Method Article

Hepatectomy Lobular חלקית: מודל ניתוח עבור התחדשות הכבד מורפולוגיות

DOI:

10.3791/57302

⸱

May 31st, 2018

 ,  , 
1Institute for Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Stanford University School of Medicine, 2Department of Developmental Biology, Stanford University School of Medicine, 3Comprehensive Pneumology Center, Institute of Lung Biology and Disease, Helmholtz Zentrum München, 4German Center for Lung Research (DZL)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, אנו מציגים שיטה חדשה עבור כריתה חלקית של האונה השמאלית הכבד בעכברים neonatal (יום 0). פרוטוקול חדש זה מתאים ללמוד פציעת כבד חריפה ותגובה פציעה בהגדרת neonatal.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התחדשות האיברים מורפולוגי בעקבות איבוד רקמות חריפה נפוצה בקרב בעלי חוליות נמוכים יותר, אבל הוא לעיתים נדירות בחיי כמחנכת יונקים. למבוגרים התחדשות הכבד לאחר 70% hepatectomy חלקית תוצאות היפרטרופיה hepatocyte עם כמה שכפול באונות הנותרים שיקום של פעילות חילוף החומרים, אבל עם אובדן קבוע של אדריכלות ומורפולוגיה של האונה פצועים. כאן, אנו מפרטים שיטה כירורגית חדשה ב neonate זה משאיר סביבה הפיזיולוגיות להצטיינות התחדשות. מודל זה כולל כריתה של האונה השמאלית השיא, משטר ניהול שמרנית עוקבות, חסרה את הצורך מצדו של כלי כבד הגדולות או פגיעה כימית, עוזב סביבה הפיזיולוגיות בו התחדשות עלולה להתרחש. אנו להרחיב את פרוטוקול זה כדי כריתות על ילדותי עכברים (P7-14), שבמהלכו הכבד נפגע המעברים של התחדשות האיברים לצמיחה לפיצוי על ידי היפרטרופיה. פרוטוקול שהוצגו, קצר 30 דקות מספק מסגרת כדי ללמוד על מנגנוני התחדשות שלה ירידה גיל-הקשורים ביונקים, אפיון בשם גזע כבדית או אבות.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כבר חשבה את היכולת להתחדש איבר, או לשחזר צורה ותפקוד, ללכת לאיבוד בעיקר לאורך זמן אבולוציונית. פוטנציאל הרגנרציה של הכבד יונקים בוגרים לאחר פגיעה חריפה כימיים או פיזיים נמצאה לערב גיוס כל hepatocytes הנותרים וכתוצאה מכך גלים של היפרטרופיה כמה סיבובים של חלוקת התא, וכתוצאה מכך אך פונקציונלי איברים שונים מבחינה ארכיטקטונית1,2,3,4,5. לאחרונה, מחקרים החלו לאפיין את התגובה הרגנרציה של איברים יונקים neonatal לפגיעה בתוך השבוע הראשון של החיים-6,-7,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הניסויים בוצעו בהתאמה קפדנית עם המנחים שנקבעו על ידי האגודה מגוונת פאנל ניהול הסמכה של מעבדה חיה אכפת הבינלאומי (AAALAC) ואת אוניברסיטת סטנפורד על חיות מעבדה טיפול (APLAC), (פרוטוקול מס ' #10266), ארצות הברית, או חוק האירופית בעלי חיים רווחה, דירקטיבה 2010/63/האיחוד האירופי. הפרוטוקול שאושר על ידי ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חיים של ממשלת בוואריה, גרמניה, וקיבל את ההרשאה לא: 55.2-1-54-2532-150-2015.

1. הכנה בעלי חיים

  1. הכן של כלוב ריק עם מצעים המתאימים על כרית החימום.
  2. לפני מגע חיות עם כפפות, לשפשף המצעים של האם אל הכפפות.
  3. הסר כל הגורים שלהם אמא ומקום לתוך הכלוב ריק. להסיר חלק מצעים של האם ולמקם אותו בכלוב ריק ע....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איור 1A מפרט כללי ציר זמן של neonatal חלקית lobular hepatectomy (סכמטי של איור 1B), ואת אורך זמן לחכות עד התחדשות נצפית הצפוי. התחדשות עדין של האונה השמאלית יכול להיות שנצפו 7-14 ימים שלאחר ניתוח. התחדשות מלא לעתים קרובות נצפתה לאחר 56 ימים לתגובה. עכברים צריך להראות סימנים של ליקויים הפיזיולוגיות לאחר הניתוח.

