מאמר שיטה

השגרה הקרנת שיטה עבור Microparticles ב עירויי טסיות

DOI:

10.3791/56893

⸱

31 בינואר 2018

 ,  ,  , 
1Research & Development, LightIntegra Technology Inc., 2Quality Engineering & Regulatory, LightIntegra Technology Inc., 3Department of Pathology and Laboratory Medicine; Center for Blood Research, University of British Columbia, 4Canadian Blood Services

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניהול מלאי טסיות בהתבסס על הקרנת microparticle בתוכן תרכיזים טסיות הוא יוזמה חדשה של שיפור איכות ב בנקי דם בבית החולים. המטרה היא להבדיל מופעל מ שלא הופעל טסיות כדי למטב את השימוש של טסיות דם. מתן טסיות שלא הופעל לחולים המטולוגיה-אונקולוגיה עשוי להפחית את הסיכון גבוהה שלהם להיות עקשן.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניהול מלאי טסיות בהתבסס על הקרנת microparticle בתוכן תרכיזים טסיות הוא יוזמה חדשה של שיפור איכות עבור בנקי דם בבית החולים. מספר גדול של תאים מחוץ microparticles (MP) כאשר הם לחוצים מרכיבי דם ודם עשוי להכיל הסלולר קטעים מתוך מגוון של תאים, בעיקר של טסיות מופעל. בעת ביצוע תפקידיהם תאים חיסוניים מולדת ואת השחקנים המרכזיים קרישה ו hemostasis, טסיות לשנות צורה וצור microparticles. עם פיזור אור דינאמי (DLS)-המבוסס על זיהוי microparticle, ניתן להבדיל מופעל (microparticle גבוהה) שלא הופעל (נמוך microparticle) טסיות ב עירויי ולמטב את השימוש במוצר זה דם נדיר. מחקרים קודמים עולה כי מתן טסיות שלא הופעל לשימוש מניעתי בחולים המטולוגיה-אונקולוגיה יכול להפחית את הסיכון שלהם להיות עקשן, לשפר את הטיפול בחולה. המטרה של שיטת הקרנה היא להבדיל בין שגרתי הפעלתם טסיות שלא הופעל. השיטה המתוארת כאן מתאר את הפעולות שיש לבצע עבור ניהול מלאי שגרתית טסיות בבנק הדם החולים: קבלת מדגם של עירוי, loading הדגימה נימי למדידה DLS, ביצוע של DLS בדוק זהה microparticles, ואת באמצעות התוכן microparticle דיווח לזיהוי טסיות מופעל.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

האינטרס microparticles יש נסובה בעיקר סביב מעורבותם בתהליכים תא לתא תקשורת, ביולוגיים. 1 , 2 , 3 לאחרונה, microparticles יש גם להתעניינות כמו פוטנציאליים סמנים אבחון מוקדם של מחלות אוטואימוניות, לב וכלי דם. 4 , 5 Microparticles, הידוע גם בשם חוץ-תאית שלפוחית או exosomes, נרחב נחקרו על ידי cytometry זרימה. למרבה הצער, למרות המאמצים לתקנן את הפרוטוקולים cytometry זרימה קונבנציונלי יש הסכמה כללית על פרוטוקול אופטימלית. להשתמש. 6 , 7 , 8 , 9 , 10

למרות cytometry זרימה קונבנציונאלי ניתן לאפיין ספציפי subpopulations MP,11 יש כמה דיווח מגבלות. 11 , 12 , 13 , 14 חלק מההגבלות הללו יש טופלו על-ידי שימוש גבוה יותר כוח לייזרים וגלאים מה שנקרא "חלקיקים קטנים אפשרות",15,16 , כמו גם זיהוי-קדימה 15 ° - 25 ° זווית פיזור ושינית נדן לחץ . 17 , 18 . בכל זאת, שיטה מהירה, קלה לשימוש הקרנה כי יכול להיות בשילוב עם שיטות מתוחכמות אלו עדיין יש צורך לנצל microparticles כסמני אבחון מוקדם. רמות גבוהות של microparticles לזיהוי כשליש תורמים דם נורמלי19 , עשוי להצביע על תנאים תת-קליני. כתוצאה מכך, רמות microparticle גבוהות במוצרי דם שנתרמו ייתכן תואם נמענים פגיע. 20

כאשר מתן עירויי טסיות, יש סיכון של אי-החיסון refractoriness - מצב שבו גוף המטופל דוחה עירויי ברציפות ואת אינו מאפשר ניכר של טסיות הדם לזרום. 21 , 22 refractoriness Non-החיסון יכול לגרום עירויי מבוזבז, נשאר לסיבוכים בריאותיים עבור חולים, ובית החולים המורחבת. 23 עירויי טסיות המכיל מספר גבוה של microparticles יכול להיות גורם תורם לפיתוח של הלא-החיסון refractoriness בחולים פגיע המטולוגיה-אונקולוגיה. 20 אפשרי לנהל את המלאי טסיות לפי ההרכב של עירויי טסיות על ידי הקרנה של microparticles ובכך לצמצם את הסיכון עבור חולים פגיעים. עם זאת, רוב בדיקות microparticle דורשים בידוד של microparticles מ-5,טסיות דם12 או אחרת הם העבודה מאוד אינטנסיבית24,25 , ולכן לא ניתן ליישם באופן שגרתי בבית החולים בנקי דם.

בטכניקה המתוארת כאן משתמש פיזור אור דינאמי (DLS) - הידועה גם בשם ספקטרוסקופיה המתאם פוטון או פיזור אור ומעין אלסטי. במשך עשורים, פיזור אור דינאמי נרחב שימש בתעשייה הפרמצבטית לאפיון התרופה liposomal ניסוחים או אמולסיות איפה גודל החלקיקים בטווח תת מיקרון. 26 , 27 . אולם, כלים שפותחו עבור יישומים אלה לא ממוטבים למוצרים דם מסך. מערכת חדשה של DLS פותחה כדי להתגבר על מגבלות טכניות ולהפוך אור דינאמי פיזור שימושיים להקרנה של עירויי טסיות. 28

פיזור אור דינאמי מדידות מבוצעות על ידי מאיר החלקיקים על תנאי עם אור לייזר וניתוח וריאציית זמן של עוצמת האור מפוזר אשר היא תוצאה של חלקיקים נעים ההשעיה. עוד יותר, שיטה זו משתמשת היחס ההפוך בין חלקיקים מהירות וגודל - חלקיקים קטנים לנוע מהר, חלקיקים גדולים זזים לאט - לספק מידע על הפצות גודל ועל יחסי ריכוזים של הרכיבים הדגימה. באמצעות DLS, microparticle אומר התוכן ולא רדיוס של הרכיב microparticle ניתן לכמת. התוכן של microparticles את המוצר דם ניתנת % MP מבוסס באזור היסטוגרמה נמדדו חלקיקים רדיוס של 50-550 ננומטר. בעוד חלקיקים עם רדיוס מתחת 50 ננומטר זוהה על ידי DLS, שדווחו על-ידי המערכת DLS, אינם כלולים ב- % MP. במקום מבודד microparticles של טסיות הדם, הטרוגניות של עירויי טסיות נקבע בהתבסס על התוכן היחסי של microparticles ושל טסיות הדם במדגם. למעשה, היחס שבין הפסגות טסיות ו microparticle יכול לשמש כדי לחשב את הריכוז MP מוחלט מתי ספירת טסיות ידוע. 19

המערכת DLS מספקת אנשי מקצוע בתחום הבריאות עם כמותיים אודות microparticles נמצאו דגימות נגזר האנושי דם או מוצרי דם. היתרון העיקרי של הטכניקה DLS שתואר על טכניקות חלופיות כגון cytometry זרימה, מיקרוסקופ אלקטרונים, ננו-חלקיק29 מעקב אחר ניתוח30 או tunable הדופק resistive חישה31 הוא הכנת הדוגמא: aliquots של טסיות תרכיזים ניתן למדוד ישירות ללא הצורך לבודד MP טסיות הדם, לדוגמה דילול או שינויים אחרים. 9 , 17 . בנוסף, DLS היא שיטה גודל מוחלט ו אינם סובלים חוסר כיול חרוזים עם מקדם שבירה המתאים. 14 , 32

מתאם בין טסיות הפעלה ותוכן MP שהוצג בעבר על ידי מיקרוסקופ33,20 , שניתן להסיק מן העלייה MP בתוכן מצבים פתולוגיים15,34, 35 , 36 ובתנאים במבחנה ידוע כדי להפעיל את טסיות הדם. 19 , 37 , 38 . עם זאת, בהמשך נדרשים מחקרים כדי להבין באופן מלא את הקשר של הפעלת התוכן של טסיות DLS-נמדד microparticle. בהתבסס על הידע הנוכחי שלנו כי טסיות מופעל מכילים מספר גבוה של microparticles, הם הם הטובים ביותר בשימוש לטיפול טיפולית של דימום פעיל חולים39, בעוד חולים המטולוגיה-אונקולוגיה תועלת שלא הופעל טסיות דם ללא או רמות נמוכות של microparticles20. לאחרונה דווח כי ההיענות במבחנה של תורם טסיות לא להשפיע באופן משמעותי את השחזור ואת הישרדות של אלה טסיות ב עירויי יחיד לחולים יציב, בעיקר הלא-דימום המטולוגיה-אונקולוגיה40 . מממצא זה, הוא עשוי להיות סיכם כי הפעלת טסיות המזוהה על-ידי תוכן MP גבוהה גם ממלא כל תפקיד משמעותי בטיפול מניעתי של חולים. עם זאת, בשל הבחירה הצר של חולים, מחקר זה לא התייחסו ההשפעה של גורמים התורמים עבור חולים מורכבים שאינם קודח (נכלל מן המחקר), לא יציבה ולקבל עירוי טסיות רק אחד או יותר רבים. השאלה איך ניתן להפחית את המורכבות של המקרים המטופל - אשר טומנת בחובה הבטחה להפחית refractoriness - נותר ללא מענה.

Microparticles מוקדם סמנים של דלקת41,42,43,44 ו טסיות הפעלה45 , ולכן זוהו ב תורמים נורמלי רבים. 19 . כתוצאה מכך, טסיות מופעל, microparticles נמצאים התרומות טסיות. סביר משערים כי חולים עם חום גבוה, קרי, מופעל באופן מלא מולדת מערכת החיסון, לא יכולה לסבול האתגר נוספים של עירוי של טסיות מופעל. עם זאת, מחקרים נדרשים להוכיח השערה זו. הקרנת Microparticle יכול להקל על הוודאות הנוכחי על התוכן של עירויי טסיות ולהפחית את המורכבות של טיפול בחולים.

היחס של טסיות מופעל כדי שלא הופעל בבנק הדם החולים תלוי בעיקר על האוכלוסייה התורם פחותה בהרבה על תחבורה, הקרנה, איון הפתוגן ותהליכים אחרים עלול להגביר טסיות הפעלת ב מרכזת. 19 נתונים מבנקים הדם החולים הגדולים בארצות הברית הראו כי ההרכב הממוצע של המלאי טסיות הוא 49% מופעל, 51% שלא הופעל (טווח עבור מופעל טסיות: 38-62%, תקשורת אישית). אם ספקי המוצר דם או בנקי דם בבית החולים רוצה לדעת תרכיזים טסיות מופעל, שלא הופעל כמה הם מייצרים או לקבל, ואני רוצה לנהל את המלאי שלהם מבוסס על הפעלת טסיות כמצוין microparticle תוכן, זה פרוטוקול ייתכן והמתאים להם.

בהתבסס על הרכב טסיות בנק הדם החולים יוכלו להפנות טסיות שלא הופעל, הומוגני עבור מניעה להשתמש ומופעל, טסיות הטרוגנית לשימוש טיפולית. טסיות ההקרנה מאפשר חולים למקסם את השימוש של מלאי זמין אשר משפר את הטיפול בחולה, הקטנת עלות. פרוטוקול זה מיועד עבור עובדי מעבדה המכירים טיפול בסיסי ומניפולציה של מוצרי דם.

המובאת כאן היא שיטת הקרנה microparticles ב עירויי טסיות זה יכול להיות מיושם באופן שגרתי כדי לנהל את המלאי בנק הדם בבית החולים שבו בחירת מוצר בהתבסס על תוכן microparticle רצוי. המטרה של פרוטוקול זה היא חלוקה לרמות את יישום והערכה של DLS להקרנה של טסיות דם שנתרמו. הפרוטוקול המתואר מענה על שאלות נפוצות של גישה לא פולשנית דגימות, שילוב של בדיקה לתוך זרימת עבודה בנק הדם, ואת מאפייני ביצועים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

להלן כללי התנהגות בוצעה בהתאם להנחיות שירותי הדם קנדי (CBS) כל. מתנדבים נתנה את הסכמתה התרומות שלהם שיכול להיות נהגו לבצע מחקרים אלה. טסיות תרכיזים הוכנו על פי נהלי CBS. כל בדיקת ביצועים המתוארים כאן בוצע במרכז למחקר דם ב אוניברסיטת בריטיש קולומביה, וונקובר, קנדה עם המוסדיים לאישור הדירקטוריון אתיקה במחקר.

