הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

כולה-הר מיקרוסקופיה קונפוקלית לעור מבוגר האוזן: מערכת מודל ללמוד מורפוגנזה מסעף נוירו-וסקולרית והפצה תא החיסון

13.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57406

⸱

29 במרץ 2018

 ,  , 
1Laboratory of Stem Cell and Neuro-Vascular Biology, Genetics and Developmental Biology Center, National Heart, Lung, and Blood Institute, National Institutes of Health, 2Earle A. Chiles Research Institute, Robert W. Franz Cancer Center, Providence Portland Medical Center

במאמר זה

סיכום

כאן נתאר שיטת הדמיה כולה-הר ברזולוציה גבוהה בעור האוזן והעכבר כולו למבוגרים, אשר מאפשרת לנו לדמיין מורפוגנזה מסעף והמתבנת של העצבים ההיקפיים, כלי הדם, כמו גם התפלגות תא החיסון.

תקציר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של עור האוזן למבוגרים כולה-הר של הדמיה טכניקה ללמוד מקיף תלת מימדי מורפוגנזה מסעף נוירו-וסקולרית ו המתבנת, וכן חלוקת תא החיסון ברמה התאית. הניתוח של היקפי עצבים, כלי דם מבנים אנטומיים של רקמות בוגרות מספק כמה תובנות להבנת חיווט נוירו-וסקולרית פונקציונלי והתנוונות נוירו-וסקולרית במצבים פתולוגיים כגון ריפוי הפצע. כמערכת מודל מאוד אינפורמטיבי, אנחנו התמקדו המחקרים שלנו בעור האוזן למבוגרים, אשר נגיש עבור ניתוח. פרוטוקול לשחזור ופשוט שלנו מספק תיאור מדויק של הרכיבים הסלולר של העור כולו, כגון העצבים ההיקפיים (אקסונים סנסוריים, סימפטי אקסונים ו תאי שוואן), כלי הדם (תאי אנדותל ותאים השריר החלק בכלי הדם ), ותאים דלקתיים. אנו מאמינים שפרוטוקול זה יסלול את הדרך לחקור ליקויים מורפולוגי של העצבים וכלי הדם, כמו גם הדלקת בעור האוזן למבוגרים תחת מצבים פתולוגיים שונים.

מבוא

העור מורכב משלוש שכבות: אפידרמיס, דרמיס ובהיפודרמיס. זה שימש כמערכת מודל לחקר תאי גזע תחזוקה, בידול, מורפוגנזה פיתוח וכן התחדשות, tumorigenesis, וכן דלקת למבוגרים. העור הוא בעושר vascularized, innervated כך ההתפתחות של מערכת העצבים ההיקפית, מערכת כלי הדם היא מתואמת היטב.

בעבר הראו טכניקת דימות של העור מתחלקים כולה-הר עם תיוג מרובים ללמוד העצבים ההיקפיים שלמים וכלי הדם כולל את מרכיבי התא1,2,3, 4: אקסונים סנסוריים אקסונים סימפטי, שוואן תאי העצבים, תאי אנדותל, pericytes, תאי השריר החלק בכלי הדם (VSMCs) בכלי הדם. במהלך האנגיוגנזה, רשת נימי הראשי עובר שיפוץ כלי הדם אינטנסיבית ומפתחת היררכי לרשת מסתעפים כלי הדם. פיתוח הדרמיס/ובהיפודרמיס, העורקים הסניף לצד העצבים החישה היקפיים וורידים מכן יוצרים הסמוכים העורקים. אחרי היררכי לרשת כלי הדם יהיה מכוסה היטב עם VSMCs, העצבים הסימפתטית להאריך לאורך, innervate כלי דם גדולים בקוטר1,5,6. למרות החשיבות של האגודה קרוב בין מערכות עצבים וכלי פיתוח, שאלה גדולה כבר להתייחס מה יקרה הרשתות נוירו-וסקולרית במצבים פתולוגיים שונים אצל מבוגרים. דימות ברזולוציה תלת מימדי יש צורך להעריך בפתוגנזה, מורפוגנזה מסעף לזיהוי אנטומית ו המתבנת.

