מאמר שיטה

עיבוד של רקמת הלב האנושי כלפי עצמי בהרכבת הידרוג במבחנה ויישומים In Vivo מטריצה חוץ-תאית

DOI:

10.3791/56419

⸱

4 בדצמבר 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Charité - Universitätsmedizin Berlin, corporate member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin, and Berlin Institute of Health, 2Berlin-Brandenburg Center for Regenerative Therapies (BCRT), 3German Center for Cardiovascular Research (DZHK), 4Deutsches Herzzentrum Berlin (DHZB), 5Department of Cardiovascular Surgery, Charité - Universitätsmedizin Berlin, corporate member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin, and Berlin Institute of Health

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר את decellularization מלא של שריר הלב האנושי תוך שמירה על מרכיביו מטריצה חוץ-תאית. עיבוד נוסף של התוצאות מטריצה חוץ-תאית בייצור של microparticles ו הידרוג וההספק עצמית של cytoprotective.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מטריצה חוץ-תאית acellular ההכנות שימושיים עבור לימוד אינטראקציות סלולרי-מטריקס ולהקל תא משובי טיפול יישומים. מספר מוצרים מסחריים מטריצה חוץ-תאית זמינים כמו hydrogels או ממברנות, אך אלה לא ניחנת פעילות ביולוגית רקמות ספציפיות. כי זלוף decellularization בדרך כלל לא אפשרי עם רקמת הלב האנושי, פיתחנו תהליך decellularization 3-צעד טבילה. פרוסות שריר הלב האנושי רכש במהלך הניתוח הראשון שטופלו hyperosmolar דטרגנט ללא פירוק מאגר, ואחריו הדגירה עם יונית דטרגנט, dodecyl סולפט נתרן, ואת התהליך הושלם על ידי ניצול הפעילות DNase מהותי של סרום שור בעובר. טכניקה זו התוצאה ללא תא גיליונות של מטריצה חוץ-תאית לב עם נשמר בעיקר סיבי רקמת ביופולימרים ואדריכלות הרכב, אשר הוצגו לספק רמזים סביבתיים מסוימים כדי אוכלוסיות הלב תא גזע pluripotent תאים. מטריצה חוץ-תאית לב גליונות שניתן ואז עוד יותר מעובד לאבקה microparticle ללא שינוי כימי נוסף או, באמצעות עיכול פפסין לטווח קצר, לתוך הידרוג מטריצה חוץ-תאית לב וההספק עצמית עם משומר אתריים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מטריצות (ECM) מספק לא רק מבנה תומך אבל חשוב גם עבור תא ביולוגי, רקמות לתפקד1. בלב, ECM משתתף בוויסות תגובות pathophysiologic כגון פיברוזיס, דלקת, אנגיוגנזה, הפונקציה כויץ cardiomyocyte ואת הכדאיות קדמון תושב גורל. בנוסף מרכיביו העיקריים - סיבי glycoproteins, glycosaminoglycans ו proteoglycans - הוא מכיל שורה של גורמי גדילה מופרשים ציטוקינים, עלי הלוואי קרומיים שלפוחית המכילה2,של חומצות גרעין וחלבונים -3.

זה הפך לאחרונה כי ההכנות ECM acellular הן לא רק שלא יסולא בפז ללמוד אינטראקציות סלולרי-מטריקס, אלא גם עבור יישומים פוטנציאליים מבוססת תא טיפולית. החשיבות של מתן סביבה נאותה התא טיפולית מוצרים או רקמות מהונדסים כעת ידוע נרחב. נעשים ניסיונות לשלב תא המתלים או חומרים פעילים עם מוגדר hydrogels biopolymeric4,5,6 או עם קוקטיילים חלבון מופרש על ידי תאי מאתר סרקומה (קרי, Matrigel, Geltrex) 7. עם זאת, לשעבר מוגבלת אתריים האחרונים הם בעייתיים בתהליכים GMP-כיתה, שניהם חסרים את אתריים רקמות ספציפיות של הלב ECM (cECM)8,9,10, 11,12,13.

