים יותר בשל המתקנים הדרושים פחות מורכב2.
העכבר אי ספיקת לב דגמים מציעים את היתרונות אותו כמו הדגמים עכברוש. בנוסף דיור מוזל עד עולה3, העכבר מודלים להפיק תועלת הזמינות של זנים (KO) רלוונטי מהונדס, נוק אאוט. האפשרות של תאים ייחודיים לסוג, inducible KO או אסטרטגיות הטרנסגניים הפוך את העכבר כלי יקר ערך ללמוד בפתוגנזה של אי ספיקת לב ולנסות לזהות את הרומן משטרי טיפולית3.
בין העכבר מודלים של אי ספיקת לב בשימוש כיום4, התרחבות אבי העורקים רוחבי (טק) אשר תוארה לראשונה על ידי יובל בנאי-ג'וליה5 הוא הדגם המועדף כדי ליצור לחץ יתר-induced גדילת (LVH)1 , 3. היתרון הגדול ביותר של מודל זה הוא היכולת לאפשר ריבוד של LVH2, למרות עזב חדרית שיפוץ בתגובה טק הוא משתנה בין זנים שונים בעכבר. בפרט, עכברים C57BL/6 לפתח התרחבות מהירה LV לאחר עיגול זה עלולים להופיע עם אחרים זנים4,6,7.
התפרצות פתאומית של יתר לחץ דם מושגת עם טק גורם כ 50% עלייה במסה LV בתוך 2 שבועות, ומאפשר לבחון את הפעילות של התערבויות תרופתי או המולקולריות מכוון להתכוונן על התפתחות LVH4במהירות. תנאי הגיוס חריפה של יתר לחץ דם חמור על ידי טק לא בדיוק לשחזר את גדילת מתקדמת, שיפוץ שנמדדו בסביבה קלינית של באבי העורקים או יתר לחץ דם. עם זאת, מודל זה משמש על ידי חוקרים רבים כדי לזהות ולשנות את הרומן מטרות טיפולית אי ספיקת לב4.
ביצוע טק בעכברים דורש למומחיות הכירורגית גדול יותר מהנדרש לקבלה אחרים טכניקות המשמשות לזירוז LVH ואי ספיקת לב לאחר מכן2. הסופרים לבצע הליך זה באמצעות נלוקסון ואוורור של בעלי חיים2,8, אשר גורם בהליך זה יותר תובעניים ולגזול ומוסיף הנטל כירורגי לבעל החיים. רק כמה חוקרים השתמשו טק פולשנית במחקר שלהם עם התייחסות קצרה הליך כירורגי9,10,11.
המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד טכניקה פשוטה וידידותית של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים, הדגשת השלבים הקריטיים של ההליך. על-ידי ביצוע השלבים הבאים מפתח, באפשרותך לבצע בקלות בטכניקה זו.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
C57BL זכר/6J עכברים (10 שבועות, 25-30 גרם, n = 60) נמצאים בשימוש בפרוטוקול זה. בעלי החיים מקבלים טיפול אנושי תואם ההנחיות שגובשו על ידי משרד הצרפתי של החקלאות ושל ההשכלה הגבוהה והמחקר, כל הפרוצדורות מתבצעות לפי ההנחיה מועצת הקהילה האירופית של 24 בנובמבר 1986 ( 86/609/EEC) ואת החוקים צרפתי. הפרוטוקול שאושר על ידי " הוועדה המחוזית אתיקה CREMEAS ניסויים בבעלי חיים " (#2016092816207606).
1. הכנה לניתוח
2. ניתוח
3. ההחלמה לאחר הניתוח
4. לב קציר
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פעיל. ומאחר הישרדות
פעיל ההישרדות היה גבוה מאוד, 98.3% (59 מתוך 60) של הסידרה כולה (טק ובעלי המופעלים דמה). פעיל רק מותו היה בגלל סיבוך דימום בעכבר מהוקצע לפעולה המזויפים. הישרדות לאחר הניתוח במהלך התצפית של 28 ימים גם היה מצוין, ב 98.3% (58 מתוך 59). רק לאחר מותו לאחר הניתוח אירע עכבר טק ביום (D) 16, ואולי של מקור לבבי.