מורפוגנזה עצביים ואת כלי הדם בעור עכבר מבוגרים בדרך כלל ניתוח על ידי רקמת סעיף מכתים. מחקרים אחרים השתמשו כולה-הר הדמיה של העור כדי להמחיש את העצבים וכלי הדם, בנוסף זקיקי שיער, בלוטות החלב, arrector pili השרירים7,8,9. עם זאת, עובי העור למבוגרים הפכה אותו קשה לנתח את העור מעל כל העומק שלה.

במחקר הנוכחי, פיתחנו הרומן דימות כולה-הר ברזולוציה של האוזן למבוגרים עור כדי להתגבר על האתגרים הללו. האוזן העור הוא נגיש עבור ניתוח והדמיה כולה-הר עוקבות של העור מעל כל העומק שלה. לכן שיטה פשוטה מאוד לשחזור שניתן להחיל כדי להשוות בין ארכיטקטורה תלת מימדי של מערכות היקפיות לחוץ ואת כלי הדם של העור, עם מדידות כימות מקיף. להדגים היישור של העצבים ההיקפיים חושית ואוהד עם כלי דם גדולים בקוטר נשמרת בעור מבוגר. המטרה של פרוטוקול זה היא להציג באופן חזותי מורפוגנזה מסעף, את המתבנת של העצבים ההיקפיים, כלי הדם, כמו גם את התפלגות תא החיסון ברמה התאית במודלים של העכבר מבוגרים בתנאים שונים כגון דלקת ו התחדשות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בסעיף זה בוצעו תחת אישור מן הלאומי ללב, ריאות, ודם המכון (NHLBI) חיה אכפת לי שימוש הוועדה.

1. בגיר העכבר האוזן העור אוסף

  1. המתת חסד עכברים בוגרים על ידי חשיפה פחמן דו-חמצני (CO2) בתוך תא סגור ולאחר מכן לאשר את המתת חסד מאת נקע בצוואר הרחם.
    הערה: הניסוי מלווה מנחה לאומי מכונים לבריאות (NIH) עבור שיטת המתת חסד.
  2. לנתח את האוזן מבסיס ולמקם אותו 35 x 10 מ מ2 פטרי המכילות 2 מ"ל מאוזנת מלח פתרון (HBSS של האנק). בקצרה לקצץ שערות עם מספריים.
  3. לקלף את העור האחורי ועור הקדמי משם בקפידה הסחוס להתערב.
    הערה: סחוס מייחסת העור הקדמי.
  4. להעביר את ישבנה ואת העור הקדמי בנפרד כדי בגודל 24 טוב לוח המכיל 1 מ"ל של קרח טרי 4% paraformaldehyde (PFA) בתוך buffered פוספט תמיסת מלח (PBS) לכל טוב. לרדד את העור האחורי ו הקדמי של ארבעה אחוזים מחברים.
  5. לתקן את העור האחורי ו הקדמי עם סחוס ב 4 ° C עבור 1 h.
  6. לשטוף את העור האחורי ו הקדמי 3 פעמים במשך 5 דקות ב- 1 מ"ל של PBS עם ערבוב עדין על מערבל בטמפרטורת החדר.
  7. להעביר את העור האחורי ו הקדמי עם הסחוס התחתון של 35 x 10 מ מ2 פטרי. חתוך את אזור הבסיס, אשר הוא מקופל יש שומן ואת רקמות החיבור. לקלף את הסחוס של העור הקדמי באמצעות מלקחיים מעוקל בסדר.
  8. הסר בזהירות את השערות, רקמות adipose ואת רקמות החיבור מהחלק הפנימי של העור האחורי בעזרת פינצטה מעוקל משובחים. לשמור על עור רטוב עם PBS.

2. כולה-הר נוגדן של העכבר האוזן העור

הערה: כל הניסויים בסעיפים הבאים בוצעו בהתאם להנחיות הבטיחות מעבדה NIH.