Decellularization של שריר הלב בעבר בוצעה על ידי זלוף בלב שלם באמצעות ה-14,להערכת כלילית15. אמנם זה אפשרי בלבבות בעלי חיים, לבבות אדם שלם זמינים רק לעתים רחוקות. לפיכך, תהליך טבילה המאפשר טיפול דגימות רקמה שהושג בחדר הניתוח היה המועדף. פרוטוקול "3-צעד" שלנו מכיל 3 נפרד הדגירה שלבים כלומר פירוק, solubilization, והסרת ה-DNA. זה מניב ECM שריר הלב האנושי עם משומר בעיקר חלבון, גליקוזאמינוגליקן קומפוזיציה16,17. פרוסות cECM אלה מאפשרים מחקרים במבחנה של התא-מטריקס אינטראקציות אבל מתאים היטב עבור יישומים פוטנציאליים בקנה מידה האדם טיפולית. תהליך הייצור הוארך אז כדי לייצר lyophilized cECM microparticles או של הידרוג cECM18.

פרוטוקול זה מאפשר decellularization של שריר הלב האנושי המתקבל דגימות כירורגי, שמירה על המרכיבים העיקריים של מטריצה חוץ-תאית שריר הלב (ECM) ופעילותם וחיסונים. פרוטוקול זה מומלץ כאשר ECM הלב האנושי עם אתריים רקמות ספציפיות שהשתמרו נדרשת ללימודים ניסיוני של אינטראקציות סלולרי-מטריקס, או כאשר סביבה מתאימה יש צורך גישות מבוססות תא התחדשות שריר הלב. בעקרון, זה גם אפשרי להתאים פרוטוקול זה בתנאי GMP-כיתה, כך השימוש cECM מעובד צריך להיות ריאלי יישומים טיפוליים בעתיד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול המחקר תואמת עקרונות אתיים שמתואר את הצהרת הלסינקי, שאושר על ידי סקירה מוסדיים המנהלים ואתיקה ועדת צ'אריטה הרפואי האוניברסיטאי. כל המטופלים סיפק נכתב, הסכמה מדעת לשימוש של רקמת הלב ללימודי ניסיוני.

1. הכנה של שריר הלב האנושי חלוקתה

  1. להשיג את שריר הלב הימני חדרית (גודל משתנה בהתאם לסוג הניתוח) ישירות מתוך חדר הניתוח של תחבורה PBS קר במיכל סטרילי.
  2. הסר את כל רקמת שומן עם איזמל סטרילי עם להב מספר 10 בתנאים סטריליים.
  3. חותכים שריר הלב קוביות של 1 x 1 x 1 ס מ בעזרת אזמל.
  4. מניחים את הקוביות צינורות סטרילי 50 מ.
    הערה: כדי להשהות, לבצע צעד 1.5, אחרת המשך לשלב 2.2. הימנע מחזורים ההקפאה חוזרות ונשנות-הפשרה כדי למנוע השפלה חלבון לבין ירידה באיכות הרקמות.
  5. לאחסן הצינורות המכילים את הקוביות ב-80 מעלות צלזיוס. ניתן לאחסן את הרקמה במשך מספר חודשים.

