אסטרטגיות דגימה ועיבוד של דגימות רקמה Biobank של מודלים ביו חזירי

סיכום

היישום המעשי והביצועים של שיטות לדור של דגימות רקמה נציג של חזירי מודלים בבעלי חיים עבור קשת רחבה של ניתוחים במורד הזרם בפרויקטים biobank מודגמות, כולל volumetry, דגימה אקראית שיטתית, ועיבוד דיפרנציאלית של דגימות רקמה עבור סוגי ניתוחים כמותיים מורפולוגיות ומולקולרית.

תקציר

במחקר רפואי translational, מודלים חזירי בהתמדה הפך פופולרי יותר. בהתחשב בערך גבוה של חיות בודדות, במיוחד של חזיר מהונדס גנטית מודלים ומספר מוגבל לעיתים קרובות בעלי זמינות של מודלים אלה, הקמת (biobank) אוספים של דגימות רקמה שלמאחה מעובדים מתאים קשת רחבה של שיטות ניתוח עוקבות, כולל ניתוחים לא צוין בנקודת הזמן של הדגימה, מייצגים גישות משמעותי כדי לנצל את מלוא היתרונות של הערך translational של המודל. לגבי הייחוד של האנטומיה חזירי, הנחיות מקיף לאחרונה הוקמו לדור מתוקננת של נציג, באיכות גבוהה דגימות שונים חזירי איברים ורקמות. קווים מנחים אלה הם תנאים מוקדמים חיוניים עבור הפארמצבטית התוצאות, comparability שלהם בין מחקרים שונים החוקרים. ההקלטה של נתונים בסיסיים, כמו משקולות איברים כרכים, הקביעה של המיקומים דגימה, המספרים של דגימות רקמה שיווצר, כמו גם שלהם התמצאות, גודל, עיבוד וזמירה כיוונים, הם הגורמים הרלוונטיים קביעת את generalizability ואת השימושיות של הדגימה עבור מולקולרית, כמותיים המורפולוגיים. . הנה, המחשה, מעשית, צעד אחר צעד בהפגנה של הטכניקות החשובות בדור של נציג, רב תכליתי biobank דגימות רקמות חזירי מוצג. השיטות המתוארות כאן כוללים קביעת צפיפות, ואמצעי אחסון איברים/רקמות היישום של הליך משוקלל נפח דגימה אקראית שיטתית של איברים parenchymal על ידי ספירת נקודת, הנחישות של היקף רקמת הצטמקות הקשורים הטבעה היסטולוגית של דגימות, דור של דגימות מונחה באופן אקראי עבור ניתוחים כמותיים stereological, כגון איזוטרופיות אחיד אקראי (iur השוק) סעיפים שנוצר על ידי שיטות "Orientator" ו- "Isector", המדים אנכי קטעים אקראיים (VUR).

מבוא

ב translational רפואה, חזירים הם נפוצים יותר ויותר לשימוש כמו חיה גדולה מודלים^1,2,3,4,5, עקב מספר קווי דמיון יתרון בין חזירי, אנטומיה, פיזיולוגיה, וזמינות של הוקמה שיטות ביולוגי מולקולרי לאפשר לדור של המותאמים, מהונדסים גנטית חזיר דגמים למגוון רחב של מחלות תנאים^1,4.

עם זאת, מספר החיות של מודל חזיר בהתאמה מסופקים עבור ניסויים בכל עת לעומת מודלים מכרסמים, מוגבל. זאת בשל המרווח דור חזירי של שנה אחת, ואת המאמצים פיננסיים וגוזלת זמן נדרש עבור הדור של חזירי מודלים טרנסגניים. לכן, חיות בודדות של מודל חזירי, כמו גם כדוגמאות ניתן להפיק של החזירים האלה הם חשובים מאוד, במיוחד אם מהונדסים גנטית מודלים חזירי ו/או בעיות ניסיוני לטווח ארוך (למשל, סיבוכים מאוחר של מחלות כרוניות) נבדקים ב אנשים בגילאי^2,6,7.

במהלך כל המחקר, הביצועים של ניתוחים נוספים אשר לא נקבעו בעיצוב ניסיוני הראשונית של המחקר עשוי מאוחר יותר להפוך להיות רלוונטי, למשל, לכתובת שאלות שונות הנובעות קודם לכן גילה ממצאים בלתי צפויות. אם הדוגמאות מתאימים עבור ניסויים נוספים אלה אינם זמינים, עלות גבוהה באופן לא פרופורציונלי והוצאות אינטנסיבית יתכן שיהיה צורך ליצור חזירים נוספים ודוגמאות רקמה. כדי להיות מוכנים לכל מצב כזה, דור של biobank אוספים דגימות שנשמרת גיבוי של איברים שונים, רקמות או ביו-נוזלים, באופן כמותי ובאופיו מתאימים למגוון רחב של ניתוחים שלאחר מכן, נחשב חשוב הגישה^2,6,7. הנובעות יתרונות מיטבית מודל בעלי חיים חזירי, הזמינות של דגימות biobank נאותה גם מציעה את האפשרות ייחודי כדי לבצע קשת רחבה של שיטות ניתוח שונות על מדגם זהה בחומרים על רמה איברים רב אותו חיות בודדות, למשל, על ידי חלוקת דוגמיות המדענים של קבוצות עבודה שונות מאורגן ב^6,72,רשת המחקר. בנוסף, אסטרטגיית הדגימה "מבט לעתיד" biobanking תורם גם הפחתה של מספר החיות הצורך במחקר. היתרונות של מודל חזירי biobanking הוכחו לאחרונה באיבר רב, multiomics רקחמ, איברים הצלב לדבר במודל של חזירי מהונדס גנטית של סוכרת לטווח ארוך, באמצעות דגימות מן Biobank החזיר מינכן MIDY ².

קיימות מספר דרישות חובה דגימות biobank חייב לעמוד בדרך כלל כדי לבסס את המהימנות ואת interpretability של תוצאות הבדיקות שבוצעו לאחר מכן. הדגימות להפיקם reproducibly, הם חייבים להיות נציג, כלומר, במידה מספקת שיקוף התכונות מעוניין מולקולרית מורפולוגיים של האיבר/הרקמות הדגימות נלקחו מ^-7. למתאים למגוון רחב של סוגי ניתוח במורד הזרם, הדגימות חייב להיות בכמויות מספיקות אשר מעובדות בהתאם לדרישות (כולל זמן ותנאי טמפרטורה) שיטות אנליטיות השונות, כולל תיאורי ניתוחים histopathological, כגון cryohistology, פרפין, היסטולוגיה פלסטיק, אימונוהיסטוכימיה, בחיי עיר הכלאה, ultrastructural אלקטרון מיקרוסקופיות ניתוחים ניתוחים אבחון קליני מעבדתי, כמו גם כמו מולקולרית ניתוחים של ה-DNA, RNA, חלבונים ו מטבוליטים.