  1. הכנת המאגר חסימה. מסנן חום 10% לא פעיל עז סרום (HIGS) מדולל ב- PBS עם טריטון 0.2% מאגר חסימה X-100 (TX-100), או 10% חמור סרום (DS) מדולל ב- PBS עם 0.2% מאגר חסימה TX-100, באמצעות יחידת מסנן 0.45 מיקרומטר.
  2. להעביר את הצד האחורי, העור הקדמי כדי בגודל 24 צלחת טוב המכיל 1 מ"ל של 10% HIGS מאגר חסימה או מאגר חסימה של DS 10% לכל טוב. דגירה על העור למשך 30 דקות עם ערבוב עדין על מערבל בטמפרטורת החדר.
  3. להכין את הפתרון נוגדן ראשוני על ידי דילול הנוגדנים הראשי (טבלה של חומרים) במאגר חסימה (או 10% HIGS או 10% DS).
    הערה: כל-mout immunohistochemical ניתוח של האוזן למבוגרים עור עם נוגדנים לכיתה ספציפית נוירון סמן פאן עצבית השלישי β-טובולין (Tuj1, ארנב polyclonal IgG או בעכבר monocloncal IgG2a, דילול שבערך על הריכוז הסופי של 2 µg/mL). תאי אנדותל-פאן סמן טסיות תא אנדותל אדהזיה מולקולה 1 (PECAM-1, אוגר monoclonal איג, 1:300 דילול-הריכוז הסופי של 3.3 µg/mL), מעטפת המיאלין סמן המיאלין הבסיסי חלבון (MBP, ארנב polyclonal איג, 1:200 דילול ב הריכוז הסופי של 5 µg/mL), סמן דלקתיות התאים מיאלואידית CD11b (עכברוש IgG2b monoclonal, 1:50 דילול-הריכוז הסופי של 20 µg/mL) הוצג באיור 1 ו- 2 איור. העור, נדגרה עם נוגדנים Cy3 מצומדת על השריר החלק בכלי הדם תא סמן α שריר חלק אקטין (αSMA) יחד עם נוגדנים משניים (2.6). הנוגדנים הראשית נבדקו על-ידי עצמנו נרשמו בטבלה שלחומרים. יכול להיות מעורב מספר נוגדנים העיקרי נגזר מינים שונים בו זמנית.
  4. להעביר את עור אחורי, קדמי באר חדשה המכילה 150 µL של הפתרון העיקרי נוגדנים. דגירה העור תוך ערבוב עדין על מערבל ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
  5. למחרת, להעביר את עור אחורי, קדמי בארות חדשות בצלחת טוב 24 או תשאף המאגר חסימה המכיל נוגדנים העיקרי. להוסיף 1 מ"ל או 2% HIGS מדולל ב- PBS עם מאגר כביסה TX-100 0.2% או 2% DS מדולל ב- PBS עם מאגר כביסה TX-100 0.2%. לשטוף את העור עם שינויים 3 המאגר כביסה בכל 15 דקות עם ערבוב עדין על מערבל בטמפרטורת החדר.
  6. להכין את הפתרון נוגדנים משניים (טבלה של חומרים). לדלל נוגדנים משניים במאגר חסימה (או 10% HIGS או 10% DS) ומסנן המאגר חסימה המכיל נוגדנים משניים דרך 0.22 מיקרומטר polyvinylidene difluoride (PVDF) ממברנה מזרק פילטר מחובר מזרק 1 מ"ל.
    הערה: אלקסה 488 או מצומדת 633 עז ארנב אנטי איג (H + L) או עכבר IgG2a עבור Tuj1, אוגר נגד עז מצומדת אלקסה 647 IgG (H + L) אנטי-ארנב PECAM-1, 488 אלקסה מצומדת עז IgG (H + L) עבור MBP, ושימשו עכברוש מצומדת אלקסה 594 IgG (H + L) עבור CD11b עם דילול 1:250-הריכוז הסופי של 8 µg/mL. העור, נדגרה עם נוגדנים αSMA מצומדת Cy3 (דילול שבערך על הריכוז הסופי של 2-3 µg/mL) בשילוב עם נוגדנים משניים אלה.
  7. Centrifuge הפתרון ב 13,000 g x 10 דקות להסיר חלקיקים צבורים של נוגדנים משניים מתוך המאגר חסימה.
    הערה: שונה פלורסנט מצומדת משני נוגדנים נגזר מינים שונים יכול להיות מעורב בו זמנית.
  8. העבר את העור האחורי ו הקדמי טוב המכיל 150 µL של הפתרון נוגדנים משניים. לעטוף את הצלחת היטב 24 בנייר אלומיניום כדי למנוע אור דגירה את העור h 1 עם ערבוב עדין על מערבל בטמפרטורת החדר.
  9. להעביר את עור אחורי, קדמי בארות חדשות בצלחת טוב 24 או תשאף הפתרון נוגדנים משניים על-ידי pipet לחלוטין. להוסיף 1 מ"ל של מאגר כביסה HIGS 2% או 2% DS כביסה מאגר.
  10. לעטוף את הצלחת היטב 24 בנייר אלומיניום ולשטוף בשינויים 3 המאגר כביסה בכל 15 דקות עם ערבוב עדין על מערבל בטמפרטורת החדר.

