הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

שיפור של מודל חזירי אוטם שריר החזה סגור על ידי סטנדרטיזציה של רקמות ופרוצדורות דגימה דם

11K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/56856

⸱

12 במרץ 2018

 ,  ,  ,  , 
1Department for Biomedical Research, University of Bern, 2Graduate School for Cellular and Biomedical Sciences, University of Bern, 3Institute of Chemical Sciences and Engineering, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL)

במאמר זה

סיכום

כאן אנחנו מדגימים פרוטוקול לתקנן את תהליכי דגימה מודל חזירי הוקמה של אוטם שריר הלב חריפה על מנת להגדיל את ערכו translational בהבנת הפתופיזיולוגיה של שריר הלב איסכמיה/פגיעה reperfusion פציעה כדי לבחון מועמדים סמים הרומן.

תקציר

פגיעה reperfusion איסכמיה בשריר הלב (אני / R) פגיעה תורמת כמעט מחצית של האזור עם נמק לאחר אוטם שריר הלב. עד היום יש אין סמים שאושרו כדי למנוע או להפחית את שריר הלב אני / R פציעה. הלימוד והבנה של המנגנונים הקשורים pathophysiological של שריר הלב אני / R פציעה הוא חיוני לפתח טיפולים מוצלחים. ניסויים בבעלי חיים גדולים הם צעד חשוב בשיטות translational. הדגם חזירי של אוטם אקוטי הוקמה ותיאר את עצמנו ואחרים. אנחנו נועדו לשפר את הערך של המודל על-ידי התמקדות בפירוט הטכניקות דגימה לצורך שימוש בניסויים בעתיד. יתר על כן, אנו שמים דגש צעדים קטנים אך חשובים שיכולים להשפיע על איכות התוצאות הסופיות. כדי לחקות את המצב הקליני של שריר הלב אני / R פציעה, קטטר התערבות כלילית מלעורית (PCI) הוכנס לתוך השמאלי הקדמי היורד העורק הראשי (LAD) של חזיר anesthetized. ° ° ° זה מודל מחקה אוטם אקוטי וטיפול PCI בבני אדם עם אפשרות לקבוע באופן מדויק את האזור ב להסתכן כמו גם נמק-קיימא רקמות איסכמי. כאן הדגם שימש לחקור את השפעת מעכב פפטיד bicyclic של FXIIa. כן, ניתן לשנות את המודל כדי לאפשר זמנים ארוכים יותר פגיעה reperfusion לחקור תופעות מאוחרות יותר של אוטם שריר הלב.

מבוא

מחלת לב איסכמית, חריפה במיוחד אוטם שריר הלב (MI), הוא הגורם העיקרי של המוות בקרב המדינות המפותחות 1. כיום הטיפול הסטנדרטי של MI הוא התערבות כלילית מלעורית (PCI), הטיפול קטטר בלון. אחד הגורמים הקריטיים המשפיעה על איכות החיים, הפרוגנוזה של חולים לאחר שטופלו PCI MI חריפה הוא גודל אוטם. צמצום הגודל יכול לקבל השפעה רבה על הישרדות והפרוגנוזה החולה 2. איסכמיה/פגיעה reperfusion שריר הלב (אני / R) פציעה יש השפעה משמעותית על גודל אוטם כך שאחת המטרות העיקריות במחקר לב וכלי דם היא למנוע או להפחית את שריר הלב אני / R פציעה 3. המנגנון המדויק של אני / R פגיעה הם עדיין תחת חקירה 4. הפעלה של הפלזמה אשדים, תאי אנדותל חדישים אני / R פציעה 5. הפעלת במערכת קרישת הדם היא בבירור מעורב 6,7. לאחרונה, הוכח את התפקיד של FXII, כמו פפטיד במעלה מוקדם מעורב בשלב הקשר ההפעלה של המפל קרישת הדם, ב FXII תעלף עכברוש מודל של מוחי / R פציעה 8. אימות של תוצאות אלו במודל חזירי הוא שלב חשוב לתוך תרגום קליניים. לכן, אנחנו בודקים מעכב הרומן (80 פרוטאז kDa) bicyclic FXIIa בהקשר של שריר הלב אני / R פציעה על מחקר פיילוט.

מודלים בבעלי חיים, אשר לחקות את המצב הקליני של MI חריפה וטיפולי PCI, חיוניים לשיפור שלנו הבנה של הפתופיזיולוגיה של שריר הלב אני / R פציעה ולבדוק אפשרויות טיפול הרומן. חזירים מייצגים מודל בעלי חיים עבור קליניים שריר הלב אני / R פציעה. זה לא רק בגלל ליבם דומים מאוד לבבות אנושיים אנטומיה, זרימת הדם בעורק הכלילי, אבל הם גם מראים דומה pathophysiological תגובות שריר הלב איסכמיה, פגיעה reperfusion 9,10. דגמים אחרים כגון חולדות ועכברים לא עונים על דרישות אלו ולהראות בהבדלים ניכרים בהשוואה לבבות אדם 11,12, ואילו כלבים למשל, יש רבים הדם הכליליים יותר משני לעומת בני אדם 13.