1. בקרת איכות סימון

  1. לבצע בדיקת בקרת איכות לפחות פעם אחת לכל בדיקה יום כדי לוודא פעולה תקינה של המערכת DLS. למדוד את החרוזים הבקרה הניתנים (50 ננומטר radius) ההוראות של היצרן לשימוש.
  2. לאחזר את המבחנה שליטה אחסון הקרה ולאפשר 15 דקות להתחמם לטמפרטורת החדר. החרוזים חייב equilibrate עד לטמפרטורת החדר לפני השימוש.
  3. להפעיל DLS המערכת לפני הכנת המדגם אז הלייזר 15 דקות להתחמם תקופת השלמת עד שהמדגם הראשון הוא מוכן לבדיקה.
  4. ברגע במסוף הקימה, בצע את ההוראות על המסך מגע, התחבר למערכת ובחר באפשרות בדיקת המערכת כדי למדוד את דגימת הבקרה.
  5. מערבולת לערבב את המבחנה 10 s כדי להבטיח מדגם מייצג.
  6. למלא את נימי החרוזים שליטה באמצעות 100 µL נפח קבוע פיפטה, פיפטה עצה נימי מבחן הערכה.
  7. השלמת הבדיקה בצע את ההוראות על המסך של DLS המערכת.
    הערה: תוצאות הבדיקה חרוז שליטה אוטומטית לעומת המידע המאוחסן חרוז פקד תווית ברקוד, אישור או הודעה על כשל, כמו גם מידע לדוגמה מוצגים על המסך מערכת DLS בסוף המבחן.

2. לקבל את מדגם של תרכיז טסית דם

הערה: השלבים הבאים מתארים תהליך הדגימה לא פולשנית של עירוי טסיות לתוך DLS בדיקות נימי לניהול מלאי טסית דם שגרתית. סקירה מוצג באיור1. נדרש אביזרים: צינור סילר לאיטום, שפופרת ידנית חשפנית, מספריים, מגן התזה.

  1. הסר את תרכיז טסיות המלאי נבדק.
  2. להשיג הדגימה של המוצר טסיות ממקום נרתיק דגימה שאינם בשימוש (המשך לשלב 2.3) או קטע אבובים (המשך לשלב 2.4 אם ריק או צעד 2.5 אם לא ריק).
    כדי לנתק את נרתיק אבובים או אבובים קטע להשתמש סילר לאיטום של הרכבת התחתית. לפעול חותם שפופרת, בצע הוראות היצרן. בקצרה, תהדק את הצנרת יפורסמו במיקום מדויק בין שתי הלסתות מחוממת. התקן כף-יד, הקש יחד את צינורות מותכת ולא רגוע תחת לחץ גבוה תוך כדי לחיצה על הידית (משך הזמן הוא הצביע על ידי אור ירוק) וכתוצאה מכך חותם קבע, עמיד בפני נזילה.
  3. דגימה מן כיס
    1. לערבב את תכולת השקית טסיות היטב על ידי תנועה אופקית עדינה עבור 5 s (גלגלי מקצה לקצה חמש פעמים).
    2. פתח את המלחציים על התיק. זה המשקה מפונה, ימלא בעצמו. . זה לא הכרחי כדי למלא את התיק לחלוטין כפי מדגם µL רק 100 יידרש לבדיקת DLS
    3. נתק זה המשקה התיק על ידי חום איטום של חיבור לצנרת עם סילר לאיטום הרכבת התחתית. המשך לשלב 3.
  4. דגימה מן הריק לצנרת
    1. ודא כי טסיות תיק אבובים אוחסן ריק, הבלוק אבובים היא עדיין במקום. מבחינה ויזואלית בדיקת הצנרת כדי לוודא שאין כמות משמעותית של טסיות להתרכז בתוך הצנרת. אם הצנרת אינה ריקה המשך לשלב 2.5.
    2. סגור את החשפנית צינור לאורך צינור כמו קרוב לרחוב אבובים ככל האפשר על-ידי דחיסת האחיזה כדי לסחוט את הצנרת בין הגלילים.
    3. לתלות את התיק אנכית ולשמור על דחיסת האחיזה חשפנית.
    4. תוך שמירה על החשפנית סגור, משחרר את הבלוק אבובים.
    5. לאט לאט למשוך את החשפנית למטה לאורך צינור ריק ומאפשר הצנרור למלא לאט מאחורי החשפנית. ממשיכים עד המקטע להלן החשפנית יש מלא בניפוח או עד החשפנית נמצא במרחק 1 אינץ ' של הסוף של הצנרת.
    6. לאחר נקודת עצירה הגיע עם החשפנית, שימוש חותם צינור חום חותם לאורך צינור 1 אינץ ' מעל החשפנית.
    7. שחרר את נקודות האחיזה של החשפנית צינור ידנית.
    8. חום חותם שוב 1 עד 2 ס מ מעל החותם הקודם כדי ליצור את המקטע הבדיקה.
    9. לחתוך את המקטע בדיקות יחידה טסיות. קטע זה ישמש עבור DLS בדיקות.
  5. דגימה של צינורות לא ריקה
    1. לתלות את התיק אנכית ולשחרר את הבלוק אבובים אם במקום.
    2. מבחינה ויזואלית לבדוק הצנרת כדי לקבוע אם ישנם גושים מוצקים משמעותית כלשהי. אם קיימים גושים מוצקים, חותם מעליהם כזה כי אין אפשרות להסיר אותם לתוך השקית.
    3. סגור את החשפנית צינור לאורך צינור כמו קרוב לסוף אטום הצנרת ככל האפשר.
    4. להסיר את התוכן של הצנרת לתוך השקית על-ידי דחיסת האחיזה כדי לסחוט את הצנרת בין הגלילים, תוך שמירה על הכוח clamping, להזיז החשפנית צינור לאורך הצנרת לכיוון התיק.
    5. להסיר את השקית טסיות הקרס תלוי ומערבבים בעדינות את התיק עבור 5 s על ידי גלגלי אותו מקצה לקצה חמש פעמים תוך שמירה על החשפנית סגור.
    6. לתלות את התיק באופן אנכי תוך שמירה על החשפנית סגור.
    7. לאט לאט למשוך את החשפנית למטה לאורך צינור ריק, המאפשר הצנרור למלא לאט מאחורי החשפנית. ממשיכים עד המקטע להלן החשפנית יש מלא בניפוח או עד החשפנית נמצא במרחק 1 אינץ ' של הסוף של הצנרת.
    8. לאחר נקודת עצירה הגיע עם החשפנית, שימוש חותם צינור חום חותם לאורך צינור 1 אינץ ' מעל החשפנית.
    9. שחרר את החשפנית.
    10. חום חותם שוב 1 עד 2 ס מ מעל החותם הקודם כדי ליצור את המקטע הבדיקה.
    11. לחתוך את וזורקים את החלק האחרון של הצנרת.
    12. לחתוך את המקטע בדיקות יחידה טסיות. קטע זה ישמש עבור DLS בדיקות.

3. מילוי את המדגם לתוך DLS בדיקות נים

  1. באמצעות התזה מגן מספריים נקי, יבש, חותכים קצה אחד של המשקה אבובים או בדיקה קטע.
    הערה: נימי המשמש DLS בדיקות אמורה להיות מלאה באופן מיידי.
  2. למלא את נימי באמצעות הכלי דגימה (שהורכב µL 100 נפח קבוע פיפטה, עצה פיפטה ו נימי) למשוך את הדגימה ישירות מתוך לתיק שנפתח או אבובים קטע לתוך נימי.
  3. חותם בתחתית נימי מלא על-ידי בעדינות דוחף את נימי מלא לתוך צינור קפילרי חומר האיטום תוך יישום טוויסט עדין ובלחץ מסוימים נגד המגש.
  4. נתק את µL 100 קבוע פיפטה נפח ואת קצהו של נים, המבטיח נימי נשאר נעוץ בחוזקה חומר האיטום צינור קפילרי.
  5. הסר את נימי ממגש איטום צינור קפילרי, לנגב עם כרית אלכוהול איזופרופיל ולהבטיח כי אין בועות אוויר לכוד על ידי בעדינות מצליף בתחתית נימי.
  6. מקם את נימי לתוך מערכת DLS.

4. ביצוע המבדק DLS

  1. בחר באפשרות הבדיקה MP ליזום בדיקה DLS חדשה למדידת התוכן microparticle של מדגם טסיות.
  2. הזן את המידע מדגם (מספר זיהוי תרומה (ISBT) תאריך תפוגה אוסף/ייצור, קוד מוצר) תוך שימוש בסורק ברקוד או באופן ידני.
  3. אם אין קוד המוצר זמין שממנו DLS המערכת יכול לחלץ את המידע בינוני נוזלים, בחר המדיום הנוזלי מתאים באופן ידני (עבור רוב טסיות תרכיזים לבחור פלזמה אך עבור דגימות המכיל פתרון כתוסף טסיות (PAS), הזן האחוז של פלזמה שיורית).
    הערה: סטייה קטנה באחוזים PAS 65% נומינלית יגרום שגיאת קטן ב צמיגות (מחושבים באופן אוטומטי על ידי מערכת DLS) המשפיע מינימלית של רדיוס MP מחושב אבל לא % MP.
  4. מקם את נימי לתוך מערכת DLS כאשר הורה ולהתחיל את הבדיקה.
  5. כאשר המבחן הושלם, הסר את הדגימה בעל נימי והשלך מתכלים כראוי בהתאם להנחיות מתקן. הסר את הדגימה בעל נימי והשלך מתכלים כראוי בהתאם להנחיות מתקן.
  6. לתייג את השקית טסית דם בצבע התואם התוצאה, למשל כתום בשביל שלא הופעל (הומוגניות) % MP שווה או מתחת 15% וורוד עבור מופעל (הטרוגניות) עם % MP מעל 15%.

figure-protocol-1
איור 1 : שיטה סקירה. סקירה של השלבים שיש לבצע עבור ניהול מלאי שגרתית טסיות בבנק הדם החולים: קבלת מדגם של טסיות התרכז, loading הדגימה נימי למדידה DLS, ביצוע של DLS בדיקה לזיהוי microparticles ומופעל באמצעות של microparticle דווח על תוכן כדי לזהות טסיות. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זמן הכנה ממוצע
טסיות סינון באמצעות מערכת DLS מסוכם באיור1. טסיות נבדקים עם מערכת DLS בזמנו של קבלת מהספק דם. כמפורט בטבלה 1, הזמן הממוצע הכנה למשתמשים מיומנים הוא 2 דקות 23 s בעת הניקיון, שלאחר הבדיקה עבודה שהזמנים 14 s ו- 46 s, בהתאמה. בסך הכל, המשתמש הממוצע לוקח 3 דקות ו- 23 s של הזמן על הידיים לכל מבחן.

פעילותזמן פעילזמן הבדיקה הליכה משםסה
הכנת מערכת DLS14 s
להרכיב כלי דגימה28 s
להשיג קטע52 s
מילוי נימי ולהתחיל מבחן49 s
5 דקות
ניקיון14 s
תיק טסיות תג ומלאי46 s
הזמן הכולל הדרוש עבור דגימה3 דקות 23 s5 דקות8 דקות 23 s

לוח 1: התפלגות זמן הבדיקה פעיל. הבדיקה עצמה הוא מבחן הליכה משם עם משך ממוצע של 5 דקות. המשתמש הממוצע לוקח 3 דקות 23 s כדי להכין את המערכת DLS למבחן, להשיג, לבדוק מדגם בעקבות פרוטוקול זה ולסמן את השקית טסיות.

דיוק
הדיוק של המערכת DLS הוערכה בשלוש רמות microparticle, 0-7%, 12-25% ו 28-75%. הטווח % MP הרלוונטית קלינית הוא 3-75%. שני אופרטורים לבדוק דגימות הבקרה נמוך, בינוני וגבוה 16 ימי ההפעלה על שתי מערכות DLS במקביל. דוגמאות נבדקו כפילויות, אך בסדר אקראי בכל יום הבדיקה.

בטבלה 2 מסכמת הדיוק בתוך-התקן המידות DLS עבור אחוז Microparticles (% MP) ביחס טסיות.

תוכן Microparticle
נמוךבינוניגבוהה
כלומר MP % (אחוזים)4.419.553.8
סטיית תקן (%)1.82.65.8
CV (%)40.413.210.6

בטבלה 2: דיוק בתוך התקן של Microparticles % (% MP). -תוכן microparticle נמוך מאוד קטן טסיות הדם עשויה לתרום % MP וכתוצאה מכך גדלה השתנות לדגימות תוכן microparticle נמוכה.

טבלה 3 מראה את הדיוק בתוך התקן של המדידות DLS רדיוס ממוצע microparticle בין 50-550 ננומטר.

תוכן Microparticle
נמוךבינוניגבוהה
כלומר רדיוס (אן אם)331161188
סטיית תקן (מ מ)1334125
CV (%)40.125.213.5

טבלה 3: דיוק בתוך התקן של הרדיוס microparticle. ב- microparticle נמוך מאוד תוכן טסיות קטן עשוי לתרום אחוז Microparticles (% MP) וכתוצאה מכך גדלה השתנות לדגימות תוכן microparticle נמוכה.

בטבלה 4 מציג את הפארמצבטית של DLS מדידות עבור אחוז Microparticles (% MP).

תוכן Microparticle
נמוךבינוניגבוהה
כלומר MP % (אחוזים)4.429.253.6
הפארמצבטית (%)1.52.35
CV (%)3511.89.4

טבלה 4: הפארמצבטית של פיזור אור דינאמי (DLS) מידות עבור אחוז Microparticles (% MP).

ליניאריות
איור 2 מראה כי התוצאות DLS הם ליניאריים, מתאימים, כלומרקו ישר לגבי הערכים שהוקצו של הדגימות. דוגמאות שבע הוכנו עם תוכן microparticle שונות. דגימות עם גבוהה (MP7) ואת תוכן נמוך של microparticle (MP1) וריכוז טסיות תואמות היו מוכנים, מעורב-יחסים שונים כדי ליצור דוגמאות ביניים (MPx). דוגמאות נבדקו עם cytometry זרימה כפי שתואר לעיל,19 ו DLS ואת תוצאות % MP-ריכוז כל שורטטו בתור הקלט והפלט. מקדם הדטרמינציה נמצאה להיות 0.985. דוגמאות של DLS היסטוגרמות לתוכן microparticle נמוך וגבוה מוצגים באיור 3א. התוצאות DLS שאושרו על-ידי cytometry זרימה (איור 3ב).

figure-results-1
איור 2 : השוואה של cytometry זרימה ותוצאות של DLS- הקשר הליניארי בין % MP נקבע על ידי Cytometry זרימה (קלט) ו- DLS (פלט), הנתונים המקוריים DLS מ בשתי הדגימות מסומן על ידי סמל פתוח ○ מוצגים באיור3. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

figure-results-2
איור 3 : Microparticle תוכן כדי להבדיל בין טסיות מופעל, שלא הופעל. (א) DLS תוצאות של תוכן MP ב- activated טסיות (קו מקווקו) היה כ- 57% לעומת 4% בשלא הופעל טסיות (קו רציף). הבדיקות בוצעו בטמפרטורה מדידה של 37 ° C, הגדרת צמיגות הפלסמה של 1.06 x10-3 Pa·s והגדרות עוצמת הכולל בין 200-600 קילו-הרץ. (B) Flow cytometry התוצאות (כפי שתואר לעיל19) של הדגימות אותו, כפי שמוצג (א); ב היסטוגרמות פיזור קדימה P1 ו- P2 מייצגים את השערים MP, טסיות, בהתאמה; עבור טסיות מופעל (שמאל) 76% מהאירועים נפל לתוך השער MP בהשוואה ל- 6% עבור שלא הופעל טסיות (מימין). קו הרגרסיה הליניארית מציע תרומה יחסית קבוע של רעש רקע % MP מאת cytometry זרימה שמוביל התוצאות גבוהות באופן עקבי. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

ירידה לפרטים/הפרעות
הארגון הבינלאומי לקביעת תקנים (ISO) מגדיר אנליטית ירידה לפרטים היכולת של הליך המדידה כדי לזהות או למדוד רק את measurand בעוד ישנן כמויות אחרות נוכח במדגם. יחודיות אנליטית של ההקרנה microparticle עשוי להיות מושפע על ידי תאי דם אדומים (RBC). DLS מודד MP תוכן יחסית תוכן טסיות. RBC עשוי להתערב כי התרומה פיזור של RBC הינו כלול את התרומה פיזור של טסיות דם, הפחתת התרומה היחסית של MP. קיימות מגבלות רגולטוריות עבור התוכן RBC המותר במוצרי דם; המרה השמרני של הסף מומלצת על ידי AABB הריכוז המותר RBC ב טסיות תרכיזים-2 מיליליטר ארוזים RBC יחידה אחת של טסיות-הביא 8.0 x1010 תאים/L (הנחות: אחסון RBC הוא 8.5 x10-14L, המטוקריט דם הוא 68%, אמצעי האחסון של טסית דם יחידה הוא 200 מ ל). דווח על ריכוז RBC שיורית במוצרים שונים הם הרבה מתחת לסף זה46.

שלושה תורמים שונים תרמה טסיות דם, תאי דם אדומים (RBC)-יומיים שונים, כמו זכאי, 3 ניסויים עצמאית. התוכן RBC הראשונית תרכיזים טסיות (דגימת הסימוכין) היה 0.05 - 0.15 x109 תאים/L כפי שנקבע עם hemocytometer. חמש דוגמאות נוספות שנוצרו על-ידי עולה בידוע כמויות של RBC לתוך aliquots של תרכיז טסית דם; רמות היעד RBC בדגימות אלה היו 1.0, 5.0, 10, 40 ו- 80 x109 תאים/ל'

הסף הפרעות של כדוריות דם אדומות היה כ 1.0 x1010 תאים/L (איור 4), אשר גם בקורלציה עם הרמה שבה היתה הנוכחות של תאי דם אדומים ראייה ברורה (איור 5). מעל רמה זו, % MP היה המעיט שאומר כי מבחינה ויזואלית אדום דגימות-אשר מכילים RBC מאשר המוגלובין-microparticle דווח על תוכן יהיה נמוך מדי.

figure-results-3
איור 4 : הקשר הליניארי בין % MP (DLS) וריכוז RBC (תאים/L). RBC ריכוז של 0.1 x109, 1.0 x109, 5.0 x109, 1.0 x1010, 4.0 x1010ו- 8.0 x1010 תאים/L (משמאל לימין) מ- 3 ניסויים עצמאית (○ ניסוי 1, ניסוי ● 2, ניסוי □ 3, קווי הרגרסיה הליניארית מוצגים עבור כל ניסוי). מעל 1.0 x1010 RBC/L מוביל underestimation של % MP. המראה החזותי של RBC המכיל דוגמאות מוצג באיור5. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

figure-results-4
איור 5 : המראה החזותי של RBC המכיל דוגמאות. האדמומיות של טסיות דוגמיות המכילה RBC ריכוזים של 0.1 x109, 1.0 x109, 5.0 x109, 1.0 x1010, 4.0 x1010ו- 8.0 x1010 תאים/L משמאל לימין. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

דיוק
דיוק מוגדר כהפרש בין תוצאה בודדת מדידה וערך הכמות האמיתית שהוקצו המדגם. שגיאה מדידה זו כוללת רכיב שיטתית מוערך על ידי מדידה הטיה מרכיב אקראי מוערך על ידי סטיית תקן. לפיכך, הדיוק של תוצאה מדידה הוא שילוב של אמיתות ודיוק.

חרוז סטנדרטי שימש כדי לקבוע את הדיוק של הבדיקה DLS. דיוק הוערך ב שני ריכוזים בטווח הרלוונטית קלינית של וזמינותו של MP 3-75%. הפניה חרוז תערובות שימשו כדי להכין דגימות של ריכוזים ידועים כי הפניה חרוזים יש גודל ידוע של ריכוז. כתוצאה מכך, חרוזים הפניה יכול להיות מעורב כדי להשיג דגימות עם גודל החלקיקים הרצוי וריכוזי.

