Method Article

ניתוח והכנת פרוסה הילתית בפיתוח העכבר בלוטת יותרת המוח

DOI:

10.3791/56356

⸱

November 16th, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מציגים פרוטוקול כדי לנתח יותרת ולהכין יותרת המוח מקטעים הילתית מלפתח עכברים.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בלוטת יותרת המוח או hypophysis הוא איבר האנדוקרינית חשוב הפרשת הורמונים חיוניים עבור הומאוסטזיס. הוא מורכב שתי בלוטות עם המקורות עובריים נפרד פונקציות – את neurohypophysis ולא את adenohypophysis. בלוטת יותרת המוח המתפתח של העכבר הוא קטן ועדין עם צורה של אליפסה מוארכת. מקטע הילתית הוא העדיף כדי להציג הן adenohypophysis והן neurohypophysis פרוסה אחת של ההיפופיזה העכבר.

המטרה של פרוטוקול זה היא להשיג מקטעים הילתית יותרת המוח תקין עם רקמת שהשתמרו ארכיטקטורות מלפתח עכברים. ב פרוטוקול זה, נתאר בפירוט כיצד לנתח ולעבד יותרת כראוי מלפתח עכברים. ראשית, עכברים נפתרות על-ידי transcardial זלוף פורמלין לפני ניתוח. אז שלוש טכניקות שונות ויבתר מוחלים כדי להשיג שלמות בלוטות יותרת המוח תלוי בגילו של עכברים. עבור עוברי עכברים מגיל 17.5 ימים עובריים (E)-18.5 ו- neonates עד 4 ימים, האזורים סלה כולו לרבות עצם היתד, בלוטה, המשולש העצבים הם גזור. עבור גורים בגילאי כמחנכת ימים (P) 5-14, בלוטות יותרת המוח הקשורים המשולש העצבים הם גזור בכללותה. עבור עכברים מעל בן 3 שבועות, בלוטות יותרת המוח הם בקפידה גזור ללא תשלום מן הרקמות הסובבות. אנחנו גם להציג כיצד להטביע את בלוטות יותרת המוח בכיוון הנכון באמצעות הרקמות הסובבות כמו ציוני דרך כדי להשיג סיפוק מקטעים הילתית. שיטות אלה שימושיים בניתוח תכונות ההתפתחותי היסטולוגית של בלוטות יותרת המוח בפיתוח עכברים.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בלוטת יותרת המוח או hypophysis הוא איבר האנדוקרינית חשוב הפרשת הורמונים חיוניים עבור הומאוסטזיס1,2. מבחינה אנטומית, בלוטת יותרת המוח היא מבנה ' שני-in-one"הכוללת את neurohypophysis, את adenohypophysis. חלקים אלה יש מקורות עובריים שונים, פונקציה אחרת. Neurohypophysis נגזרת של האאקטודרם עצבית, מפריש אוקסיטוצין, הורמון antidiuretic. Adenohypophysis מקורו נרתיק של ראת'קי, אחראי על השחרור של הורמונים לרבות הורמון גדילה, פרולקטין, תירוטרופין, הורמון מגרה זקיק, הורמון מחלמן, הורמון אדרנוקורטיקוטרופי, ו מלנוציט – הורמון מגרה3,4,5

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C57BL/6 עכברים מובאים בתנאים מסוימים ללא הפתוגן. כל שיטות ניסוי בבעלי חיים הם בהתאם להנחיות אושרה על ידי חיה אכפת ועדת האתיקה-השנייה הצבאי לרפואה של אוניברסיטת.

