תהליכי ייצור ומדידות שבירה כפולה עבור תכנון יון לנתניד דיסקות מגיב Chelating פוספוליפיד להרכבות

Stéphane Isabettini; Mirjam E. Baumgartner; Peter Fischer; Erich J. Windhab; Marianne Liebi; Simon Kuster

doi:10.3791/56812

הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

תהליכי ייצור ומדידות שבירה כפולה עבור תכנון יון לנתניד דיסקות מגיב Chelating פוספוליפיד להרכבות

7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/56812

⸱

3 בינואר 2018

Stéphane Isabettini¹ , Mirjam E. Baumgartner¹ , Peter Fischer¹ , Erich J. Windhab¹ , Marianne Liebi² , Simon Kuster¹

¹Laboratory of Food Process Engineering, ETH Zurich, ²MAX IV Laboratory, Lund University

במאמר זה

סיכום

נהלי ייצור יון לנתניד קשוב מאוד דיסקות chelating הרכבות polymolecular מוצגים. התגובה מגנטי מוכתב על ידי גודל ההרכבה, אשר מותאם על ידי ההבלטה דרך ממברנות nanopore. של ההרכבות alignability מגנטיות, טמפרטורה-induced שינויים מבניים המפוקחים על-ידי שבירה כפולה מדידות, טכניקה ללא תשלום תהודה מגנטית גרעינית, פיזור ניוטרון זווית קטנה.

תקציר

Bicelles הם מכלולים polymolecular דמוי דיסק tunable נוצר מגוון רחב של תערובות השומנים. מגוון יישומים ממחקרים קרום חלבונים מבניים על ידי תהודה מגנטית גרעינית (NMR) להתפתחויות nanotechnological כולל היווצרות של ג'לים האקטיביות דיסקות להחלפה שטיחות. לטכנולוגיות אלו דורשים שליטה גבוהה של גודל ההרכבה, תגובה מגנטית התנגדות תרמית. תערובות של 1, 2-dimyristoyl -sn- glycero-3-phosphocholine (DMPC) ויון לנתניד שלה (בעוד^{3 +}) chelating פוספוליפיד המספר המשלים, 1, 2-dimyristoyl -sn(triaminepentaacetate - glycero-3-פוספו-ethanolamine-דיאטילן DMPE-DTPA), להרכיב לתוך הרכבות קשוב מאוד מגנטית כגון DMPC/DMPE-DTPA/בתוך^{3 +} (יחס טוחנת 4:1:1) bicelles. הקדמה של כולסטרול (חול-OH) ונגזרות סטרואידים בתוצאות bilayer בערכת אחר מכלולים מציעים מאפיינים ייחודיים הכימי פיזיקלי. עבור הרכב השומנים נתון, alignability מגנטי הוא יחסי לגודל bicelle. Complexation של Ln^{3 +} תוצאות בתגובות מגנטי חסר תקדים מבחינת סדר הגודל והיישור כיוון. קריסת זאזא תרמו הדיסק-מבני לתוך שלפוחית על חימום ומאתגרות של הממדים של ההרכבות על ידי ההבלטה דרך ממברנה מסננים עם גדלים נקבובית מוגדרים. Bicelles מגנטית alignable נוצרות על ידי קירור עד 5 מעלות צלזיוס, והתוצאה היא מכלול המידות שמגדיר את מבשרי שלפוחית. במסמך זה, הליך ייצור זה מבואר, alignability המגנטי של ההרכבות הוא לכמת על ידי שבירה כפולה המידות תחת שדה מגנטי T 5.5. בהמשך, האות שבירה כפולה, שמקורם bilayer פוספוליפיד, מאפשר מעקב אחרי polymolecular שינויים המתרחשים bilayer. טכניקה פשוטה זו היא משלימה ולניסויים NMR, זה בדרך כלל המועסקים לאפיין bicelles.

מבוא

Bicelles הם מכלולים כמו דיסק polymolecular המתקבל תערובות השומנים רבים. ¹ ^, ² ^, ³ ^, ⁴ ^, ⁵ הם נמצאים בשימוש נרחב עבור אפיון מבניים ממברנה מולקולות על ידי NMR ספקטרוסקופיה. ⁶ ^, ⁷ . עם זאת, מאמצי שואפים להרחיב בתחום היישומים האפשריים. ⁵ ^, ⁸ ^, ⁹ מערכת bicelle הכי נחקרות מורכבת תערובת של 1, 2-dimyristoyl -sn- glycero-3-phosphocholine (DMPC), המהוות את החלק מישוריים של ההרכבה, 1, 2-dihexanoyl -sn- glycero-3-phosphocholine (DHPC) פוספוליפיד המכסים את הקצה. ¹ ^, ² ^, ³ מבנה מולקולרי של פוספוליפידים להלחין את bilayer להכתיב את הארכיטקטורה של המבנה שהורכב עצמית polymolecular. ⁴ ^, ⁵ החלפת DHPC עם DMPE-DTPA מייצרת מערכות מאוד דיסקות עדיב וחברותי tunable bicelle. ¹⁰ ^, ¹¹ DMPC/DMPE-DTPA/בתוך^{3 +} (יחס טוחנת 4:1:1) bicelles לקשר עם רבים יותר לנתניד פאראמגנטיים יונים (בעוד^{3 +}) על פני השטח של bilayer, וכתוצאה מכך מענה מגנטי משופרת. זאת ועוד ¹⁰ , החלפת מולקולות DHPC מסיסים במים עם DMPE-DTPA/בעוד^{3 +} מאפשרת היווצרות של דילול עמידים bicelles. ¹¹

Alignability מגנטי מכלולים polymolecular מישורי היא מוכתבת על ידי אנרגיה מגנטית הכולל שלהם,

figure-introduction-1 (1)

