ההכנה והשתלות של רקמת שומן נגזר תאי גזע (ASC) מגיליונות דיו sutured. חיבור המעי הגס במודל חולדה מוצג. יישום זה הרומן מראה כי גיליונות ASC יכולים להפחית זליגת השקה המעי הגס.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
השתלת תאי רקמת שומן-Derived גיליון כדי להפחית את זליגת לאחר קיצור קיבה חלקית במודל של עכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
זליגת anastomotic הוא סיבוך נוראי לאחר ניתוח המעי הגס. למרות שיטות למניעת זליגת יש רמות שונות של יעילות קלינית, הם עד עכשיו לא מושלם פתרונות. טיפול בתאי גזע באמצעות גליונות ASC יכול לספק פתרון לבעיה זו. השיקופיים נחשבים כמו מבטיח מועמדים לקידום רקמת ריפוי בגלל תכונותיהם עם מחלות, immunomodulatory. כאן, אנו מספקים שיטות כדי לייצר הגליונות ASC בצפיפות גבוהה, אשר מושתלים על גבי השקה המעי הגס במודל חולדה כדי להפחית לדליפת. השיקופיים נוצר תא גליונות במנות תרבות תרמו מגיב זה יכול להיות מנותק בקלות. ביום של השתלת, בוצעה כריתת חלקית עם השקה המעי הגס 5-תפר. חיות הושתלו מייד עם גיליון 1 עולה לכל חולדה. גליונות ASC באופן ספונטני דבקה ההשקה ללא בדבק כלשהו, בתפר או biomaterial כלשהו. קבוצות בעלי חיים הוקרבו 3 ו 7 ימים במשככי. בהשוואה לבעלי המושתלים, השכיחות של אבצס anastomotic ודליפה היה גבוה בבעלי השליטה. במודל שלנו, השתלת של גיליונות עולה לאחר ההשקה המעי הגס היה מוצלח עם קצב דליפת נמוך יותר.
מבוא
קיצור קיבה חלקית עם השקה ראשי הוא ניתוח נפוץ שבוצעו שניתן להיעשות למחלות רבות להשפיע על המעי הגס כגון סרטן המעי הגס, מחלת קרוהן, דיברטיקוליטיס1,2. הכי חששתי סיבוך לאחר ההשקה המעי הגס היא דליפה anastomotic3. למרות מספר גורמי סיכון הקשורים עם דליפות anastomotic זוהו, פתרונות למניעת זליגת נשארים unkown4,5.
רקמת שומן-derived סטרומה תאים (השיקופיים) קשורים עם תכונות אנטי דלקתיות עם מחלות6,7, מה שהופך את התאים האלה מבטיח מועמדים טיפולים משובי
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
רקמת השומן התת עורית בטן הושג מתורמים האנושי עם אישור של הוועדה האתית הרפואית (#MEC-2014-092), המרכז הרפואי של אוניברסיטת MC ארסמוס, רוטרדם, הולנד. ניסויים בבעלי חיים כל אושרו על-ידי אתית הוועדה של חיות ניסוי, המרכז הרפואי של אוניברסיטת MC ארסמוס, רוטרדם, הולנד (133-14-01).
1. האדם השיקופיים בידוד ותרבות
- להכין 3 מ"ל של בידוד בינוני 1g של רקמת שומן. מיקס גלוקוז נמוך Dulbecco של בינוני הנשר ששינה (LG-DMEM) עם 10 גרם/ליטר שור אלבומין (BSA) ו 1 g/L collagenase סוג 1.
