זילוח תוך רחמי קלה הופק על ידי היצרות עורק עם מפוליויניל מתכת העוטפת את העורקים הרחם ואת השחלות אצל חולדות עובריים ביום 17. הליך זה מיוצר זילוח טרום לידתי, פיגור גדילה תוך רחמי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מודל עכברוש של זילוח תוך רחמי קלה עם היצרות Microcoil
במאמר זה
סיכום
תקציר
זילוח תוך רחמי/איסכמיה הוא אחד הגורמים העיקריים של פיגור גדילה תוך רחמי/העובר, לידה לידה מוקדמת, משקל לידה נמוך. רוב המחקרים של תופעה זו בוצעו גם דגמים עם איסכמיה תוך רחמי חמורה או מודלים בדרגת ההדרגתיות זילוח תוך רחמי. אף מחקר בוצעה בדוגמנית על זילוח תוך רחמי קלה אחיד (MIUH). שני דגמים שימשו מחקרים של MIUH: מודל המבוסס על התפר מצדו של צדי ארקייד עורקי הקים עם העורקים הרחם ואת השחלות, ולפי מודל ארעי מסיכה העורקים השחלות דו צדדיים של אבי העורקים שיש patency. אלה שני מודלים מכרסם של MIUH יש כמה מגבלות, למשל, לא כל העוברים נחשפים אל MIUH, בהתאם למיקום שלהם בהקרן הרחם. במודל שלנו MIUH ', כל העוברים נחשפים לרמה המקבילה של זילוח תוך רחמי. MIUH הושגה על ידי היצרות קלה של כל ארבעה עורקים האכלה הרחם, קרי, העורקים הרחם ואת השחלות הדו-צדדיים.
היצרות העורקים הסחרור הושפע מפוליויניל מתכת העוטפת את העורקים האכלה. הפקת היצרות עורקים עם מפוליויניל מאפשרת לנו לשלוט, לייעל, להתרבות לירידה בזרימת הדם עם השתנות בין בעלי חיים מעט מאוד ושיעור התמותה נמוכה, ובכך מאפשר הערכה מדויקת. כאשר מפוליויניל עם הקוטר הפנימי של 0.24 מ שימשו, זרימת הדם בתוך השליה והן העובר היה בלשון המעטה ירד (כ-30% מרמת היצרות מראש את השליה). הצאצא של המודל MIUH שלנו מדגים בבירור שינויים לטווח ארוך תוצאות בדיקות נוירולוגיות, neuroanatomical והתנהגותיים.
מבוא
תינוקות עם פיגור גדילה תוך רחמי ההגבלה (IUGR) (המכונה גם הגבלת צמיחה עוברית) (משקל לידה < אחוזון 10בתאנון לגיל ההיריון), לידה לידה מוקדמת (נולד ב- < בשבוע ה-37 של ההיריון), ו/או נמוך הלידה משקל (< 2500 גרם) חשבון עבור כמעט 10% של ילודים כל 2,3. הרבה תינוקות אלה להציג בעיות נוירולוגיות כגון שיתוק מוחין, הפרעות התפתחותיות (כגון: הפרעת תשומת לב-קשב/היפראקטיביות (ADHD) והפרעות למידה) 3,4,5. תנאים אלה יש קווי דמיון והבדלים שלהם אטיולוגיה, תוצאות. האטיולוגיה של IUGR multifactorial, אי ספיקה היפרדות המשויך זילוח תוך רחמי נחשבת הגורם השכיח ביותר ב העוברים שאינו חריג 7. האטיולוגיה של לידה מוקדמת multifactorial גם כן, chorioamnionitis הוא הגורם השכיח ביותר 8.