המודל אוטם אקוטי חזירי כבר בשימוש נרחב במחקר לב וכלי דם לחקור מחלת לב איסכמית כולל שריר הלב אני / R פציעה 14,15,16,17. האחרון הוא מצב דלקתי, בגלל איזה צמצום תגובה דלקתית הקשורים sternotomy או ניקור חזה נעשה שימוש בניתוח פתוח-החזה הוא חיוני. המודל חזה סגור באמצעות C-arm מסתמים בקביעת קליני מתגבר על הבעיה הזו. יתר על כן, באחת הנקודות החשובות ביותר הוא פרוטוקול שלנו מספקת של הבחנה מדויקת בין איסכמי (אזור בסיכון, AAR) ושטחים שאינם-איסכמי של החדר השמאלי (אזור אינם נתונים בסיכון, ANR) כך גודל לאוטם (נמק איסכמי רקמות, ניט) יכול להיות נחוש באופן מדויק. המטרה שלנו בשביל הנייר הזה הוא להגדיר בבירור מתודולוגיה לשחזור של חזירי שריר הלב אני / דגם R פציעה, בפרט ביחס דגימה רקמת שריר הלב, אשר תאפשר ניתוח מדויק יותר של המנגנונים המולקולריים של אני / פציעה R ו- a תמונה ברורה של ההשפעות של טיפולים חדשניים תרופות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. בעלי חיים:

כל החיות טופלו בהתאם לקווים המנחים של דיני הלאומית השוויצרית. המחקר אושרה על ידי הוועדה המקומית לניסויים בבעלי חיים של קנטון ברן (הרשאה אין. להיות 25/16).

משתמשים בחזירים לבן גדול לשני המינים (~ 30 ± 5 ק ג). לחלק את החיות בצורה עיוורת לשתי קבוצות, קבוצה אחת מקבלת מעכב (80 פרוטאז kDa) bicyclic של FXIIa או טיפול של ברירה והשני פקד לא פעיל.

2. ניתוח (איור 1)