2. חלוקתה של קוביות שריר הלב לפרוסות

  1. קח את צינור המכיל את קוביות מוכן מהמקפיא.
  2. תחבורה על הקרח cryostat.
  3. הגדר את הטמפרטורה אובייקט והרכבים-15 מעלות צלזיוס.
    הערה: ככל הנראה חיוני להבטחת חלוקתה מושלם.
  4. מקררים שפופרות ריק 50 מ ל, בולים בבית הבליעה או על קרח יבש.
  5. הוסיפו שכבה (כ 0.5 - 1.0 מ"ל) cryosection בינוני על גבי חותמת קר ולתת זה להקפיא עד שזה לבן ומוצק.
  6. להוסיף שכבה נוספת של cryosection בינוני, מניחים קוביית שריר הלב על גבי שכבה זו.
  7. ודא כי המדיום cryosection, שריר הלב קפואים לגמרי לפני שתמשיך.
    הערה: כאשר המדיום ולדגום cryosection שאינן מוקפאות חלוקתה יהיה פגום. Cryosection קפוא לגמרי בינוני פונה מן נוזל שקוף אחיד, לבן ו שאינם שקופים. קוביות שריר הלב צריך לפחות 30 דקות עד 1 h לקפוא לחלוטין אם ממשיך מיד מהשלב 1.4. כאשר הרקמה קפוא זה צריך עיוות כאשר נגע/מטופל עם פינצטה.
  8. להוסיף חותמת עם שריר הלב הקפוא המחזיק והדק את כל הברגים.
  9. חתוך את פני השטח של הרקמה עד השטח אפילו אופטים מתקבל.
  10. הגדר חלוקתה עובי 300 מיקרומטר.
  11. בסעיף שריר הלב הקפוא עם חלוקתה אוטומטית. זה מבטיח מקטעים חתוכים אחיד. כ- 30-40 מקטעים באפשרותך נפרס מקוביית אחד.
  12. מקם כל פרוסה אחרי חלוקתה באופן רופף צינור precooled 50 מ.
    הערה: לא לחץ את פרוסות או חבילת בחוזקה. פרוסות כ-40 יכולים להשתלב שפופרת אחת.
  13. סגור את הצינורות מלא ומניחים על קרח.
    הערה: כדי להשהות ללכת על צעד 2.14, אחרת המשך לשלב 3.2.
  14. חנות פרוסות שריר הלב ב-80 מעלות צלזיוס. ניתן לאחסן את הפרוסות במשך מספר חודשים.

3. decellularization של שריר הלב האנושי פרוסות

  1. קח את המספר הדרוש של 50 מ ל צינורות המכיל מקטעים שריר הלב המקפיא-80 ° C וגם הובלה בקירור.
  2. להעביר הסעיפים קפוא של צינורות 50 מ ל כל שלב 3.1 לתוך הספל סטרילי אחד. פרוסות כ-40 נוספים כשהספל למחזור 50 מ. הספל צריך להיות 3 פעמים את הנפח של הצינורות 50 מ; למשל, עבור decellularization של שפופרת 50 מ ל אחת להשתמש גביע 150 מ.
  3. להוסיף פתרון פירוק 50 מ ל (10 מ"מ. טריס, 0.1% w/v EDTA, pH 7.4 H2O) למחזור 50 מ עם פרוסות שריר הלב.
  4. לנער את הפרוסות שריר הלב בתוך סטרילי במהירות של 100-150 סל ד ברציפות כבר שעתיים בטמפרטורת החדר.
  5. מסננים את הנוזל עם הפרוסות רקמות דרך מסננת גסה. להעביר את הפרוסות רקמות עם פינצטה בוטה גביע סטרילית חדשה. להוסיף 50 מ של 0.5% מרחביות PBS למחזור הראשוני 50 מ של שריר הלב פרוסות (למשל, שימוש 100 מ ל מרחביות פתרון כאשר הם להיות decellularized צינורות 50 מ ל שני סעיפים שריר הלב).
  6. לנער ברציפות במשך 6-אייץ '-100-150 סל ד בטמפרטורת החדר.
  7. מסננים את הנוזל עם הפרוסות רקמות דרך מסננת גסה. להעביר את הפרוסות רקמות עם פינצטה בוטה גביע סטרילית חדשה ולשטוף 3 פעמים עם 50 מל PBS למשך 10 דקות תוך כדי טלטול-150 סל ד. לאחר מכן, לשטוף בן לילה ב- PBS עם 1% פניצילין/סטרפטומיצין ו 1% ניסטטין (PBS-P/S-N)-100-150 סל ד ו- 4 מעלות צלזיוס תוך טלטול.
    הערה: שטיפה חיוני להסיר לחלוטין את כל מרחביות שיורית. שאריות שנותרו למען חברה דמוקרטית רעילים כאשר ה-ECM משמש בשילוב עם תאים.
  8. להסיר את הפתרון כביסה ולהוסיף 25 מ ל טרופה FBS (37 ° C) עם 1% פניצילין/סטרפטומיצין ו 1% ניסטטין לפרוסות decellularized למחזור הראשוני 50 מ של שריר הלב פרוסות.
  9. תקופת דגירה של h 3-37 מעלות צלזיוס. בשלב זה, דנ הנותרים מוסר מתוך מטריצת עקב פעילות DNase מהותי FBS.
  10. להעביר את הפרוסות גביע סטרילית חדשה ולשטוף 3 פעמים עם 50 מל PBS למשך 10 דקות תוך כדי טלטול-150 סל ד.
    הערה: הפרוסות ECM יכול להיות מאוחסן PBS-P/S-N ב 4 מעלות צלזיוס למשך מספר ימים. עם זאת, מומלץ להמשיך מיד.

