Method Article

ניתוח והכנת פרוסה הילתית בפיתוח העכבר בלוטת יותרת המוח

DOI:

10.3791/56356

⸱

November 16th, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מציגים פרוטוקול כדי לנתח יותרת ולהכין יותרת המוח מקטעים הילתית מלפתח עכברים.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בלוטת יותרת המוח או hypophysis הוא איבר האנדוקרינית חשוב הפרשת הורמונים חיוניים עבור הומאוסטזיס. הוא מורכב שתי בלוטות עם המקורות עובריים נפרד פונקציות – את neurohypophysis ולא את adenohypophysis. בלוטת יותרת המוח המתפתח של העכבר הוא קטן ועדין עם צורה של אליפסה מוארכת. מקטע הילתית הוא העדיף כדי להציג הן adenohypophysis והן neurohypophysis פרוסה אחת של ההיפופיזה העכבר.

המטרה של פרוטוקול זה היא להשיג מקטעים הילתית יותרת המוח תקין עם רקמת שהשתמרו ארכיטקטורות מלפתח עכברים. ב פרוטוקול זה, נתאר בפירוט כיצד לנתח ולעבד יותרת כראוי מלפתח עכברים. ראשית, עכברים נפתרות על-ידי transcardial זלוף פורמלין לפני ניתוח. אז שלוש טכניקות שונות ויבתר מוחלים כדי להשיג שלמות בלוטות יותרת המוח תלוי בגילו של עכברים. עבור עוברי עכברים מגיל 17.5 ימים עובריים (E)-18.5 ו- neonates עד 4 ימים, האזורים סלה כולו לרבות עצם היתד, בלוטה, המשולש העצבים הם גזור. עבור גורים בגילאי כמחנכת ימים (P) 5-14, בלוטות יותרת המוח הקשורים המשולש העצבים הם גזור בכללותה. עבור עכברים מעל בן 3 שבועות, בלוטות יותרת המוח הם בקפידה גזור ללא תשלום מן הרקמות הסובבות. אנחנו גם להציג כיצד להטביע את בלוטות יותרת המוח בכיוון הנכון באמצעות הרקמות הסובבות כמו ציוני דרך כדי להשיג סיפוק מקטעים הילתית. שיטות אלה שימושיים בניתוח תכונות ההתפתחותי היסטולוגית של בלוטות יותרת המוח בפיתוח עכברים.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בלוטת יותרת המוח או hypophysis הוא איבר האנדוקרינית חשוב הפרשת הורמונים חיוניים עבור הומאוסטזיס1,2. מבחינה אנטומית, בלוטת יותרת המוח היא מבנה ' שני-in-one"הכוללת את neurohypophysis, את adenohypophysis. חלקים אלה יש מקורות עובריים שונים, פונקציה אחרת. Neurohypophysis נגזרת של האאקטודרם עצבית, מפריש אוקסיטוצין, הורמון antidiuretic. Adenohypophysis מקורו נרתיק של ראת'קי, אחראי על השחרור של הורמונים לרבות הורמון גדילה, פרולקטין, תירוטרופין, הורמון מגרה זקיק, הורמון מחלמן, הורמון אדרנוקורטיקוטרופי, ו מלנוציט – הורמון מגרה3,4,5.

בלוטת יותרת המוח נשענת על המשטח הגבי של עצם היתד (אשר) של הגולגולת העכבר ו מחוברת לרצפה של המוח על ידי גבעול שביר. המלון מוקף רוחבית על ידי המשולש העצבים ועל anteriorly ידי הצנטר6,7. בלוטת יש צורה של אליפסה מוארכת עם ציר זמן בניצב לראש. על השטח הגבי שלה, את neurohypophysis, את adenohypophysis יכול בקלות להיות התחום, עם לשעבר הכובש המדיאלי האזור הגבי ולהרחיב את האחרון רוחבית ולא ventrally. במהלך פיתוח כמחנכת, בגודל של יותרת המוח גדל במהירות בחודש הראשון לאחר הלידה8,9. בכל זאת, ההיפופיזה העכבר הוא עדיין קטן מאוד בגודלם במשקל ממוצע של 1.9 מ"ג, קוטר ציר זמן של ~ 3 מ מ למבוגרים10, קוטר ציר זמן של 2-2.5 מ"מ ביום כמחנכת 21 (P21), ולא רק 1-1.5 מ"מ P0.