אימות של הטכניקה
הטכניקה הציג הוא אמין מאוד לשחזור. המיקום הנכון של ה...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המטרה של פרוטוקול זה היא להציג דוגמה צעד אחר צעד של טכניקה כירורגית פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים. תיאור טכני מפורט של התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים דווחה על-ידי סופרים אחרים,2,8. עם זאת, חוקרים אלה לבצע ניתוח בעקבות צנרור ואוורור של בעלי חיים. השימוש צעד נוסף של צנרור-איוורור מגביר את המורכבות ואת משך הזמן של כל התהליך ואת הלחץ העולמי החיה הוא חשוף. מסיבות אלו, קיבלה המושג פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי קצת תשומת לב. הכיווץ של אבי העורקים רוחב...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים יש אין ניגוד אינטרסים לחשוף.
עבודה זו נתמכה על ידי מענק (N ° 32016) של קרן לב וכלי דם שוויצרי כדי RT.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מיקרוסקופ כירורגי | Olympus | SZX2-TR30 | |
| סכין גילוח | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| <חזק>תפרים: | |||
| פוליפרופילן 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| פוליפרופילן 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| משי 6/0 קשירה | FST | 18020-60 | |
| פוליפרופילן 4/0 | Ethicon | 8683 | |
| פוליפרופילן 5/0 | Ethicon | Z303 | |
| <חזק>תרופות: < / חזק > | |||
| קטמין | מריאל | Imalgè ne 1000, LBM154AD | |
| Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
| Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
| <חזק>מכשירים: | |||
| ציפורני עצם | כלים כירורגיים עדינים | 16101-10 | |
| עזר קשירה | כלים כירורגיים עדינים | 18062-12 | |
| מלקחיים קשירת | כלים כירורגיים עדינים | 18026-10 | |
| מחזיק מחט | כלים כירורגיים עדינים | מעץ קרייל 12003-15 | |
| מלקחיים מיקרו-כירורגיים | כלים כירורגיים עדינים | 11003-12 | |
| מלקחיים מיקרו-כירורגיים | כלים כירורגיים עדינים | 11002-12 | |
| מלקחיים לרקמות | כלים כירורגיים עדינים | 11021-12 | |
| מחזיק מחט מיקרוכירורגיה | כלים כירורגיים עדינים | 12076-12 | |
| מספריים מיקרוכירורגיה | כלים כירורגיים עדינים | 91501-09 | |
| מספריים מאיו | כלים כירורגיים עדינים | 14511-15 | |
| סכין 11 להבים | כירורגית עדינה כלים | 10011-00 | |
| <חזק>מיצוי RNA ו-qPCR: | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit בדיקת RNA פלואורמטרית | פישר סיינטיפיק | 10034622 | |
| RNA 6000 ערכת ננו | Agilent | 5067-1511 | |
| ערכת cDNA בקיבולת גבוהה | פישר סיינטיפיק | 10400745 | |
| טקמן מאסטר מיקס | פישר סיינטיפיק | 10157154 | |
| טקמן BNP פריימרים | פישר סיינטיפיק | Mm01255770_g1 | |
| תקמן ANP | פישר סיינטיפיק | Mm01255747_g1 | |
| פריימרים Taqman ACE | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 פריימרים | פישר סיינטיפיק | Mm00801666_g1 | |
| טקמן TGFb פריימרים | פישר סיינטיפיק | Mm01178820_m1 | |
| טקמן גפד פישר | סיינטיפיק | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| <חזק>תוכנה: | |||
| GraphPad פריזמה | GraphPad | פריזמה 7 | |
| <חזק>מזון מן החי | |||
| תזונה מלאה לחולדות/עכברים בוגרים | בטוח | UB220610R |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה