Method Article

נוהל מקיף כדי להעריך את ביצועי במבחנה כורוידאלית Hemangioblastoma בשם משתמש את ספרואיד הלבלוב Assay

DOI:

10.3791/57183

⸱

April 12th, 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery, Huashan Hospital, Fudan University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמר זה מציג נוהל מקיף כדי להעריך במבחנה אם אנגיוגנזה קלאסי קיימת ב- hemangioblastomas (HBs) ותפקידו HBs. התוצאות להאיר את המורכבות של HB-כורוידאלית, מציע כי זו הצורה השכיחה של אנגיוגנזה הוא רק מנגנון משלים ב- HB-כורוידאלית.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איון של הגן מדכא הגידול פון היפל-Lindau. אייצ ' (.-אל) ממלא תפקיד מכריע בהתפתחות של hemangioblastomas (HBs) בתוך מערכת העצבים המרכזית אנושי (CNS). עם זאת, התהליך האבולוציוני של HBs (כולל כורוידאלית) והן המקור cytological נותרו שנויים במחלוקת, אנגיוגנזה עבור אייצ '-אל-HBs, בהתבסס על קלאסי על בסיס חצי פנסיון אנגיוגנזה, יצרו תוצאות מאכזבות בניסויים קליניים. מכשול רציני תרגום קליני מוצלח של טיפול אנטי-כלי הדם היא חוסר הבנה מעמיקה של כורוידאלית זה הגידול בכלי הדם. במאמר זה, נציג נוהל מקיף כדי להעריך במבחנה אם אנגיוגנזה קלאסי קיימת ב- HBs, וכן את תפקידו ב- HBs. באמצעות הליך זה, חוקרים יכולים במדויק להבין את המורכבות של כורוידאלית על בסיס חצי פנסיון ולזהות את הפונקציה של זו הצורה השכיחה של אנגיוגנזה HBs. פרוטוקולים אלה ניתן להשתמש כדי להעריך את הטיפול האנטי-וסקולרית המבטיחים ביותר עבור גידולים, אשר יש פוטנציאל גבוה translational לטיפול גידולים או לסיוע באופטימיזציה של הטיפול האנגיוגנזה anti HBs בעתיד תרגומים. התוצאות להאיר את המורכבות של כורוידאלית על בסיס חצי פנסיון, מציע כי אנגיוגנזה טופס הנפוץ הזה הוא רק מנגנון משלים בכורוידאלית על בסיס חצי פנסיון.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hemangioblastomas (HBs) הם גידולים שפירים כלי הדם אשר נמצאים אך ורק בתוך האדם מערכת העצבים המרכזית (CNS). הם מפתחים אצל חולים עם מחלת פון היפל-לינדאו (אייצ '-אל) או נגעים סדיר. אייצ '-אל-HBs קשה לרפא באמצעות טיפול כירורגי עקב הישנות תכופים, נגעים מרובים לנבוע זה גנטי ההפרעה1. למרות איון של הגן מדכא הגידול אייצ '-אל נחשב שורש tumorigenesis של אייצ '-אל-HBs, המקור cytological (כולל כורוידאלית) ואת התהליך האבולוציוני של HBs נותרו במחלוקת במידה רבה2. לכן, הבנה טובה יותר של המנגנונים הביולוגיים HB-neovascular עשוי לספק תובנות שימושיות האסטרטגיות אנטי-וסקולרית המבטיחים ביותר אייצ '-אל-HBs.

מחקרים אח....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שיטה זו בוצעה בהתאם הנחיות שאושרו והתקנות של מחקר אתיקה הוועדה של Huashan חולים, אוניברסיטת פודאן (fudan). אמצעי בטיחות סטנדרטית המתאימה עקבו כל צעד. עבור מצגת סכמטית, נא עיין באיור 1.