כאשר B הוא עוצמת שדה מגנטי, figure-introduction-2 מגנטי קבוע, n המספר צבירת ו figure-introduction-3 חיזקו הרגישות דיאמגנטית מולקולרית של ליפידים להלחין את bilayer. לכן, התגובה של DMPC/DMPE-DTPA/בעוד^{3 +} bicelles לשדות מגנטיים המותאמות לפי גודל שלהם (n מספר צבירה) Δχ חיזקו את הרגישות דיאמגנטית מולקולרית. האחרון ברצון מושגת על ידי שינוי אופי chelated בעוד^{3 +}. ¹² ^, ¹³ ^, ¹⁴ ^, ¹⁵ החדרת כולסטרול (חול-OH) או נגזרות סטרואידים אחרים ב- bilayer מציעה את האפשרות של כוונון של n מספרים צבירה והן את Δχ המגנטית של ההרכבות. ¹¹ ^, ¹⁶ ^, ¹⁷ ^, ¹⁸ ^, ¹⁹ עבור הרכב השומנים נתון, מכלולים גדולים יותר מכילים יותר שומנים מסוגל לתרום E_מג (גדול צבירה מספר n), וכתוצאה מכך מינים יותר alignable. לדוגמה, בגודל של bicelles DMPC/DHPC, כמקובל נשלטת באמצעות אופטימיזציה של ההלחנה השומנים יחס או סך הריכוז. ²⁰ ^, ²¹ ^, ²² למרות שזה אפשרי ב- DMPC/DMPE-DTPA/בעוד^{3 +} bicelles, וטרנספורמציה התרמו-הפיך מן bicelle אל שלפוחית על חימום מציע להוסיף אפשרויות ולביא. מכונות פירושו כגון הבלטה דרך ממברנה מסננים מאפשרת עיצוב של השלפוחיות המוגלתיות. Bicelles מגנטית alignable נוצרות מחדש לאחר הקירור עד 5 מעלות צלזיוס, מידות שלהם מוכתבים של סימנים מקדימים שלפוחית. ¹¹ שעל זה, אנו נתמקד על הפוטנציאל של תהליכי ייצור מכני עם DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 4:1:1) או DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 16:4:5:5) כמו מערכות יחוס. התהליך עובד באנלוגיה בעת עבודה עם אחרים בתוך^{3 +} ^{3 +}Tm. המגוון הרחב של האפשרויות המוצעות על ידי טכניקות אלה מודגש באיור 1, בהרחבה במקום אחר. ²³

figure-introduction-4
איור 1: סקירה סכמטי של ההליכים פבריקציה נוספת אפשרית. למדה מגנטית alignable Ln^{3 +} chelating polymolecular ההרכבות מורכבים או DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 4:1:1) או DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 16:4:5:5). הסרט השומנים יבש הוא להתייבש באמצעות בופר פוספט 50 מ מ על ערך ה-pH של 7.4, ריכוז השומנים הכולל 15 מ מ. הידרציה יעיל של הסרט השומנים דורש גם להקפיא שהביקושים מחזורים (FT) או חימום וקירור מחזורים (H & C). H & מחזורי C יש צורך להתחדש דגימות לאחר אחרונה ההקפאה מפשיר שלב או להתחדש דגימות המשיך קפוא על פני תקופה ממושכת של זמן אם הם רוצים לשמש ללא נוסף ההבלטה. שלבים אלה נידונות בהרחבה על-ידי Isabettini et al. ²³ polymolecular alignable מקסימאלית הרכבות מושגות, אספקת ארכיטקטורות הרכבה שונים בהתבסס על הרכב השומנים. Alignability מגנטי וגודל bicelle הוא tunable על ידי ההבלטה (Ext) דרך מסננים הממברנה nanopore. גורמים A_f היישור הציג חושבו דפוסי הפיזור (SAN) נויטרון 2D זווית קטנה של מדגם^{3 +} (יחס טוחנת 16:4:5:5) DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm extruded דרך 800, 400, 200, או 100 ננומטר נקבוביות. SANS המידות הם אמצעי משלים לכמת יישור bicelle זה לא יכוסה באופן מפורט במסמך זה. ¹¹ ^, ¹⁶ A_f נע מ-1 (פיזור ניוטרון מקבילים או יישור אנכי bicelles ביחס לכיוון השדה המגנטי) כ- 0 עבור פיזור isotropic.אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

המבנה של bicelles נחקרה בהרחבה על-ידי מגוון רחב של שיטות אפיון. ¹³ יש כבר לכמת את היישור של bicelles נחשף לשדה מגנטי באמצעות NMR ספקטרוסקופיה או זווית קטנה ניוטרון פיזור (SAN) ניסויים. ⁵ ^, ¹⁰ ^, ¹¹ ^, ¹² ^, ¹³ ^, ¹⁶ ^, ¹⁷ ^, ¹⁸ ^, ¹⁹ ^, ²⁴ ^, ²⁵ . אולם, המשמרת מרחיבה פסגות NMR, המתרחשת בנוכחות בעוד^{3 +} הם מגבלות רציניות לשיטה. ¹⁵ ^, ²⁶ ^, ²⁷ ^, ²⁸ SANS למרות ניסויים אינם סובלים מ מגבלה זו, אלטרנטיבית, טכניקות נגיש יותר רצוי על כימות שגרתית של יישור דיסקות המושרה מכלולים בפתרון. שבירה כפולה המידות הן חלופה מעשית ופשוטה יחסית. באנלוגיה כדי הניסויים NMR, מדידות שבירה כפולה לחשוף מידע חשוב על השומנים rearrangements, השומנים שלבים המתרחשים bilayer. יתר על כן, שינויי צורה גיאומטריים המתרחשים מכלול polymolecular עם שינוי תנאים סביבתיים כגון טמפרטורה מנוטרים. ¹¹ ^, ¹² ^, ¹³ ^, ¹⁶ Δn′ מגנטית המושרה שבירה כפולה שימש ללמוד סוגים שונים של מערכות פוספוליפיד. ¹³ ^, ²⁹ ^, ³⁰ מדידות שבירה כפולה המבוססת על טכניקת אפנון פאזה של השדה המגנטי היא שיטה מעשית כדי לזהות את הכיוון של bicelles. ¹² ^, ¹⁶ ^, ¹⁸ ^, ²⁹ ^, ³¹ ^, ³² האפשרות של חוקרים bicelles עם שבירה כפולה בשדות מגנטיים גבוהה עד 35 T הודגם גם על ידי מ Liebi. et al. ¹³

כאשר אור מקוטב מזין של חומר אנאיזוטרופי, זה להיות נשברת בגל (אקסטרא). ¹¹ הגלים שני יש במהירויות שונות, יוזזו בשלב על ידי אלפא פיגור. מידת פיגור אלפא נמדדים וישנה להמיר אות שבירה כפולה figure-introduction-5 לכמת את מידת חיזקו באמצעות חומרים

figure-introduction-6 (2)