כדי לאפשר ההערכה של מגוון רחב של פרמטרים מורפולוגי כמותיים ברורים כגון מספרים, אמצעי אחסון, אורכי או פני שטחים של רקמות שונות מבנים על ידי ניתוחים כמותיים stereological, קטע אקראי מטוסים של דוגמאות היסטולוגית של הרקמות/האיברים המתאימים צריכים להיות מוכנים^7,8,9,10,11. במחקרים כמותיים מורפולוגי, הקביעה מדויקת מהנפח הכולל של רקמה, איבר, או איבר תא, הדגימות שנלקחו ממנו (קרי, החלל הפניה) חשיבות מכרעת^{7,9 , 12} לחישוב הכמויות מוחלטת של הפרמטרים מעוניין בתוך האיברים המתאימים, רקמת, או אורגניזם. בסופו של דבר, ההשפעה של רקמות הטבעה הקשורות הצטמקות במהלך ההכנה של מקטעים היסטולוגית חייב להיות נחוש ונלקח לתוך חשבון¹³. לכן, ניתוחים כמותיים stereological, במיוחד של דגימות בארכיון (קבוע דגימות רקמה, רקמה מוטבע בלוקים, סעיפים היסטולוגית, וכו ') ממחקרים קודמים הם לפעמים מוגבלות מאוד או אפילו בלתי אפשרי¹², במיוחד אם volumetry של האיברים המתאימים/הרקמות לא בוצע, אם אין עיצובים דגימה נאותה הוחלו על צו מדגמים מייצגים, אם המספרים ואת כמויות של דוגמאות בודדות זמין אינן מספיקות, או העיבוד דוגמאות אינו תואם שערוך של הפרמטרים מורפולוגי כמותית של עניין. בשל הגורמים כמשפיע האפשריים סעפת, התאמת חומרי ארכיון-sample ניתוחים של פרמטרים מורפולוגי כמותיים ברורים באופן חד משמעי אין אפשרות לענות, אבל תלוי הערכה זהירה של כל מקרה ומקרה.

לפיכך, מיקום, גודל, מספר, עיבוד, כיוון זמירה, וכיוון דוגמאות של פוטנציאל ישפיעו על התוצאות של הבדיקות עוקבות, גורמים אלה חשיבות גדולה, יש לקחת בחשבון בעיצוב ניסיוני בכל מחקר. בכל הנוגע היבטים אלה תכונות מיוחדות של האנטומיה חזירי, הנחיות דיגום מקיף, מפורט, בקנה מידה גדול מותאם חזירי חייתיים לאחרונה הוקמו, מתן התייחסות איתנה מתוקננת, לשחזור , ויצירת יעיל של דגימות יתיר, מעובד כראוי, באיכות גבוהה יותר מ-50 שונים חזירי איברים ורקמות^6,7.

התיאורים מתודולוגי, את ערכת לימוד בנושא המוצג במאמר הנוכחי מספקים נתונים היסטוריים, המחשה, מובנת, צעד הוראות שלב אחר שלב מעשי בביצוע מגוון רחב של טכניקות volumetry, דגימה של רקמות חזירי, איברים, ועיבוד של דגימות רקמה עבור שיטות ניתוח שונות במורד הזרם. הטכניקות נבחרים כוללים שיטות לקביעת איברים/רקמות כרכים וצפיפות המבוססת על העקרונות של ארכימדס, קאבליירי⁹, לרבות קביעת מימדי תלת מימדי התכווצות של רקמות הקשורים הטבעה שונות ההטבעה מדיה¹⁴ במהלך עיבוד לבדיקה היסטולוגית, גישות יישום מעשית משוקלל נפח שיטתית אקראי הדיגום, עיבוד של דגימות רקמה שנדגמו עבור אחר העוקבים ניתוחים^7,8,9,15, דור של כראוי ומכוונים מעובד דגימות פוטנציאלית ניתוח כמותי stereological^{7,8, 9,10,11}. לצד היישום שלהם בפרויקטים biobank חזירי, השיטות והפגינו מתאימים בדרך כלל ללימודי כל בחינת מאפיינים כמותיים היסטו-מורפולוגי של איברים/רקמות. יתר על כן, דגימה אקראית שיטתית עיצובים הם מועיל במיוחד לדור של מדגמים מייצגים ניסויים בשיטות ניתוח מולקולרית כדי לזהות שינויים שפע של, למשל, RNAs, חלבונים או מטבוליטים ב איברים ורקמות שונות.

בפסקאות הבאות לספק הקדמה קצרה לשיטות אלו, בזמן הביצוע המעשי שלהם מתוארת בסעיף פרוטוקול.

הנחישות של איברים/רקמות כרכים
קביעה של איברים משקולות ואמצעי אחסון חשוב מספר הגדרות ניסיוני, כמו גורמים אלה עשוי להצביע על שינויים, שעשוי להיות קשור השפעול נבדק גורמי עניין. הנפח הכולל איברים/רקמה נדרש גם כדי לחשב פרמטרים כמותיים מוחלט, (למשל, המספר בתא סכום) של צפיפויות נפח מספריים מוערך stereologically (כלומר, מספר התאים ליחידת נפח של רקמה)^7,12. מלבד באמצעות ציוד טכני מורכב, כגון טומוגרפיה המחשב, טכניקות יש בעצם שלוש שיטות מעשיות נפוץ כדי לקבוע את נפח מוחלט של איבר או רקמה. היקף איבר יכול להיקבע על ידי "הנפחי מדידה ישירה", לפי עקרון ארכימדס, קרי, מדידת הנפח של מים או תמיסת מלח שנעקרו על ידי המבנה כאשר לחלוטין. עם זאת, עבור איברים חזירי וזהובה גדולים, גישות אלה הם מעשי נוטה העוסקת, מכיוון שהם דורשים מבחנות גדולות מאוד נפח/מדידה. יותר נוח, ניתן לחשב את עוצמת הקול איברים/רקמה שלו משקל, צפיפות^7,12,16, אשר יכול ביעילות להיקבע באמצעות את "שיטת ועלייתו"^{7,12 ,16} (פרוטוקול שלב 1.1.). איברים/רקמות כרכים יכול גם להיות מוערך שימוש בגישות volumetry מבוסס על "עקרון Cavalieri" (1598-1647). במילים פשוטות, העיקרון קאבליירי קובע, כי אם שני עצמים הם למחלקה במישורים מקבילים למישור הקרקע, הפרופילים של הסעיפים לחתוך דרך שני העצמים ב המתאים המרחקים בין מישור הקרקע יש את אותם אזורים, שני העצמים יש באותו אמצעי אחסון. לפיכך, הנפח של אובייקטים באופן שרירותי בצורת יכול להיות מוערך כמו התוצר של אזורים הפרופיל שלהם סעיף סעיף מקביל, באותה מידה מרוחק מטוסים, המרחק בין המטוסים סעיף. . זה מובנת עם האנלוגיה הבאה: שקול שתי ערימות המורכב מספר זהה של מטבעות זהים ממוקמים לצד מחסנית אחת עם המשרת מטבעות בערימה אחד מעל השני מניב בצורת גליל של הערימה מטבע, והאחר ערימה של מטבעות עם מחוץ למרכז בעמדה מטבעות (איור 3 א). למרות הצורות של שני אוספים מטבעות שונים, האחסון שלהם זהים, מאז האזורים של המטבעות ברמות המתאימות של שתי ערימות (קרי, האזורים של פרופילים של מקטעים מקבילים לחתוך שתי ערימות מטבע מרחקים שווים קרקע) זהים. הערכה של הכרכים של חזירי איברים ורקמות באמצעות ה קאבליירי עקרון^7,12,15 מתואר בשלב 1.2.