  1. הרדמה והכנה של החיה:
    1. מהר החיות במשך 12 שעות לפני תחילת הניסוי.
    2. קדם טיפול תרופתי החיה עם 20 מ"ג/ק"ג קטמין ו- 2 מ"ג/ק"ג של חריגות השירותים הווטרינריים באמצעות זריקה תוך שרירית לתוך הצוואר, באמצעות מזרק 10 מ"ל. להקליט את משקל חיות וסקס.
    3. לגרום הרדמה על ידי הזרקת 0.5 מ"ג/ק"ג Midazolam ו 0.05 מ"ג/ק"ג Atropin לווריד אוריקולארית. לצנרר את החיה עם צינור אנדוטרכאליות.
    4. לשמור על ההרדמה על ידי אוורור מכני באמצעות מסכת חמצן (O2/air 1:3, Sevorane 1.5%), צינור הנשימה 7-8 מ מ והן מסנן. התאם את השבר של השראה חמצן (FiO2) ועד 35% בנפח של עד 6-10 מ"ל/ק"ג.
    5. עומק ההרדמה שקובעת נאותה גם בהעדר תגובות מוטוריות או אוטונומי צובט את האף. רפלקסים palpebral וגוון הלסת נוטרו באופן רציף גם פילוח הטון הרגוע הלסת ואת היעדר רפלקסים palpebral. טמפרטורת נוטרו באופן רציף, ומבטיחים תחזוקה של normothermia (38-38.5 ° C) היה עם חימום פסיבי (בידוד שמיכות ובקבוקים חמים).
    6. לנתח ללא תשלום, כפי שתואר על ידי Koudstaal את. צעדיו עמיתים 3-1 עד 3-318, עורק משני הצדדים, נקרר אותם עם נדן 7F. נקרר ומוחלף על שמאל עם נדן 7F דגימה דם ורידי.
    7. מחלקים מנה בולוס של שיכוך כאב פנטניל µg 250 דרך קו ורידי מרכזי ואחריו µg 250/h כמו תקינות תוך ורידי באמצעות משאבת אינפוזיה. לפקח על טמפרטורת הגוף, קצב הלב, קצב עם רל 3-עופרת (א), לחץ ורידי עורקי ומרכזי במהלך הניסוי כולו.
    8. באמצעות צינורות איסוף דם רגילה, למשוך את דגימות הדם הבסיסית הבאה משורת ורידים: פלזמה citrated מ ל ו- 2.9 מ ל פלסמה EDTA לתוך הצינורות המתאימים. צנטריפוגה מיד ב g x 2,000 למשך 15 דקות ב 4 º C. ניקח 2.9 מ ל דם לתוך צינור סרום ולאפשר מצב של קרישת חסר במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר לפני צריך שתוציאו כמתואר לעיל.
    9. Aliquot µL 200 של פלזמה או סרום לתוך 500 µL צינורות ולאחסן כל דוגמאות ב-80 מעלות צלזיוס לניתוח נוסף.
    10. למשוך 0.5 מ של דם העורק באמצעות שהניתוח גז דם מיוחד (הבי) מזרקים כדי למדוד ההלחמה לשימוש במכונה ההלחמה בהתאם להוראות היצרן.
    11. לסגת 0.5 מ של דם משורת ורידים בעזרת מזרק רגיל 2 מ"ל והעברתה מיד לתוך הדיו מעשה באמצעות מחט 30 גרם. הכנס את מיכל הדיו מלא לתוך המכונה חוק כדי למדוד זמן קרישת דם על פי הוראות היצרן. ראה איור 2 נקודות זמן.
    12. לנהל 5000 יחב unfractionated הפארין לתוך הקו ורידים באמצעות מזרק 2 מ"ל ולאפשר את החיה לייצב במשך 20 דקות לפני תחילת הניסוי MI.
    13. צג לפעול כל 30-45 דקות כאמור 2.1.11. להזריק לווריד הפארין 2500 IU unfractionated אם המעשה הוא s < 180.
  2. ניסוי אוטם שריר הלב
    1. השימוש בציוד fluoroscopy סטנדרטי של C הזרוע (coronary angiography התוכנית, זווית 0°, 12 מסגרות לכל השני, ~ 70 kV) - או לחלופין מערכת מסתמים ייעודי - לבצע התערבות כלילית.
    2. השתמש הדרכה fluoroscopic להכניס צנתר לחץ (5F, 120 ס מ) באמצעות נדן הקודם שמוקם בעורק השמאלי. לקדם אותו לתוך החדר השמאלי. לחבר את הצנתר לחץ מערכת רכישה להקליט השמאלי לחץ חדרית. רכישת המערכת צריכה לחשב ולהקליט קצב הלב, פיתח באופן רציף, לחץ, dP/dt המרבי (contractility של החדר השמאלי) ו dP/dt מינימלי (הרפיה של החדר השמאלי) במהלך הניסוי כולו. שיא ערכים של תוכנית בסיסית 10 דקות.
    3. הכנס של 6F (100 ס"מ, EB3.75) המנחה צנתר דרך נדן הקודם שמוקם לתוך עורק התרדמה הימני. עולה זה העורק השמאלי הראשי כדי להגיע השמאלי הקדמי היורד העורק הראשי (LAD) בהנחיית רנטגן. להזריק והחדות בינונית בעזרת מזרק 20 מ ל דרך הקטטר המנחה לבצע צילום אנגיוגרפיה כלילית בסיסית.
      הערה: הזרקה של והחדות בינונית נעשה על ידי לחץ ידני אך מערכת מזרק כוח ייעודי יכול לשמש גם כן.
    4. להעריך את הגודל של הנער על המסך רנטגן כדי לבחור את הגודל המתאים של הקטטר התערבות כלילית מלעורית (PCI). השתמש בלונים PCI באורך של 15-25 מ מ, קטרים בין 2 ל- 3.5 מ"מ בהתאם לגודל בחור. להרכיב קטטר PCI ו- guidewire כלילית (נ 014/J, 175 ס מ). לחבר את הצנתר PCI עם המכשיר האינפלציה מראש מלא והחדות בינונית.
