RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
he_IL
Menu
Menu
Menu
Menu
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Research Article
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Erratum Notice
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
בפרוטוקול הנוכחי מתאר את השלבים להשגת פקקת ורידים באמצעות מודל של ההקפאה. בנוסף, אנו משתמשים בשיטה לא פולשנית למדוד כגון היווצרות והרזולוציה לאורך זמן.
פקקת ורידים היא מצב נפוץ המשפיעים על 1-2% של האוכלוסייה, עם שכיחות שנתי של 1 ב 500. פקקת ורידים יכולה להוביל למוות באמצעות תסחיף ריאתי או תוצאות התסמונת הפוסט-קדחת, המאופיינת על ידי כאב כרוני, נפיחות, כיבת, או כרונית יתר לחץ דם ריאתי וכתוצאה מכך משמעותיות כרוניות בדרכי הנשימה פשרה. זו היא המחלה הנפוצה ביותר לב וכלי דם לאחר אוטם שריר הלב, שבץ איסכמי והיא אתגר קליני עבור כל התחומים הרפואיים, כמו זה יכול לסבך את הקורס של הפרעות אחרות כגון סרטן, מחלות מערכתיות, ניתוח נזק גדול.
גרסאות ניסיוניות נחוצים לחקור מנגנונים אלה. המודל ההקפאה גורם עקבי כגון גודל וכמות לכימות של כגון. עם זאת, יש צורך בשיטתיות מאתרים ומפסיקים בצד סניפים של הכלילי התחתון כדי למנוע השתנות במידות כגון כל פרשנות הנתונים שגויים. פיתחנו שיטה לא פולשנית כדי למדוד את גודל כגון באמצעות בדיקת אולטרה סאונד. בעזרת טכניקה זו, שנוכל להעריך כגון פיתוח והרזולוציה לאורך זמן של אותה חיה. גישה זו מגבילה את מספר עכברים הנדרש על כימות של פקקת ורידים בקנה אחד עם עקרון ההחלפה, הפחתת ו עידון של בעלי חיים במחקר. הראו כי משקל כגון וניתוח היסטולוגית של כגון גודל לתאם עם מדידה שהושג עם בדיקת אולטרה סאונד. לפיכך, המחקר הנוכחי מתאר כיצד לגרום פקקת ורידים עמוקה בעכברים באמצעות מודל stasis הכלילי וכיצד לפקח עליו באמצעות אולטרסאונד בתדירות גבוהה.
ורידי פקיקי (VTE), אשר מורכב של פקקת ורידים עמוקה (DVT), תסחיף ריאתי, הוא הגורם המוביל השלישי המוות לב וכלי דם לאחר אוטם שריר הלב ושבץ. . זה מצב שכיח המשפיעים על 1-2% של האוכלוסייה, עם שכיחות שנתי של 1 ב 5001... VTE יכול להוביל: 1) מוות תסחיף ריאתי; 2) תסמונת פוסט-קדחת, המאופיינת על ידי כאב כרוני, נפיחות, כיבי; או 3) לחץ דם ריאתי כרוני וכתוצאה מכך משמעותי כרונית פשרה בדרכי הנשימה. VTE היא מחלה רב העצרת, העלולות לנבוע ההקפאה של זרימת הדם, נזק כלי הדם ו/או hypercoagulable הברית עקב הפרעה של איזון בין את הקרישה ומערכות fibrinolytic, כפי שתיארנו זה לפני מאה שנה מאת וירכו וידוע בשם וירשאו.
כי ברוב המקרים זה אפשרי להשיג דגימות DVT אנושי, חוקרים פיתחו מודלים חייתיים ניסיוני של DVT. מספר בעלי חיים כולל עכברוש2, עכבר3, ארנב4, חזיר5, הכלב6ואנושיות הפרימטים7 שימשו. עכברים יכול להיות שונה גנטית, החיה שנמצאות בשימוש תכוף ביותר ללמוד DVT. עם זאת, כמו כל בעלי החיים, DVT ספונטנית הוא לא ציין בעכברים. לפיכך, שינויים פיזי או כימי החומה וריד משמשות ליצירת פקקת בעכברים. בעבר השתמשנו המודל הברזל ותחמוצת כלוריד לזירוז פקקת ב הכלילי התחתון (IVC) של עכברים8,9,10. מודל זה יש את היתרון של אמין בהפקת thrombi ריטלין תוך דקות והוא יכול לשמש כדי לחקור את התפקיד של אנטי מקריש ותרופות נגד טסיות בתקופת DVT חריפה. עם זאת, זה הליך מסוף. לפיכך, במחקר DVT אקוטי וכרוני, המודל stasis הוא מתאים יותר. במודל זה, כגון היווצרות הנגרמת על ידי ההפרעה מלאה של זרימת הדם ב- IVC, אחד הגורמים בטריאד וירשאו להתפתחות DVT. מודל זה ניתן ללמוד היווצרות DVT ו ברזולוציה, וזה יתרון לעומת ה3 דגם של FeCl11.