איפה λ הוא אורך הגל של הלייזר ו- d הוא העובי של המדגם. פוספוליפידים הם אניסוטרופי אופטים, ציר אופטי שלהם עולה בקנה אחד עם צירים מולקולריות ארוכות שלהם, במקביל הזנב של פחמימנים. ¹¹ ^, ¹² . אין פיגור נמדד אם פוספוליפידים הם חוקיים באופן אקראי בפתרון. פיגור נמדד כאשר פוספוליפידים המיושרים במקביל אחד לשני. שבירה כפולה דיסקות המושרה figure-introduction-7 יכול לקבל סימן חיובי או שלילי בהתאם הכיוון של המולקולות בתוך השדה המגנטי; ראה איור 2. פוספוליפידים המיושרים במקביל ציר ה-x תגרום שלילי figure-introduction-8 , ואילו התוצאה האלה מסודרים לאורך ציר z חיובי figure-introduction-9 . אין שבירה כפולה הוא ציין מתי לציר האופטי עולה בקנה אחד עם הכיוון של הפצת אור כפי פוספוליפיד יישור במקביל ציר ה-y.

figure-introduction-10
איור 2: יישור של פוספוליפידים, המתאימים סימן שבירה כפולה דיסקות המושרה figure-introduction-11 . סימן נמדד figure-introduction-12 תלוי בכיוון פוספוליפיד בשדה מגנטי. קווים מקווקווים מציינים את הציר האופטי של המולקולה. האור הוא מקוטב-45° והפצת בכיוון y. השדה המגנטי B נמצאת בכיוון z. איור זה השתנה מ מ Liebi. ¹¹ אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

במקרה ראש צמיגי איזוטרופיות של bicelles, כיוון המושרה על ידי הסידור של פוספוליפידים ב- bilayer תהיה אבודה, מכוונת את אלפא פיגור. Bicelles עליך ליישר גם על מנת להתמצא פוספוליפידים שטיחות פעיל ב- bilayers שלהם, גורם של אלפא פיגור של אור מקוטב. כתוצאה מכך, שבירה כפולה הוא כלי רגיש לכמת את alignability מגנטי מכלולים polymolecular. Bicelles יישור מאונך השדה המגנטי תניב דבר חיובי figure-introduction-13 , בעוד אלה המיושרים במקביל תניב תוצאה שלילית figure-introduction-14 . השלט תלויה היישור של ההתקנה, ייתכן ניתן לבדוק באמצעות דגימת.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. ייצור נוהל DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 4:1:1) וההרכבות DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 16:4:5:5) polymolecular