השפעת זילוח מתון תוך רחמי (MIUH) על המוח המתפתח לא ברור. כיום זמינים מודלים חייתיים של זילוח תוך רחמי/איסכמיה כרוך בעיקר זילוח חמורה או מעבר צבע מידת זילוח עם או בלי פגיעה reperfusion 9,10,11. הגדרות קליני, עם זאת, מקרים של MIUH נחשבים להיות תכופים יותר מאשר אלה מעורבים בתנאים קשים. כל דגמי MIUH זמין כעת הם מודל מכרסמים הכרוכים בתפר מצדו או את הרחם העורק השחלות, או דוגמנית מכרסמים מעורבים מסיכה העורקים השחלות דו צדדיים של אבי העורקים נתקל patency 12,13, 14,15,16,17. אחד החסרונות של מודלים אלה הוא ההשתנות העובר בין נרחב, החל עוברים עם זילוח עמוקה עוברים עם זלוף כמעט שלם, בהתאם התנוחה של העובר בתוך עורקי ארקייד של הרחם ואת העורקים השחלות. חיסרון נוסף של מודלים אלה הוא היכולת שלהם להבחין בין המיקום של כל העובר לאחר הלידה; לפיכך, חוקרים לא יכול להבחין בין חומרת זילוח תוך רחמי מנוסים על ידי הגור בודדים לאחר הלידה שלה.
פיתחנו מודל עכברוש של MIUH מעורבים היצרות עורק מספר 1. גלישת מיקרו-סלילי מתכת בקוטר הפנימי 0.24 מ מ סביב השחלות ואת הרחם העורקים גורמת היצרות, אבל לא חסימה, של כלי הדם (איור 1). החלת אלה מפוליויניל על החלקים הפרוקסימלית של כל העורקים ויישם את הרחם, קרי, העורקים הרחם ואת השחלות דו צדדיים, ביום עובריים 17 (שקול ל- 20-25 שבועות עובריים בני 18) מעניקה ירידה משמעותית אך מתון זרימת הדם מאחד לשני, העוברים. ירידות זרימת הדם לאחר סלילי יוחלו על כל העורקים לארבעה האכלה הרחם זהים במידה רבה על פני כל השליה לעובר. שיעור התמותה העובר הוא פחות מ- 20%. הגורים נולדים דרך העבודה ספונטני 1-2 ימים מוקדם יותר (היום עובריים 21-22) יותר מהרגיל. כמעט כל הגורים נולדים מפגין משקל לידה נמוך באופן משמעותי 1. אמצעי אחסון חומר אפור ולבן הם ירד בלי ברור רקמת נזק 1. הגורים להציג עם רכישת מושהית של היילוד רפלקסים, חולשת שרירים, פעילות ספונטנית שינו 1. מודל זה מחקה את הסימנים הקליניים ואת הסימפטומים של ילדים שנולדו פגים או עם IUGR; התערוכה לידה מוקדמת נולד ילדים מופחתת אפור, חומר לבן עם או בלי חומר לבן פציעה 6, נוכח מושהית אבני דרך של התפתחות נוירולוגית, ונפח עשוי להציג בעיות התנהגותיות כגון ADHD 3,5; ילדים עם IUGR התערוכה שינויים neuroanatomical מינימלי, יש סיכון מוגבר להתפתחות נוירולוגית לקוי כגון עיכוב מוטוריות קוגניטיביות 4,7. לידה לידה מוקדמת ו IUGR מצבים שונים, אך שני תנאים חולק המנגנון הבסיסי, כלומר עלבונות על מוח ילדותי לפני גיל הריון מלא לטווח.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הניסויים בוצעו על פי פרוטוקולים אושרה על ידי טיפול ניסיוני חיה שימוש הוועד הלאומי מוחין ו קרדיו סנטר, -סוויטה, יפן.
1. מכינים את הבאים חיות וחומרים לניתוח MIUH
- להכין מתוזמן חולדות ספראג-Dawley בהריון הריונית יום 17, קרי, עובריים יום 17 (E17). משקלי גוף ממוצע של הסכרים הם 307.0 ± 40.7 g (זאת אומרת ± SD, n = 9).
- להכין מפוליויניל מתכת; הקוטר הפנימי 0.24 מ מ, עשוי פלדה מצופה זהב.
- להכין את כל החומרים לפי הטבלה של החומרים.
2. מכינים לניתוח MIUH
- לחמם כרית החימום ב 37 ° C עבור מיקום עכברוש
- מניחים חיתול סטרילי על כרית החימום
- מלחית סטרילי ב 37 מעלות צלזיוס בתוך אמבט מים
3. לבצע ניתוח MIUH
- לבצע ניתוחים בתנאי סטרילי. לעקר את סלילי, מלקחיים, מחט עם 70% אתנול לפני השימוש. להשתמש בכפפות סטריליות, ולחטא מעת לעת על-ידי החלת ספריי אתנול.