קביעת היקף רקמת הצטמקות הקשורים הטבעה היסטולוגית
ניתוח של מספר פרמטרים כמותיים מורפולוגי נמדד בסעיפים רקמות היסטולוגית, כולל ההשפעה של רקמות הטבעה הקשורות הצטמקות המתרחשים במהלך עיבוד עבור היסטולוגיה רקמה להיות נחושים ולא נלקח בחשבון. היקף רקמת הטבעה הקשורות הצטמקות עשוי להיות משתנה, תלוי הן על הרקמה, העיבוד שלו את ההטבעה בינוני^{8,13,17,18,19}. באופן כללי, שינויים הקשורים הטמעה של אמצעי האחסון של דגימת רקמה (קרי, בעיקר הצטמקות) מתרחשים כל שלושת הממדים של החלל, ולכן משפיע על כל הפרמטרים ממדי ההערכה על ידי ניתוחים כמותיים stereological⁸ . בעיקרון, היקף רקמת הקשורות הטבעה, הביע כגורם הצטמקות לינארית רקמת (f_S), התכווצות יכול להיות מוערך כפי שמוצג צעד 1.3. משמשת עבור תיקון של פרמטרים מורפולוגי כמותית (הצטמקות רגיש)¹⁴.

משוקלל נפח דגימה אקראית שיטתית של איברים/רקמות
על הקמתה של אוסף biobank של דגימות איברים חזירי/רקמה, גישות משוקלל נפח דגימה אקראית שיטתית כמו שמתואר בשלב 2 הוכיחו להיות טכניקות מעשיות, לחיסכון בזמן ויעיל עבור הדור של נציג, רב תכליתי רקמות דוגם^7,8,9,15.

הדור של איזוטרופיות אחיד אקראי מקטעים ומקטעים אנכי אחיד אקראי עבור ניתוחים stereological כמותית
דגימות רקמה Biobank צריך להיות מתאים עבור מגוון רחב של שיטות ניתוח stereological כמותיים שונים עבור הערכה של הפרמטרים לא היתה אפשרות לקבוע בלי הדגימה מוכן כראוי, לכל היותר. כמעט כל הפרמטרים stereological כמותיים ניתן לקבוע, באמצעות "isotropic (עצמאית) אחיד אקראי (iur השוק) סעיפים"^8,9. בסעיפים iur השוק, כיוון תלת מימדי של המטוס סעיף של דגימת הרקמות הוא אקראי. אפשר להשיג על ידי אקראיות של העמדה של דגימת הרקמות ביחס המיקום של המטוס הסעיף, כפי שהוא מיושם בשיטה "Isector"¹¹ (פרוטוקול שלב 3.1), או על ידי אקראיות על הכיוון של המטוס סעיף שיחסית אליה דגימת הרקמות, כמו שיטת "Orientator"¹⁰ (פרוטוקול שלב 3.2). דגימות רקמה, כגון העור - או mucosa הדגימה הצגת נוכח באופן טבעי, או לזיהוי כראוי והמוגדרים ציר אנכי, הכנת "אחיד אקראי (VUR) מקטעים אנכיים" (פרוטוקול שלב 3.3.) אך ורק למחלקה בתוך מישור שלהם הציר האנכי הוא יתרון^8,20. על שיח שלם של היסודות התיאורטיים של הדגימה iur השוק/VUR, דיון מקיף של פוטנציאל במורד הזרם ניתוחים stereological כמותיים, הקורא מעוניין מכונה הלימוד של stereology כמותיים בחיים מדעי^8,9.

פרוטוקול

כל השיטות המתוארות כאן להשתמש דגימות רקמה נגזר חיות מתות, מלא לציית לתקנות החוק הגרמני לרווחת בעלי חיים.