הכנות ראשוניות
1. רחיצת כל כלי הזכוכית על ידי שטיפה פעם עם אתנול התייצב כלורופורם (> 99% כלורופורם) ויבש עם אוויר דחוס.
2. לייצר 2 נפרדים 10 מ"ג/מ"ל מלאי פתרונות של DMPC ו DMPE-DTPA ב כלורופורם מיוצב אתנול (> 99% כלורופורם), 10 מ מ מניות פתרון של חול-OH ב כלורופורם מיוצב אתנול (> 99% כלורופורם) ו- 10 מ מ פתרון מניות של TmCl₃ . מתנול.
3. להכנת בופר פוספט 50 מ מ על ערך ה-pH של 7.4 על ידי ערבוב 0.121 גר' נתרן dihydrogen פוספט וגופרית והרכבו ו- g 0.599 di נטול מים-נתרן מימן פוספט ב- 100 מ של הנדסה גנטית H₂O.
הכנת הסרט השומנים יבש
1. שוקלים את הנדרש כמויות של חומרים פעילי שטח (DMPC, DMPE-DTPA וכאופציה חול-OH) בעוד^{3 +} מלאי פתרונות נפרדים 3 מ"ל snap-כוסות זכוכית עם מזרק זכוכית 2.5 מ.
  1. עבור אמצעי אחסון מדגם 3 מ"ל של DMPC/DMPE-DTPA / Tm3 + (יחס טוחנת 4:1:1, ריכוז השומנים סך של 15 מ מ), שוקל בסול 3.6435 של הפתרון מניות DMPC, 1.4731 g של הפתרון מניות DMPE-DTPA ו- g 0.7126 של הפתרון מניות של₃ TmCl.
  2. עבור אמצעי אחסון מדגם 3 מ"ל של DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 16:4:5:5, ריכוז השומנים סך של 15 מ מ), שוקל גרם 2.9148 של הפתרון מניות DMPC, 1.4731 g של הפתרון מניות DMPE-DTPA, g 1.0749 של פתרון מניות בחול-הו, 0.7126 גר' הפתרון₃ TmCl מניות.
    התראה: כלורופורם וב מתנול הינם רעילים נדיפים בטמפרטורת החדר. לעבוד תחת ברדס fume והמשך מיד עם המדידות המוני.
2. להעביר את התוכן של הצמד-גדלים שונים 25 מ ל עגול בתחתית הבקבוק. ריקון כל snap-כוס לתוך הבקבוק העגול התחתון בערך 2.5 מ של הממס המתאימים.
3. הסר הממס תחת ואקום המאדה סובב ב 40 º C. הגדר את הלחץ הראשוני 30 000 הרשות הפלסטינית עד רוב הממס יוסר. להפחית את הלחץ עד 100 הרשות הפלסטינית ויבש הדגימה תחת סיבוב למשך תקופה מינימלית של ה 2 לקבל סרט השומנים יבש אחיד על קירות זכוכית + בקבוקי שתייה צידניות.
4. מקם את הסרט השומנים יבש במשך דקה אחת תחת זרם קבוע של ארגון כדי למנוע חמצון השומנים באוויר ולאחסן את הדגימה במקפיא לפני התייבשות.
הידרציה של הסרט השומנים יבש
1. להוסיף mL 3 פוספט המאגר הבקבוק העגול התחתון כדי להגיע ריכוז השומנים סך של 15 מ מ.
2. בנשיאה מחזור (FT) מפשיר הקפאה על ידי צולל. הבקבוק תחת סיבוב של חנקן נוזלי עד זה ביסודיות קפוא (התחנות חנקן נוזלי רותחים), ואז מחממים בחזרה עד 60 ° צלזיוס על ידי הצבת המדגם עבור 5 דקות באמבט מים, מתערבל את הבקבוק ללא הרף כדי סיוע בתהליך ההיתוך. להחיל 30 s של vortexing לפני כל מחזור ההקפאה כאשר המדגם הוא נוזלי כדי לסייע את הידרציה של הסרט שומנים בדם.
  הערה: אין סרט השומנים צריך להיות גלוי על הקירות את הבקבוק לאחר השנייה להקפיא שהביקושים מחזור.
3. חזור 1.3.2 בסך הכל חמש פעמים. לסגור את הבקבוק עם כובע כדי למנוע אידוי מיותרים של המאגר פוספט כאשר המדגם הוא שווה. אולי ניתן להשהות את הפרוטוקול כאשר המדגם הוא קפוא.
4. המשך שני חימום וקירור (H & C) מחזורים כדי לייצב את המדגם יוצא מקפיא השלב האחרון, או לשמור קפואים עד חודשיים. מחממים את הדגימה כדי 40 או 60 ° C עבור DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 4:1:1) או DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 16:4:5:5), בהתאמה, לפני קירור עד 5 ° C-1 ° C לדקה לתחזק את הדגימה 5 דקות מקסימום, מינימום טמפרטורות של המחזור.
5. עכשיו, גם לקבוע את האות שבירה כפולה של המדגם של שדה מגנטי חיצוני (שלב 2) או נוסף הבלטת הדגימה כדי להתאים את מידות bicelle ואת alignability מגנטי (שלב 1.4).
  הערה: DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 4:1:1) דגימות מורכבים בעיקר bicelles בקוטר hydrodynamic רשע D_H של 70 nm כפי התפלגות מספר המתקבלים פיזור אור דינאמי (DLS) מדידות-5 ° C. דגימות אלה מכילים גם גדול יותר polymolecular ההרכבות בעלות רשע D_H של 500 ננומטר כפי חלוקת העוצמה. הם DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 16:4:5:5) דוגמאות מאוד polydisperse בגודל עם הפצות בעוצמה טיפוסי הגילוי של רשע D_H של 700 nm, בעוד מספר ההפצות לחשוף אוכלוסיה נשלט על ידי קטן יותר bicelles בטווח גודל של 200 ננומטר. הפצות גודל יותר מפורט ותמונות הקפאה הילוכים מיקרוסקופ אלקטרונים הדוגמאות הללו דווחו על ידי. Isabettini et al. ²³
ההבלטה של ההרכבות polymolecular.
1. להרכיב את מכבש כמוצג באיור3. השתמש בכפפות עור פינצטה עם הגנה על צינורות סיליקה עבור טיפול. רטוב נייר הסינון (5) עם כמה טיפות של המאגר כדי לאפשר מיקום אופטימלי של המסנן ממברנה (6). ודא שהנייר יש אין קפלים לאחר הנחת את o-ring (7) על העליונה.
  הערה: תהליך ההבלטה נבדק על קרום מסננים (6) עם קוטר נקבובית של 100 200, 400, 800 ננומטר; ראה איור 7.
2. הגדר את המים הרותחים עד 40 ° צלזיוס על DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 4:1:1) דוגמאות או 60 ° C עבור DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 16:4:5:5) דגימות להבטיח את היווצרות שלפוחית extrudable.
3. להתחבר. המתקן בקבוק חנקן בלחץ באמצעות צינור PVC בלחץ גבוה (> 4 MPa) מצוידות עם מתאמים serto, הבלטת חומר נוזלי דרך הקרום. MPa 1 לחץ נדרש בדרך כלל לשחול דרך ממברנה מסננים (6) עם קוטר נקבובית של 200 ננומטר ומעלה. 1.5-2.5 MPa נדרשים עבור המסננים קרום קטן (6) עם קוטר נקבובית של 100 ננומטר.
  הערה: לשנות את מסנן ממברנה אם באופן חריג בלחצים גבוהים (> 2.5 MPa) נדרשים הבלטת המדגם (זהו הסימן הראשון של סתימת).
4. פתח את המכסה (10) והכנס את הדגימה באמצעות פיפטה מזכוכית 2 מ. לאחר מכן סגור את המכסה (10), לפתוח את השסתום לחץ (12) תוך החזקת הצינור לשקע מדגם (2). סגור את השסתום לחץ (12) לאחר סיום מחזור שחול, וונט ולהמשיך עם המחזור הבא.
  הערה: אל תשאירו את הדגימה במגע זמן רב מדי עם הספינה במקטורן חם (8) כדי למנוע אובדן לדוגמה מופרז על ידי אידוי.

30-60 s הוא מספיק זמן עבור מדגם 3 מ ל equilibrate ב. המתקן לפני פתיחת את שסתום הלחץ (12).

המשך 10 מחזורים ההבלטה עבור ממד נקבובית נתונה ממברנה כמוצג באיור3. רוב המערכות bicelle הם extruded 10 פעמים דרך ריריות עם קוטר נקבובית של 200 ו עוד 10 פעמים דרך ריריות עם קוטר נקבובית של 100 ננומטר, המבטיח מדגם comparability.

עכשיו, לקבוע את האות שבירה כפולה של המדגם של שדה מגנטי חיצוני (שלב 2).

figure-protocol-1
איור 3: מעבדה extruder המשמש ההכנות bicelle, שלפוחית. . המתקן שמתארגנת מלמטה למעלה: הר (1), (2) מדגם איסוף מרחב עם צינור עודפים פלסטיק 2.4 מ מ (קוטר פנימי) o-ring (3) ו (4) גדולים וקטנים ייצוב רשת שינוי, (5) מסנן נייר, מסננים ממברנה (6), (7) o-ring, הכלי המעטפת (8), (9. ) למעלה לכסות עם כניסת וחיבור לחץ כיסוי (10), ברגים (11) פרפר, שסתום לחץ (12). קלסתרון של המתקן שהורכב מוצג ימינה-יד-צד. הגז חנקן (N₂) מסופק על-ידי כלי לחץ, הספינה המעטפת (9) מחובר באמבט מים עבור בקרת טמפרטורה. הדגימה עוברת 10 מחזורים ההבלטה עבור כל קוטר נקבובית מסנן נתונה ממברנה (נתיב מדגם מוצג בצבע כחול). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

2. שבירה כפולה מדידות של DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 4:1:1) ו- DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 16:4:5:5) polymolecular הרכבות.