4. עיבוד של cECM Decellularized כדי אבקה

  1. מניחים את פרוסות ECM באופן רופף בצלחת 6-ובכן סטרילית חדשה. להקפיא את ה-ECM ב-80 מעלות צלזיוס, lyophilize 2 ימים ב- איזה שהוא לופילייזר.
    הערה: ניתן להניח פרוסה אחד או יותר לכל טוב. לסדר את פרוסות לכסות לחלוטין את פני השטח של הבאר. חופפים את הפרוסות לא משפיעה על ההצלחה pulverization הבאים.
  2. עבור pulverization של הפרוסה ECM, כרסום מסוים לשימוש צינורות (ראה טבלה של חומרים) המכיל 1.4 מ מ קרמיקה חרוזים. למלא הצינורות באופן רופף lyophilized ECM באמצעות פינצטה בוטה סטרילי. לקבלת תוצאות מיטביות, מומלצת במשקל כולל של ECM בין 10-20 מ"ג.
    הערה: אם ה-ECM ארוזה חזק מדי הצינורות הטחינה תהליך pulverization שלילית יושפעו.
  3. Snap-הקפאת הצינורות של חנקן נוזלי.
    זהירות: חנקן נוזלי בטמפרטורה נמוכה מאוד, לענוד הגנה אישית המתאימה.
  4. הוספת הצינורות קפוא לתוך המכונה הטחינה, pulverize את ECM.
    1. הגדרת משך זמן של 30 s ומקסימום מהירות ולהתחיל את המכשיר.
    2. לאחר שסיים, להוציא את הצינורות, snap-להקפיא שוב בחנקן נוזלי.
    3. חזור על חמש פעמים.
  5. לשטוף את microparticles מן הצינורות על-ידי הוספת 1 מ"ל ddH2O לכל צינור, טלטול או מערבולת עבור solubilizing מלאה. לסנן את הפתרון הטרוגנית באמצעות רשת מיקרומטר 200 לתוך צינור 50 מ.
  6. להקפיא את הצינור ב- 80 ° C או נוזל חנקן.
  7. החלף את המכסה הרגיל של הצינור מסנן 0.22 מיקרומטר. זה מכסה המסנן מונע את האבקה זורם הצינור אבל מאפשר זרימת אוויר על אידוי מים.
  8. הכנס הצינורות איזה שהוא לופילייזר, lyophilize שוב כדי להסיר את המים מן השלב (שלב 4.5)
    הערה: Lyophilization בשלב זה יכול לקחת עד 3 ימים.
  9. לאחסן את האבקה ב-80 מעלות צלזיוס עד עיבוד נוסף או להמשיך עם צעד 5.1.