חרוזי פוליסטירן סטנדרטי עם רדיוס 125 nm שימשו כדי לייצג microparticles, חרוזים עם רדיוס מיקרומטר 1.5 שימשו כדי לייצג טסיות. הדיוק של וזמינותו microparticle נאמד עם חרוז תערובות של 20% ל-50% תוכן MP. הדיוק של רדיוס חלקיקים נמדד הושווה את רדיוס חלקיקים מתועדים על אישורים של ניתוח עבור חרוזים הפניה כמוצג בטבלה 5.

125 nm חרוזים1.5 חרוזים מיקרומטר
תעודת אנליזהתעודת אנליזה
20% MP50% MP20% MP50% MP
כלומר רדיוס122.0113.8124.41.51.61.60
Std Dev4.52.833.60.0350.060.07
קורות חיים3.60%2.48%2.89%2.20%3.74%4.05%
דיוק6.70%2.00%6.50%6.30%

טבלה 5: דיוק של מדידות פיזור אור דינאמי (DLS). השוואת גודל עבור DLS תוצאות נגד תעודת אנליזה עבור חרוזים עם 125 nm radius ו- 1.5 מיקרומטר radius תערובות.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר שיטה פיזור אור דינאמי להקרנה microparticle אופטימיזציה עבור ריכוז החלקיקים גבוהה נמצאו דגימות ביולוגיות כגון מתרכזת טסיות. השיטה של DLS יתוקנן מטבעו כדי למדוד במדויק את גודל. ניתן להמיר את הריכוז היחסי של microparticles ריכוז מוחלט אם ריכוז טסיות ידוע והוא האזור שיא טסיות משמש את שיא התייחסות19. כמו טסיות ריכוזים מתקבלים בדרך כלל עם מנתחי המטולוגיה או זרימה cytometers שיטות אלה יכול להיחשב טכנולוגיות לוויה DLS.

הפונקציונליות של מערכת DLS מבוטח על ידי הפעלת שליטה חרוזים באופן קבוע. מים מזוקקים ניתן למדוד כדי לוודא רעש רקע מינימלי. ניתן לנתח אותם סטנדרטים זמינים מסחרית טסיות כפקדי MP-שלילי, לאחר תוספת של 125 nm רדיוס חרוזים, כפקדי MP-חיוביות. בקרב הריכוזים מגוון ביולוגי של MP של הריבית, התהליכים הם מעשי ומהיר לבצע כחלק השגרה בנק הדם.

בניגוד cytometry זרימה, שיטה זו אינה מבוססת על השוואת עוצמות פיזור חלקיקי אבל מעדיף את המהירות של תנועה בראונית שלהם. לפיכך, exosomes ניתן לזהות גם למרות גודלם הזעיר, מדווחים בנפרד MP.

תוכנן ככלי מיון, המגבלות של פעולת שירות זו קשורים יכולתו להבחין בין סוגים שונים של microparticles. יש מקום פוטנציאל לשיפור אם צעדים נוספים בידוד משמשים; דוגמאות נבדק לפני ואחרי הסרת microparticles באמצעות נוגדן ספציפי בשילוב חרוז מגנטי הלכידה. בנוסף, זה לא יכול להניח, כי כל שזוהו microparticles תא נגזר כי chylomicrons נוצר היפרליפידמיה47,48 ו קטן חיידקים או וירוסים6 גם ידווחו בטווח microparticle. עם זאת, הגנה נוספים קיימים בתוך אספקת הדם כדי למנוע מאוד lipemic או טסיות דם מזוהמים כדי להזין את המלאי בנק הדם של בית החולים.

הבחירה של קרישה המדגם משפיע על מידת ההפעלה טסיות ולכן תוכן MP,49. להשוואות של מוצרים שונים גורם זה צריך להיחשב. יתר על כן, החלפת פלזמה עם מדיה ההשעיה חינם MP PAS ישפיע התוכן MP ועל הסף לקביעת הטרוגניות-אם רק כשליש התוכן MP המקורי נשאר בתוך פלזמה שיורית ב תרכיז בהתאם הסף התחתון של תוכן MP יציין את אותה רמת טסיות הפעלה כמו פלזמה 100%. MP אחוז הוא התוכן MP ביחס טסיות. בעבר דווח כי ספירת טסיות ממוצע של המוצר PAS היה נמוך כך % ממוצע MP עדיין היה 9.5%19. הסף % MP עבור טסיות PAS ברישיון בארצות הברית מוגדר כרגע 10%.

המקור העיקרי של MP בתרכיזים טסיות הוא התורם, התהליכים שגורמים ללחץ כדי טסיות יהיה להעלות את רמת MP בהתאם הרגישות של טסיות הדם להדגיש-אם כבר מאוד מופעלים טסיות, מינורי לחצים כגון להאריך חיי מדף, איון הפתוגן, הכביסה, הקרנה או בתחבורה הבינעירונית עלול להוביל עלייה משמעותית בתוכן MP. אף אחד לחצים אלו הוכחו להשפיע באופן משמעותי על טסיות הומוגנית, שלא הופעל19. בנוסף, תשומת הלב צריכה להיות שילם על פוטנציאל עבור שינויים בהרכב מדגם בתוך נימי אם לא נבדקה מיד לאחר ההכנה (בסיום שלב 3 של פרוטוקול זה).

המוקד של פרוטוקול זה היא לקבוע את ההרכב של חלקיקים נוכח עירויי טסיות, להשתמש microparticles כמו סמנים ביולוגיים של הפעלת טסיות. עירויי טסיות הן מתויגות כ או שלא הופעל (כתום) או מופעל (ורוד) מבוסס על סף אחוז microparticle של 15%. הסף של 15% MP של טסיות בפלסמה 100% נקבע מדעית כמוהאחוזון ה ממוצע 66 מאתרים מרובים .

