כאן נתאר פרוטוקול מפורט על הבידוד של לימפוציטים האתרים אינדוקטיבית כולל בלוטות לימפה mesenteric המנקזים ותיקונים של פייה רקמת הלימפה הקשורים הבטן, ואת האתרים אפקטור כולל את פרופריה. מוסקולריס ו אפיתל המעי של המערכת החיסונית קטנים במעיים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
לימפוציטים בידוד מן העכבר קטן המעי המערכת החיסונית
במאמר זה
סיכום
תקציר
המערכת החיסונית מעיים ממלא תפקיד חיוני בשמירה על המכשול את תפקוד מערכת העיכול על ידי יצירת סובלנית התגובות אנטיגנים תזונתיים וחיידקים commensal בעת טעינת תגובות חיסוניות יעילה כדי enteropathogenic מיקרובים. בנוסף, כבר ברור כי החסינות המקומית מעיים יש השפעה עמוקה על חסינות מרוחק ומערכתית. לכן, חשוב ללמוד איך תגובה חיסונית מעיים הוא המושרה ומהי התוצאה אוטואימונית של התגובה. . הנה, פרוטוקול מפורט מתואר על הבידוד של לימפוציטים מפני מהאתרים אינדוקטיבית המעי הדק של פייה רקמת הלימפה הקשורים בטן ותיקונים בלוטות לימפה mesenteric ניקוז ואתרי אפקטור כמו פרופריה. מוסקולריס ו אפיתל המעי. שיטה זו מבטיחה בידוד של מספר גדול של לימפוציטים רקמות במעיים קטן עם טוהר האופטימלי ואת הכדאיות מינימלי זיהום compartmental לחצות בתוך אילוצי זמן מקובל. היכולת הטכנית לבודד לימפוציטים ותאים חיסוניים אחרים רקמות מעיים מאפשר את הבנת התגובות החיסונית זיהומים במערכת העיכול, סרטן ומחלות דלקתיות.
מבוא
מערכת העיכול (GI) יש הרבה קיפולים בליטות המייצג את הממשק הגדול המפריד בין הגוף הפנימיים ואת הסביבה החיצונית. המערכת החיסונית מעיים ממלא תפקיד חיוני בשמירה על הפונקציה מכשול של דרכי העיכול. הוא כל הזמן נחשף אנטיגנים תזונתיים commensal חיידקים, חיידקים פתוגניים. בתור שכזה, זה חייב להישאר סובלני כדי אנטיגנים מזון וחיידקים commensal תוך שמירה על יכולת לייצר במהירות תגובה חיסונית יעיל חיידקים enteropathogenic1. מערכת החיסון במעי יכול להיות מבחינה אנטומית מחולק אתרי אינדוקטיבית, איפה לימפוציטים נאיביים מופעלים על ידי אנטיגן הצגת תאים נושאת אנטיגנים של רירית המעי, ואתרי אפקטור, שבו מופעל לימפוציטים להפעיל ספציפי אפקטור פונקציות2
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ניסויים בבעלי חיים היו לפי הנחיות המכון הלאומי לבריאות ואושר על ידי סטוני ברוק אוניברסיטת מוסדיים חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה.
הערה: ודא כי כל האישורים מוענקות לפני ביצוע הליכים.
