אנו מתארים פרוטוקול בניתוח לחשוף ולייצב את בלוטת הרוק submandibular מאתר עבור הדמיה intravital באמצעות מיקרוסקופ intravital זקוף. פרוטוקול זה ניתנת להתאמה בקלות אחרים בלוטות אקסוקרינית של הראש, באזור הצוואר של עכברים ומכרסמים קטנים אחרים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הכנה של בלוטת הרוק Submandibular מאתר מיקרוסקופ Intravital זקופה
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
בלוטת הרוק submandibular (SMG) הוא אחד של בלוטות הרוק הגדולות שלוש, הוא עניין בתחומים רבים ומגוונים של המחקר הביולוגי, כולל ביולוגיה של התא, אונקולוגיה, רפואת שיניים, אימונולוגיה. SMG היא בלוטה אקסוקרינית מורכב של תאים אפיתל הפרשה, myofibroblasts, תאי אנדותל, עצבים, מטריצה חוץ-תאית. בעבר יש כבר תמונה דינמית תהליכים תאיים החולדה, העכבר SMG, בעיקר באמצעות הפוכה מיקרוסקופים פוטונים ריבוי מערכות. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול פשוטה עבור הכנה כירורגית ו ייצוב SMG מאתר בעכברים ומורדמת עבור ויוו הדמיה עם מערכות מיקרוסקופים פוטונים מרובה זקוף. אנו מציגים תמונה intravital נציג סטים של אנדוגני, הועבר adoptively פלואורסצנט תאים, כולל תיוג של כלי הדם או צינוריות הרוק ואת הדור השני הרמונית להמחיש קולגן fibrillar. לסיכום, פרוטוקול שלנו מאפשר הכנה כירורגי של בלוטות הרוק העכבר במערכות מיקרוסקופ זקוף, אשר משמשים בדרך כלל עבור הדמיה intravital בתחום של אימונולוגיה.
מבוא
הרוק הוא מופרש על ידי בלוטות אקסוקרינית לשמן מזון, להגן על משטחים הרירית של מערכת אוראלי, וכדי לספק אנזימי העיכול, כמו גם חומרים מיקרוביאלית1,2. בנוסף בלוטות הרוק קטין וביניהם ב submucosa דרך הפה, ישנם שלוש קבוצות דו צדדיים של בלוטות הגדולות מזוהות הפרוטיד, sublingual, submandibular, לפי המיקום שלהם,1,2. תאים אפיתל בצורת פירמידה, המסודרות בצורת הבקבוק שקי (acini) או demilunes זה מוקף קרום המרתף, והתאים myoepithelial מפרישים הצפק, ריריות מרכיבי הרוק1. ברווח luminal הצר acini מתנקז לתוך צינוריות intercalated, אשר התאחדו לתוך צינור....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל העבודה בעלי חיים אושרה על ידי הוועדה הקנטונים לניסויים בבעלי חיים וניהלת בהתאם להנחיות הפדרלי.
1. עזים ומתנגד העכבר
- ללבוש ציוד מגן אישי, כולל חלוק וכפפות.
- מערבבים קטמין חריגות השירותים הווטרינריים, תמיסת מלח כדי ריכוז העבודה של 20 מ"ג/מ"ל, 1 מ"ג/מ"ל, בהתאמה. להזריק את מלאי עבודה intraperitoneally (i.p.) ב 8-10 µL/g העכבר. הנח את העכבר בחזרה לתוך הכלוב.
הערה: פרוטוקול זה נבדקו עבור עכברים זכר ונקבה 6 - ל שבוע בן 40 עם רקע C57BL/6. - להכין את הפתרון איזופרומאזין ב- 2.5 מ"ג/מ"ל, להזריק 30 µL i.p., 15 דקות אחרי הזריקה קטמין-חריגות השירותים הווטרינריים (µg 75/עכבר).