מקטע הילתית הוא העדיף כדי להציג הן adenohypophysis והן neurohypophysis פרוסה אחת של ההיפופיזה העכבר. עם זאת, כישורים טכניים נדרשים להשיג סיפוק הילתית חלקים ובלוטות יותרת המוח פיתוח עכברים בשל גודל קטן במיוחד שלה האנטומיה ברורה. במאמר זה וידאו, נדגים כיצד לנתח העכבר יותרת ולהכין מקטעים הילתית יותרת המוח בשלבי התפתחות שונים.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C57BL/6 עכברים מובאים בתנאים מסוימים ללא הפתוגן. כל שיטות ניסוי בבעלי חיים הם בהתאם להנחיות אושרה על ידי חיה אכפת ועדת האתיקה-השנייה הצבאי לרפואה של אוניברסיטת.

1. דיסקציה של כמחנכת פיתוח בלוטת יותרת המוח

  1. לבצע הרדמה: במקום neonatal עכברים (P0 - P5) על קרח כתוש, כדי ליצור היפותרמיה. עבור עכברים יותר 5 ימים של גיל מבוגר, להזריק urethane 5% (30 µL/g של משקל הגוף) intraperitoneally כדי לגרום הרדמה. להעריך תגובות הזנב toe צובט. להמשיך רק לאחר העכבר אינו מגיב לגירויים יתמודד.
  2. לאבטח את העכבר במצב פרקדן (שוכבת על הגב עם הפנים כלפי מעלה) על ידי בעדינות מקליטה את forepaws ואת hindpaws על משטח העבודה כי הוא מסוגל להיות מוצמד (קרי, קלקר) בתוך ברדס fume כימי.
  3. לבצע זלוף transcardial.
    1. לחתוך את בית החזה של העכבר עם מספריים כירורגיים כדי לחשוף את הלב (ואיברים אחרים בית החזה).
    2. לאבטח את הלב הפועם עם מלקחיים בוטה והכנס מחט 26G (0.45 מ מ) לתוך החדר השמאלי. המחט מחוברת מזרק 10 מ"ל מלא מלוחים heparinized פוספט buffered (PBS; בתוספת 5 מ"ג/מ"ל נתרן חנקיתי ו 10 הפארין U/mL, pH 7.4, לחמם עד 37 ° C לפני השימוש). מיד אטריום ימין עם מספריים בסדר גזורה להתחיל perfuse לגוף PBS חמים עד הנוזל יציאה אטריום ימין ברור.
      הערה: משוער 5-10 mL PBS יש צורך עכברים neonatal ו- 10-20 מ ל PBS עבור עכברים בוגרים.
    3. להשאיר את המחט מקום ושנה נוספת מזרק מלא עם 4% paraformaldehyde (PFA; pH 7.4). Perfuse 10 mL ו- 20 מיליליטר מקבע עבור neonatal ועכבר P21, בהתאמה.
      התראה: PFA רעיל. הוא עלול לגרום לעור גירויים הנשימה ואת העין נזק. יש ללבוש כפפות ולעבוד תחת ברדס כימי.
  4. לערוף את העכבר מחברים-קבוע וחתך את הגולגולת עם מספריים.
    1. הרם בעדינות את hindbrain מבסיס הגולגולת עם מלקחיים קטנים. -הסימן הראשון אשר, להפסיק להרים אך להחזיק hindbrain, חותכים את גבעול יותרת המוח, סיבי עצב התחברות לבסיס של המוח עם מספריים משובחים. שלב זה הוא קריטי כדי להבטיח כי בלוטת יותרת המוח לא יוסר משם עם המוח.
    2. לאחר מכן להרים את המוח, להסיר את זה. כדי לחשוף את בלוטת יותרת המוח באופן מלא. לחתוך את האזור כולו סלה כולל בלוטת יותרת המוח, העצבים המשולש לרוחב, ו מתחת עצם היתד עם מספריים (כ 3 x 5 מ מ 2).
  5. להכניס את הרקמה ביתור תבשיל 35 מ מ או אחד טוב של צלחת 6-ובכן המכיל 2 מ"ל קר 4% מחברים (pH 7.4). לתקן את הרקמה ב 4 מעלות צלזיוס למשך 40 דקות בשביל P0 - P7 pituitaries, 1h לציון P14 pituitaries, ה 1.5 עבור P21 - P28 pituitaries, ו- h 3 עבור מבוגרים pituitaries.
  6. נוסף דיסוציאציה של יותרת המוח
    1. לרחוץ הרקמה קבוע עם 10 מ"ל PBS, שינויים 5, 15 דקות כל אחד. בלוטת יותרת המוח neonatal יחד עם הרקמות הסובבות שלו ואת מתחת עצם היתד יעובד ישירות על התייבשות. עם זאת, צריך להיות הפומבית יותרת מן העכברים שגילן עולה על 5 ימים נוספים תחת מיקרוסקופ סטריאו.
    2. לשים את הרקמה קבוע לתוך תבשיל 35 מ מ המכיל 1 מ"ל PBS. P5 - P14 pituitaries, להסיר את הקרומים חיבור בין העצבים והעצם עם בסדר. מלקחיים ומספריים, בזהירות לבודד את בלוטת יותרת המוח יחד עם העצבים המשולש לרוחב שלם אלא עוזב את אשר. בלוטת מבודד ועצבים מחוברים באמצעות ממברנות חיבור עם " H "-אוהב את המראה ( איור 1B).
      3. Pituitaries
    3. עבור P21, מבוגר, להסיר את העצבים ואת ממברנות חיבור מסביב בלוטת יותרת המוח, חופשית בלוטת מן הרקמות הסובבות. עוטפים את רקמת יותרת המוח עם עדשה ניקוי נייר טישו ולשים אותו קלטת ההטבעה.
      הערה: גלישת בלוטת יותרת המוח זעיר עם עדשה ניקוי נייר טישו מסייע למנוע אובדן פוטנציאלי של דגימות לשמר את שלמות רקמות בפרוצדורה הטבעה-פרפין הבאה. זה ייתכן שלא יהיה צורך לעטוף את בלוטת יותרת המוח אם היא מעובדת בבקבוקון קטן בהליך הטמעת הקפאה.

2. שעוות פרפין Embedding ו Sectioning

  1. מייבשים דגימות ב הטבעה קלטות עם 50%, 65%, 75% ו-95% אתנול פתרונות למשך 15 דקות כל אחד. לאחר מכן מייבשים עם 3 שינויים של כוהל טהור, 3 דקות כל עבור P0 - P4 בלוטות, 4 דקות לכל עבור P5 - בלוטות P14, ו 5 דקות כל עבור P21 ובלוטות בוגרים. מעונן חלקית עם קסילן, 3 משתנה, 3 דקות כל עבור P0 - P4 בלוטות, 4 דקות לכל עבור P5 - בלוטות P14, ו 5 דקות כל עבור P21 ובלוטות בוגרים. לחדור עם מותך פרפין, שינויים 3, 7 דקות כל עבור P0 - בלוטות P4, ואחריו 8 דקות פעמיים 6 דקות פעם עבור P5 ובלוטות מבוגר.
    הערה: פרמטרים אופטימליים לעיבוד רקמות יכול להיות מדעית מותאם. כדי להשיג חלקים באיכות גבוהה, יש להימנע התייבשות לא מספיקות או נגמר. הדבר נכון עבור ניקוי הרקמה באמצעות קסילן.
  2. התמצאות בעת הטבעה
    1. על טישו הטמעת מערכת מסוף, להסיר את הדגימה הקלטת ומקם אותה לתוך תבנית הבסיס מלא למחצה עם מותך פרפין. כיוון נכון של בלוטת יותרת המוח ההטבעה חיוני סיפוק מקטעים הילתית.
      2. בלוטות יותרת המוח
    2. עבור P21, מבוגר, מקם את בלוטת יותרת המוח עם ציר קצר בניצב למשטח התחתון של תבנית הבסיס (המטוס סעיף). להשתמש היתד עצמות ועצבים המשולש בתור ציוני אנטומיים P0 - P4, P5 - P14 pituitaries, בהתאמה. אוריינט דגימות עם המשולש העצבים או פרופריה חציה של היתד עצמות בניצב למשטח התחתון של תבנית הבסיס שלהם.
      3. עם מלקחיים בסדר ומחוממת,
    3. החזק בעדינות את הרקמה במיקום הרצוי עד שהשעווה הופך מוצק למחצה על צלחת קירור. למעלה למעלה את התבנית עם מותך פרפין. לאפשר לבלוק פראפין להתקרר עד השעווה לחלוטין פני השטח למוצק.
      הערה: בלוטת יותרת המוח ביום עובריים 18.5 (E18.5) יכולים להיות מטופלים באופן זהה כמו בלוטת יותרת המוח neonatal. אבל pituitaries (ראת'קי ' s שקיות) יותר צעיר ממה צריך להיות מוטבע עם הראש כולו, מונחה עם הציר הסאגיטלי (מתוך הפה כדי occiput) בניצב למשטח התחתון של תבנית הבסיס E16.5.
  3. להירגע לבלוק פראפין ב-20 מעלות צלזיוס למשך 10-20 דקות ולאחר מכן לחתוך אותו לתוך דק לפרוסות (עובי 4 מיקרומטר הוא מועדף) עם מיקרוטום. כדי לקבל את המקטעים הילתית משביע רצון, לכוונן את המיקום של פרפין בלוקים במהלך חלוקתה. לטעון את הפרוסות רקמות על גבי זכוכית מצופים polylysine שקופיות כדי למנוע התנתקות של פרוסות בהליכים הבאים.
    הערה: לחלופין, דגימות יכול להיות מיובש ב 15%, 30% (W/V) פתרונות סוכרוז (ב- PBS) ב 4 ° C עד הם שוקעים לתחתית, משובצים במתחם הטבעה-הקפאה באמצעות אותה שיטה שבה התמצאות, במהירות קפוא בקרח יבש. ואז חותכים את רקמת קפוא פרוסות של 8-10 מיקרומטר באמצעות cryostat. המורפולוגיה של הקפאה-מקטעים, עם זאת, לעיתים קרובות נחות הפרפין מקטעים.

3. H & E מכתים ולקרוא Immunofluorescence

  1. חמים השקופיות על חום לחסום ב 55 ° C ו- dewax עם קסילן, 2 שינויים, 4 דקות כל אחד. מייבשים את הדגימות עם 95% אתנול פעמיים, 75% אתנול פעמיים, 3 דקות כל אחד. לשטוף את השקופיות עם מים מזוקקים למשך 5 דקות על מטרף.
  2. עבור H & E מכתים, כתם בסעיפים אלום hematoxylin פתרון 6 דקות, לשטוף בשחקן פוטבול פועלing מי ברז למשך 2 דקות, להבדיל במים אמוניה 0.2% 45 s ו מחדש לשטוף במים למשך 2 דקות. לאחר מכן מייבשים הסעיפים עם אתנול 95% 1 דקות, הכתם עם אאוזין עבור 2 דק ברצף מייבשים, נקה, ואת הר-
  3. Immunofluorescence תיוג
    1. פנקו הסעיפים עם מתנול המכיל 3% H 2 O 2 ו- 0.01% נאן 3 עבור 20 דקות בטמפרטורת החדר, כדי להשבית peroxidases אנדוגני. לאחזר אנטיגנים על ידי הרתחה ובסעיף המאגר אחזור (EDTA 1 מ"מ ו 1 מ"מ טריס-HCl, pH 7.4) בסיר לחץ במשך 2 דק Incubate הסעיפים באמצעות מאגר חסימה (סרום עיזים 5% ב- PBS) במשך 30 דקות ב- 37 מעלות צלזיוס.
    2. דגירה מקטעים עם הארנב הורמון אנטי-גדילה (GH) נוגדנים (1:2, 000) או ארנב נוגדן anti-גליה חלבון חומצי fibrillary (GFAP) (1:2, 000) מדולל במאגר חסימה למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס
    3. תקופת דגירה מקטעים עם נוגדנים משניים (עז נגד הארנב IgG-HRP, 1:300 במאגר חסימה) של 35 דקות ב- 37 מעלות צלזיוס.
    4. להגביר את האותות באמצעות Biotinyl Tyramide (1:50 בתוך תמיסת מלח טריס באגירה מלאה המכילה 2 O 0.3% H 2) למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר, והמחש עם Streptavidin-Alexa594 או 488 (1:300 בחסימה מאגר, 30 דקות, 37 ° C).
    5. Counterstain הגרעינים עם דאפי (50 מ"ג/ליטר ב- PBS) עבור 5 דקות בטמפרטורת החדר.
      הערה: לא יתכן צורך להגביר את האות באמצעות מערכת הגברה האות Tyramide (TSA). לחלופין, ניתן להשתמש נוגדנים משניים מצומדת פלורסצנטיות להמחיש את האות.
  4. רכוש תמונות באמצעות מיקרוסקופ פלורסצנטיות מצויד דאפי, טקסס ואדום, מערכות סינון FITC, × 4/0.13 כדי × 40/0.75 יעדים, 5.0 מגה פיקסל מצלמה. השתמש ה-360, 488, 594 ננומטר לייזר אורכי גל עבור הדמיה דאפי, אלקסה 488 - ומקטעי שהוכתמו 594 אלקסה, בהתאמה. למטב את עוצמת הלייזר (0.8 היה משמש בדרך כלל), זמן החשיפה לרמות הרצויות לכל ערוץ. ללכוד את התמונה תחת השליטה של תמונה רכישת תוכנה, כיסוי הדימויים פלורסצנטיות לאחר מכן באמצעות תוכנת עיבוד תמונה-

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מציג שיטה לנתח יותרת מלפתח עכברים. עבור העכבר neonatal, האזורים סלה שלם המכיל את בלוטת יותרת המוח, העצבים המשולש, במסווה עצם היתד היו גזור החוצה מבסיס הגולגולת. בלוטת יותרת המוח קטן ועדין נותרו על כנן במהלך התהליך (איור 1 א'). בלוטות יותרת המוח קשורה העצבים המשולש לרוחב עכברים שגילן עולה על 5 ימים, היו אז מבודד. המבנה ברוטו של בלוטת יותרת המוח מבודד את P7 העכבר השתמר היטב (איור 1B). עבור העכבר P21, בגודל של בלוטת יותר...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לפיתוח מאתר pituitaries, עברו טכנית קשה להשיג מקטעים הילתית נכונה עקב שלהם תכונות זעירים, שברירית, מאפיינים אנטומיים ייחודיים6,8. כמה קבוצות מחקר ולכן בחרה מקטעים מאמצע-הווריד כדי לנתח את המורפולוגיה של עובריים ו neonatal יותרת המוח11,12. למרות המקטע מאמצע-הווריד של יותרת המוח הוא גם מסוגל להראות את הקדמי, ביניים, אונות האחורי בפרוסה אחת, המקטע הילתית מועדף מאוד מכיוון שהוא מאפשר להציג תצוגה המרבי של אלה ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי המענקים של הלאומי מדעי הטבע קרן של סין (31201086, 31470759 ו- 31671219) וקרן מדעי הטבע שנגחאי (12ZR1436900).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<חזקים>כלים/ציוד
מספריים כירורגיים-ישרJinZhongJ21010לרכוש מספקים אחרים
ניתן לרכוש מספריים משובחים-סטרינגטJinZhongWA1010מספקים אחרים
מלקחיים קהיםJinZhongJD1020ניתן לרכוש מספקים אחרים
מלקחיים עדיניםDumontRS-5015לבידוד של יותרת המוח
מחט 26G (0.45 מ"מ)HongDaלמזרק זלוף דרך הלב
(1 מ"ל)BD300841מספקים אחרים
ניתן לרכוש מזרק (10 מ"ל)BDמספקים אחרים ניתן לרכוש
צלחת 35 מ"מCorning430165מספקים אחרים
ניתן לרכוש נייר לניקוי עדשותShuangQuanמספקים אחרים
ניתן לרכוש מיקרוסקופ אנטומיOLYMPUSSZX-ILLB2-200מספקים אחרים
הטמעהThermo Fisher22-272423מספקים אחרים
ניתן לרכוש מערכת קונסולת הטמעת רקמותKEDEEKD-BM11מספקים אחרים
ניתן לרכוש MicrotomeThermo FisherHM315Rמספקים אחרים
ניתן לרכוש שקופיות Superfrost-PlusThermo Fisher22-037-246מספקים אחרים
זכוכית כיסויThermo Fisher12-543מספקים אחרים
מיקרוסקופ פלואורסצנטיOLYMPUSBH2-RFCAמספקים אחרים
<>שם<חזק>חברה<חזק>מספר קטלוגי<חזק>הערות
<חזק>ריאגנטים
אוריתןBBIEB0448
NaClSigmaS9625עבור PBS
KClSigmaP9541עבור PBS
Na2HPO4.12H2OSigma71650עבור PBS
K2HPO4SigmaP2222עבור PBS
NaNO2Sigma237213
הזרקת נתרן הפריןSPHH31022051לזלוף
מלח Paraformaldehyde (PFA)SigmaP6148
אתנולSCR10009218
קסילןSCR10023418
פרפיןתרמו פישר8330
המטוקסיליןסיגמאH9627עבור H& E מכתים
Eosin YSigmaE4009עבור H&
הורמון אנטי גדילה של ארנב מכתים E (GH)הורמוןלנוגדנים צביעה חיסונית
יותרת המוח
ארנב נגד עכבר נוגדן GFAPSigmaG9269לצביעה חיסונית
נגד ארנב עיזים IgG, HRPג'קסון111-035-003לצביעה חיסונית
מערכת TSANEN מוצרי מדעי החייםNEL700לצביעה חיסונית
סטרפטווידין, Alexa Fluor 594Thermo FisherS32356לצביעה חיסונית
Anti-FITC Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090לצביעה חיסונית
ניתן ניתן לרכוש קלטתניתן לרכושניתן לרכוש חזק לאומי תוכנית