1. Volumetry

1. ועלייתו בטכניקה לקביעת צפיפות רקמה/איברים (איור 1 , איור 2) ^{7 , 12 , 16}
   1. להכין חומרים: האזמל להבים מגבות נייר, מלקחיים בסדר, מאזני מעבדה סטנדרטיים, זכוכית או פלסטיק בקבוקונים, saline 0.9%, מחזיקי הדגימה נבנה עצמית (איור 2 א).
   2. בלו פיסת רקמה (הגודל המרבי: 2 x 2 x 2 ס"מ³) מתוך האיבר/הרקמה, במיוחד מ תא איברים של עניין. קטנים, כגון בלוטת יותרת המוח, או בלוטת האצטרובל, האיברים שנמדדה בוססו.
      התראה: ודא שגודל המדגם ובמיוחד קטן יותר הקוטר הפנימי של כשהספל (שלב 1.1.5 למתימטיקה), ואת רמתו מילוי כדי לאפשר מלאה ועלייתו של המדגם ללא פנייה אל הקירות הפנימיים של כשהספל בשלב 1.1.7.
   3. בזהירות שתנגב את הדגימה. עם מגבת נייר כדי להסיר את נוזל הדם עודף/רקמות.
   4. שוקל את הדגימה בקנה מידה דיוק והקלטה של המשקל של המדגם (m_S). לקבוע את המשקל של דגימות רקמה קטנה מ ג הקרוב (איור 1 א').
   5. המקום גביע מלא בטמפרטורת החדר saline 0.9% על המשקל. לא לגמרי ולמלא את הספל, כדי לאפשר צלילה של דגימת הרקמות בשלב שלאחר מכן ללא על גדותיו.
      התראה: שימוש בגודל גביע מתאים לגודל ושל נטל sample(s) הרקמה כדי למדוד את טווח מדידה אפקטיבית של הסקאלה. עבור מדגמים גדולים יותר עד 2 x 2 x 2 ס"מ³, גודל הספל של 50 – 100 מ ל מתאים בשילוב עם סולם מדידה של 100 מ ג ל 500 גרם, ואילו עבור מדגמים קטנים, להשתמש בקבוקונים של 5 – 10 מ"ל נפח בשילוב עם דיוק סולמות עם מדידת נע בין כ 0.1 מ"ג ו 20 גרם.
   6. להטביע את בעל מדגם (קרי, לולאה מספיק נוקשה של חוט דק או משהו דומה, איור 2A) בתמיסת המלח למיקום המסומן (חיצים איור 1B, 2B איור, איור 2C). לאחר מכן, לאפס (טרה) התצוגה של הסקאלה לאפס.
   7. בזהירות לצרף דגימת הרקמות המחזיק לדוגמה, לגמרי להטביע את הדגימה בתמיסת המלח עד עמדה מסומן על המחזיק לדוגמה (חיצים איור 1B, 2B איור, איור 2C).
      התראה: המדגם המשוקע, בעל מדגם כנראה אין קשר עם הקירות הפנימיים או בתחתית כשהספל או המשטח של תמיסת המלח.
   8. בעוד אתה מחזיק בעל מדגם של המדגם המשוקע במצב הזה, רושמות את משקל מוצגים בסולם (m_L), בהתייחסו המשקל של תמיסת מלח שנעקרו על ידי דגימת הרקמות (איור 1 C, איור 2B, ו איור 2C).
   9. חישוב הנפח של המדגם (V_S) מ- m_L, הצפיפות של תמיסת מלח בטמפרטורת החדר (20 ° C) (ρ_מלוחים = g 1.0048/cm³) כמו V_S m_L= / Ρ_מלוחים [g g cm³] (איור 1).
   10. חישוב הצפיפות של דגימת הרקמות (ρ_לדוגמה) לפי המשקל (כלומר, מסה) של המדגם (m_S), הנפח שלה (V_S): ρ_דגימה = m_S /V_S[g/cm³] (איור 1).
   11. עבור איברים נמדדת בוססו, חזור על המדידה שלוש פעמים, לחשב את צפיפות איבר ממוצע מתוך הערכים מדידה אחת. עבור איברים גדולים/רקמות, לבצע מדידות חוזרות ונשנות עם דוגמאות שונות של התא באותו איבר/רקמות/איברים, לחשב את הצפיפות הממוצעת של המדידות יחיד, בהתאם.
   12. לחשב את הנפח הכולל של תא איברים/רקמות/אורגן שלה משקל, צפיפות (איור 1).
2. היישום של השיטה-Cavalieri לקביעת אמצעי אחסון איברים חזירי ⁷
   1. להכין חומרים: הסרגל, קליבר, סכין, מספריים, מלקחיים, עט עמיד למים, פלסטיק, שקפים, סורק, צילום המצלמה ורשתות קרוס מודפס על שקפים פלסטיק.
   2. הנח הרקמה/האיבר שלם על משטח רגיל (חיתוך בסיס), למדוד את האורך (l) של האיבר לאורך ציר האורך (3B איור, איור 5A).
   3. את מלאה האיברים/הרקמות לחתוך לפרוסות מקבילים קו מקביל אורתוגונלית לציר האורך איברים (3C איור, איור 5B). לבחור מרחק d בין שני מקטעים (קרי, את עובי המרווח/מקטע אופטים, בדרך כלל כ- 1 ס מ) קטן מספיק לקבל מספר מספיק של רקמות/איברים לוחות. באופן אקראי למקם את המקטע הראשון למרחק בין 0 להמרווח אופטים מן השוליים של האיבר. בעודו חותך, לשפוט באופן חזותי את המיקום והכיוון של כל מטוס סעיף, כדי להשיג כ איברים מקבילים/רקמות לוחות של עובי אחיד פחות או יותר.
      הערה: המספר הדרוש של לוחות רקמות/איבר תלוי הצורה והגודל של הרקמה/האיברים שנבדקו. אם איברים קטנים או דגימות חייב להיות למחלקה של לוחות דק של ≤5 מ מ, להטביע את הדגימות אגר לפני חלוקתה (ראה שלב 1.3.3.) ולהשתמש במכשיר טכני שמגיע המדגם אגר-מוטבע. מרווחי אופטים מדעית recommendable חזירי ביותר איברים ורקמות, כמו גם דוגמאות עבור התקנים עם פרוסות, הם הצביעו על החומר משלים של "רקמת דגימה מדריכים עבור חזירי ביו מודלים"⁷.
   4. במקום כל איבר/רקמות לוחות על המשטח אותו כלפי מטה בבסיס חיתוך (כלומר, באופן עקבי על הימין או על המטוס שמאלי של כל לוח איברים, 3D איור, איור 5C) ולספור את הלוחות (n).
   5. לקבל סעיף פרופילים של הלוחות רקמות על-ידי אחת מהצורות הבאות:
      1. בזהירות המקום הלוחות רקמות על שקפים פלסטיק שכותרתו כראוי, תוך שמירה על הכיוון של משטחים המקטע העליון והתחתון שלהם. לאתר קווי המתאר של הלוחות רקמות השקפים פלסטיק באמצעות עט עמיד למים (3E איור1-2).
      2. קח תמונות מצולמות הלוחות רקמות, מחזיק את המצלמה בצורה אנכית מעל משטחים סעיף (איור 3F). לצורך כיול, הנח סרגל הגודל ליד הלוחות רקמות.
      3. סריקת הלוחות רקמות סורק משטח הסורק תוך שמירה על הכיוון של משטחים המקטע העליון והתחתון שלהם (איור 3G). לצורך כיול, הנח סרגל הגודל ליד הלוחות רקמות.
   6. למדוד את תחומי הפרופילים (עקיבה, המצולם או סרוקים) סעיף של כל לוחות רקמות על ידי אחת מהצורות הבאות:
      1. כיסוי או להרכיב את הפרופילים סלאב איברים לעקוב אחריו עם רשת בגודל מתאים, מכויל צלבים המרווחות באופן שווה מודפס על שקיפות פלסטיק עם ספירת כל חוצה להכות את האזור פרופיל (איור 3E3-4; השווה ל איור 5D). לחשב את השטח פרופיל סעיף של כל לוח אורגן על-ידי הכפלת מספר צלבים להכות את האזור פרופיל על-ידי האזור המקביל צלב אחד.
         הערה: כדי לקבל נפח מדויקים דיים הערכות, לבחור רשת מוצלב במרחק קטן מספיק בין צלבים סמוכים, כך ממוצע של פחות 100 חוצה יכה את המשטחים סעיף הלוחות של איבר אחד בכל מקרה ומקרה בחן המחקר . רשת קרוס מדעית recommendable גדלים עבור איברים ורקמות חזירי ביותר הם הצביעו על החומר משלים של "רקמת דגימה מדריכים עבור חזירי ביו מודלים"⁷.
      2. למדוד את האזורים הלוחות רקמות של תמונות דיגיטלי של התמונות/הסריקות באמצעות המתאימים זמינים מסחרית או freeware morphometry רך - ויישומים חומרה (איור 3 H), כגון תמונות מסחרי ניתוח מערכת²¹, או ImageJ²².
         התראה: הערה זה לוח רקמות (הראשון או האחרון) ממוקם על-גבי הסורק נח על פני השטח הטבעי שלו, בהתאמה, פרצופים למצלמה עם פני השטח הטבעי שלו. לכן, סרוק התמונה, התמונה תמונה של לוח זה, לא יציג משטח סעיף. לכן, אין פרופיל אזור מקטע נמדד בדמות תמונה/תמונות סרוקות סלאב רקמה זו (איור 3עכשיו). גם הקרנה יתר הערה להציג תמונות סרוקות ותצלומים של איברים/רקמות לוחות, דהיינו, רק למדוד את האזורים של הפרופילים סעיף בפועל, אך לא של הרקמה בתמונה שמאחורי סעיף סלאב פני השטח (איור 12 G-H).
   7. לחשב את האחסון איברים מוערך כמו התוצר של הסכום בכל התחומים הפרופיל המתאים סעיף של כל לוחות רקמות בכל מקרה (כלומר, באופן עקבי של ימינה או שמאלה, בהתאמה, המשטח החלק העליון או התחתון של כל איבר ואיבר סלאב העובי הממוצע של לוחות (קרי, את המנה של נמדד אורך הציר האנכי איברים (l) ואת מספר לוחות)¹⁵.
3. קביעת היקף רקמת הקשורות הטבעה תלת מימדי הצטמקות במהלך עיבוד של דגימות רקמה עבור כפפות
   1. להכין חומרים: מיקרוטום להבים, מלקחיים, אגר, תבניות ליציקות מתכת, סורק דיגיטלי וגודל הסרגל (למשל, גרף נייר).
   2. לחתוך משטח סעיף המטוס טריים, מתוך דגימת רקמה קבוע.
      הערה: אם באמצעות דגימות של בקלות deformable רקמות (רכות) (רקמת שומן, כמו ג'לי רקמות), להטביע דגימת הרקמות קבוע באגר לפני אופטים (איור 4A).
   3. להטמיע לדוגמה באגר:
      1. לערבב אבקת אגר רגיל משמש מיקרוביולוגיה בינוני תרבות עם אמצעי אחסון המתאים של מים (כ 0.5-1 גרם אגר/10 מ ל מים) בתוך זכוכית. מערבבים את התערובת וחום זה תנור מיקרוגל ב- 700 W עד רותחים במשך 3-5 ס לבחוש את התערובת ולהביא לרתיחה שוב עבור s 3-5.
      2. לחלופין, כדי להגדיל את החדות של אגר אל הרקמות, לצבוע את נוזלי אגר, למשל, עם דיו שחור (להוסיף 10 מ של אגר נוזל חם דיו 1 מ"ל ומערבבים נמרצות).
      3. יוצקים על אגר חם לתוך תבנית יציקה (למשל, תבנית מתכת המשמש פרפין הטבעה, איור 10A-D) ויציפו דגימת הרקמות קבוע ב אגר חמים. תן את אגר מגניב עד התמצקות להסיר את התבנית, חותכים את גוש אגר עם הרקמה מוטבע באמצעות מיקרוטום או גילוח.
         התראה: בעת טיפול אגר נוזל חם, ללבוש משקפי מגן וכפפות. דגימות רקמה תהליך קבוע בפתרון פורמלדהיד תחת פליטה הוד וללבוש משקפי מגן וכפפות מעבדה.
   4. למקם את הדגימה שפני השטח שלו סעיף כלפי מטה על סורק משטח הסורק, יחד עם סרגל הגודל, סריקת פני השטח סעיף (איור 4Aב').
   5. קובעים את האזור של המשטח החלק של דגימת הרקמות קבוע (_f) במהלך הסריקה הדיגיטלית, באחת מהשיטות המתוארות שלב 1.2.6 (איור 4B).
   6. להטביע את הדגימה במדיום ההטבעה פלסטיק, כגון אפוקסי (למשל, Epon) או glycolmethacrylate/methylmethacrylate (GMA/MMA)²³(^{25 24,23,}פרוטוקולים סטנדרטיים הבאים איור 4C). ודא כי השטח סעיף של המדגם קבוע שנסרקו בשלב הקודם (1.3.4) נשמרת במדגם פלסטיק-מוטבע.
      הערה: כדי לשמור על הכיוון של המשטח החלק של המדגם במהלך העיבוד של המדגם, באופן עקבי למקם את הדגימה שפני השטח המיועד סעיף שלו פונה כלפי מטה לתוך בקלטת ההטבעה או עובש הליהוק של או סמן המקטע המיועד השטח (או בצדו הנגדי של המדגם) עם דיו.
   7. לחתוך מקטע היסטולוגית מהגוש פלסטיק המקביל למשטח הסעיף המקורי של דגימת הרקמות קבוע (שלב 1.3.2) באמצעות מיקרוטום (איור 4D), הר המקטע על משטח זכוכית (איור 4D), יחתים אותו באופן שגרתי ( למשל, Hematoxylin ו eosin כתם, H & E)^24,25.
      התראה: כדי לקבל מקטע היסטולוגית בקירוב אותו מישור כמו השטח הסעיף המקורי של דגימת הרקמות קבוע, להתאים בקפידה העמדה של גוש פלסטיק הר האזמל הקטן לפני חלוקתה.
   8. מקום השקופית עם החלק המוכתם פונה כלפי מטה על סורק משטח אופקי עם סרגל הגודל, הקדמות (איור 4E).
   9. קובעים את האזור של המקטע דגימת הרקמות פלסטיק-מוטבע (A_e) במהלך הסריקה הדיגיטלית, באחת מהשיטות שתוארו בשלב 1.2.6 (איור 4F).
   10. לחשב הצטמקות רקמות הטבעה הקשורות הממוצע (כדי להפוך את הרקמה המתאימים בינוני ההטבעה) מאזורי מדודה של פרופילים בסעיף המתאים של דגימות רקמה לפני ואחרי הטבעה פלסטיק והטבעה בינוני. ה גורם ההתכווצות ליניארי f_s מחושבת השורש הריבועי של המנה של האזורים של הפרופילים סעיף של דגימות רקמה n לאחר הטמעת פלסטיק והטבעה בינוני (_e) ואזורי של פרופילים בסעיף המתאים של דגימות רקמות אותו לפני הטמעת פלסטיק והטבעה בינוני (_f) (איור 4G)¹⁴.