פיתחנו שיטה לא פולשנית לעקוב אחר כגון היווצרות והרזולוציה לאורך זמן באמצעות מערכת מיקרו-הדמיה סאונד בתדירות גבוהה12. בעבר הראו כי מדידה של פקקת ורידים על ידי אולטרסאונד להרכב בחיוב thrombi מתקבל באופן פתולוגי. יש לנו אישר ב שני מחקרים מאוחרים יותר כי מדידות שהושג עם אולטרסאונד לתאם עם כגון משקל, כגון אזור לכמת על ידי9,להסטולוגיה10. יותר חשוב, יש הראנו שסאונד בתדירות גבוהה הזה יכול לשמש כדי לפקח על היווצרות של פקקת ורידים עמוקה עכברים12. זה עשוי לשמש גם לכמת כגון רזולוציה בצורה לא פולשנית.
כאן נתאר את פרוטוקול המאפשר כגון היווצרות באמצעות המודל העכבר stasis-induced פקקת, כיצד כגון היווצרות ניתן לנטר בצורה לא-פולשנית לאורך זמן באמצעות אולטרסאונד בתדירות גבוהה.
כל ההליכים אושרו על-ידי בית קנדה חיה טיפול הוועדה של מקגיל אוניברסיטת מונטריאול, QC, מוסדיים. כל הציוד הנדרש רשום בטבלה אני.
1. מאתר (C57BL/6J) פרוטוקול Stasis IVC
2. פרוטוקול אולטרסאונד בתדירות גבוהה
הערה: פרוטוקול זה הוא ממאמרו של ליידי דיוויס המכון מכרסם Phenotyping הליבה הצוות עבור הדמיה סאונד בתדירות גבוהה. פרוטוקול זה מתבצע 24 שעות שלאחר הניתוח, אך ניתן לעשות זאת מוקדם ככל החיה מגיבה טוב הניתוח. הפרוטוקול יכול להתבצע בכל עת על עכברים בריאים, לעיתים קרובות נעשה כדי להשוות לפני ואחרי הניתוח.
Stasis פקקת ורידים מודל
במודל stasis, עכברים הם מרדימים, חתך לחשוף הכלילי התחתון (IVC). החתך נעשה בצד השמאלי או הימני של העכבר במקום פתיחה של קו האמצע הבטן באופן לא אפריע החללית אולטרסאונד. את שרירי הבטן ואת העור הם מקפלים לאחור כדי לחשוף את IVC (איור 1). ראשית, בצד סניפים מאתרים 6-0 בתפר משי (איור 2). לאחר מכן, IVC מופרדת מן העורקים באמצעות עמום, המשי ממוקם בסביבה IVC (איור 3 א-ג). IVC זה מאתרים בתפר משי 6-0. הרחבה של IVC להלן האתר מצדו הוא מעיד על הפרעה מוצלחת של זרימת הדם (איור תלת-ממד). לבסוף, חלל הצפק, העור ומאחים בחזרה באופן רציף (איור 3E).
פיקוח על היווצרות כגון באמצעות בדיקת אולטרה סאונד
כפי שהראתי קודם לכן, אולטרסאונד בתדירות גבוהה, אשר משמש בדרך כלל כדי להעריך פקקת ורידים בהגדרות קלינית, ניתן למדוד כגון היווצרות והרזולוציה לאורך זמן במודל מאתר ניסיוני. השתמשנו עם מערכת מיקרו-הדמיה בתדר גבוה12. לפני מצדו, ניתן לזהות את IVC בתצוגה האורך. לאחר מצדו של הווריד, ניתן לאבחן את ההצלחה של הפרוצדורה. מצב PW-דופלר יכול לשמש כדי לקבוע את מהירות זרימת הדם לפני (34.8 מ מ/s) ואחרי (5.6 מ מ/s) מצדו. מכיוון thrombi הן ודחוסה יותר זורם דם, אנחנו יכלו להעריך את כגון בנוי בתוך IVC באמצעות בדיקת אולטרה סאונד, 24 שעות לאחר מצדו (איור 4A). בדיקת אולטרה סאונד מאפשר כימות של המהירות של זרימת הדם בכלי הדם באמצעות צבע דופלר. כפי שמוצג באיור 4B, אנו יכולים למדוד את זרימת בווריד לפני מצדו, מעריך את ההפרעה של הזרם לאחר מצדו, כאשר כגון נוצר. נתונים מהתוכנית מעבדה גודל כגון ממוצע של 0.22 מ מ ±2 4.85 ב 24 שעות ואת 5.05 0.47 מ מ ±2 ב 48 שעות (אומר ± SEM).