לבנות את הכיוונון שבירה כפולה כפי שהוצגו באיור 4 ומקשרים לספק חשמל לרכיבים אלקטרוניים בהתאמה. אין למקם את PEM המדגם, מקטב השני בנתיב לייזר בשלב זה. למנוע גילוי אור לייזר מפוזרים בחזרה על ידי כיסוי משטחים המשקף, למשל אלומיניום מראה מחזיקי, עם נייר שחור.
להתאים את המראות כדי למקסם את עוצמת הלייזר-הגלאי, המיוצגת על ידי עוצמת הזרם ישיר המתקבל למסנן יעברו של איור 4B.
התראה: לענוד הגנה העין המתאימה בעת כוונון המראות ולהתייעץ עם מדריך בטיחות לייזר אם מניפולציה לייזרים בפעם הראשונה.
להפוך את הראשון מקטב ליניארי מצטלבים (מתוחזק מאונך קרן הלייזר האירוע) על מנת למקסם .

figure-protocol-4
איור 4: ייצוג סכמטי של ההתקנה שבירה כפולה, חיבורים עבור אותות אופטי. A) אלקטרומגנט מוליך על ספקי שדה מגנטי T 5.5. אור לייזר דיודה בעומק 635 ננומטר הוא מקוטב על ידי שני polarizers מצטלבים. Photoelastic אפנן PEM-90 הפועלת על 50 קילו-הרץ עם משרעת₀ של ראד 2.405 והניח בין שני polarizers. המדגם טמון המגנט בין PEM את מקטב השני. קיטוב ללא מראות להנחות את האור דרך האלמנטים השונים, ומתגלה לבסוף על ידי גלאי צילום. הרמוני הראשון והשני figure-protocol-5 , figure-protocol-6 של האות AC מנוטרים, המתיר את החישוב של האות שבירה כפולה נותנת מידע על alignability המגנטי של Ln^{3 +} chelating הרכבות polymolecular. Cuvette מדגם מחובר אמבט מים חיצוני עבור בקרת טמפרטורה (כחול). הטמפרטורה של המדגם נעשה עם מכשיר בדיקה טמפרטורה (אדום). B) האות גלאי צילום מוזנים לתוך השני סדר Sallen-מפתח יעברו מסנן (ספק כוח V AC 24) עם תדירות ניתוק של הרץ 360 דרך כבל בסגנון צמה אספקת חשמל (3) ±12 V DC. המסנן יעברו מחלץ את הרכיב DC figure-protocol-7 ומוסר אותו לממשק של PC-(4) דרך כבל BNC 50 Ω. האיתות הגלאי התמונה מועברת מגברים הנעילה שני (אשר לחלץ הרמוני הראשון והשני figure-protocol-8 , figure-protocol-9 ) דרך כבל BNC 50 Ω (1) & (2). עוצמות הרמונית מזוהים על ידי זיהוי רגיש שלב. כתוצאה מכך, משמשת האות PEM שידור הפניה עבור מגברים הנעילה (1f-פלט של PEM לתוך מגבר הנעילה הראשונה והפלט 2f לתוך השני, מחובר עם BNC 50 Ω כבלים). אותות הפלט מועברות יחידת ממשק PC באמצעות BNC 50 Ω כבלים. אנלוגי רכישת יחידות cFP-AI-110 ו- cFP-CB-1 digitalize את האות המועבר למחשב דרך כבל RS 232 עבור ניטור. החללית טמפרטורה מסוג K קשורה גם יחידת ממשק PC שבו אנלוגי רכישת יחידות cFP-CB-3 ו- cFP-TC-120 digitalize את האות לפני העברת אותו למחשב דרך כבל RS 232 עבור ניטור. ג) תמונה של ההתקנה סכמטית הציג ברכיבי מפתח ב' מזוהים עם המקביל מספרים מ 1 עד 4. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

מניחים את השני מקטב ליניארי מצטלבים בניצב קרן הלייזר התקרית, כפי שמוצג באיור 4A. למזער על-ידי הגדרת את מקטב השני בזווית של 90 מעלות ביחס הראשון.
המקום אפנן photoelastic (PEM) על 0° בין השני חצה polarizers ליניארית בניצב את קרן הלייזר התקרית כפי שמוצג באיור 4A. התאם את PEM לתדר של 50 קילו-הרץ ו משרעת A0 כדי ראד 2.405 כפי שמוצג באיור 5A. זה הופך את הרכיב DC עצמאית של שבירה כפולה ומגביר .
הערה: לציר האופטי PEM עשוי להיות מכוון בכמה מעלות כדי לשמור על קבוע באוויר לפני מדידה דוגמה.
המתן 1 h לאחר הפעלת הלייזר וציוד אלקטרוני כדי לייצב את האות.

. האות יציב כאשר auto-בהדרגה של מגברים הנעילה נשאר קבוע.

הכנס את הדגימה cuvette קוורץ מבוקרת טמפרטורה עם נתיב-אורך של 10 מ מ וחבר אותו אמבט מים חיצוני שמוגדר בתחילה ב- 5 ° C.

מקום צמד תרמי עבה מסוג K 0.5 מ מ (טמפרטורה העצמית) ישירות הדגימה כדי לפקח על הטמפרטורה של המדגם. ודא כי המכשיר אינו מפריע אור לייזר על ידי הנחת נייר לבן בנתיב לייזר (לאחר cuvette), מחפש צללים הנגרמת על ידי המכשיר.
הערה: ישנו הבדל 2-3 מעלות צלזיוס בין הקלטה טמפרטורה לאמבט המים והטמפרטורה של המדגם.

מקם את cuvette נשא של המגנט, כפי שמוצג באיור 4A. אור הלייזר מפיצה אופקית דרך הדגימה מוסח על ידי מראות ללא מקטב, זוהה על ידי גלאי צילום.
הערה: הלייזר מכוונת למטה, דרך הדגימה, וכן לגבות אותו נתיב לקחת בחשבון תופעות פאראדיי (כלומר את הסיבוב של המטוס קיטוב האור נגרם על-ידי השדה המגנטי כאשר יורדים מבוטלת כאשר היתה בדרכה חזרה בכיוון ההפוך).

להחיל על זרימת אוויר קבועה של אוויר דחוס-בטמפרטורת החדר ל- 10000 הרשות הפלסטינית על cuvette כדי למנוע עיבוי מים על קירות התא, אשר להפחית את עוצמת האות ולהגדיל את הרעש. זה חשוב במיוחד כאשר מודדים ב- 5 ° C.

לזהות את הרמוני הראשון והשני figure-protocol-13

של האות AC עם שני הנעילה מגברים. אוטומטית שלב מגברים את הנעילה על ידי לחיצה על הכפתור (2) המוצגת באיור 5B ולהתאים את הרגישות כפי שמוצג באיור 5B (1). ודא כי יש לא יותר מ-4 ברים אדומה על מגברים כפי שמוצג באיור 5B (3) כדי למנוע עומס יתר של האות. הערה למטה הרגישות מועסקים עבור שני מגברים הנעילה בתוכנית Tesla_Magnet_Const_V092 , כפי שמוצג באיור 5C (8). התוכנית מסופק מידע משלים.