- לנתח את האדם רקמת השומן התת עורית בטן (n = 8, כל נקבה, אומר גיל 40 ± בת 9) לחלקים קטנים (0.5 ס מ) באמצעות להב כירורגי סטרילי בגודל 10. לאדאמסון-חום רקמת מלקחיים....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
תרשים זרימה של מחקר זה המתאר ASC גיליון תרבות והן את ההליך של צוות, השקה מוצג באיור1. איור 2 מציג ASC גיליון מורפולוגיה מיקרוסקופית ואת המראה מאקרוסקופית של הגיליון ASC במהלך ואחרי הניתוק. איור 3 מראה את השלבים השונים של ניתוק גיליון ASC והשתלות. איור 4 מראה הנוכחות של הגיליון ASC קו anastomotic ומניעה של זליגת 3 ימים במשככי.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
זליגת anastomotic הוא האירוע לוואי החמורה ביותר בעקבות צוות עם השקה ראשי. טכניקות אופטימלית למניעת הפרעה anastomotic ודליפה עדיין חסרים. יישום מקומי של מערך של biomaterials נערכה, עם שלל תוצאות25,26,27. המטרה של טיפולים תא היא להקל על רקמות תיקון על ידי החלפת רקמות או הגירוי של ריפוי מקומי באמצעות הפרשת paracrine.
במודל זה עכברוש, עולה גיליון השתלת היה מוצלח מבחינה טכנית. הערכה קלינית, היסטולוגית הפגי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים כי המחקר בוצע בהיעדר יחסים מסחריים או פיננסי שיכול להחשב בתור ניגוד אינטרסים פוטנציאליים.
תודות
המחברים מודים פרופ ' ד ר S.E.R. Hovius, ד ר M.A.M. Mureau, מנתחים כל המחלקה לכירורגיה פלסטית האוסף של רקמת השומן התת עורית. עמ' הראש נתמך על ידי מענק של התוכנית היה האחווה הולנד (NFP-12/435), במהלך התנהלות של המחקר. עיון Bastiaansen-Jenniskens נתמך על ידי מענקים מקרן דלקת מפרקים ההולנדית (LP11).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| LG DMEM | Gibco, טכנולוגיות חיים | 22320022 | בידוד ותרבות ASC |
| קולגנאז סוג I | Gibco, Life technologies | 17100-01 | ASC |
| בידוד בקר סרום אלבומין | Sigma-Aldrich | A9418 | ASC בידוד |
| סרום בקר | עוברי Gibco, Life technologies | 10270-106 | FBS, בידוד ותרבית ASC |
| 3% אצטי חומצה עם מתילן כחול | טכנולוגיות תאי גזע | 7060 | בידוד ASC |
| ג'נטמיצין | ג'יבקו, טכנולוגיות חיים | 15750-037 | בידוד ותרבית ASC |
| אמפותריצין B | Gibco, טכנולוגיות חיים | 15290-018 | שייקר בידוד ותרבות ASC |
| (שייקר סביבתי Gallenkamp דגם 10X 400) | בידוד Akribis Scientific | F240 | ASC |
| צנטריפוגה | Hettichlab | Rotina380 | בידוד ותרבית |
| ASC מאגר פוספט מלח | Gibco, טכנולוגיות חיים | 14190-094 | PBS, בידוד ותרבות ASC |
| חומצה אסקורבית-2-פוספט | Sigma-Aldrich | A8960 | ASC בידוד ותרבית גורם |
| גדילה פיברובלסטים רקומביננטי אנושי 2 | AbD Serotec | AF-100-15 | FGF2, בידוד ותרבות ASC |
| Trypsin EDTA | Gibco, Life technologies | 25200-056 | תרבית ASC |
| דימתיל סולפוקסיד | סיגמא-אולדריץ' | D2650-5x | DMSO, הקפאת ASC |
| כלי תרבית רספונסיביים תרמו-רספונסיביים | Nunc Thermo Scientific | 174904 | הכנת יריעות ASC |
| משי קלוע שאינו נספג 4/0 | B ניתוח 21151042 בראון | ||
| מונופילמנט שאינו נספג פוליאמיד 8/0 | ניתוח | G1118170 בראון | |
| חומצה פוליגליקולית קלועה נספגת 5/0 | B ניתוח C1048207 בראון |
מקורות
- Kawahara, H., et al. Single-incision laparoscopic right colectomy for recurrent Crohn's disease. Hepatogastroenterology. 57 (102-103), 1170-1172 (2010).
- Saia, M., Buja, A., Mantoan, D., Agresta, F., Baldo, V. Colon Cancer Surger....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