איור 1. הקפאה דגם: הליך לחשוף הכלילי התחתון. (א) הסרת שיער העכבר מהבטן באמצעות קרם להסרת שיער. (ב) חתך הראשון מתבצע בצד שמאל של הבטן, עם השני הגחון אחד (ג) משמאל לימין. (ד) מבט סטרילית רטובה משמש exteriorize המעיים ולחשוף את הכלילי (IVC) ואת סניף בצד (SB). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

באיור 2. הקפאה דגם: הליך מאתרים ומפסיקים את הענף בצד. (א) תערוכות של IVC, SB. (B) המיקום של המשי תפר מתחת SB. (ג) מצדו של אירוו SB.: וריד הכליה השמאלית. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 3. הקפאה דגם: הליך מאתרים ומפסיקים הכלילי התחתון. (A-B) עמום להפריד את IVC אבי העורקים. (ג) השמה של המשי תפר מתחת IVC. (ד) מצדו של IVC. הרחבה של IVC הוא ציין. (ה) שרירי הבטן והעור סגורים בנפרד. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

באיור 4. פיקוח על היווצרות כגון באמצעות אולטראסאונד הדמיה- (א) אולטרסאונד נציג תמונות בעבר, מיד אחרי ו- 24 שעות לאחר מצדו של IVC. (ב) נציגים תמונות של הדם לזרום מהירות מתואר על ידי דופלר צבע באמצעות עיבוד צבע. קנה המידה של טווחים זרימת דם בצבע מאדום לצהוב כדי לתאר גבוה זרם נמוך. את החיות מחוברים היעדר זרימה מתואר בהעדרה של צבע. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
המחברים אין לחשוף.
בפרוטוקול הנוכחי מתאר את השלבים להשגת פקקת ורידים באמצעות מודל של ההקפאה. בנוסף, אנו משתמשים בשיטה לא פולשנית למדוד כגון היווצרות והרזולוציה לאורך זמן.
עבודה זו נתמכה על ידי מענק של הלב ועל קו הבסיס של קנדה על ידי מוריס וקרן משפחת בלה Fainman. המחברים רוצה להודות ורוניק מישו עזרה טכנית עם מערכת הדמיה של סאונד VEVO770.
| 6-0 תפר משי ביד פרמה | Ethicon | 706G | |
| מספריים כירורגיים | כלי מדע עדינים | 20830-00 | |
| מלקחיים לקשירת תפרים | כלי מדע עדינים | 20830-00 | |
| מלקחיים קהים (ישרים ומעוקלים) | כלי מדע עדינים | 20830-00 | |
| נהג מחט | כלי מדע עדינים | 13002-10 | |
| Moria Spring Scissors | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| מזרקים 1 מ"ל | BD Biosciences | ||
| 26G מחטים | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 מערכת הדמיה ברזולוציה גבוהה | Visualsonics | כבר לא נמכרת | |
| SR בופרנורפין | ZooPharm | ניתן ל-LDI על ידי כירורגיה וטרינרית | |
| מיקרוסקופ | Leica | Leica M651 | |
| Systan eye oinment | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2x2 סטרילי גזה | CDMV | #104148 | |
| קצה כותנה אפליקטורים | מסרט | ||
| כירורגי היפואלרגני JGH Transpore | CDMV | #7411 | |
| ג'ל אולטרסאונד (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| חממה | מ- JGH | ||
| Isoflurane | Dispomed | ||
| תא הרדמה, צינורות וציוד אדמיניסטרציה | Dispomed | ||
| Hair Remover | Nair | ||
| Water מחומם כרית קשיחה | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| משאבת מים לחימום Gaymar TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| מנורת חימום אינפרא אדום | אלקטרימט בע"מ | #1R175R-PAR | |
| פרופ טמפרטורת פי הטבעת של העכבר | emkaTECHNOLOGIES | ||
| מים | סטריליים | מבית JGH |