כבש השדה המגנטי עד 5.5 T הרציונאלית הנוכחי למגנט דרך התוכנית Tesla_Magnet_Const_V092 , כפי שמוצג באיור 5C (5).

להשיג את שבירה כפולה figure-protocol-15

באמצעות משוואה 2, שבו מחושבת על פיגור
figure-protocol-16

(3)
איפה

הם פונקציות בסל מהסוג הראשון, עם figure-protocol-19

. ¹¹ ^, ¹³ ^, ¹⁸ ^, ³³ ^, ³⁴ להתוות את פיגור בתוכנית Tesla_Magnet_Const_V092, כפי שמוצג באיור 5C (4).
הערה: האטה שמספקת התוכנית צריך לשמש כדי לחשב את האות שבירה כפולה אם מגברים הנעילה שני פועלים לא-הרגישות אותו (ראה שלב 2.12). עוצמות הרמונית שנרשמו figure-protocol-21

צריך להכפיל את הרגישות של מגברים הנעילה כדי לקבל את המידות המתאימות. יתר על כן, חייב להיות מנורמל האות שבירה כפולה שנמדד תחת שדה מגנט על-ידי חיסור האות שבירה כפולה רשע שהושג ב ט 0

מפקחים אות של המדגם שבירה כפולה-קבועה או משתנה הטמפרטורה (1 ° C/דקה) על ידי ויסות הטמפרטורה של האמבטיה מים מחובר את cuvette המוצג באיור 4.

רישום המידע מהניסוי על ידי מילוי בתיאור ניסיוני ב- 5C איור (8), מתן שם קובץ (9) ולחיצה על לחצן "התחל log" (10).

figure-protocol-23
איור 5: איורים של הגדרות מועסקים, צילומי מסך תוכנית. A) הגדרות PEM: פיגור 2.405 ראד, גל 635 nm, תדירות 50 הרץ. לבן עיגולים לציין באילו הגדרות להפעלה (USR = המשתמש הגדיר פיגור, LOC = במצב מקומי של המבצע). B) הנעילה מגבר הגדרות. הרגישות (1) חייב להיות שנבחרו לפני כל מדידה כנדרש בשלב 2.11. שם לא צריך להיות יותר מ-4 ברים אדומה על התצוגה (3) כדי למנוע עומס אות. עומס יתר מתרחש כאשר האדומים הובילו ב (1) מדליק, ביצוע מדידה בלתי אפשרי. לחץ על לחצן שלב אוטומטי (2) לפני כל מדידה. C) צילומי מסך של התוכנית Tesla_Magnet_Const_V092 סיפק מידע משלים. התוכנית מאפשרת שליטה על השדה המגנטי ורישום של כל האות פלטי כפונקציה של הזמן. עוצמת השדה המגנטי והטמפרטורה מדגם הותוו בסעיף (1). הרמוני הראשון והשני figure-protocol-24 , figure-protocol-25 של האות AC נמדדת מגברים הנעילה שני מותוות בתרשימי (2). עוצמת הזרם ישיר figure-protocol-26 ההתוויה של (3). פיגור החישוב כפי שמתואר בשלב 2.13, ההתוויה של (4). עוצמת השדה המגנטי שוכן (5). מדידה ישירה של הטמפרטורה שהוקלט על ידי צמד תרמי סוג K מוצג (6) ואת אותות הפלט ( figure-protocol-27 , figure-protocol-28 ) ב (7). מידע נוסף לדוגמה ייתכן שיוכנס ב (8) כגון רגישות מועסקים מגברים, דוגמת שם, וכו '. הנתונים עשויים להיות מחובר וייצא אל קובץ. txt הניתנים (9). התחל והפסק את רכישת נתונים באמצעות לחצן "התחל log" (10). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

האות שבירה כפולה של הלא-extruded DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (יחס טוחנת 4:1:1) מדגם היה להשגחה תחת שדה מגנטי T 5.5 במהלך חימום וקירור מחזור מ 5 עד 40 מעלות צלסיוס, חזרה בקצב של 1 ° C/min (איור 6). התוצאות שבירה כפולה אישר היישורים מגנטי גבוה ב 5 ° C עם ערך של 1.5 x 10^-5, כפליים חזקה לגבי המערכות מעוקם המדווחת. ⁶ ^, ⁷ ^, ²³ מכוונת של האות שבירה כפולה מעל ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

דין וחשבון מפורט איך שבירה כפולה המידות שימשו בשילוב עם SANS ניסויים כדי להעריך את שיטות ליצירת קשוב מאוד דיסקות Ln^{3 +}chelating פוספוליפידים הרכבות נמצא Isabettini. et al. ²³ הפרוטוקולים פבריקציה נוספת המוצעת חלים גם עבור הרכבות מורכב יותר DPPC ו- DPPE-DTPA פוספוליפידים או עבור אלה המכילים נגזרות סטרואידים הנדסה כימית ב- bilayer שלהם. ¹¹ ^, ¹² ^, ¹⁷ ^, ¹⁸