      הערה: הקוטר LAD ניתן למדוד ישירות על צג מכויל בעזרת סרגל, גודל הבלון PCI ואז נבחר בהתאם.
    5. להוסיף את המערכת שהורכב 2.2.4 לתוך לומן של הקטטר המנחה. לקדם את guidewire אל הנער עד שהוא מגיע מעבר הענף באלכסון השני של הנער.
    6. השתמש fluoroscopic הדרכה כדי לקדם את הצנתר PCI עד שהוא מגיע בערך באמצע של הנער. בחר האתר החוסמים בחורי בהתאם האנטומיה של התקפי, בדרך כלל לאחר הטיפול השני, לפעמים אחרי הסניף אלכסוני הראשון (איור 3) כדי שיהיה דומה אחוזי AAR של החדר השמאלי (LV).
      הערה: הבחירה של חסימת האתר תלוי אורך הענפים אלכסוני ולכן האזור של רקמה אשר מסופק על-ידי הדם דרך הסניף בהתאמה. במקרה של רב, ענף מתפצל לשניים הראשון אלכסוני חסימת האתר יהיה רק אחרי זה. במקרה של ענף אלכסוני הראשון קצר יותר, חסימת נעשית לאחר האלכסון השני.
    7. הסר את guidewire, ואז להגדיל את הלחץ בתוך המכשיר האינפלציה 7-10 בר לנפח את הבלון של הקטטר PCI, זירוז איסכמיה בשריר הלב עבור ה 1 להגדיל בהדרגה את FiO2 ל- 50-60% בין 15 ל-40 דקות של איסכמיה. לשמור על נפח 6-10 מ"ל/ק"ג.
      הערה: הליך זה להפחית את המופע של extrasystoles ולהקטין את התדירות של חדרים fibrillations.
    8. שיא 5-10 s רצף וידאו תוך כדי הזרקת והחדות בינונית דרך הקטטר המנחה שיהיה כיף של הבלון של הקטטר PCI במקום רק לאחר הפעלת איסכמיה; חזור לאחר 10 דקות של איסכמיה כדי לוודא סגר מוחלט של הנער דיסטלי לבלון של הקטטר PCI.
    9. לפקח על החיה מקרוב כדי לזהות ולטפל באופן מיידי (2.2.10) והפרעות בקצב הלב. Extrasystoles בדרך כלל להתרחש ומגבירים בתדירותו (> 3 כל דקות) בין 20 ל-40 דקות לאחר אינדוקציה של איסכמיה בשריר הלב. אם הדבר יתרחש, לעסות בעדינות את הצוואר משני הצדדים מתחת הלחי. ברוב המקרים זה יהיה מספיק ליצור מחדש דופק סדיר, כנראה על ידי גירוי של baroreceptors העצב vagal ממוקם על עורק תרדמני.
    10. אם הפרעות בקצב הלב התקדמות לתוך פרפור חדרים, להשתמש בשוקר חיצוני, להקים מחדש את קצב סינוס. החל 5-10 בעיסויים באמצעות הידיות דפיברילטור מיד לפני החלת ההלם על מנת למלא את התקפי עם דם מחומצן, לזעזע אז 150 J (לבעלי 30 ק ג).
    11. אני חוזר במידת הצורך ולהגביר האנרגיה 175 J לאחר 3rd ההלם. השתמש בהגדרות אנרגיה גבוהות יותר לבעלי כבד יותר.
    12. חמש דקות לפני תום זמן איסכמיה חזור על דגימה דם שצוין ב- 2.1.8-2.1.13. להזריק את החומר הבדיקה (גם bicyclic FXIIa המדכא או שליטה 4 מ"ג/ק"ג, לעשות את זה זה בצורה עיוורת) דרך הווריד באמצעות עירוי ורידי סומק השורה עם 20 מ ל תמיסת מלח.
    13. לסגת דוגמא אחת של ציטראט פלזמה (כאמור 2.1.8 תגובה על ו 2.1.9) 4 דקות לאחר הזרקת החומר ב- 2.2.12.
    14. לבצע an הצנתר (2.2.3) לאשר נער סגר, ואז השטחת קצה הבלון של הקטטר PCI ולהסיר קטטר זה מן המנחה הקטטר. לאשר זלוף של הנער דיסטלי לאתר סגר על ידי אנגיוגרפיה מיד לאחר דפלציה והסרה של הבלון של הקטטר PCI, 10 דקות לאחר מכן, בכל פעם סימני איסכמיה בשריר הלב היו גלוי מאת א עבור יותר מ 5 דקות, מיד לפני סגר מחדש של הנער.
    15. לאפשר פגיעה reperfusion של שריר הלב איסכמי כבר שעתיים. לקחת דגימות פלסמה וסרום ב דקה 10, 30, 60 ו- 115 של פגיעה reperfusion (2.1.8 תגובה על ו 2.1.9). צג ההלחמה ב דקה 60 ו- 115 (2.1.10).
    16. הכנס מחדש את הצנתר PCI יחד עם guidewire בדיוק לאותו מיקום המשמשים עבור איסכמיה. לנפח את הבלון של הקטטר PCI כמו בעבר ואשר LAD סגר על ידי אנגיוגרפיה (2.2.3). הסר את הצנתר לחץ של החדר השמאלי, לעצור את ההקלטה.
    17. להזריק 100 מ ל 2% buffered כחול אוונס פוספט תמיסת מלח (PBS, pH 7.4) אל תוך ורידית (הקו המרכזי). כ-30 s מאוחר יותר, כאשר כל החיות הופך כחול, להזריק 40 מ ל 20% אשלגן כלורי כדי להרדימו. מוות אושר ע י העדר של אק ג אותות וגלים דופק.