2. נפח משוקלל דגימה אקראית שיטתית בנקודה ספירת ועיבוד של רקמת Subsamples במורד הזרם ניתוח-סוגים⁷

1. להכין חומרים: הסרגל, קליבר, סכין, מספריים, מלקחיים, עט עמיד למים, נקודה/קרוס רשתות הדפסה על שקפים פלסטיק וטבלאות מספר אקראי.
   הערה: העתקת תבניות עבור לחצות רשתות (5-60 מ"מ) הינם מסופקים בכל החומר משלים של"רקמת דגימה מדריכים עבור חזירי ביו מודלים"⁷.
2. הנח הרקמה/האיברים על משטח רגיל (חיתוך בסיס), למדוד את האורך (l) של האיבר לאורך ציר האורך (5A איור, איור 6A).
3. את מלאה האיברים/הרקמות לחתוך לפרוסות מקבילים קו מקביל אורתוגונלית לציר האורך שלו (איור 5B). לבחור מרחק d בין שני מקטעים (קרי, עובי המרווח/מקטע אופטים, בדרך כלל כ- 1 ס מ) קטן מספיק כדי לקבל מספר מספיק של רקמות/איברים פרוסות. באופן אקראי למקם את המקטע הראשון למרחק בין 0 להמרווח אופטים מן השוליים של האיבר. בעודו חותך, לשפוט באופן חזותי את המיקום והכיוון של כל מטוס סעיף להשגת איברים כ מקביל/רקמות לוחות של עובי אחיד פחות או יותר.
   הערה: המספר הדרוש של לוחות רקמות/איבר תלוי בגודל של הרקמה/האיברים שנבדקו ואת המספר של רקמות שנדגמו מיקומים. אם איברים קטנים או דגימות חייב להיות למחלקה של לוחות דק של ≤5 מ מ, להטביע את הדגימות אגר לפני חלוקתה (ראה שלב 1.3.3.) ולהשתמש התקנים הטכניים שמגיע המדגם אגר-מוטבע. מרווחי אופטים מדעית recommendable חזירי ביותר איברים ורקמות, כמו גם דוגמאות שמגיע התקנים מסומנים בחומר משלים של "רקמת דגימה מדריכים עבור חזירי ביו מודלים"⁷.
4. מקם כל איבר/רקמות לוחות על המשטח אותו כלפי מטה על בסיס חיתוך (איור 6B).
5. שכבת-על לוחות רקמות עם רשת הצלב בגודל מתאים מודפס על שקיפות פלסטיק על-ידי הצבת החיצוני נשאר העליון צלב של הרשת נקודה אקראית מתוך הרקמה (איור 5C-D, איור 6B).
   הערה: בחר רשת מוצלב במרחק קטן מספיק בין צלבים סמוכים, כך בכל מקרה בחן המחקר, צלבים לפחות כפליים יכה את סעיף surface(s) של תא רקמת מתחננות שיטעמו, ככל שמספר הדגימות שיש לקחת בתא הזה הרקמה. רשת קרוס מדעית recommendable גדלים עבור איברים ורקמות חזירי ביותר הם הצביעו על החומר משלים של "רקמת דגימה מדריכים עבור חזירי ביו מודלים"⁷.
6. מארק וכל ספירה חוצה להכות את הרקמה (בהתאמה, רקמות תת תא מתחננות שיטעמו). באופן עקבי להחיל מצב אחיד של ספירת ומספור על הצלבים להכות תא רקמות כדי ניתן לטעום כל לוחות רקמות, למשלעל-ידי מספור רציף על הצלבים המתאימים בכל שורה אחר שורה, מן השמאל אל הימין מלמעלה למטה, או, למשל, על-ידי מספור חוצה סלאב רקמות אחד אחרי השני בכיוון השעון, החל הקרוב ביותר למצב בשעה 12, כפי שהוכח exemplarily ב איור 5Eהצלב.
7. חילוק המספר צלבים להכות תא רקמות/רקמות להיות שנדגמו (n) על ידי מספר דוגמאות שיווצר כדי להשיג את מרווח הדגימה השיטתית (i).
8. לקבוע את מיקום הדגימה הראשונה על-ידי בחירת מספר אקראי x במרווח בין 1 לאני. בשביל זה, להשתמש בטבלת המספרים האקראיים. לסמן את מיקום הדגימה הראשונה (x) ועל כל הבא x + אני, x + 2אני, x + 3i, וכו ', לחצות להכות תא רקמות/רקמות מתחננות שיטעמו על השקיפות פלסטיק באמצעות עט עמיד למים (איור 5F).
   הערה: טבלאות מספר אקראי יכול בנוחות ובמהירות להיווצר באמצעות שימוש מקוון מחולל מספרים אקראיים.
9. לתייג את הרקמה במקומות המתאימים המסומנים חוצה מעט העלאת השקיפות פלסטיק, הנחת פיסת נייר קונפטי נקי, ריק קטן על פני השטח של לוח רקמות בעזרת זוג מספריים (5G איור, איור 6E ).
10. בלו דגימה של רקמת מהמיקומים שנדגמו (איור 5 H, 6F איור, איור 7 א), בהמשך לסעף אותם עבור סוגים שונים של ניתוחים עוקבות (6G איור, איור 7 א-B), כפי שצוין במקטע טבלה 1.
11. לאחר דגימה, השקפים פלסטיק עם מים חמים וסבון, יבש, נקי, לעשות בהם שימוש חוזר.

3. הדור איזוטרופיות אחיד אקראי (iur השוק) סעיפים ו אנכי אחיד אקראי (VUR) מקטעים עבור ניתוחים Stereological כמותית