5. אנזים Homogenizing מבוסס על cECM מיקרו-חלקיקים

  1. להמיס פפסין חזירי ב- HCl M 0.01 (pH 2.0) על ריכוז של 1 מ"ג/מ"ל. מניחים על מטרף רוטרי בטמפרטורת החדר עד זה היא התפרקה לחלוטין.
  2. להמיס האבקה ECM האנושי lyophilized (שלב 4.8) הפתרון פפסין ריכוז סופי של 10 מ"ג/מ"ל. מערבבים ביסודיות באמצעות pipetting. הנפח הכולל תלוי הכמות של פתרון ה-ECM הדרושים. לדוגמה, להמיס 10 מ ג של אבקת ECM 1 מ"ל תמיסת פפסין.
    הערה: המסת חלקיקים ניתן לתמוך דרך עדינה vortexing (1000-1500 סל ד). נשארו גושים של microparticles תהיה השפעה שלילית על העיכול.
  3. להעביר את הפתרון 2 mL צינורות עם נפח של 1 מ"ל למחזור.
  4. הצב הצינורות ב שייקר הצינור עבור 48 שעות ב 27 ° C ו- 1200 סל ד.
  5. מוציאים הצינורות ניעור ומניחים על הקרח או בעל שפופרת טרום מקורר.
  6. לערבב 1/9 נפח של פתרון ה-ECM של PBS קר x 10 (pH 7.4) עם 1/10 נפח של פתרון ה-ECM של קור 0.1M NaOH צינור precooled ובמקום על קרח. תערובת זו לנטרל את פתרון ה-ECM מעוכל, בלתי הפיך להשבית את פפסין.
  7. הוסף את פתרון ה-ECM ניטרול תערובת, לערבב ביסודיות באמצעות pipetting או vortexing.
  8. הגדר את ה-ECM לריכוז הרצוי תסיים x 1 (pH 7.4). ניתן לבדוק את ה-pH של התמיסה בנייר pH.
    הערה: חישוב לדוגמה עבור 10 מ ל מתעכל פתרון ה-ECM:
    להוסיף 10 מ ג פפסין חזירי 10 מ"ל HCl (pH 2.0).
    להוסיף אבקת 100 מ ג ECM פפסין פתרון.
    הערה: חישוב לדוגמה עבור נטרול 10 מ ל מתעכל פתרון ה-ECM והגדרת את הריכוז 8 מ"ג/מ"ל:
    Volהסופי = cלהתחיל x Volלהתחיל / cהסופי = 10 mg / mL x 10 מ"ל / 8 מ"ג/מ"ל = 12.5 מ ל
    Vol10xPBS = Volלהתחיל / 9 = 1/9 מהערוץ 10 x 10 מ"ל = 1.11 מ ל
    VolNaOH = Volלהתחיל / 10 = 1/10 מ 10 מ ל = 1 מ"ל
    Vol1xPBS = Volהסופי - Volלהתחיל - Vol10xPBS - VolNaOH = מ"ל - 10 מ ל-.11 mL-1 מ"ל = 0.39 mL

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול 3-צעד עבור decellularization של שריר הלב האנושי המובאת כאן תוצאות כמעט מוחלטת הסרת חומר הסלולר, תוך שימור המרכיבים ECM העיקריים של המבנה fibrillar של ECM. לאחר decellularization, הסרת תאים מן הרקמה ברוטו הוא ברור על-ידי שינוי צבע (איור 1 א'). ניתוח היסטולוגית עם כתמי H & E ו- Trichrome מאסון גילה העדר מוחלט של תאים שלמים שיורית (איור 1B). מבחני כמותיים עבור רכיבים בודדים ECM חשף הסרה מלאה יותר של ה-DNA ושימור טוב יות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בעת הכנת ECM שריר הלב האנושי, המטרה היא להשיג את הדברים הבאים: הסרת חומרים רלוונטיים הסלולר immunogenic, שמירה על שלמות ECM ו אתריים, עקרות, אי רעילות של המוצר הסופי, תאימות GMP-תהליך, ו התאמת המוצר עבור יישום נתון במונחים של טיפול. על ידי שילוב פרוטוקול 3-צעד decellularization שלנו עם עיבוד נוסף לתוך microparticles או הידרוג וההספק עצמית, מתקבל חומר ECM הלב האנושי הוא בעל פעילות ביולוגית ספציפית, הוא קל לטפל, יש את הפוטנציאל מספר יישומים במבחנה וב ויוו, הדומה מה הוכח למוצרים ECM מספר בעלי חיים מינים