3. דגימה טכניקות

  1. חילוץ, לנתח ולדגום את הלב (איור 4)
    1. לבצע sternotomy לחשוף את הלב. לפי התקנון שתואר קודם לכן על ידי Koudstaal, עמיתים, צעדים 8-2, 8-318. לחתוך את קרום הלב תוך פיקוח על חריגות, אשר ייתכן נובעות קודמות דלקת כרום הלב, והוא לא לכלול את החיה הערכה נוספת.
    2. השטחת קצה והסרה של PCI, כמו גם את הצנתר המנחה. לסלק את הלב לצורך ניתוח נוסף. לחתוך את הווריד הנבוב ולהסיר דם באמצעות משאבה שאיבה, ולאחר מכן לחתוך את כל כלי גדול חיבור הלב עם הגוף.
    3. יש לשטוף את הלב מבפנים ומבחוץ בתמיסת בטמפרטורת החדר. שוקלים את כל הלב.
    4. בתוך 30-40 דקות, חותכים את הלב לפרוסות של-3-5 מ"מ מהקודקוד עד Chordae tendinae של המסתם, בניצב לציר הארוך בעזרת סכין חדה.
    5. יש להיזהר תמיד מקום הלב באותו הכיוון עם הצד הבטני פונה כלפי מעלה על מנת לשמור על הכיוון של הדגימות לחתוך (איור 5).
    6. לצלם את הפרוסות של הלב באמצעות מצלמת רפלקס דיגיטלית עדשה בודדת.
    7. גזור משם החדר הימני (ביטול לפי הצורך לא). לצלם את הפרוסות החדר השמאלי, לשקול את כל הפרוסות על המשקל הכולל של החדר השמאלי.
    8. להבדיל בין אוונס כחול חיובי לבין כחול אוונס שלילי רקמה בכל המדורים. לנתח את הפרוסות כדי להפריד את איסכמי (אוונס כחול שלילי) הרקמה הלא-איסכמי (כחול אוונס חיובי) באמצעות אזמל.
    9. לנתח תחילה הסעיפים שלילי כחול אוונס (האזור איסכמי בסיכון, AAR). שוקל את כולם ולשים אותם הכל לתוך מיכל פלסטיק.
    10. לכסות את פרוסות לגמרי עם פתרון כלוריד tetrazolium של 100-150 מ"ל (לפי גודל הלב) triphenyl (דור 2 TTC, 16 גרם לתוספי, משקל מולקולרי 48000-90000, ב- 200 מ ל PBS, טריה) כך החתיכות הלב יכול לנוע בחופשיות בתוך הפתרון. מכסה המכולה, תקופת דגירה של 20 דקות ב 37 מעלות צלזיוס תוך מנענע בעדינות.
    11. במהלך זה 20 דקות הדגירה זמן שוקלים הכחול של אוונס חלקים חיוביים (אזור אינם נתונים בסיכון, ANR), לקחת דגימות רקמות-Tek להטבעה (לבחור ביותר בלונדיניות מהפציעה) ולאחסן ב-80 מעלות צלזיוס לצורך ניתוח נוסף. להעביר את השאר לתוך 4% פורמלדהיד פתרון ולאחסן בטמפרטורת החדר במשך היסטולוגיה מקטעים.
    12. הסר את פיסות AAR הפתרון TTC. הרקמה מוכתם אדום הוא רקמה איסכמי קיימא (VIT) והוא הרקמה שאינו מוכתם רקמת נמק איסכמי (יחידה). לחתוך חתיכות קטנות 2 (בלוקים של 2-3 מ מ) מ הן בין ניט ויט, להטביע אותם לתוך רקמות - Tek ולאחסן ב-80 מעלות צלזיוס לצורך ניתוח נוסף. דגימות אלה צריכים להיות באותו המשקל.
    13. לתקן את שאר החלקים (כל הפרוסות נגזר על AAR) על-ידי הגדרת אותם במיכל קלקר וכיסוי לחלוטין עם 4% פורמלדהיד פתרון 24 שעות בטמפרטורת החדר בשכונה fume. החלקים צריך להישאר שטוח בתיעוד צילומי בשלב הבא.
    14. למחרת לצלם שני הצדדים של החלקים עם מצלמה ברזולוציה גבוהה עם אותה הגדרה זום, מרחק של הרקמה (הגדלה אותו). להוסיף סרגלי קנה מידה אוטומטי כל התמונות. כל קווי צריך להיות באותו האורך.
      הערה: המצלמה ברזולוציה גבוהה צריך להיות מחוברים לתוכנה מוסיף באופן אוטומטי את סרגל קנה מידה לכל תמונה.
  2. חישוב של AAR ואת גודל לאוטם
    1. % AAR של החדר השמאלי = (המשקל של ארה ב g / משקל של החדר השמאלי ב- g) * 100.
    2. להשתמש בתוכנה ImageJ כדי לחשב את פני השטח הכולל של AAR והן ניט (משני הצדדים כל פיסת) מבוסס על הצילומים.
    3. להתאים את סרגל קנה מידה על-ידי בחירת אורך בר בקנה מידה באמצעות קו ישר מן הכלי זווית. בחרו ' מתפריט ' נתח > הגדר בקנה מידה ולהוסיף את מרחק ידוע ויחידת של סרגל קנה מידה. לבחור "גלובל" אז באותו הסולם יוחלו על כל התמונות.
    4. סמן את כל פני השטח של הרקמה באמצעות הכלי בחירה יד חופשית כדי לחשב AAR. יש להיזהר לא כוללים את הצד (גובה) של הרקמה ו/או רקמת שומן (איור 6-C).
    5. להגדיר את המדידה על-ידי בחירת "אזור" ו- "הצג תווית" של נתח > תפריט הגדרת המידות. למדוד את פני השטח של נתח > מדד.
    6. חזור על שלב 3.2.5 מודדים ניט (סימן רק הרקמה שאינו מוכתם). הערה: אל תכלול רקמת שומן (איור 6-D) בחישוב ניט. חזור על השלב בצד השני של הרקמה.
    7. לחשב את ממוצע AAR ניט עבור כל פיסת רקמה.
    8. להשתמש בערכים המתקבל 3.2.7 כדי לחשב את ניט כאחוז ניט AAR:% של AAR = (סיגמא הממוצע שטח הפנים של ניט ס מ2/ סיגמא ממוצע של שטח הפנים של ארה ב ס מ2) * 100.
    9. שני חוקרים שונים צריך לחזור על השיטה לעיל. מהשוליים מקובל של ההבדל הוא < 10%.
  3. סמני איסכמיה
    1. השתמש הדגימות פלזמה EDTA, אשר אוחסנו בעבר ב-80 מעלות צלזיוס (2.1.9) כדי למדוד את רמת טרופונין הלב-שימוש assay Luminex-סוג של יחיד-פלקס כאמור שתיארתי 19.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