1. דיסקציה של כמחנכת פיתוח בלוטת יותרת המוח

  1. לבצע הרדמה: במקום neonatal עכברים (P0 - P5) על קרח כתוש, כדי ליצור היפותרמיה. עבור עכברים יותר 5 ימים של גיל מבוגר, להזריק urethane 5% (30 µL/g של משקל הגוף) intraperitoneally כדי לגרום הרדמה. להעריך תגובות הזנב toe צובט. להמשיך רק לאחר העכבר אינו מגיב לגירויים יתמודד.
  2. לאבטח את העכבר במצב פרקדן (שוכבת על הגב עם הפנים כלפי מעלה) על ידי בעדינות מקליטה את forepaws ואת hindpaws על משטח העבודה כי הוא מסוגל להיות מוצמד (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מציג שיטה לנתח יותרת מלפתח עכברים. עבור העכבר neonatal, האזורים סלה שלם המכיל את בלוטת יותרת המוח, העצבים המשולש, במסווה עצם היתד היו גזור החוצה מבסיס הגולגולת. בלוטת יותרת המוח קטן ועדין נותרו על כנן במהלך התהליך (איור 1 א'). בלוטות יותרת המוח קשורה העצבים המשולש לרוחב עכברים שגילן עולה על 5 ימים, היו אז מבודד. המבנה ברוטו של בלוטת יותרת המוח מבודד את P7 העכבר השתמר היטב (איור 1B). עבור העכבר P21, בגודל של בלוטת יותר.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לפיתוח מאתר pituitaries, עברו טכנית קשה להשיג מקטעים הילתית נכונה עקב שלהם תכונות זעירים, שברירית, מאפיינים אנטומיים ייחודיים6,8. כמה קבוצות מחקר ולכן בחרה מקטעים מאמצע-הווריד כדי לנתח את המורפולוגיה של עובריים ו neonatal יותרת המוח11,12. למרות המקטע מאמצע-הווריד של יותרת המוח הוא גם מסוגל להראות את הקדמי, ביניים, אונות האחורי בפרוסה אחת, המקטע הילתית מועדף מאוד מכיוון שהוא מאפשר להציג תצוגה המרבי של אלה .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי המענקים של הלאומי מדעי הטבע קרן של סין (31201086, 31470759 ו- 31671219) וקרן מדעי הטבע שנגחאי (12ZR1436900).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<חזקים>כלים/ציוד
מספריים כירורגיים-ישרJinZhongJ21010לרכוש מספקים אחרים
ניתן לרכוש מספריים משובחים-סטרינגטJinZhongWA1010מספקים אחרים
מלקחיים קהיםJinZhongJD1020ניתן לרכוש מספקים אחרים
מלקחיים עדיניםDumontRS-5015לבידוד של יותרת המוח
מחט 26G (0.45 מ"מ)HongDaלמזרק זלוף דרך הלב
(1 מ"ל)BD300841מספקים אחרים
ניתן לרכוש מזרק (10 מ"ל)BDמספקים אחרים ניתן לרכוש
צלחת 35 מ"מCorning430165מספקים אחרים
ניתן לרכוש נייר לניקוי עדשותShuangQuanמספקים אחרים
ניתן לרכוש מיקרוסקופ אנטומיOLYMPUSSZX-ILLB2-200מספקים אחרים
הטמעהThermo Fisher22-272423מספקים אחרים
ניתן לרכוש מערכת קונסולת הטמעת רקמותKEDEEKD-BM11מספקים אחרים
ניתן לרכוש MicrotomeThermo FisherHM315Rמספקים אחרים
ניתן לרכוש שקופיות Superfrost-PlusThermo Fisher22-037-246מספקים אחרים
זכוכית כיסויThermo Fisher12-543מספקים אחרים
מיקרוסקופ פלואורסצנטיOLYMPUSBH2-RFCAמספקים אחרים
<>שם<חזק>חברה<חזק>מספר קטלוגי<חזק>הערות
<חזק>ריאגנטים
אוריתןBBIEB0448
NaClSigmaS9625עבור PBS
KClSigmaP9541עבור PBS
Na2HPO4.12H2OSigma71650עבור PBS
K2HPO4SigmaP2222עבור PBS
NaNO2Sigma237213
הזרקת נתרן הפריןSPHH31022051לזלוף
מלח Paraformaldehyde (PFA)SigmaP6148
אתנולSCR10009218
קסילןSCR10023418
פרפיןתרמו פישר8330
המטוקסיליןסיגמאH9627עבור H& E מכתים
Eosin YSigmaE4009עבור H&
הורמון אנטי גדילה של ארנב מכתים E (GH)הורמוןלנוגדנים צביעה חיסונית
יותרת המוח
ארנב נגד עכבר נוגדן GFAPSigmaG9269לצביעה חיסונית
נגד ארנב עיזים IgG, HRPג'קסון111-035-003לצביעה חיסונית
מערכת TSANEN מוצרי מדעי החייםNEL700לצביעה חיסונית
סטרפטווידין, Alexa Fluor 594Thermo FisherS32356לצביעה חיסונית
Anti-FITC Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090לצביעה חיסונית
ניתן ניתן לרכוש קלטתניתן לרכושניתן לרכוש חזק לאומי תוכנית

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Pituitary Gland DissectionCoronal Section PreparationMouse Pituitary DevelopmentTissue Embedding TechniqueSellar Region IsolationTrigeminal Nerve OrientationParaffin Wax SectioningHistological Analysis MethodImmunolabeling CompatibilityDeveloping Mouse Pituitaries

Related Articles