עכברים שעברו חלקית hepatectomies lobular הורשו שחזור עבור 2,.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פגיעה כבדית חריפה באופן מסורתי נחקרה באמצעות חומר כימי (פרצטמול, אתנול, פחם tetrachloride), או מודלים כירורגי (70% hepatectomy חלקית). התגובה הרגנרציה לאחר 70% hepatectomy חלקי מאפיין לערב היפרטרופיה hepatocyte הכללית, מספר סיבובים של חלוקת התא4,5. לעצירת דימום, עם זאת, מודל זה היא מוגבלת, שכן כלי מרכזי חייב להיות מאתרים עוזב סביבה חריג עבור התחדשות. מחקרים רבים ולכן המועסקים דגמים אחרים פחות פולשני של פגיעה חריפה דרך נזק כימי, עוזב את הארכיטקטורה מגעיל במקום עבו.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים יש אין גילויים.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים עמ' צ'ו לביצוע H & E והיסטולוגיה; וואנג ג. ו א מקארתי לדיונים מועיל. המחקר נתמך באמצעות מימון וירג'יניה ו ד K. לודוויג הקרן לחקר הסרטן; הלאומי ללב, ריאות, ודם המכון (R01HL058770 ו- U01HL099999); מכון קליפורניה מענקים רפואה רגנרטיבית (RC1 00354) I.W. Y.R. ונתמך על ידי האדם הגבול המדע תוכנית הקריירה פיתוח בפרס (CDA00017), קרן מחקר גרמני (2787 RI/1), מכון תאי גזע של Siebel, ו תומאס, סטייסי Siebel קרן (1119368-104-GHBJI). J.M.T. נתמכה על ידי NIH (T32GM007365), בפרס שירות המחקר הלאומית (1F30DK108561), ואת פול דייזי סורוס מלגת האמריקאים החדשים.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<חזק>חיות
אמא עם המלטה של גורי ילודים ביום 0 (כל זן)
אם פונדקאית והמלטה פונדקאית (אופציונלי)
<חזק>שם<חזק>חברה<חזק>מספר קטלוגי<חזק>תגובות
><חזקים>
פוספט בופר סרום (PBS)
פרובידין-יוד או תמיסת
<חזק>שם<חזק>חברה<חזק>מספר קטלוגי<חזק>תגובות
כירורגי חזק><חזק>
מנתח מיקרוסקופZeissZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000
3 מ"מ מספריים מיקרו קפיץ ישרVannas72932-01
5SF מלקחייםDumont11252-00
מלקחיים ישרים קליגריינג'ר17-050G
כרית חימוםSunbeam000771-810-000
IsofluraneAbbott Labs0044-5260-05
מערכת הרדמת מכרסמיםKent Scientific1205S
גזה, 10.16 x 10.16 ס"מפישר סיינטיפיק13-761-52
<חזק>שם<חזק>חברה<חזק>מספר קטלוגי><חזק>הערות
<חזק>ציוד סטנדרטי
1.5 מ"ל צינור מיקרוצנטריפוגהאפנדורף22363204
6-0 תפרי מונוקרילEthiconMCP489G
צלחת פטריפישר סיינטיפיקS35839
Pipet-Aid, רגיל, 110VDrummond4-000-110
מטלר טולדו NewClassic ME מאזנים אנליטייםפישר סיינטיפיק01-912-402
תא אינדוקציה בעלות נמוכהקנט סיינטיפיקSOMNO-0730
חיטוי שווה ערך

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. Liver Regeneration. Science. 276 (80), 60-66 (1997).
  2. Ponfick, V. A. Surgery of the Liver. Lancet. 1, 881(1890).
  3. Higgins, G., Anderson, R. M. Experimental Pathology of the liver. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal. Arch. Pathol. 12, 186-202 (1931).
  4. Miyaoka, Y., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Partial Lobular HepatectomyLiver RegenerationNeonatal MouseSurgical ModelMorphologic RegenerationHepatocyte ProliferationTissue FixationCryostat SectioningLobe AmputationRegenerative Medicine

Related Articles