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול המחקר תואמת עקרונות אתיים שמתואר את הצהרת הלסינקי. חולים שסופקו מדעת לשימוש של הרקמה למטרות מחקר, התהליך של איסוף רקמת אושרה על ידי הועד המוסדי יו ר ועדת האתיקה של צ'אריטה - Universitätsmedizin ברלין (EA4/028/12).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
BalanceDR Precisa , Dietikon , שוויץPrecisa XR 205SM
Blades Nr.10 Skalpell Nr.3InstrumenteNRW, Erftstadt, גרמניהSK-10-004
צלחות תרבית תאים (6-well)Greiner , Frickenhausen , גרמניה657160
Cryostat CMLeica , וצלר, גרמניה3050S
EDTACarl Roth , קרלסרוה, גרמניה8043.3
שפופרות תגובה אפנדורף (1.5 או 2 מ"ל)גריינר, פריקנהאוזן, גרמניה616201, 623201
פלקון 15 מ"ל, 50 מ"לגריינר, פריקנהאוזן, גרמניה188271, 227270
סרום בקר עוברי (FBS)ביוכרום, ברלין, גרמניהS 0115
מערכת ייבוש בהקפאהLabconco, קנזס סיטי, ארה"ב7670520
מקפיא (-80° C)Thermo Scientific, Waltham, MA, ארה"בForma 900 Series
HClCarl Roth, קרלסרוהה, גרמניה281.1
Microtome Blades Type 819Leica, Wetzlar, Germany14035838925
Minilys HomogeniserPEQLAB Biotechnologie GmbH, Erlangen, גרמניה91-PCSM
NaOHCarl Roth , קרלסרוה, גרמניהK021.1
NystatinPAN Biotech, Aidenbach, גרמניהP06-07800
PBSThermo Scientific, וולת'אם, MA, ארה"ב14190-094
פניצילין/סטרפטומיציןLife Technologies, דרמשטדט, גרמניה15140122
PepsinSigma-Aldrich, Taufkirchen, גרמניהP6887-1G
Precellys Keramik-Kit 1.4 מ"מPeqlab Biotechnolgie, ארלנגן, גרמניה91-PCS-CK14
Rotamax 120 Plate shakerHeidolph, Schwabach, גרמניה544-41200-00
SDSCarl Roth , קרלסרוה, גרמניהCN30.3
מיקרוסקופ סטריאוLeica , Wetzlar, גרמניהM125
Steriflip-GP, 0,22 µ mMerck Millipore, דרמשטדט, גרמניהSCGP00525
מערבלי נדנדה ורולרים אנלוגיים של סטיוארטסיגמא-אולדריץ', טאופקירכן, גרמניהZ675113-1EA
רקמות Tek O.C.T תרכובתהרטנשטיין, וירצבורג, גרמניהTTEK
200µ מSarstedt, Nü mbrecht, גרמניה798.200.500
TRISCarl Roth, קרלסרוה, גרמניה5429.3
vedena Skalpellgriff איור 3, סטנדרטי, 125 מ"מדגשים רפואיים, רוהרדורף, גרמניהCV102-003
Vortex-Genie2Scientific Industry, ניו יורק, ארה"בSI-0256
סט עירוי