3. הרכבה את העור האוזן בשקופית

  1. מקם את העור על החלק התחתון של 35 x 10 מ מ2 פטרי. הסר בזהירות את שערות רקמות adipose, רקמות החיבור, dusts, הסיבים מהחלק הפנימי של העור בעזרת מלקחיים מעוקל בסדר תחת stereomicroscope עם תאורה נמוכה כדי למזער תמונה מקיפה הלבנה. לשמור על עור רטוב עם PBS.
  2. להעביר את העור שקופיות מיקרוסקופ דבק באמצעות מלקחיים. מקם את העור האחורי ו הקדמי עם הפנימי כלפי מעלה בשקופית. לשטח העור בעזרת מלקחיים.
  3. הר העור במדיום הרכבה לדעוך אנטי נוזלית כדי להימנע photobleaching ולשמר אותות פלואורסצנט. ודא כי אין בועות אוויר הם בערך בהעור.
  4. מכסה עם coverslip על הדגימות העור בזהירות, לאחסן השקופיות לדוגמה את העור הנטען הלילה חשוך בטמפרטורת החדר, כדי לאפשר את שהתקשורת הרכבה לקבל המשרד. לסגור את coverslip אל השקופית עם לק ואחסן אותו ב 4 ° C לאחסון לטווח ארוך.

4. מיקרוסקופיה קונפוקלית

  1. כוונן המתאים לייזרים של fluorophores. מיקרוסקופ קונפוקלי עם שלושה מקורות לייזר (ארגון 488 ננומטר, DPSS 561 ננומטר, הנה 633 ננומטר) משמש בניסוי זה.
  2. השתמש בכלי הסריקה רציפים, אשר בו זמנית מרגש דגימות שהוכתמו שלוש פעמים, כדי למנוע ולהפחית בחפיפה.
    הערה: תמונות תועבר באופן רציף באמצעות מצב סריקה רציפים.
  3. תמונה תחת מטרה X 10. השתמש בכלי הסריקה אריח כדי ללכוד את העור כל אוזן. הגדר Z-מחסנית וודא כי z-המיקום מכסה את כל עובי העור האוזן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

עור אחורי האוזן העכבר למבוגרים (איור 1 א') והעור באוזן קדמית (איור 1B) היו immunostained עם נוגדנים αSMA (אדום), Tuj1 (ירוק), ו- PECAM-1 (כחול). העור האחורי היה immunostained ללמוד נוירו-החיסון הפצה באמצעות נוגדנים CD11b (אדום) ו MBP (ירוק), יחד עם Tuj1 (כחול) (איור 2 א). חלוקת CD11b+ תאים דלקתיים, כולל מקרופאגים זוהה ברזולוציה הסלולר יחיד (איור 2B).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה מתאר את כולה-הר immunonohistochemical הדמיה של האוזן למבוגרים עור לניתוח של המבנים הנוירו-וסקולרית והפצה תא החיסון. אנו מאמינים שבשיטה זו יש יתרונות רבים ניסיוני לחוקרים ללמוד מורפוגנזה מסעף ו את המתבנת של העצבים וכלי הדם, כמו גם תלת מימדי הפצה של רכיבי העור כולל תאים חיסוניים ושיער זקיקי. ניתן לכמת את התוצאות של ההדמיה באמצעות תוכנות דימות לצורך ניתוח כמותי נוסף.