חיה אחת נפטר בטרם עת לפני ניהול של פפטיד מעכב או פקד FXIIa עקב תקלה טכנית (צניחה פתאומית בלחץ הדם בזמן איסכמיה, לפני חיבור של חומר המבחן). חיה אחת הוצאה מהכלל מקבוצת מעכבי FXIIa כי אין פגיעה איסכמיה/פגיעה reperfusion נצפתה עקב אנטומיה חריגה של העורק יורד הקדמי השמאלי (LAD). חלק גדול של החדר השמאלי, כולל השיא, היה perfused על ידי העורק וכלילי של חיה זו. החיות כללו שבניתוח סופי היו n = 2 בקבוצה bicyclic FXIIa פפטיד מעכב (מתכוון המשקל של 27.5 ± 2.5 ק ג) ו- n = 3 קבלת פפטיד של שליטה bicyclic ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

שריר הלב אני / R פציעה יש השפעה משמעותית על הגודל הסופי לאוטם אשר מתורגם ישירות להפרוגנוזה של החולה לאחר אוטם אקוטי3. הבנת הפתופיזיולוגיה של שריר הלב אני / R פציעה הוא הצעד הראשון כדי להקטין או למנוע את זה. שריר הלב אני / R פציעה הוא מצב אקוטי המתרחשת ישירות לאחר פגיעה reperfusion של כלי occluded. אני / R פציעה מובילה להפעלה של מערכת החיסון המולדת, נזק תאי מתרחש באתר של פגיעה reperfusion, לרקמות שמסביב20. מחקר שנערך לאחרונה הראה שיפור בתוצאה נוירולוגיות במודל של עכברים של ה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים ללא ניגוד אינטרסים.