המטרה של ניהול מלאי טסיות בהתבסס על microparticle שגרתית ההקרנה עם DLS היא לשפר את החולה לטיפול, נסיעה מתוחזקות על ידי מניעת refractoriness טסיות-החיסון. מימוש מערכת DLS להקרנה של טסיות תיקים תאפשר למשתמש לכוון שלא הופעל טסיות לאוכלוסיות החולה ביותר בסיכון לפתח refractoriness טסיות.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

EMS הוא המייסד של LightIntegra טכנולוגיה inc., חברת המכשור הרפואי כדי לפתח את מערכת ThromboLUX עבור microparticle ובדיקות איכות טסיות. כל המחברים האחרים הם עובדים של טכנולוגיית LightIntegra. ייצור וגישה חופשית אל מאמר זה ממומנים על ידי LightIntegra טכנולוגיה בע מ

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים התורמים דם ואנשי במרכז הרשת שירותי הדם הקנדית לפיתוח חלה על אוסף והפקה של יחידות טסיות השתמשו במחקר זה. אנו להכיר קרן קנדה על חדשנות ועל קרן מייקל סמית למחקר בריאות למימון תשתיות במרכז UBC למחקר דם. מימון עבור הפרסום סופק על ידי LightIntegra טכנולוגיה inc., יצרן של ThromboLUX.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ThromboLUX-MLightIntegra Technology Inc. LPN120DLS
System ThromboSight תוכנהLightIntegra Technology Inc. LPN124DLS תוכנת ניתוח
נימיםLightIntegra Technology Inc. (כלול בערכת הבדיקה, הספק Optinova MLE)LPN065צינור פלסטיק שחול בהתאמה אישית, לא מפעיל, לא דו-שביר,
MiniPet LightIntegra Technology Inc. (כלול בערכת הבדיקה, הספק TriContinent Scientific)LPN082100 ומיקרו; L פיפטה בנפח קבוע לדגימה   
MicroFlex 1-200 ומיקרו; טיפים לפיפטה LLightIntegra Technology Inc. (כלול בערכת הבדיקה, הספק ESBE Scientific)טיפים לפיפטהLPN080
Critoseal LightIntegra Technology Inc. (כלול בערכת הבדיקה, הספק Fisher Scientific)LPN075איטום צינורות נימי
Dukal Alcohol Pad או שווה ערךLightIntegra Technology Inc. (כלול בערכת הבדיקה, הספק Dukal Corp.)LPN085רפידת איזופרופיל (רוויה ב-70% אלכוהול איזופרופיל
חרוזי בקרה, רדיוס 50 ננומטרLightIntegra Technology Inc. (כלול בערכת הבדיקה, ספק PolySciences Inc.)LPN128חרוזי בקרה
Microbead NIST גודל חלקיקים ניתן למעקב סטנדרטי, 3 ומיקרו; מפוליסיינסס בע"מ64060מיקרו-חרוזים סטנדרטיים: 1.5 ומיקרו; חרוזי פוליסטירן ברדיוס m; טווח 1.43-1.58 ומיקרו; m; תרחיפי מוצקים 1% במים נטולי יונים
תקן גודל חלקיקים הניתן למעקב NIST , 250 ננומטרPolySciences Inc.64014-15ננו-חרוזים סטנדרטיים: חרוזי פוליסטירן ברדיוס 125 ננומטר; טווח 120 - 130 ננומטר; תרחיפי מוצקים 1% במים נטולי יונים
Genesis BPS RapidSeal II או שווה ערךGenesis BPS428-SE640אוטם צינורות
Fresenius Kabi Tube Stripper או שווה ערךFresenius Kabi6R4452מסיר צינור ידני
Biohazard Shield - מונה תאים או שווה ערךCardinalHealthS1389-75מערבל
Corning LSE או מערבלשווה ערך של Corning Incorporated6775
FACSCanto II Flow Cytometer  עם תוכנת FACSDiva גרסה 6.1.3 או שווה ערךBD Biosciences338960ציטומטר זרימה
נבדק ומוקרן; לדגימת) מערבולת Splash Shield מערבולת