- מקם את החולדה בתיבת אינדוקציה הרדמה. מציגים 4% איזופלוריין לתוך התיבה (כ- 5 דקות).
- במקום העכברוש על גבי חיתול סטרילי על כרית החימום במצב פרקדן לאחר החיה ביסודיות. הוא מורדם בתיבת אינדוקציה. לבדוק לעומק של הרדמה לתחושה של חוסר תגובה קמצוץ הבוהן. לשמור על 1.5-2.0% איזופלוריין עם קונוס האף.
- החל depilatory קצף על גבי הבטן מהטבור עד לאזור של הקשת האגן. לאחר מספר דקות, תנגבי את הקצף depilatory עם מגבת נייר. גילוח עשוי לשמש כתחליף הקצף depilatory.
- החל גזה ספוגה תמיסת חיטוי יוד באזור depilated של העור.
- במקום תלוי כירורגית עם חור עגול כדי לכסות את הבטן זולת האזור. של החתך כירורגי. כמה חתיכות של גזה עשוי לשמש כתחליף הכיסוי ותאבטחי.
- באמצעות אזמל כירורגי, לבצע את החתך כ 2.5 ס"מ long בבבטן התחתונה מהקצה העליון של עצם הערווה ישר לכיוון הטבור. ואז, לעשות חתך דרך השכבה שריר מתחת.
- במקום מספר חתיכות של גזה סטרילית ליד הפתח של הכיסוי ותאבטחי, להרטיב את הגזה בתמיסת ומחוממת.
- לדחוף משני צדי הבטן בעדינות, כך חלק קרן הרחם מגיח החתך.
- לחטא את הידיים של המנתח עם 70% אתנול.
- משוך בעדינות את הצופר הרחם כולו של חלל הבטן באופן ידני ללא שימוש מלקחיים. בעזרת מלקחיים כירורגיים אינה מומלצת, היות שהם עלולים בקלות לפגום את הרחם שביר, העוברים ו כלי דם על-ידי דחיסתן חזק וכל לצר.
- מניחים את הצופר הרחם על פד רטוב.
- לבצע את ההליך עבור הקרן הרחם אחרים.
- לספור את מספר העוברים.
- החל תמיסת מלח ומחוממת לעתים קרובות כדי לשמור על הרחם חם ורטוב לאורך כל הניתוח.
- לשנות את החיתול כאשר זה ספג יותר מדי מלח. כדי לשמור על יציבות, חזור על חיטוי כפפות עם 70% אתנול וביו -טיפים של המכשיר עם יוד. להשאיר את האצבעות שאינו סטרילי העצות סטרילי של המכשיר היא קריטית.
- לזהות את החלק הפרוקסימלית של ארקייד הראשי של העורקים השחלות ואת הרחם תחת stereomicroscope.
הערה: חשוב להבחין ארקייד הראשי מן הענפים כדי מאחד לשני. שימו לב כי בפעולה כירורגית עשוי להיות קל יותר כאשר הקרן הרחם הוא התחרפן. לעיתים, החלת סליל בחלק מקורב מאוד של הקשתות היא קשה, כי הוא ממוקם עמוק בתוך חלל הבטן, העורקים טבור קרובים מאוד החלק הפרוקסימלית של הקשתות. במקרה זה, סליל ניתן ליישם חלק ארקייד לאחר ונדיצל הסניף הראשון מחוץ. - להפריד את העורק הווריד פועל במקביל אליו עם מלקחיים ולעשות רווח ביניהם.
- מניחים חתיכת בד (משי תפר 4.0, 5 ס מ) מתחת העורק.
- הרם את שני הקצוות של המחרוזת עם מלקחיים כך העורק וזריחה הופרדו את הווריד שביר.
- שהחזיק בשולי microcoil עם מלקחיים בסדר וביד השנייה, במקום של microcoil ליד עורק והרימה אותה (איור 2.1).
- לסובב את העורק והרימה אותה באמצעות המחרוזת סביב microcoil לעטוף את microcoil סביב העורק. קל לסובב את העורק מסביב הגליל יותר כדי לסובב את הגליל סביב העורק (איור 2.2).
