אנו מציגים שיטה אשר יכול לספק עוד תובנות האירועים בתחילת שבבסיס הקשורים ניוון מוחיים, המבוססת על הטכניקה המוח הוקמה לשעבר-vivo , המשלב את היתרונות של ניסויים ב- vivo ו- in vitro לקשרי . יתר על כן, הוא מייצג הזדמנות ייחודית השוואה ישירה של קבוצת טיפול ללא טיפול באותו מישור אנטומיים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
גישה חלופית ללמוד העיקרי אירועים הקשורים ניוון מוחיים לשעבר Vivo עכברוש המוח בפרוסות
במאמר זה
סיכום
תקציר
למרות מחקרים רבים המנסים לפתח מודלים אמינים בעלי חיים אשר המשקף העיקרית תהליכים הקשורים ניוון מוחיים הבסיסית, מעטים התקבלו באופן נרחב. כאן, אנו מציעים הליך חדש מקורי ידועים שמחוץ המוח פרוסה הטכניקה, אשר מציעה יישום קרוב ויוו-כמו לתרחיש יותר במבחנה הכנות, על חקירת האירועים בתחילת מפעילה ניוון תאים, כמו נצפתה מחלת אלצהיימר (AD). וריאציה זו כוללת צעדים לשחזור בקלות ופשוט, המאפשר שימור cytoarchitecture האנטומי של האזור שנבחר המוח ופונקציונליות המקומית שלה וחשש פיזיולוגיים. ניתן להשיג במגוון תחומים אנטומיים המוח באותו, מתן האפשרות לבצע ניסויים מרובים עם הטיפולים המדובר האתר - מינון-, באופן תלוי-זמן. מגבלות פוטנציאליים, אשר עלול להשפיע על התוצאות הקשורות מתודולוגיה זו קשורים שימור הרקמה, קרי, שמירה על שלמותה אנטומי במהלך השלבים הדגירה וגזירה, העובי סעיף, אשר יכול להשפיע על הניתוח הביוכימי ו- immunohistochemical. גישה זו יכולה להיות מועסק למטרות שונות, כגון חקר המנגנונים המולקולריים המעורבים בתנאים פיזיולוגיים או פתולוגית, והתרופות הקרנה או מבחני מנה-תגובה. לבסוף, פרוטוקול זה גם יכול להפחית את מספר בעלי חיים המועסקים במחקרים התנהגותיים. היישום דיווחו כאן שתוארו לאחרונה ובדק בפעם הראשונה ב- ex-vivo עכברוש המוח פרוסות המכילות הקדמי הבזליים (BF), אשר הוא אחד האזורים במוח מושפע בעיקר לספירה. באופן ספציפי, זה הוכח כי הממשל של פפטיד רעילים שמקורם את קצה קרבוקסילי של אצטילכולין אסטראז (AChE) יכול לבקש פרופיל כמו AD, מפעילה, לאורך ציר גישה antero-אחוריים BF, ביטוי דיפרנציאלי של חלבונים שינו לספירה, כגון הקולטן nicotinic alpha7 (α7-nAChR), phosphorylated טאו (p-טאו), עמילואיד ביתא (Aβ).
מבוא
המודעה היא שמחלה כרונית המאופיינת על ידי ליקוי ניווניות הדרגתית להשפיע על אזורים שונים במוח, כגון entorhinal קליפת (EC), BF, ההיפוקמפוס (HC) וכן הריח הנורה (אבוב)1,2,3, 4,5. כך שהאח של AD התפתחות להוביל ירידה קוגניטיבית מתקדמת, גורם מחלה זו הצורה הנפוצה ביותר של דמנציה, והיוו כ-70% של המקרים כל6. למרות ניסיונות נרחב להבין בשלבים הראשונים גורם לספירה, אין כרגע אינדיקציה ניסיוני מוגדר שחקרתי אותם. בנוסף, התיאוריה המקובלת ביותר - "עמילואיד ההשערה" - נחקרת יותר ויותר מאז הוא אינו מספק פ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
מחקרים שנעשו בבעלי חיים כל בוצעו תחת פרוטוקולים שאושרו.
הערה: בחלק זה, רצף השלבים העיקריים שבוצעו במהלך ההליך ניסיוני, מרווח הזמן המוצע הינו מסופק (איור 1). יתר על כן, תיאור צעד אחר צעד של הפרוטוקול בתוספת לוח המחשה, מציג פעולות קריטיות ועד המוח להסרת רקמות המגון לאחר תקופת הדגירה (איור 2). הפרטים לגבי חומרים ו הוראות לבנות את המנגנון ואת השלב שלאחר מכן לניתוח WB הם שתואר לעיל22.