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Elliott, R., Hoehn, J. Use of Commercial Porcine Skin for Wound Dressings. Plastic and reconstructive surgery. 52 (4), 401-405 (1973).
  2. Rienks, M., Papageorgiou, A. -P., Frangogiannis, N. G., Heymans, S. Myocardial Extracellular Matrix: An Ever-Changing and Diverse Entity. Circulation Research. 114 (5), 872-888 (2014).
  3. Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction. Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).
  4. Boopathy, A. V., Martinez, M. D., Smith, A. W., Brown, M. E., Garcia, A. J., Davis, M. Intramyocardial Delivery of Notch Ligand-Containing Hydrogels Improves Cardiac Function and Angiogenesis Following Infarction. Tissue Eng Part A. 21 (17-18), 2315-2322 (2015).
  5. Gaetani, R., Yin, C., et al. Cardiac derived extracellular matrix enhances cardiogenic properties of human cardiac progenitor cells. Cell Transplant. , (2015).
  6. Kraehenbuehl, T. P., Ferreira, L. S., et al. Human embryonic stem cell-derived microvascular grafts for cardiac tissue preservation after myocardial infarction. Biomaterials. 32 (4), 1102-1109 (2011).
  7. Zhang, J., Klos, M., et al. Extracellular matrix promotes highly efficient cardiac differentiation of human pluripotent stem cells: The matrix sandwich method. Circulation Research. 111 (9), 1125-1136 (2012).
  8. Fong, A. H., Romero-López, M., et al. Three-Dimensional Adult Cardiac Extracellular Matrix Promotes Maturation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes. Tissue Engineering Part A. 22 (15-16), 1016-1025 (2016).
  9. DeQuach, J. A., Mezzano, V., et al. Simple and High Yielding Method for Preparing Tissue Specific Extracellular Matrix Coatings for Cell Culture. PLoS ONE. 5 (9), e13039(2010).
  10. Saldin, L. T., Cramer, M. C., Velankar, S. S., White, L. J., Badylak, S. F. Extracellular matrix hydrogels from decellularized tissues: Structure and function. Acta Biomaterialia. 49, 1-15 (2017).
  11. Tukmachev, D., Forostyak, S., et al. Injectable extracellular matrix hydrogels as scaffolds for spinal cord injury repair. Tissue Eng Part A. , (2016).
  12. Freytes, D. O., Martin, J., Velankar, S. S., Lee, A. S., Badylak, S. F. Preparation and rheological characterization of a gel form of the porcine urinary bladder matrix. Biomaterials. 29 (11), 1630-1637 (2008).
  13. Singelyn, J. M., Sundaramurthy, P., et al. Catheter-deliverable hydrogel derived from decellularized ventricular extracellular matrix increases endogenous cardiomyocytes and preserves cardiac function post-myocardial infarction. Journal of the American College of Cardiology. 59 (8), 751-763 (2012).
  14. Wainwright, J. M., Czajka, C. A., et al. Preparation of cardiac extracellular matrix from an intact porcine heart. Tissue Eng Part C Methods. 16 (3), 525-532 (2010).
  15. Ott, H. C., Matthiesen, T. S., et al. Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart. Nature Medicine. 14, 213-221 (2008).
  16. Oberwallner, B., Anic, B. A., et al. Human cardiac extracellular matrix supports myocardial lineage commitment of pluripotent stem cells. Eur J Cardiothorac Surg. 47, 416-425 (2015).
  17. Oberwallner, B., Brodarac, A., et al. Preparation of cardiac extracellular matrix scaffolds by decellularization of human myocardium. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 102 (9), 3263-3272 (2014).
  18. Kappler, B., Anic, P., et al. The cytoprotective capacity of processed human cardiac extracellular matrix. Journal of Materials Science: Materials in Medicine. , (2016).
  19. Bashey, R. I., Martinez-Hernandez, A., Jimenez, S. A. Isolation, characterization, and localization of cardiac collagen type VI. Associations with other extracellular matrix components. Circulation Research. 70 (5), (1992).
  20. Wu, J., Ravikumar, P., Nguyen, K. T., Hsia, C. C. W., Hong, Y., Gorler, A. Lung protection by inhalation of exogenous solubilized extracellular matrix. PLOS ONE. 12 (2), e0171165(2017).
  21. Chen, W. C. W., Wang, Z., et al. Decellularized zebrafish cardiac extracellular matrix induces mammalian heart regeneration. Science Advances. 2 (11), e1600844(2016).
  22. Godier-Furnémont, A. F. G., Martens, T. P., et al. Composite scaffold provides a cell delivery platform for cardiovascular repair. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (19), 7974-7979 (2011).
  23. Sarig, U., Sarig, H., et al. Natural myocardial ECM patch drives cardiac progenitor based restoration even after scarring. Acta Biomaterialia. 44, 209-220 (2016).
  24. Singelyn, J. M., DeQuach, J. A., Seif-Naraghi, S. B., Littlefield, R. B., Schup-Magoffin, P. J., Christman, K. L. Naturally derived myocardial matrix as an injectable scaffold for cardiac tissue engineering. Biomaterials. 30 (29), 5409-5416 (2009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Cardiac Extracellular MatrixDecellularization ProcessHydrogel FormationTissue ProcessingMicroparticle PreparationPepsin DigestionLyophilization TechniqueCell free ECM SheetsIn Vitro ApplicationsIn Vivo Applications

מאמרים קשורים