- אחרי סיבוב העורק 3 או 4 פניות (סלילי יש תורות 5), לשנות את האתר שבו מתקיים את הגליל ועד לקצה השני. להחזיק את הקצה של הסליל זה נעטף סביב העורק עם מלקחיים. לשנות את האתר שבו המחרוזת מרימה את העורק לצד השני של סליל. לסובב את העורק מסביב הגליל כך הסליל לגמרי (5 תורות) עוטפת את העורק (איור 2.3, 2.4).
- הסר את המחרוזת.
- לבצע את ההליך של העורקים שלושה אחרים.
- הערה כי לעתים קרובות החלת חימם תמיסת מלח אל הרחם היא קריטית; אחרת, מגביר את שיעור התמותה של העוברים, היפותרמיה עלולה להיות neuroprotective.
- בעדינות להחזיר את הקרן הרחם לתוך חלל הבטן. הרמת קצה של החתך דופן הבטן עם מלקחיים יכול להקל על הליך זה.
- Stich שריר הבטן ולאחר מכן stich בעור בטן עם תפר (משי תפר 4.0). לקשור את התפר לאחר כל stich, כלומר קטע אחד התפרים.
- החל גזה ספוגה תמיסת חיטוי יוד סביב הניתוח החתך.
- לנהל את meloxicam להרגעה-0.5 מ"ג/ק"ג משקל גוף subcutaneously.
- לאפשר למשך 30 דקות של התאוששות בכלוב ומחוממת. בדיקת חיות אם ער לחלוטין ומרגש לכלוב, לחזור הביתה כלוב.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
לאחר החלת כל העורקים האכלה הרחם, קרי, העורקים הרחם ואת השחלות דו צדדיים, מפוליויניל ותוחלת העוברים כל רמות דומות זילוח. היישום של מפוליויניל עם הקוטר הפנימי של 0.24 מ גורם מתון היצרות של העורקים האלה, ובכך לגרום לירידה קלה זרימת הדם מאחד לשני, העוברים (איור 3; כ-30% מרמת היצרות מראש את השליה, רואה הפניה 1 לפרטים). הגורים נולד מן הסכר מדגימים IUGR (טבלה 1).
הסכרים נראה בתשוקה במהלך מ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
Microcoil היצרות של העורקים השחלות ואת הרחם שני קרניים הרחם מייצר זילוח תוך רחמי עקבית ומותאמת לשחזור כל מאחד לשני, העוברים. ניתן לשנות את רמת זילוח באמצעות מפוליויניל עם קטרים שונים הפנימי. עכברוש הגורים נולדים מן סכר שבו בוצעה היצרות עורק עם מפוליויניל 0.24 מ מ קוטר פנימי מדגימים IUGR, לידה מוקדמת (ראה התייחסות 1 לפרטים). הגורים התערוכה שינויים neuroanatomical והתנהגותיים הדומות הסימנים והתסמינים נצפתה אצל ילדים לידה מוקדמת. שינויים neuroanatomical אלה כוללות הגדלת חדרית, דילול של קליפת המוח, כפיס המוח, וירידה במשקל המ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על-ידי התוכנית Exchange מחקר של 2013 שנות כספים בין JSPS ו CNRS, JSPS KAKENHI גרנט מספר 26860858 קרן מחקר מדעי המוח Narishige. אנו מודים ד"ר מריקו Harada-שיבא, קיוקו Shioya על דיונים מועילים. אנו מודים מארי Furuta, Mutsumi סאקאמוטו, Ritsuko Maki, ד ר טנקה Emi לסיוע טכני מעולה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| סטריאומיקרוסקופ | |||
| מכונת | |||
| תיבת | |||
| כרית | |||
| חיתול 30x40 ס"מ | |||
| קצף אפילטורי או מכונת | |||
| תמיסת | חיטוי יוד | ||
| גזה 10x20 ס"מ | |||
| וילון כירורגי 45x45 ס"מ עם פתח עגול בקוטר | |||
| בקבוק ספריי עם אתנול לחיטוי | |||
| צמר | |||
| מלקחיים עם קצוות קהים | |||
| מלקחיים עם קצוות | |||
| מספריים | |||
| אזמל כירורגי, גודל הלהב באורך 27 מ"מ (מס' 10, Axel, AS ONE Corporation, אוסקה, יפן) | |||
| מחט | |||
| מיקרו-סלילי מתכת; קוטר פנימי 0.24 מ"מ, עשוי מפלדה מצופה זהב (SAMINI Co. Ltd., Shizuoka, יפן) | |||
| תפר משי 4-0 | |||
| תמיסת מלח סטרילית (0.9% נתרן כלורי) | |||
| מים לחימום | |||
| מזרקי פלסטיק (50 מ"ל) ומחטים (18 גרם) |
מקורות
- Ohshima, M., et al. Mild intrauterine hypoperfusion reproduces neurodevelopmental disorders observed in prematurity. Sci Rep. 6, 39377(2016).