תודות

המחברים רוצים להכיר פרופסור כריסטיאן Heinis למתן את המדכא FXIIa ואת הפקד בהתאמה. אנו להכיר בהכרת תודה גם Olgica Beslac, ד ר דניאל מאטלר, קיי Nettelbeck של יחידת ניתוח ניסיוני, המחלקה למחקר ביורפואי, אוניברסיטת ברן לקבלת תמיכה טכנית. סלין Guillod מתיאס ראש מהמחלקה אבחון, Interventional, Pediatric Radiology, בית החולים האוניברסיטאי ברן, Inselspital מסופקים תמיכה עם טכניקות וציוד צילום רנטגן. הפרויקט מומן על ידי שוויצרי הקרן הלאומית למדע, פרויקט מס 320030_156193. אנחנו גם רוצה להודות מר ריטו Haenni של תקשורת ושיווק, בית החולים האוניברסיטאי ברן, Inselspital עבור ההקלטה הניסוי שלנו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ABL 90 Flex, מנתח גזי דםרדיומטר-ניתוחגזי דם (BGA)
ACT Plusזמן קרישה המופעלעל ידימדטרוניק
אטרופיןסינטטיקה-אטרופינוםסולפס, 0,5 מ"ג/מ"ל
איזון (20-500 ק"ג)סולם NAGATA, ניתןלהשתמש במוצרים אלטרנטיבייםHTB/HTR
איזון (21-4200 גרם)מטלר טולדו, שוויץMS4002SDRניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
איסוף דם: EDTA, ציטראט וסרוםS-Monovette, Nuembrecht, גרמניה05.1167.001,
05.1071.001
ו
05.1557.001 בהתאמה		ניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
BV Pulsera נייד C-armPhilips-מוצרים אלטרנטיביים ניתן להשתמש
בצנטריפוגהLabcare, בריטניהניתן להשתמש במוצרים חלופיים ALC PK120Rלהשתמש
בדפיברילטור Lifepak 12אלטרנטיבייםשל מדטרוניק
Dextran מבית Leuconostoc mesenteroidesSigma-Aldrich, גרמניהD3759ממוצע M.wt 48000-90000
מצלמת רפלקס דיגיטלית עם עדשה אחתסוני, תאילנדDSLR-A500/A550ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
לניתוח מלקחייםניתן להשתמש במוצרים חלופיים
EMPIRA RX PCI צנתר הרחבהCordis, Johnson& ג'ונסון, ארה"ב85R15300Sקוטר 3 מ"מ, אורך 15 מ"מ, ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
EMPIRA RX PCI צנתר הרחבהCordis, Johnson& ג'ונסון, ארה"ב85R15350Sקוטר 3.5 מ"מ, אורך 15 מ"מ, ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
Evans BlueSigma-Aldrich, גרמניהE2129Toxic
Fabius GS מכונת הנשמה פרימיוםDrä ger, Lü בק, גרמניה-תחנתעבודה להרדמה, ניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
פנטנילInselspital ISPI-פנטניל2500 מק"ג/50 מ"ל
המכון לפתולוגיהפורמלדהידSI148701ניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
מעכב FXIIaמסופק על ידי המעבדה של פרופ' כריסטיאן הייניס ב-EPFLNovel Bicyclic peptide
Galeoחוט הנחיה כליליBiotronik, גרמניה125497ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
קטטר הדרכהבוסטון סיינטיפיק, פלורידה, ארה"ב34356-066F (100 ס"מ, EB3.75.), ניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
הפרין נתרןדרוספארם, באזל,, 25000 U.I./5 מ"ל
אלקטרו-כירורגיה מתקדמתBOWA, גרמניהARC 400מקור חשמלי לשאיבת דם. ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
מסנן נשימה Hydro-GuardminiIntersurgical, ליטא1745000מסננים
תמונה Jהמכון הלאומי לבריאות, ארה"ב1.47vניתן להשתמש במוצרים חלופיים
מכשיר ניפוח, Atrion QL2530Atrion מוצר רפואי, אלבמה, ארה"ב96402ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
IntelliVue MP 70Philips, Boeblingenמוניטור גרמניה(א.ק.ג, דופק, לחץ דם וטמפרטורת גוף)., ניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
KClSinteticaSA-אשלגן כלורי 15%
קטמיןוטוקינול-נרקטן, 1 מ"ל/100 מ"ג
LR-ACTמדטרוניק402-01ACT מזרקים מיוחדים
MidazolamRoche-Dormicum, 5 מ"ג/מ"ל
אזמלניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
מחזיקניתן להשתמש במוצרים חלופיים
ברזולוציה גבוהה, מעמד הדמיית מאקרו PathStandלהדמיית ספוט ברוטו, ארה"ב1080 p HD רזולוציה. ניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
PBSהכנה פנימית-ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
צינורית ורידית היקפית, 18 Gניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
PowerLab 4/35 מערכת רכישת נתוניםAdinstruments, Spechbach, גרמניה-Rotamax120T
Heidolph, גרמניה544-41200-00שייקר. ניתן להשתמש בחלופה R
ü schelit-Super SafetyClear Tube Teleflex, דבלין, אירלנד112480צינורות דרכי אוויר, ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
Pico Aspirator מזרקיםרדיומטר956-622BGA מזרקים מיוחדים
SalineSintetica Bioren-NaCl0,9%. ניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
Sevorane 1.5%AbbVieAG-Sevorane 250 מ"ל 100%
SheathCordis, Johnson& ג'ונסון, ארה"ב504-607 AAVANTI + / 7 F, ניתן להשתמש במוצרים אלטרנטיביים
משאבת עירוי חללB.Braun Medical AG, גרמניה-לעירוי פנטניל. ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
SPR-350 (קטטר Millar)Adinstruments, טקסס, ארה"ב840-8166MIKRO-TIP, 5F, 120 ס"מ
מסורניתן להשתמש במוצרים חלופיים
תפריםETHICON, Johnson& ג'ונסון, ארה"בY3110Hמונוקריל 3-0 SH-1 פלוס. ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
מזרקים (20, 10 ו-5 מ"ל)CODAN, Baar, שוויץ62.7602,
62.6616,
62.5607
בהתאמה		משמשים להזרקת חומרי הרדמה תוך שרירית או ישירות לקו הוורידי המרכזי. גם להזריק הפרין או FXIIa או את השליטה המתאימה. ניתן להשתמש במוצרים חלופיים ניתן להשתמש במפזר
בית החזהניתן להשתמש במוצרים חלופיים
Tissue-tekSAKURA, הולנד4583O.C.T. תרכובת
מלקחיים וסקולרייםניתן להשתמש במוצרים חלופיים
Xenetix 300 חומר ניגודGuerbet, Zü עשיר,, 300 מ"ג יוד/מ"ל
קסילזיןוטוקינול-קסילאפן, 20 מ"ג/1 מ"ל
2,3,5-טריפנילטטרזוליום כורידסיגמא-אולדריץ', אוסטריהT8877
500 μ צינורות L (eppendorf)Trefflab, שוויץ96.08185.9.03ניתן להשתמש במוצרים חלופיים
של טיוואן צינורות ניתן מוצרים , אוניברסיטת ברן שוויץ-ליקמין חד קוטבי מחט מצלמה בטוחים סטרנוטומיה שוויץ-לוביטרידול