- לאחר 5-15 דקות, בדוק אם שיכוך כאבים ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
פרוטוקול זה מאפשר הדמיה של כמעט כל הגבי או הגחון הצד של SMG. שדה הראייה בדרך כלל כולל גם את בלוטת הרוק sublingual, שונה במקצת SMG קומפוזיציה הסלולר4. שתי בלוטות כמוס על ידי קולגן fibrillar, מחולק אונות. רוב השעות 14:00 מערכות יכול לייצר תמונה ללא תווית של קולגן fibrillar על ידי מדידת האות הרמונית 2nd , אך בדרך כלל מולקולות פלורסנט נחוצות עבור ויזואליזציה של מבנים הסלולר subcellular. למשל, הביטוי הטרנסגניים בכל מקום של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) בשילוב .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פרוטוקול זה מציעה גישה ישירה עבור ויוו הדמיה של מאתר בלוטות הרוק submandibular, sublingual באמצעות מיקרוסקופ ליניארי זקוף משמש לעתים קרובות בתחום אימונולוגיה. השיטה ניתן להתאים עבור ההדמיה בלוטות אקסוקרינית אחרות באזור הראש והצוואר. למשל, המעבדה שלנו ביצע הדמיה של בלוטת הדמעות באופן מקביל (לא מוצג).
הסרת רקמת החיבור מסביב SMG הוא השלב הקריטי ביותר של פרוטוקול זה, שכן נזק לרקמות מקרי יכול להתרחש. נזק אספקת הדם הראשי SMG מחייבת פיטורים מידיים של הניסוי, מאז הרקמה SMG יהפוך ובשפתיים. אם .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
שאין ניגודי אינטרסים הכריז.
תודות
עבודה זו מומן על ידי הקרן הלאומית השוויצרית (SNF) פרויקט גרנט 31003A_135649, 31003A_153457, 31003A_172994 (ל JVS), מלגת Leopoldina LPDS 2011-16 (כדי BS). עבודה זו כמיותרים setups אופטי של "מיקרוסקופ הדמיה מרכז" (MIC) באוניברסיטת ברן.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נרקטאן 10 % (קטמין) 20 מ"ל (100 מ"ג/מ"ל) | Vetoquinol | 3605877535982 | |
| Rompun 2% (קסילזין) 25 מ"ל (20 מ"ג/מ"ל) | Bayer | 680538150144 | |
| Saline NaCl 0.9% | B. Braun | 3535789 | |
| Prequillan 1% (אצפרומזין) 10 מ"ל (10 מ"ג/מ"ל) | Fatro | 6805671900029 | |
| מכונת גילוח חשמלית | Wahl | 9818L | או דומה |
| להסרת שיער קרם | Veet | 4002448090656 | |
| Durapore סרט כירורגי (2.5 ס"מ x 9.1 מ' ו-1.25 ס"מ x 9.1 מ') | Durapore (3M) | 1538-1 | |
| סרט כירורגי Durapore (2.5 ס"מ x 9.1 מ' ו-1.25 ס"מ x 9.1 מ') | Durapore (3M) | 1538-0 | |
| דבק סופר אולטרה ג'ל, דבק מיידי | Pattex, הנקל | 4015000415040 | |
| כיסוי מיקרוסקופ שקופיות זכוכית 20 מ"מ ו-22 מ"מ | מנזל-גל&אומל; ser | 631-1343/ 631-1344 | |
| גריז למעבדות 60 גרם גליסיאל N | Borer (ספק VWR) | DECO514215.00-CA15 | |
| מספריים כירורגיים | כלי מדע עדינים (F.S.T) | 14090-09 | או כלים |
| עדינים של מלקחיים | עדינים (F.S.T) | 11252-20 | או דומה |
| ספוגית כותנה | Migros | 617027988254 | או דומה |
| גזה גזין 5 x 5 ס"מ | Lohmann and Rauscher | 18500 | או |
| סטריאומיקרוסקופ | Leica | MZ16 | או דומה |
| טקסס אדום דקסטרן 70kDa | בדיקות מולקולריות | D1864 | |
| אשד כחול דקסטרן 10kDa | invitrogen | D1976 | |
| מערכת דו-פוטונית | LaVision Biotec | TrimScope I ו-II | או דומה |
| XLUMPLANFL 20x/0.95 W אובייקטיבי | אולימפוס | n/a | או מטרת טבילה אחרת במים |
| מדחום דיגיטלי | Fluke | 95969077651 |
מקורות
- Pakurar, A. S., Bigbee, J. W. Digestive System. Digital Histology. , John Wiley & Sons. Hoboken, NJ, USA. 101-121 (2005).
- Carpenter, G. Role of Saliva in the Oral Processing of Food. Food Oral Processing. , Wiley-Blackwell. Oxford, UK. 45-60 (2012).
- Masedunskas, A., Weigert, R.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