- Specified Report on Vital Statistics in FY2010, Ministry of Health, Labour and Welfare, Japan. , Available from: http://www.mhlw.go.jp/english/database/db-hw/FY2010/live_births.html (2010).
- Anderson, P., Doyle, L. W., Victorian Infant Collaborative Study, G. Neurobehavioral outcomes of school-age children born extremely low birth weight or very preterm in the 1990s. JAMA. 289 (24), 3264-3272 (2003).
- Levine, T. A., et al. Early childhood neurodevelopment after intrauterine growth restriction: a systematic review. Pediatrics. 135 (1), 126-141 (2015).
- Sucksdorff, M., et al. Preterm Birth and Poor Fetal Growth as Risk Factors of Attention-Deficit/ Hyperactivity Disorder. Pediatrics. 136 (3), e599-e608 (2015).
- Volpe, J. J. Brain injury in premature infants: a complex amalgam of destructive and developmental disturbances. Lancet Neurol. 8 (1), 110-124 (2009).
- Nardozza, L. M., et al. Fetal growth restriction: current knowledge. Arch Gynecol Obstet. 295 (5), 1061-1077 (2017).
- Chang, E. Preterm birth and the role of neuroprotection. Bmj. 350, g6661(2015).
- Coq, J. O., Delcour, M., Massicotte, V. S., Baud, O., Barbe, M. F. Prenatal ischemia deteriorates white matter, brain organization, and function: implications for prematurity and cerebral palsy. Dev Med Child Neurol. 58, Suppl 4. 7-11 (2016).
- Jantzie, L. L., Corbett, C. J., Firl, D. J., Robinson, S. Postnatal Erythropoietin Mitigates Impaired Cerebral Cortical Development Following Subplate Loss from Prenatal Hypoxia-Ischemia. Cereb Cortex. 25 (9), 2683-2695 (2015).
- Kubo, K. I., et al. Association of impaired neuronal migration with cognitive deficits in extremely preterm infants. JCI Insight. 2 (10), (2017).
- Delcour, M., et al. Mild musculoskeletal and locomotor alterations in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia. Int J Dev Neurosci. 29 (6), 593-607 (2011).
- Gilbert, J. S., Babcock, S. A., Granger, J. P. Hypertension produced by reduced uterine perfusion in pregnant rats is associated with increased soluble fms-like tyrosine kinase-1 expression. Hypertension. 50 (6), 1142-1147 (2007).
- Granger, J. P., et al. Reduced uterine perfusion pressure (RUPP) model for studying cardiovascular-renal dysfunction in response to placental ischemia. Methods Mol Med. 122, 383-392 (2006).
- Mazur, M., Miller, R. H., Robinson, S. Postnatal erythropoietin treatment mitigates neural cell loss after systemic prenatal hypoxic-ischemic injury. J Neurosurg Pediatr. 6 (3), 206-221 (2010).
- Olivier, P., Baud, O., Evrard, P., Gressens, P., Verney, C. Prenatal ischemia and white matter damage in rats. J Neuropathol Exp Neurol. 64 (11), 998-1006 (2005).
- Robinson, S., et al. Developmental changes induced by graded prenatal systemic hypoxic-ischemic insults in rats. Neurobiol Dis. 18 (3), 568-581 (2005).
- Rice, D., Barone, S. Jr Critical periods of vulnerability for the developing nervous system: evidence from humans and animal models. Environ Health Perspect. 108, Suppl 3. 511-533 (2000).
- Basilious, A., Yager, J., Fehlings, M. G. Neurological outcomes of animal models of uterine artery ligation and relevance to human intrauterine growth restriction: a systematic review. Dev Med Child Neurol. 57 (5), 420-430 (2015).
- Delcour, M., et al. Neuroanatomical, sensorimotor and cognitive deficits in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia. Brain Pathol. 22 (1), 1-16 (2012).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