1. פתרון הכנה
-
HGPG (HEPES,-גלוטמין פניצילין/סטרפטומיצין, gentamycin), 100 ×
- לערבב 59.6 g HEPES (500 מ"מ הסופי), 14.6 g L-גלוטמין (200 מ"מ הסופי), 1 × 106 U פניצילין (2,000 U/mL הסופי), סטרפטומיצין 1 g (2 מ"ג/מ"ל הסופי) ו- 2.5 מ"ג גנטמיצין (5 µg/mL הסופי). להוסיף RPMI 1640 עד 500 מ"ל. להתאים את ה-pH 7.5 באמצעות NaOH (לפני ההתאמה, המאגר הוא צהוב/כתום עם pH בסביבות 6.0). מסנן לחטא באמצעות....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
ייצוג סכמטי של הפרוטוקול מתואר (איור 1). לימפוציטים בתוך mucosa מעיים אינדוקטיבית, אתרי אפקטור מאורגנים במובהק. Peyer של ותיקונים (PP) בלוטות לימפה mesenteric (MLN) מכילים לימפוציטים מאורגן היטב באזורים תא T, B-cell זקיקים, ואילו האפיתל במעי כוללת לימפוציטים המופצים יותר diffusely. פרופריה. מוסקולריס (LP) מכיל הן לימפוציטים diffusely מבוזרת והן לימפוציטים הכלול בתוך מבנים הלימפה מאורגן כמו זקיקי הלימפה מבודד (איי) ו- cryptopatches. כל תא החיסון מעיים מאופיין .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פרוטוקול מפורט מוצג עבור הבידוד של לימפוציטים מן המעי הרירית אינדוקטיביים (MLN ו- PP) ואתרים אפקטור (LP ו אישור IEL תא). הפרוטוקול פותח כדי לאזן הקלט (זמן) והפלט (הכדאיות ואת התשואה) להגדיל את הפרודוקטיביות ואת תוצאות. הפרוטוקול מבטיח גם זיהום compartmental לחצות מינימלי בין תאים LP ו אישור IEL.
מספר פרוטוקולים עבור הבידוד של תאים חיסוניים מן המעי הדק העכבר היה שפורסמו3,4,5,
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
B.S.S. נתמך על ידי מענק-NIH (R01 AI076457) וקרנות הניתנים על ידי האוניברסיטה בסטוני ברוק. Z.Q. נתמך על-ידי NIH הענק (K12 GM102778).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| HEPES | Fisher Scientific | BP310-500 | |
| L-גלוטמין | סיגמא-אולדריץ' | G3126-100G | |
| פניצילין-סטרפטומיצין | טכנולוגיות חיים | 15140-122 | |
| Gentamicin | Life Technologies | 15710-072 | |
| נתרן הידרוקסיד | פישר סיינטיפיק | S318-500 | |
| RPMI 1640 | Life Technologies | 21870-076 | |
| נתרן ביקרבונט | פישר סיינטיפיק | S233-500 | |
| סרום בקר עוברי | Life Technologies | 26140-079 | |
| תמיסת מלח מאוזנת 10x של הנקס | סיגמא-אולדריץ | H4641-500ML | |
| 1,4-דיתיואריתריטול | סיגמא-אולדריץ' | D9680-5G | |
| 0.5M EDTA, pH 8.0 | Life Technologies | 15575-020 | |
| קלסיום כלוריד הקסהידראט | סיגמא-אולדריץ' | 21108-500G | |
| מגנזיום כלוריד הקסהידרט | סיגמא-אולדריץ' | M2670-100G | |
| קולגנאז, Type I | Life Technologies | 17100-017 | |
| תמיסת מלאי שיפוע DG (פרקול) | GE Healthcare | 17-0891-01 | |
| מאגר ליזה של תאי דם אדומים | Biolegend | 420301 | |
| 70-µ מסננת תאים M | קורנינג | 352350 | |
| 14 מ"ל פוליפרופילן צינור תחתון עגול | 352059 | ||
| בקבוק Erlenmeyer | Kimble | 26500R-50mL | |
| מערבל מגנטי | תרמו פישר | 50094596 | |
| לערבב בר | פישר סיינטיפיק | 14-512-148 |
מקורות
- Hooper, L. V., Macpherson, A. J. Immune adaptations that maintain homeostasis with the intestinal microbiota. Nat Rev Immunol. 10 (3), 159-169 (2010).
- Brandtzaeg, P., Kiyono, H., Pabst, R., Russell, M. W. Terminology: nomenclature of mucosa-associated lymphoid tissue.....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