1. טכניקת "Isector"
   1. להכין חומרים: סכיני גילוח או מיקרוטום אגר, עובש הליהוק כדורית (למשל, יציקה תבניות פרלינים, אשר ניתן להשיג מהספקים קונדיטור), foldback מלחציים, מלקחיים.
   2. הכנס של רקמה בגודל שלמאחה פיסת (1 x 1 x 1 ס מ³) קבועה, שנדגמו באקראי באופן שיטתי תבנית ליציקת כדורית, מחזיקים יחדיו על ידי מהדק foldback, למלא את התבנית עם אגר נוזל חם (איור 8A-E).
   3. הסר לספרה אגר (איור 8F) עובש הליהוק לאחר התמצקות של אגר.
   4. לגלגל את גלגל אגר עם דגימת הרקמות מוטבע על-פני השולחן, לעצור, סעיף זה במיקום אקראי.
      הערה: המטוס סעיף וכתוצאה מכך הוא מקטע iur השוק (איור 8F-G).
   5. המשך כדי להטביע את דגימת רקמה שרף פלסטיק כגון GMA/MMA, שמירה על הכיוון של המקטע iur השוק מטוס (ראה 1.3.5).
2. טכניקת "orientator"
   1. הכנת החומרים: סכיני גילוח או מיקרוטום, אגר, מלקחיים, טבלאות מספר אקראי, הדפסים של מעגלים equiangular, ואת קוסינוס משוקלל.
      הערה: העתקת תבניות חוגים ניתנים פרסומים קודמים^8,26.
   2. למקם את דגימת רקמה קבוע (או רקמת קבוע אגר-מוטבע) על טביעת אצבע של עיגול equiangular עם קצה אחד מקביל 0-180 ° בכיוון (איור 9 א, איור 10E).
   3. לקבוע זווית אקראית על ידי שימוש בטבלה מספר אקראי. למצוא את הסימנים המתאימים היקף המעגל equiangular, הנשענת על המדגם. בעזרת הסימנים האלו, לגזור מקטע באמצעות המדגם (או דרך על אגר המקיפים את דגימת רקמה מוטבע), עם המטוס סעיף להיות מונחה מקביל לכיוון הזווית אקראי המצוין על היקף המעגל equiangular, ואנכי נח השטח של המדגם (איור 9B-C, איור 10F).
   4. מניחים את גוש רקמה עם משטח סעיף שנוצר בשלב הקודם מול החיסרון על מעגל קוסינוס משוקלל עם הקצה של פני השטח מנוחתו להציב מקביל לכיוון 1-1 (9D איור, איור 10 H).
   5. חזור על שלב 3.2.3 וחותכים מקטע חדש באמצעות המדגם בזווית אקראי נחוש להשתמש בטבלה מספר אקראי (איור 9E-F, איור 10I-J).
      הערה: המטוס סעיף וכתוצאה מכך הוא מקטע iur השוק.
   6. אם זה מתאים, לקבוע את האזור של הפרופיל סעיף iur השוק של דגימת הרקמות קבוע לקביעת הצטמקות רקמות הקשורות הטבעה (איור 9G-J) כפי שמתואר בשלב 1.3, והמשך כדי להטביע את דגימת רקמה בפלסטיק שרף כגון GMA/MMA.
3. דור סעיפים אנכי אחיד אקראי (VUR)
   1. להכין חומרים: סכיני גילוח או מיקרוטום, אגר, מלקחיים, טבלאות מספר אקראי, והדפסים של מעגלים equiangular.
      הערה: העתקת תבניות חוגים ניתנים פרסומים קודמים^8,26.
   2. הגדר ציר אנכי בתוך דגימת הרקמות קבוע כי הוא תמיד לזיהוי בסעיפים/המדגם במהלך והשלבים הבאים.
      הערה: בדרך כלל, הציר האנכי השטח הטבעי של דגימת הרקמות נבחר בתור הציר האנכי.
   3. אם זה מתאים, להטביע את הדגימה אגר (איור 11B).
      הערה: אגר-הטבעת לפני VUR - או iur השוק-חלוקתה של המדגם קבועה היא בדרך כלל recommendable עבור דגימות קטן, דק, שביר או רכים. גם להשתמש אגר-הטבעה של דוגמאות כדי להקל על המיקום של המדגם משרטוטי VUR במהלך עוקבות הטבעה של המדגם במדיום שרף הפלסטיק.
   4. מניחים את הדגימה על טביעת אצבע של עיגול equiangular, עם הציר האנכי להיות מונחה orthogonally למטוס של הטבלה לטבלה/נייר (איור 11C).
   5. המדגם בזווית אקראי (שנקבע באמצעות טבלה מספר אקראי) עם המטוס סעיף אורתוגונלית לטבלה גזורה מקביל לציר האנכי כדי לקבל מטוס סעיף VUR (איור 11D).
   6. אם זה מתאים, לקבוע את האזור של הפרופיל סעיף iur השוק של דגימת הרקמות קבוע לקביעת הצטמקות רקמות הטבעה הקשורות כפי שמתואר בשלב 1.3 (השווה ל 9G איור-J) והמשך כדי להטביע את דגימת רקמה ב שרף הפלסטיק כגון GMA/MMA.

תוצאות

הטכניקה ועלייתו של קביעת צפיפות רקמה/איברים

איור 12A -B מראה הקביעה נציג של צפיפות ונפח של כליה חזירי בטכניקה ועלייתו שמתואר בשלב 1.1 (איור 1, איור 2). נציג יותר תוצאות מדידות צפיפות של האיברים חזירי נוספים מוצגים בטבלה מס ' 2. רשימה מקיפה של צפיפות התייחסות מגוונות חזירי רקמות ואיברים מוצג "רקמת דגימה מדריכים...

דיון

הדור של אספנים מדגם biobank חזירי חייתיים דורש חזקים טכניקות ופרוטוקולים מצפני איברים/רקמות כרכים, הדור לשחזור של נציג, דגימות רקמה עודפת מתאים למגוון רחב של שיטות ניתוח שונות, ועבור אקראיות על הכיוון של מדגם מקטעים עבור ניתוחים כמותיים stereological. בשיטות המתוארות במאמר הנוכחי הם מותאמים הגדלים של חזירי איברים ורקמות, פותחו להכיר ביעילות דרישות אלה,^2,7. הם מבוססים על עקרונות מתודולוגיים מוכרת היטב, הוכיחו בעבר שלהם practicability מחקרים שונים שהתפרסמו