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

המחברים להכיר קרן המדע הלאומית השוויצרית למימון SMhardBi (פרויקט מספר 200021_150088/1). SANS הניסויים בוצעו spallation שוויצרי ניוטרון במקור SINQ, פול Scherrer Instute, Villigen, שוויץ. המחברים מודים בחום ד ר יואכים Kohlbrecher על הדרכתו עם הניסויים SANS. הגדרת מדידה שבירה כפולה תחת שדות מגנטיים גבוה קיבל השראה מן הכיוונון הקיים במעבדה גבוהה-שדה מגנטי HFML, ניימכן, הולנד. אנו מודים ברונו Pfister על עזרתו בפיתוח האלקטרוניקה של ההתקנה שבירה כפולה, יאן Corsano, דניאל Kiechl לבניית מסגרות המתיר יישור בסדר ולא נתיישב לייזר ו ד ר קולר ברנהרד לתמיכה טכנית שוטפת.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DMPC)	Avanti Polar Lipids	850345P	>99%
1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phospho-ethanolamine-diethylene triaminepentaacetate acid מלח הקסמוניום (DMPE-DTPA)	Avanti Polar Lipids	790535P	>99%
תוליום(III) כלוריד	סיגמא-אולדריץ'	439649	נטול מיםאבקה, 99.9% על בסיס מתכות קורט
דיספרוזיום (III) כלוריד	סיגמא-אולדריץ	325546	נטול מים, אבקה, 99.9% על בסיס מתכות קורט
איטרביום (III) כלוריד	סיגמא-אולדריץ'	439614	נטול מים, אבקה, 99.9% על בסיס מתכות קורט
כלורופורם	סיגמא-אולדריץ	'	319988 מכיל אתנול כמייצב, מגיב ACS, ≥ 99.8%
מתנול	סיגמא-אולדריץ'	34860	≥ 99.9%
כולסטרול	אמרסקו	433	אולטרה טהור כיתה
D2O	ARMAR כימיקלים	1410	99.8 אטום % D
מים טהורים	במיוחד Millipore		Synergy pak2 (SYPK0SIX2), Millipack GP (MPGP02001)
מד pH אלקטרוני	Metrohm	17440010
Whatmann Nuclepore 25 מ"מ 100 ננומטר מסנן ממברנה	VWR	515-2028
Whatmann Nuclepore 25 מ"מ 200nm ממברנה מסנן	VWR	515-2029
Whatmann Nuclepore 25 מ"מ 400nm ממברנה מסנן	VWR	515-2030
Whatmann Nuclepore 25 מ"מ 800nm ממברנה	מסנן VWR	515-2032
Whatmann נייר סינון	VWR	230600
25 מ"ל בקבוק תחתון עגול	VWR	201-1352	14/23 NS
זכוכית 3 מ"ל VWR		548-0554	ND18, 18x30 מ"מ
2.5 מ"ל מזרק זכוכית	המילטון
נתרן דימימן פוספט דיהידרט	Merk	1.06342	מלח המשמש לייצור מאגר פוספט
די-נתרן מימן פוספט	Merk	1.06586	מלח המשמש לייצור מאגר פוספט
חנקן נוזלי	Carbagas	-
גז חנקן בלחץ	Carbagas-200		בקבוק בר
מכבש ליפידים 10 מ"ל	Lipex-מצויד		במלואו בחבית תרמו-צינור
PVC בלחץ גבוה	GR NETUM-חייב		להתנגד ליותר מ-4 מתאמי Serto MPa
	Sertot-Nitrile
כפפות	VWR-2
מ"ל פיפטות	זכוכיתVWR	612-1702	לייזר דיודה ארוכה 230 מ"מ
	ניופורט	LPM635-25C
DSP מגבר נעילה דו-פאזי	SRS	SR830
גלאי פוטודיודות	Silonex Inc.	SLSD-71N5	5 מ"מ, סיליקון, מוליך פוטו
5.5 T קריוגני	מגנטי קריוגני/Oerlikon	AG-12	בר מקורר. מדחס RW4000/6000, ראש קריו RGD 5/100 TA
מסנן מעבר נמוך מסדר שני			ספק כוח ליניארי ביתי 24V DC, מסדר שני, מפתח סאלן, תדר ניתוק 360 הרץ, +/- 12V, מקסימום 10 mA
אפנן פוטואלסטי	מכשירי הינדס	PEM-90
גלאן-תומפסון קלציט מקטב	ניופורט	10GT04	קוטר 25.4 מ"מ
קובט מדגם קוורץ	הלמה	165-10-40	תא מבוקר טמפרטורה, 0.8 מ"ל, אורך נתיב 10 מ"מ
בדיקת טמפרטורה			Thermocontrol-Type K, קוטר 0.5 מ"מ,
מראות תרמוקואקס לא מקטבות	ניופורט	50326-1002	25.4 מ"מ
RS 232 כבלים	National Instruments	189284-02	לחיבור ליציאת RS-232 בחזית בקרי FieldPoint קומפקטיים
BNC 50 ו-Omega; כבלים ומחברים	National Instruments	763389-01
cFP-AI-110	National Instruments	777318-110	מודול כניסת מתח וזרם אנלוגי 8 ערוצים עבור FieldPoint קומפקטי
cFP-CB-1	National Instruments	778618-01	בלוק מחברים משולב לחיווט ל-FieldPoint קומפקטי קלט/פלט
cFP-CB-3	National Instruments	778618-03	בלוק מחבר איזותרמי משולב לחיווט צמדים תרמיים למודול cFP-TC-120
cFP-TC-120	National Instruments	777318-120	מודול כניסת צמד תרמי 8 ערוצים עבור FieldPoint קומפקטי
cFP-1804	National Instruments	779490-01	ממשק Ethernet/טורי עבור NI Compact FieldPoint
LabView 2010	National	Instruments-כוח
תעשייתי אספקת	Traco Power	TCL 060-124	100-240V AC
אמבט מים	Julabo	FP40-HE	סירקולטור קירור/חימום