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S., Rosenfeld, M. G. Molecular physiology of pituitary development: signaling and transcriptional networks. Physiol Rev. 87 (3), 933-963 (2007).
  4. Bancalari, R. E., Gregory, L. C., McCabe, M. J., Dattani, M. T. Pituitary gland development: an update. Endocr Dev. 23, 1-15 (2012).
  5. Kelberman, D., Rizzoti, K., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C., Dattani, M. T. Genetic regulation of pituitary gland development in human and mouse. Endocr Rev. 30 (7), 790-829 (2009).
  6. Peker, S., Kurtkaya-Yapicier, O., Kilic, T., Pamir, M. N. Microsurgical anatomy of the lateral walls of the pituitary fossa. Acta Neurochir (Wien). 147 (6), 641-648 (2005).
  7. Wolpert, S. M., Molitch, M. E., Goldman, J. A., Wood, J. B. Size, shape, and appearance of the normal female pituitary gland. AJR Am J Roentgenol. 143 (2), 377-381 (1984).
  8. Carbajo-Perez, E., Watanabe, Y. G. Cellular proliferation in the anterior pituitary of the rat during the postnatal period. Cell Tissue Res. 261 (2), 333-338 (1990).
  9. Nantie, L. B., Himes, A. D., Getz, D. R., Raetzman, L. T. Notch signaling in postnatal pituitary expansion: proliferation, progenitors, and cell specification. Mol Endocrinol. 28 (5), 731-744 (2014).
  10. Tzou, S. C., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of mouse pituitary immunogen for the induction of experimental autoimmune hypophysitis. J Vis Exp. (46), (2010).
  11. Budry, L., et al. Related pituitary cell lineages develop into interdigitated 3D cell networks. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (30), 12515-12520 (2011).
  12. Wilson, D. B., Wyatt, D. P. Histopathology of the pituitary gland in neonatal little (lit) mutant mice. Histol Histopathol. 7 (3), 451-455 (1992).
  13. Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device. J Neurosci Methods. 12 (2), 141-149 (1984).
  14. Cao, D., et al. ZBTB20 is required for anterior pituitary development and lactotrope specification. Nat Commun. 7, 11121(2016).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Pituitary Gland DissectionCoronal Section PreparationMouse Pituitary DevelopmentTissue Embedding TechniqueSellar Region IsolationTrigeminal Nerve OrientationParaffin Wax SectioningHistological Analysis MethodImmunolabeling CompatibilityDeveloping Mouse Pituitaries

Related Articles