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Agar	Carl Roth GmbH, גרמניה	אגר (אבקה), קט': 5210.3	ממיסים כ -1 גרם אגר ב -10 מ"ל מים קרים בכוס או בכוס פלסטיק, מחממים במיקרוגל בחום של 700 וואט, מרתיחים את התמיסה פעמיים תוך ערבוב קפדני. יוצקים לתבנית כשהיא עדיין חמה ומניחים להתמצק. זהירות: בזמן הטיפול באגר נוזלי חם, יש ללבוש משקפי מגן וכפפות.
קליפר	Hornbach Baumarkt GmbH, בורנהיים, גרמניה	Schieblehre כרום/ורניקט 120 מ"מ Cat.: 3664902	כל סוג של קליפר (מכני או אלקטרוני) יעשה גם כן.
תבניות יציקה (מתכת)	אנגלברכט מדיזין & Labortechnik, Edermü nde, גרמניה	Einbettschä lchen aus Edelstahl, 14 x 24 x 5 מ"מ, Cat.: 14302b	כל סוג אחר של תבנית יציקת מתכת המשמשת להטמעת פרפין יעשה גם כן.
תבניות העתקה של רשתות צולבות (5 מ"מ - 6 ס"מ)	n.a.n.a.תבניות		העתקה של רשתות צולבות (5 מ"מ - 6 ס"מ) מסופקות בקובץ הנתונים המשלים של Albl et al.  טוקסיקול פאתול. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016)
העתק תבניות של מעגלים שווי זווית ומשוקלל קוסינוס	n.a.n.a.תבניות		העתקה של מעגלים שווי זווית ומשוקללת קוסינוס מסופקות ב Nyengaard & גונדרסן. Eur Respir Rev. 15, 107-114, doi: 10.1183/09059180.00010101 (2006) ובGundersen et al. עקרונות סטריאולוגיים ונהלי דגימה עבור פתולוגים טוקסיקולוגיים. בתוך: האשק ורוסו; s מדריך לפתולוגיה טוקסיקולוגית. מהדורה שלישית, 215-286, ISBN: 9780124157590 (2013).
מהדקים מתקפלים לאחור (תפסי קלסר YIHAI, 15 מ"מ ו-19 מ"מ)	Ningbo Tianhong נייר מכתבים ושות 'בע"מ, סין	Y10006 ו-Y10005	כל סוג אחר של מהדקי קיפול משרדיים סטנדרטיים יעשה גם כן.
מלקחיים (אנטומיים)	NeoLab Migge GmbH, היידלברג, גרמניה	neoLab Standard -Pinzette 130 מ"מ, אנטומיש, rund, Cat.: 1-1811	כל סוג של מלקחיים אנטומיים יעשה.
פורמלדהיד-תמיסת 4%	SAV-Liquid Produktion GmbH, פלינצבאך, גרמניה	פורמלדהיד 37/40%, קט': 1000411525005	לדלל ל-4% מהתמיסה המרוכזת. חוצץ ל-pH ניטרלי. יש ללבוש הגנה מתאימה לעיניים, לידיים ולנשימה. עבד דגימות רקמה קבועות בתמיסת פורמלדהיד מתחת למכסה המנוע ולבש משקפי מגן וכפפות מעבדה.
נייר גרף (לכיול)	Bü romarkt Bö ttcher AG, יינה, גרמניה. www.bueromarkt-ag.de	Penig Millimeterpapier A4, Cat.: 2514	כל סוג של נייר גרף (בקנה מידה של מילימטר) יתאים.
כוסות מעבדה (5 מ"ל, 10 מ"ל, 50 מ"ל, 100 מ"ל)NeoLab	Migge GmbH, היידלברג, גרמניה	Becherglas SIMAX® , niedrige Form, Borosilikatglas 3.3 Cat.: E-1031, E-1032, E-1035, E-1036	כל סוג של כוסות זכוכית או פלסטיק בנפח 5 – 100 מ"ל יתאים.
סולמות מעבדהMettler	Toledo GmbH, Gieß en, גרמניה	PM6000	כל מאזני מעבדה סטנדרטיים עם טווחי מדידה בין 0.1 מ"ג לכ-20 גרם, בהתאמה בין 100 מ"ג לכ-500 גרם יעשו
	Sartorius AG, Gö ttingen, גרמניה	להבי מיקרוטום BP61S
	Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Edermü nde, גרמניה	FEATHER Microtome blasdes S35, Cat.:14700	כל סוג של להבי מיקרוטום חד פעמיים יתאים.
תוכנת מורפומטריה / פלנימטריה / מערכת	המכון הלאומי לבריאות (NIH)	ImageJ	הורד מ https://www imagej.nih.gov/ij/ (1997).
Zeiss-Kontron, Eching, גרמניה	מערכת ניתוח תמונות VideoplanTM	אזל מהמלאי
מצלמת צילום	Nikon	D40	כל סוג של מצלמת צילום דיגיטלית שניתן להרכיב על חצובה יתאים.
שקפים מפלסטיק	Avery Zweckform GmbH, Oberlaindern, גרמניה	לייזר תקורה-פולי DINA4 Cat.:  3562	כל שקף פלסטיק להדפסה (בלייזר) יעשה.
טבלאות מספרים אקראיות	n.a.n.a.ניתן	ליצור טבלאות מספרים אקראיות בנוחות (עם מספרים מוגדרים של מספרים אקראיים ובמרווחים מוגדרים), באמצעות מחוללי מספרים אקראיים, כגון: https://www.random.org/
Razor blades	Plano GmbH, Wetzlar, Germany	T5016	כל סוג של סכיני גילוח יתאים.
שליט	Bü romarkt Bö ttcher AG, יינה, גרמניה. www.bueromarkt-ag.de	ליניאלי משרדי 30 ס"מ, Kunststoff, שקוף, Cat.: ln30	כל סוג של סרגל בקנה מידה של ס"מ-מ"מ יתאים גם כן.
תמיסת מלח (0.9%)	Carl Roth GmbH, גרמניה	Natriumchlorid, >99% קט': 0601.1	להכנת 0.9% מי מלח, יש להמיס 9 גרם NaCl ב-1000 מ"ל מים מזוקקים בטמפרטורה של 20&00 מעלות צלזיוס.
להבי אזמל	Aesculap AG & Co KG, Tuttlingen, גרמניה	להבים כירורגיים של BRAUN N° 22	כל סוג של להבי אזמל יתאים.
סורק	Hewlett-Packard	hp scanjet 7400c	כל סוג של סורק משרדי סטנדרטי המסוגל לסרוק ברזולוציות של 150-600 dpi יתאים.
		דוגמאות להתקני חיתוך שנבנו בעצמם ניתן למצוא ברשומה אנטומית Knust, et al.. 292, 113-122, doi: 10.1002/ar.20747 (2009) ובקובץ הנתונים המשלים של Albl et al.  Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016).
תבניות יציקה כדוריות (למשל, בקוטר 25.5 מ"מ)Pralinen-Zutaten.de	, וינדך, גרמניה	פרלין-הולקוגלן וולמילך, תבניות יציקה כדוריות 25.5 מ"מ	יכולות להיות גם בבנייה עצמית, או להשיג מספקי קונדיטורים אחרים (לפרלינים). תבניות היציקה המצוינות כאן הן למעשה אריזה/עטיפה של גופי פרלינים חלולים (תחילה אוכלים את הפרלינים ולאחר מכן משתמשים באריזה ליצירת קטעי i-sector)
חוט דק	Basteln & הובי שובס, סטרה ושליג; furth, גרמניה. www,bastel-welt.de	Messingdraht (0.3 מ"מ) Cat.: 216464742	כל סוג אחר של חוט דק יתאים גם כן.
נייר טישו	NeoLab Migge GmbH, היידלברג, גרמניה	Declcate Task מגבונים-לבן, קט: 1-5305	כל סוג אחר של נייר טישו מעבדה יעשה גם כן.
עט עמיד למים	Staedler Mars GmbH & Co KG, Nü rnberg, Grmany	Lumocolor קבוע 313, 0.4 מ"מ, S, שחור, Cat.: 313-2	כל סוג אחר של עט עמיד למים יעשה גם כן.