1. כלי ניתוח, Vibratome הגדרות והכנה לטיפול
הערה: בצע את השלבים הבאים לפני תחילת ההליך ניסיוני:
- להכין שני שונים מלא....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
פרוטוקול המובאת כאן מציין כי הממשל של פפטיד רעילים, T30, שמחליש באופן תלוי-אתר הביטוי של α7-nAChR, p-טאו, ו Aβ במקטעים המכילים BF (איור 3 א). הקולטן nicotinic מציג עלייה משמעותית hemislice rostral שטופלו לעומת המקביל שליטה (פרוסה 1, p = 0.0310) (איור 3B), בעוד הפרוסה ביניים אינו חושף כל שינוי בין (שני תנאים פרוסה 2, p = 0.1195) (איור 3B). במקטע האחורי הפחתה משמעותית קיים בחלק החשופי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
ההיבט העיקרי של פרוטוקול זה, המבוסס על טכניקת המוח ומבוססת ex-vivo , מאפשר לבחון באופן סינכרוני שני hemislices סימונים, המתקבל אותו מישור אנטומיים, ניטור התגובה שלהם לאחר היישום של ספציפי תנאי (לשלוט או לטפל); זה מציע לכן פרדיגמה נסיונית מבוקר חזק ככל האפשר. האפשרות של הערכת פעם, מינון-ו באופן ספציפי לאתר neurochemicals שונים הקשורים ליקוי עצביים, כפי שניתן לראות במהלך אירועים ניווניות22, מייצגת תכונה חיונית. מתודולוגיה זו מקשרת את היתרונות של סביבה ויוו פיזיולוגיים עם אלה של ההכ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים אינטרסים כלכליים מתחרים. סוזן א גרינפילד הוא מייסד נשיא מוגבלת נוירו-ביו, חברה בבעלות פרטית, מחזיק במניות החברה. כוח המוח עמנואלה, אנטונלה Cogoni עובדים של נוירו-ביו בע מ
תודות
עבודה זו מומן על ידי נוירו-ביו בע מ ברצוננו להודות Ferrati ג'ובאני ד ר ד ר סרג'יו ברוטונדו (נוירו-ביו) הערות, עצות על כתב היד.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נתרן כלורי (NaCl) | סיגמא-אולדריץ', גרמניה | S7653 | מגיב להכנת aCSF |
| אשלגן כלורי (KCl) | סיגמא-אולדריץ', גרמניה | P9333 | מגיב להכנת aCSF |
| נתרן ביקרבונט (NaHCO3) | סיגמא-אולדריץ', גרמניה | S5761 | מגיב להכנת aCSF |
| מגנזיום סולפט הפטהידראט (MgSO4 (7H2O)) | סיגמא-אולדריץ', גרמניה | 63138 | מגיב להכנת aCSF |
| אשלגן פוספט מונובייסי (KH2PO4) | סיגמא-אולדריץ', גרמניה | P5655 | מגיב להכנת aCSF |
| מלח הפס | סיגמא-אולדריץ', גרמניה | H7006 | מגיב להכנת aCSF |
| חומצת הפס | סיגמא-אולדריץ', גרמניה | H3375 | מגיב להכנת aCSF |
| גלוקוז | סיגמא-אולדריץ', גרמניה | מגיב G7528 | להכנת aCSF |
| סידן כלוריד מיובש | סיגמא-אולדריץ', גרמניה | 223506 | מגיב להכנת aCSF |
| פפטיד T30 | Genosphere Biotechnologies, צרפת | נבדק פפטיד שמקורו ב-AChE | |
| ערכת ניתוח כירורגית | World Precision Instruments, ארה"ב | פריט #: MOUSEKIT | שלב הסרת מוח |
| להבים כירורגיים | סוואן-מורטון, בריטניה | BS 2982 | הסרת מוח שלב |
| נייר סינון פישר | סיינטיפיק, ארה"ב | 11566873 | הכנת המוח לחיתוך |
| דבק | הכנת המוח לחיתוך | ||
| Vibratome | Leica, גרמניה | VT1000 S | מברשות |
| ברקמות | |||
| מיכל | חמצןשלב חיתוך ודגירה | ||
| 1x מי מלח מאגר פוספט (PBS) | פישר סיינטיפיק, ארה"ב | BP2438-4 | שלב הומוגניזציה |
| מעכבי פוספטאז | פישר סיינטיפיק, ארה"ב | 1284-1650 | שלב הומוגניזציה |
| מעכבי פרוטאז | רוש שלמים PIC, ארה"ב | 4693116001 | שלב הומוגניזציה |
| Pestles | Starlab, בריטניה | I1415-5390 | שלב הומוגניזציה |
| מיקרוצנטריפוגה | |||
| פירס 660 ננומטר בדיקת חלבון | תרמו מדעית, ארה"ב | 22660 | ריכוז חלבון |
מקורות
- Braak, H., Braak, E. Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes. Acta Neuropathologica. 82 (4), 239-259 (1991).
- Schliebs, R. Basal forebrain cholinergic dysfunction in Alzheimer's diseas....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