מקורות

  1. Mozaffarian, D., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update. Circulation. 133, e338-e360 (2016).
  2. Miller, T. D., et al. Infarct size after acute myocardial infarction measured by quantitative tomographic 99mTc sestamibi imaging predicts subsequent mortality. Circulation. 92, 334-341 (1995).
  3. Ovize, M., et al. Postconditioning and protection from reperfusion injury: where do we stand? Position Paper from the Working Group of Cellular Biology of the Heart of the European Society of Cardiology. Cardiovasc Res. 87, 406-423 (2010).
  4. Neri, M., Riezzo, I., Pascale, N., Pomara, C., Turillazzi, E. Ischemia/Reperfusion Injury following Acute Myocardial Infarction: A Critical Issue for Clinicians and Forensic Pathologists. Mediators Inflamm. 2017, 1-14 (2017).
  5. Yang, Q., He, G. -W., Underwood, M. J., Yu, C. -M. Cellular and molecular mechanisms of endothelial ischemia/reperfusion injury: perspectives and implications for postischemic myocardial protection. Am J Transl Res. 8, 765-777 (2016).
  6. Massberg, S., et al. Platelet-Endothelial Cell Interactions During Ischemia/Reperfusion: The Role of P-Selectin. Blood. 92, 507-515 (1998).
  7. Wang, J., et al. Antithrombin is protective against myocardial ischemia and reperfusion injury. J Thromb and Haemost. 11, 1020-1028 (2013).
  8. Hopp, S., et al. Targeting coagulation factor XII as a novel therapeutic option in brain trauma. Ann Neurol. 79, 970-982 (2016).
  9. Crick, S. J., Sheppard, M. N., Ho, S. Y., Gebstein, L., Anderson, R. H. Anatomy of the pig heart: comparisons with normal human cardiac structure. J Anat. 193 (Pt 1), 105-119 (1998).
  10. Heusch, G., Skyschally, A., Schulz, R. The in-situ pig heart with regional ischemia/reperfusion - ready for translation. J Mol Cell Cardiol. 50, 951-963 (2011).
  11. Poirier, P. Exercise, heart rate variability, and longevity: the cocoon mystery? Circulation. , 2085-2087 (2014).
  12. Milani-Nejad, N., Janssen, P. M. L. Small and large animal models in cardiac contraction research: advantages and disadvantages. Pharmacol Ther. 141, 235-249 (2014).
  13. Bloor, C. M., White, F. C. Functional development of the coronary collateral circulation during coronary artery occlusion in the conscious dog. Am J Pathol. 67, 483-500 (1972).
  14. Banz, Y. Locally targeted cytoprotection with dextran sulfate attenuates experimental porcine myocardial ischaemia/reperfusion injury. Eur Heart J. 26, 2334-2343 (2005).
  15. Krombach, G. A., Kinzel, S., Mahnken, A. H., Günther, R. W., Buecker, A. Minimally Invasive Close-Chest Method for Creating Reperfused or Occlusive Myocardial Infarction in Swine. Invest Radiol. 40, 14(2005).
  16. Suzuki, Y., Lyons, J. K., Yeung, A. C., Ikeno, F. In vivo porcine model of reperfused myocardial infarction: in situ double staining to measure precise infarct area/area at risk. Catheter Cardiovasc Interv. 71, 100-107 (2008).
  17. McCall, F. C., et al. Myocardial infarction and intramyocardial injection models in swine. Nat Protoc. 7, 1479-1496 (2012).
  18. Koudstaal, S., et al. Myocardial infarction and functional outcome assessment in pigs. J Vis Exp. , e51269(2014).
  19. Kamat, P., et al. Dexrazoxane Shows No Protective Effect in the Acute Phase of Reperfusion during Myocardial Infarction in Pigs. PLoS One. 11, e0168541(2016).
  20. Carden, D. L., Granger, D. N. Pathophysiology of ischaemia-reperfusion injury. J Pathol. 190, 255-266 (2000).
  21. Pérez de Prado, A., et al. Closed-chest experimental porcine model of acute myocardial infarction-reperfusion. J Pharmacol Toxicol Methods. 60, 301-306 (2009).
  22. Lown, B., Levine, S. A. The carotid sinus. Clinical value of its stimulation. Circulation. 23, 766-789 (1961).
  23. Regueiro-Purriños, M., et al. Ventricular Arrhythmias and Mortality Associated with Isoflurane and Sevoflurane in a Porcine Model of Myocardial Infarction. J Am Assoc Lab Anim Sci. , (2011).
  24. Roberts, L. N. Evans blue toxicity. Can Med Assoc J. 71, 489-491 (1954).
  25. Ellenbroek, G. H. J. M., et al. Primary Outcome Assessment in a Pig Model of Acute Myocardial Infarction. J Vis Exp. , e54021(2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

פגיעה מאיסכמיה וreperfusionמודל חזיריםהתערבות כלילית בעורקים כליליים (PCI)העורק הכלילי השמאלי היורדנהלי דגימת רקמותטכניקות דגימת דםצביעה ב-Evans Blueדגירה בתמיסת TTCקביעת גודל השמיר
שיפור של מודל חזירי אוטם שריר החזה סגור על ידי סטנדרטיזציה של רקמות ופרוצדורות דגימה דם
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.