הכנה נכונה של העור האוזן הינה קריטית להצלחת פרוטוקול זה. ראשית, בעור האוזן צריך גזור בקפידה זמן קצר לאחר המתות חסד העכב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

אנו מודים ק' גיל לניהול מעבדה, תמיכה טכנית, ג'יי הוקינס, הצוות של נבחרת מכונים לבריאות (NIH) בניית מתקן בעלי חיים 50 על הסיוע עם העכבר, והטיפול ר ריד, פ Baldrey לסיוע מינהלי. תודה גם Motegi ס ו מ Udey עבור שיתוף שלהם האוזן העור לנתיחה פרוטוקול, כוויות (ש ע) עזרה העריכה, חברים של המעבדה של תאי גזע וביולוגיה נוירו-וסקולרית לקבלת עזרה טכנית ודיון מתחשב. ט יאמזאקי נתמכה על ידי החברה יפן עבור NIH-KAITOKU קידום המדע (JSPS). עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית מחקר מגזר של הלאומי ללב, ריאות, ודם המכון (HL005702-11 כדי עיון)

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
10 x פוספט חוצץמלח KD רפואיRGE-3210PBS, ללא Ca2+/Mg2+
Hank' s תמיסת מלח מאוזנתGibco14025-092HBSS, עם Ca2+/Mg2+
16% ParaformaldehydeElectron Microscopy Sciences15710PFA, מקבע, מדולל ב-PBS
Triton X-100SigmaX100חומר ניקוי
רגיל סרום עיזיםGibco16210064רכיב של מאגר חסימה/כביסה
רגיל סרום חמורג'קסון מחקר חיסוני017-000-121רכיב של מאגר חסימה/כביסה
פינצטה עדינה מעוקלתDumontRS-5047
פינצטה מעוקלתIntegra MiltexVantage V918-782, V918-784
יחידת סינון 0.45 מ"מThermo Scientific157-0045לסינון
1 מ"ל מזרקCoviden8881501400עבור
סינון מסנן מזרק יחידה 0.22 מ"מMillex-GVSLGVR04NLלסינון
ProLong GoldThermo ScientificP36934נגד דהייה הרכבה בינונית
לקאלקטרונים מיקרוסקופיה Sciences72180לאיטום
חיתוך מיקרוסקופLeicaMZ95
מיקרוסקופ קונפוקליLeicaTCS SP5
Photoshop CC 2017תוכנת עורך הגרפיקהשל Adobe
Illustrator CC 2017תוכנת עורך הגרפיקהשל Adobe
Image JNIHתוכנת עיבוד תמונה
נוגדן Anti-PECAM-1 (CD31)MilliporeMAB1398ZHamster IgG, סמן תאי אנדותל כלי דם, נוגדן 1:300
Anti-PECAM-1 (CD31)BD Pharmingen553369Rat IgG2a kappa, סמן תאי אנדותל של כלי הדם, 1:300
נוגדן Anti-αSMA מצומד עם cy-3SigmaC6198Mouse IgG2a, סמן תאי שריר חלק בכלי הדם, 1:500
נוגדן Anti-EphB1Santa Cruzsc-9319Goat polyclonal, סמן תאי אנדותל ורידי, 1:100
אנטי-נוירונים ספציפיים Class III β-tubulin (Tuj1)AbcamAB18207Tuj1, IgG פוליקלונלי של ארנב, סמן פאן-אקסונלי, 1:500
נוגדן נגד Tuj1CovanceMMS-435PMouse IgG2a, סמן פאן-אקסונלי, 1:500
נוגדן נגד MBPAbcamAB40390IgG פוליקלונלי של ארנב, סמן מיאלינציה, 1:200
נוגדן אנטי-טירוזין הידרוקסילאזChemiconAB152ארנב פוליקלונלי, סמן נוירון סימפתטי, 1:500
נוגדן נגד פריפריןChemiconAB1530ארנב פוליקלונלי, סמן נוירונים היקפי, 1:1000
נוגדן Anti-CD11bBio-RadMCA74GRat IgG2b, סמן תאים דלקתיים (מקרופאגים), 1:50
נוגדן Anti-CD45Thermo Fisher Scientific14-0451-85Rat IgG2b kappa, סמן תאים פאן-המטופויאטיים, 1:500
נוגדן Anti-CD3Bio-RadMCA1477Tחולדה IgG1, סמן תאי חיסון, 1:100
נוגדן Anti-CD45R (B220) ThermoFisher Scientific14-0452Rat IgG2a kappa, סמן תאים דלקתיים, 1:200
נוגדן נגד GFPThermo Fisher ScientificA11122ארנב פוליקלונלי, 1:300
נוגדן נגד GFPAbcamAb13970פוליקלונל עוף, 1:500
נוגדן Anti-β-galCappel55976ארנב פוליקלונלי, 1:5000
נוגדן נגד RFPAbcam Ab62341ארנב פוליקלונלי, 1:300
עיזים נגד ארנב IgG (H+L) Alexa 488Thermo Fisher ScientificA11034נוגדן משני פוליקלונלי ארנב, 1:250
נוגדן נגד אוגר עיזים IgG (H+L) Alexa 647Jackson Immuno research127-605-160נוגדן משני רב-שבטי של אוגר, 1:250
עיזים נגד חולדות IgG (H+L) Alexa 594Jackson Immuno Research112-585-167נוגדן משני פוליקלונלי של חולדות, 1:250
נוגדן משני נגד עכבר עיזים IgG2a Alexa 633Thermo Fisher ScientificA21136נוגדן משני IgG2a עכבר, 1:250