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dinkla, S., et al. Platelet microparticles inhibit IL-17 production by regulatory T cells through P-selectin. Blood. 127 (16), 1976-1986 (2016).
  2. Yin, W., Ghebrehiwet, B., Peerschke, E. I. Expression of complement components and inhibitors on platelet microparticles. Platelets. 19 (3), 225-233 (2008).
  3. Aatonen, M., Gronholm, M., Siljander, P. R. Platelet-derived microvesicles: multitalented participants in intercellular communication. Semin Thromb Hemost. 38 (1), 102-113 (2012).
  4. Suades, R., Padro, T., Alonso, R., Mata, P., Badimon, L. High levels of TSP1+/CD142+ platelet-derived microparticles characterise young patients with high cardiovascular risk and subclinical atherosclerosis. Thromb Haemost. 114 (6), 1310-1321 (2015).
  5. Obeid, S., et al. Development of a NanoBioAnalytical platform for "on-chip" qualification and quantification of platelet-derived microparticles. Biosens Bioelectron. 93, 250-259 (2017).
  6. Witwer, K. W., et al. Standardization of sample collection, isolation and analysis methods in extracellular vesicle research. J Extracell Vesicles. 2, (2013).
  7. Lacroix, R., Robert, S., Poncelet, P., Dignat-George, F. Overcoming Limitations of Microparticle Measurement by Flow Cytometry. Semin Thromb Hemost. 36 (8), 807-818 (2010).
  8. Lacroix, R., et al. Standardization of platelet-derived microparticle enumeration by flow cytometry with calibrated beads: results of the International Society on Thrombosis and Haemostasis SSC Collaborative workshop. J Thromb Haemost. 8 (11), 2571-2574 (2010).
  9. Shah, M. D., Bergeron, A. L., Dong, J. F., Lopez, J. A. Flow cytometric measurement of microparticles: pitfalls and protocol modifications. Platelets. 19 (5), 365-372 (2008).
  10. Nolan, J. P., Jones, J. C. Detection of platelet vesicles by flow cytometry. Platelets. 28 (3), 256-262 (2017).
  11. Connor, D. E., Exner, T., Ma, D. D., Joseph, J. E. The majority of circulating platelet-derived microparticles fail to bind annexin V, lack phospholipid-dependent procoagulant activity and demonstrate greater expression of glycoprotein Ib. Thromb Haemost. 103 (5), 1044-1052 (2010).
  12. Inglis, H., Norris, P., Danesh, A. Techniques for the analysis of extracellular vesicles using flow cytometry. J Vis Exp. (97), (2015).
  13. Inglis, H. C., et al. Techniques to improve detection and analysis of extracellular vesicles using flow cytometry. Cytometry A. 87 (11), 1052-1063 (2015).
  14. van der Pol, E., Coumans, F., Varga, Z., Krumrey, M., Nieuwland, R. Innovation in detection of microparticles and exosomes. J Thromb Haemost. 11, Suppl 1 36-45 (2013).
  15. Boudreau, L. H., et al. Platelets release mitochondria serving as substrate for bactericidal group IIA-secreted phospholipase A2 to promote inflammation. Blood. 124 (14), 2173-2183 (2014).
  16. Rousseau, M., et al. Detection and quantification of microparticles from different cellular lineages using flow cytometry. Evaluation of the impact of secreted phospholipase A2 on microparticle assessment. PLoS One. 10 (1), 0116812(2015).
  17. Groot Kormelink, T., et al. Prerequisites for the analysis and sorting of extracellular vesicle subpopulations by high-resolution flow cytometry. Cytometry A. 89 (2), 135-147 (2016).
  18. van der Vlist, E. J., Nolte-'t Hoen, E. N., Stoorvogel, W., Arkesteijn, G. J., Wauben, M. H. Fluorescent labeling of nano-sized vesicles released by cells and subsequent quantitative and qualitative analysis by high-resolution flow cytometry. Nat Protoc. 7 (7), 1311-1326 (2012).
  19. Maurer-Spurej, E., Larsen, R., Labrie, A., Heaton, A., Chipperfield, K. Microparticle content of platelet concentrates is predicted by donor microparticles and is altered by production methods and stress. Transfus Apher Sci. 55 (1), 35-43 (2016).
  20. Maurer-Spurej, E., et al. Platelet quality measured with dynamic light scattering correlates with transfusion outcome in hematologic malignancies. Transfusion. 49 (11), 2276-2284 (2009).
  21. Hess, J. R., et al. Clinical and laboratory correlates of platelet alloimmunization and refractoriness in the PLADO trial. Vox Sang. 111 (3), 281-291 (2016).
  22. Doughty, H. A., et al. Relative importance of immune and non-immune causes of platelet refractoriness. Vox Sang. 66 (3), 200-205 (1994).
  23. Vassallo, R. R., Norris, P. J. Can we "terminate" alloimmune platelet transfusion refractoriness. Transfusion. 56 (1), 19-22 (2016).
  24. Anderson, W., Kozak, D., Coleman, V. A., Jaemting, A. K., Trau, M. A comparative study of submicron particle sizing platforms: Accuracy, precision and resolution analysis of polydisperse particle size distributions. J colloid inter sci. 405, 322-330 (2013).
  25. Gyoergy, B., et al. Improved Flow Cytometric Assessment Reveals Distinct Microvesicle (Cell-Derived Microparticle) Signatures in Joint Diseases. Plos One. 7 (11), 49726-49726 (2012).
  26. Urey, C., et al. Combining gas-phase electrophoretic mobility molecular analysis (GEMMA), light scattering, field flow fractionation and cryo electron microscopy in a multidimensional approach to characterize liposomal carrier vesicles. Int J Pharm. 513 (1-2), 309-318 (2016).
  27. Mohr, K., et al. Evaluation of multifunctional liposomes in human blood serum by light scattering. Langmuir. 30 (49), 14954-14962 (2014).
  28. Maurer-Spurej, E., Brown, K., Labrie, A., Marziali, A., Glatter, O. Portable dynamic light scattering instrument and method for the measurement of blood platelet suspensions. Physics in Medicine and Biology. 51 (15), 3747-3758 (2006).
  29. Arraud, N., et al. Extracellular vesicles from blood plasma: determination of their morphology, size, phenotype and concentration. J Thromb Haemost. 12 (5), 614-627 (2014).
  30. Ambrose, A. R., Alsahli, M. A., Kurmani, S. A., Goodall, A. H. Comparison of the release of microRNAs and extracellular vesicles from platelets in response to different agonists. Platelets. , 1-9 (2017).
  31. Buzas, E. I., Gardiner, C., Lee, C., Smith, Z. J. Single particle analysis: Methods for detection of platelet extracellular vesicles in suspension (excluding flow cytometry). Platelets. 28 (3), 249-255 (2017).
  32. Stoner, S. A., et al. High sensitivity flow cytometry of membrane vesicles. Cytometry A. 89 (2), 196-206 (2016).
  33. Labrie, A., Marshall, A., Bedi, H., Maurer-Spurej, E. Characterization of platelet concentrates using dynamic light scattering. Transfus Med Hemother. 40 (2), 93-100 (2013).
  34. Ueba, T., et al. Plasma level of platelet-derived microparticles is associated with coronary heart disease risk score in healthy men. J Atheroscler Thromb. 17 (4), 342-349 (2010).
  35. Badimon, L., Suades, R., Fuentes, E., Palomo, I., Padro, T. Role of Platelet-Derived Microvesicles As Crosstalk Mediators in Atherothrombosis and Future Pharmacology Targets: A Link between Inflammation, Atherosclerosis, and Thrombosis. Front Pharmacol. 7, 293(2016).
  36. Berezin, A. E., Kremzer, A. A., Berezina, T. A., Martovitskaya, Y. V. The pattern of circulating microparticles in patients with diabetes mellitus with asymptomatic atherosclerosis. Acta Clin Belg. 71 (1), 38-45 (2016).
  37. Marcoux, G., et al. Microparticle and mitochondrial release during extended storage of different types of platelet concentrates. Platelets. 28 (3), 272-280 (2017).
  38. Yanez-Mo, M., et al. Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions. J Extracell Vesicles. 4, 27066(2015).
  39. Reddoch, K. M., et al. Hemostatic function of apheresis platelets stored at 4 degrees C and 22 degrees C. Shock. 41, Suppl 1 54-61 (2014).
  40. Kelly, A. M., et al. The effect of variation in donor platelet function on transfusion outcome: a semirandomized controlled trial. Blood. 130 (2), 214-220 (2017).
  41. Peerschke, E. I., Yin, W., Ghebrehiwet, B. Platelet mediated complement activation. Adv Exp Med Biol. 632, 81-91 (2008).
  42. Redman, C. W., Sargent, I. L. Microparticles and immunomodulation in pregnancy and pre-eclampsia. J Reprod Immunol. 76 (1-2), 61-67 (2007).
  43. Ripoche, J. Blood platelets and inflammation: their relationship with liver and digestive diseases. Clin Res Hepatol Gastroenterol. 35 (5), 353-357 (2011).
  44. Ling, Z. L., Combes, V., Grau, G. E., King, N. J. Microparticles as immune regulators in infectious disease - an opinion. Front Immunol. 2, 67(2011).
  45. Melki, I., Tessandier, N., Zufferey, A., Boilard, E. Platelet microvesicles in health and disease. Platelets. 28 (3), 214-221 (2017).
  46. Culibrk, B., et al. Application of the ADVIA cerebrospinal fluid assay to count residual red blood cells in blood components. Vox Sang. 103 (3), 186-193 (2012).
  47. Connolly, K. D., et al. Lipoprotein-apheresis reduces circulating microparticles in individuals with familial hypercholesterolemia. J Lipid Res. 55 (10), 2064-2072 (2014).
  48. Mork, M., et al. Prospects and limitations of antibody-mediated clearing of lipoproteins from blood plasma prior to nanoparticle tracking analysis of extracellular vesicles. J Extracell Vesicles. 6 (1), 1308779(2017).
  49. Raczat, T., et al. The influence of four different anticoagulants on dynamic light scattering of platelets. Vox Sang. 107 (2), 196-199 (2014).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Microparticle DetectionPlatelet TransfusionsDynamic Light ScatteringPlatelet ActivationBlood Bank ScreeningCapillary SamplingMicroparticle ContentPlatelet InventoryTransfusion MedicineDLS Testing

מאמרים קשורים