מקורות

Sanders, C. R., Hare, B. J., Howard, K. P., Prestegard, J. H. Magnetically-oriented phospholipid micelles as a tool for the study of membrane-associated molecules. Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 26, 421-444 (1994).
Glover, K. J., et al. Structural evaluation of phospholipid bicelles for solution-state studies of membrane-associated biomolecules. Biophys. J. 81 (4), 2163-2171 (2001).
Katsaras, J. H. T. A., Pencer, J., Nieh, M. -P. "Bicellar" lipid mixtures as used in biochemical and biophysical studies. Naturwissenschaften. 92 (8), 355-366 (2005).
Sanders, C. R., Prosser, R. S. Bicelles: a model membrane system for all seasons? Structure. 6 (10), 1227-1234 (1998).
Dürr, U. H. N., Soong, R., Ramamoorthy, A. When detergent meets bilayer: birth and coming of age of lipid bicelles. Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 69, 1-22 (2013).
Dürr, U. H. N., Gildenberg, M., Ramamoorthy, A. The magic of bicelles lights up membrane protein structure. Chem. Rev. 112, 6054-6074 (2012).
Ujwal, R., Abramson, J. High-throughput crystallization of membrane proteins using the lepidic bicelle method. J. Vis. Exp. (59), (2012).
Barbosa-Barros, L., et al. Bicelles: lipid nanostructured platforms with potential dermal applications. Small. 6, 807-818 (2012).
Lin, L., et al. Hybrid bicelles as a pH-sensitive nanocarrier for hydrophobic drug delivery. RSC Adv. 6, 79811-79821 (2016).
Beck, P., et al. Novel type of bicellar disks from a mixture of DMPC and DMPE-DTPA with complexed lanthanides. Langmuir. 26 (8), 5382-5387 (2010).
Liebi, M. Tailored phospholipid bicelles to generate magnetically switchable material. , ETH Zürich. Switzerland. PhD Thesis n° 21048, ISBN 978-3-905609-55-4 (2013).
Liebi, M., et al. Magnetically enhanced bicelles delivering switchable anisotropy in optical gels. ACS. Appl. Mater. Interfaces. 6 (2), 1100-1105 (2014).
Liebi, M., et al. Alignment of bicelles studied with high-field magnetic birefringence and small-angle neutron scattering measurements. Langmuir. 29, 3467-3473 (2013).
Prosser, R. S., Hwang, J. S., Vold, R. R. Magnetically aligned phospholipid bilayers with positive ordering: a new model membrane system. Biophys J. 74, 2405-2418 (1998).
Prosser, R. S., Bryant, H., Bryant, R. G., Vold, R. R. Lanthanide chelates as bilayer alignment tools in NMR studies of membrane-associated peptides. J. Magn. Reson. 141, 256-260 (1999).
Liebi, M., Kohlbrecher, J., Ishikawa, T., Fischer, P., Walde, P., Windhab, E. J. Cholesterol increases the magnetic aligning of bicellar disks from an aqueous mixture of DMPC and DMPE-DTPA with complexed thulium ions. Langmuir. 28 (29), 10905-10915 (2012).
Liebi, M., et al. Cholesterol-diethylenetriaminepentaacetate complexed with thulium ions integrated into bicelles to increase their magnetic alignability. J. Phys. Chem. B. 117 (47), 14743-14748 (2013).
Isabettini, S., et al. Tailoring bicelle morphology and thermal stability with lanthanide-chelating cholesterol conjugates. Langmuir. 32, 9005-9014 (2016).
Isabettini, S., et al. Mastering the magnetic susceptibility of magnetically responsive bicelles with 3β-Amino-5-Cholestene and complexed lanthanide ions. Phys. Chem. Chem. Phys. 19, 10820-10824 (2017).
De Angelis, A. A., Opella, S. J. Bicelle samples for solid-state NMR of membrane proteins. Nat. Protoc. 2 (10), 2332-2338 (2007).
Son, W. S., et al. "Q-Titration" of long-chain and short-chain lipids differentiates between structured and mobile residues of membrane proteins studied in bicelles by solution NMR spectroscopy. J. Magn. Reson. 214, 111-118 (2012).
Avanti Polar Lipids Inc. Bicelle Preparation. , Available from: https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation/bicelle-preparation (2017).
Isabettini, S., et al. Methods for Generating Highly Magnetically Responsive Lanthanide-Chelating Phospholipid Polymolecular Assemblies. Langmuir. 33, 6363-6371 (2017).
Nieh, M. -P., Glinka, C. J., Krueger, S., Prosser, R. S., Katsaras, J. SANS study on the effect of lanthanide ions and charged lipids on the morphology of phospholipid mixtures. Biophysical Journal. 82 (5), 2487-2498 (2002).
Watts, A., Spooner, P. J. R. Phospholipid phase transitions as revealed by NMR. Chem. Phys. Lip. 57, 195-211 (1991).
Bleaney, B. Nuclear magnetic-resonance shifts in solution due to lanthanide ions. J. Magn. Reson. 8, 91-100 (1972).
Prosser, R. S., Volkov, V. B., Shiyanovskaya, I. V. Solid-state NMR studies of magnetically aligned phospholipid membranes: taming lanthanides for membrane protein studies. Biochem. Cell Biol. 76, 443-451 (1998).
Prosser, R. S., Volkov, V. B., Shiyanovskaya, I. V. Novel chelate-induced magnetic alignment of biological membranes. Biophys. J. 75, 2163-2169 (1998).
Shklyarevskiy, I. O., et al. Magnetic alignment of self-assembled anthracene organogel fibers. Langmuir. 21, 2108-2112 (2005).
Christianen, P. C. M., Shklyarevskiy, I. O., Boamfa, M. I., Maan, J. C. Alignment of molecular materials in high magnetic fields. Physica B: Condens. Matter. 346, 255-261 (2004).
Maret, G., Dransfeld, K. Biomolecules and polymers in high steady magnetic fields. Top. App. Phys. 57, 143-204 (1985).
Gielen, J. C., Shklyarevskiy, I. O., Schenning, A. P. H. J., Christianen, P. C. M., Maan, J. C. Using magnetic birefringence to determine the molecular arrangement of supramolecular nanostructures. Sci. Tech. Adv. Mater. 10 (1), 014601(2009).
Shklyarevskiy, I. O. Deformation and ordering of molecular assemblies in high magnetic fields. , Nijmegen University. The Netherlands. PhD Thesis, ISBN 90-9018956-4 (2005).
Fuller, G. G. Optical rheometry of complex fluids. , Oxford University Press. NY. (1995).
Walde, P., Cosentino, K., Engel, H., Stano, P. Giant vesicles: preparations and applications. ChemBioChem. 11, 848-865 (2010).
Avanti Polar Lipids Inc. Liposome Preparation. , Available from: https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation (2017).
Avanti Polar Lipids Inc. Preparing Large, Unilamellar Vesicles by Extrusion (LUVET). , Available from: https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation/luvet (2017).
Isabettini, S., et al. Molecular engineering of lanthanide ion chelating phospholipids generating assemblies with a switched magnetic susceptibility. Phys. Chem. Chem. Phys. 19, 20991-21002 (2017).
Battaglia, M. R., Ritchie, G. L. D. Molecular magnetic anisotropies from the Cotton-Mouton effect. J. Chem. Soc., Faraday Trans. 2. 73 (2), 209-221 (1977).
Sprunt, S., Nounesis, G., Litster, J. D., Ratna, B., Shashidhar, R. High-field magnetic birefringence study of the phase behavior of concentrated solutions of phospholipid tubules. Phys. Rev. E. 48 (1), 328-339 (1993).
Zhao, J., et al. Continuous paranematic ordering of rigid and semiflexible amyloid-Fe3O4 hybrid fibrils in an external magnetic field. Biomacromolecules. 17 (8), 2555-2561 (2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

DMPC DMPE DTPA

תהליכי ייצור ומדידות שבירה כפולה עבור תכנון יון לנתניד דיסקות מגיב Chelating פוספוליפיד להרכבות