מקורות

  1. Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin. Cell. 109, 693-705 (2002).
  2. Mukouyama, Y. S., James, J., Nam, J., Uchida, Y. Whole-mount confocal microscopy for vascular branching morphogenesis. Methods Mol Biol. 843, 69-78 (2012).
  3. Li, W., Mukouyama, Y. S. Whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo. J Vis Exp. , (2011).
  4. Yamazaki, T., et al. Tissue Myeloid Progenitors Differentiate into Pericytes through TGF-beta Signaling in Developing Skin Vasculature. Cell Rep. 18, 2991-3004 (2017).
  5. Mukouyama, Y. S. Vessel-dependent recruitment of sympathetic axons: looking for innervation in all the right places. J Clin Invest. 124, 2855-2857 (2014).
  6. Li, W., et al. Peripheral nerve-derived CXCL12 and VEGF-A regulate the patterning of arterial vessel branching in developing limb skin. Dev Cell. 24, 359-371 (2013).
  7. Chang, H., Wang, Y., Wu, H., Nathans, J. Flat mount imaging of mouse skin and its application to the analysis of hair follicle patterning and sensory axon morphology. J Vis Exp. , e51749(2014).
  8. Salz, L., Driskell, R. R. Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin. J Vis Exp. , (2017).
  9. Liakath-Ali, K., et al. Novel skin phenotypes revealed by a genome-wide mouse reverse genetic screen. Nat Commun. 5, 3540(2014).
  10. Gunawan, M., et al. The methyltransferase Ezh2 controls cell adhesion and migration through direct methylation of the extranuclear regulatory protein talin. Nat Immunol. 16, 505-516 (2015).
  11. Avci, P., et al. Animal models of skin disease for drug discovery. Expert Opin Drug Dis. 8, 331-355 (2013).
  12. Jin, H., He, R., Oyoshi, M., Geha, R. S. Animal models of atopic dermatitis. J Invest Dermatol. 129, 31-40 (2009).
  13. Wagner, E. F., Schonthaler, H. B., Guinea-Viniegra, J., Tschachler, E. Psoriasis: what we have learned from mouse models. Nat Rev Rheumatol. 6, 704-714 (2010).
  14. Nunan, R., Harding, K. G., Martin, P. Clinical challenges of chronic wounds: searching for an optimal animal model to recapitulate their complexity. Dis Model Mech. 7, 1205-1213 (2014).
  15. O'Brien, P. D., Sakowski, S. A., Feldman, E. L. Mouse models of diabetic neuropathy. ILAR J. 54, 259-272 (2014).
  16. Yamazaki, T., et al. Whole-Mount Adult Ear Skin Imaging Reveals Defective Neuro-Vascular Branching Morphogenesis in Obese and Type 2 Diabetic Mouse Models. Sci Rep. 8, (2018).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

עצבים פריפרייםכלי דםצביעה אימונוהיסטוכימיתאותות פלואורסצנטייםארכיטקטורה תלת-ממדיתמודל עכבר
כולה-הר מיקרוסקופיה קונפוקלית לעור מבוגר האוזן: מערכת מודל ללמוד מורפוגנזה מסעף נוירו-וסקולרית והפצה תא החיסון
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.