1. תא תרבות ובבניית פלסמיד

  1. באופן שגרתי לשמור על התא אנדותל יפתור (HUVEC) ב Dulbecco המתואמת של בינוני הנשר (DMEM) בתוספת 10% סרום שור עוברית (FBS), יחידה/mL 100 של פניצילין, µg/mL 100 של סטרפטומיצין % 5 humidified CO2 מגשים ב 37 º C.
  2. תקציר PLKO.1 פלסמיד עם ApaI, EcoRI לסינתזה של פרגמנט shRNA. ודא כי הרצף oligonucleotide של וקטור shRNA אייצ '-אל CCGGGATCTGGAAGACCACCCAAATCTCGAGA TTTGGGTGGTCTTCCAGATCTTTTTG

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התמונות המקוריות נלקחים על ידי מיקרוסקופ אור הפוך. דמויות טיפוסיות של קבוצת הביקורת וקבוצת אייצ '-אל מוצגים באיור2-A1 , איור 2-A2. אורך נבטי של קבוצת הביקורת היא קצרה יותר מזו של קבוצת אייצ '-.

לאחר העלאת התמונות, הפלטפורמה המקוונת מספקת תוצאות ניתוח ישירות. הפלט מורכב משני חלקים: התמונה המעובדת ואת התוצאות המתקבלות ניתוח. תמונות מעובד .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לאחרונה, מספר תחומי מחקר לביולוגיה היו מגורה על ידי המחקר של אנדותל האנגיוגנזה15. במאמר זה, פיתחנו ספרואיד אנדותל של לבלוב טכניקה כמודל ניסויי ללמוד היווצרות כלי שמקורו ג'ין אייצ '-אל אובדן התפקוד בתאי האנדותל מניפולציות כדי לזהות מולקולות המועמד הרומן של אשד אנגיוגנזה. למיטב ידיעתנו, זה הדו ח הראשון לבחון את ההשפעות אנגיוגנזה של תאי אנדותל ששונה endogenic.

כורוידאלית רקמה (כולל גידול רקמות) היא תהליך מורכב המתרחשת באמצעות האנגיוגנזה, vasculogenic מנגנונים במהל.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים שנגחאי ועדת המדע והטכנולוגיה (15411951800, 15410723200). המחברים רוצים להודות פרופסור של YuMei וון וז'או צ'או פרופסור באוניברסיטת פתוגניים מיקרואורגניזם המחלקה של פודאן לסיוע טכני שלהם.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
תא אנדותל וריד טבורי אנושימרכז תאי המעי הרגיז פודאןFDCC-HXN180
dulbecco' נשר שונה' s בינוני סרום בקר עוברי Gibco11995040
Gibco 
PLKO.1-puro וקטורAddgene# 8453
אריזת פלסמיד psPAX2 Addgene#12260
מעטפת פלסמיד pMD2.GAddgene#12259
צלחות תלת מימד עגולות-תחתונות 96 בארותS-BioMS-9096M
matrigelBD Biosciences354234
Opti-MEM בינוניGibco31985-070מדיום סרום מופחת 
צלחת 15 בארותIbidi81501ניתן להפחית בועות אוויר בג'ל על ידי איזון ה-μ – החלק אנגיוגנזה לפני השימוש בתוך החממה תוספי
צמיחת תאי אנדותלSciencell#1052
צלחת תרבית 10 ס"מCorningScipu000813
PuromycinGibcoA1113802
typsin-EDTAGibco25200056
מערכת מונה תאים אוטומטית  תוכנה לניתוח תמונות ביוטק
 ווינמסיסhttp://mywim.wimasis.com 
26400044 לילה

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lonser, R. R., et al. von Hippel-Lindau disease. Lancet. 361 (9374), 2059-2067 (2003).
  2. Hussein, M. R. Central nervous system capillary haemangioblastoma: the pathologist's viewpoint. Int J Exp Pathol. 88 (5), 311-324 (2007).
  3. Ma, D., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hemangioblastoma NeovascularizationSpheroid Sprouting AssayVHL Gene SilencingEndothelial Cell CultureLentiviral Vector TransfectionHUVEC Cell LineSprout Length AnalysisIn Vitro AngiogenesisTumor VasculogenesisCapillary Formation Assay

Related Articles