הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

גישה חלופית ללמוד העיקרי אירועים הקשורים ניוון מוחיים לשעבר Vivo עכברוש המוח בפרוסות

6.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57507

⸱

11 באפריל 2018

 ,  , 
1Neuro-Bio Ltd, Building F5, Culham Science Centre

במאמר זה

סיכום

אנו מציגים שיטה אשר יכול לספק עוד תובנות האירועים בתחילת שבבסיס הקשורים ניוון מוחיים, המבוססת על הטכניקה המוח הוקמה לשעבר-vivo , המשלב את היתרונות של ניסויים ב- vivo ו- in vitro לקשרי . יתר על כן, הוא מייצג הזדמנות ייחודית השוואה ישירה של קבוצת טיפול ללא טיפול באותו מישור אנטומיים.

תקציר

למרות מחקרים רבים המנסים לפתח מודלים אמינים בעלי חיים אשר המשקף העיקרית תהליכים הקשורים ניוון מוחיים הבסיסית, מעטים התקבלו באופן נרחב. כאן, אנו מציעים הליך חדש מקורי ידועים שמחוץ המוח פרוסה הטכניקה, אשר מציעה יישום קרוב ויוו-כמו לתרחיש יותר במבחנה הכנות, על חקירת האירועים בתחילת מפעילה ניוון תאים, כמו נצפתה מחלת אלצהיימר (AD). וריאציה זו כוללת צעדים לשחזור בקלות ופשוט, המאפשר שימור cytoarchitecture האנטומי של האזור שנבחר המוח ופונקציונליות המקומית שלה וחשש פיזיולוגיים. ניתן להשיג במגוון תחומים אנטומיים המוח באותו, מתן האפשרות לבצע ניסויים מרובים עם הטיפולים המדובר האתר - מינון-, באופן תלוי-זמן. מגבלות פוטנציאליים, אשר עלול להשפיע על התוצאות הקשורות מתודולוגיה זו קשורים שימור הרקמה, קרי, שמירה על שלמותה אנטומי במהלך השלבים הדגירה וגזירה, העובי סעיף, אשר יכול להשפיע על הניתוח הביוכימי ו- immunohistochemical. גישה זו יכולה להיות מועסק למטרות שונות, כגון חקר המנגנונים המולקולריים המעורבים בתנאים פיזיולוגיים או פתולוגית, והתרופות הקרנה או מבחני מנה-תגובה. לבסוף, פרוטוקול זה גם יכול להפחית את מספר בעלי חיים המועסקים במחקרים התנהגותיים. היישום דיווחו כאן שתוארו לאחרונה ובדק בפעם הראשונה ב- ex-vivo עכברוש המוח פרוסות המכילות הקדמי הבזליים (BF), אשר הוא אחד האזורים במוח מושפע בעיקר לספירה. באופן ספציפי, זה הוכח כי הממשל של פפטיד רעילים שמקורם את קצה קרבוקסילי של אצטילכולין אסטראז (AChE) יכול לבקש פרופיל כמו AD, מפעילה, לאורך ציר גישה antero-אחוריים BF, ביטוי דיפרנציאלי של חלבונים שינו לספירה, כגון הקולטן nicotinic alpha7 (α7-nAChR), phosphorylated טאו (p-טאו), עמילואיד ביתא (Aβ).

מבוא

המודעה היא שמחלה כרונית המאופיינת על ידי ליקוי ניווניות הדרגתית להשפיע על אזורים שונים במוח, כגון entorhinal קליפת (EC), BF, ההיפוקמפוס (HC) וכן הריח הנורה (אבוב)1,2,3, 4,5. כך שהאח של AD התפתחות להוביל ירידה קוגניטיבית מתקדמת, גורם מחלה זו הצורה הנפוצה ביותר של דמנציה, והיוו כ-70% של המקרים כל6. למרות ניסיונות נרחב להבין בשלבים הראשונים גורם לספירה, אין כרגע אינדיקציה ניסיוני מוגדר שחקרתי אותם. בנוסף, התיאוריה המקובלת ביותר - "עמילואיד ההשערה" - נחקרת יותר ויותר מאז הוא אינו מספק פרופיל מלא להסביר את pathobiology לספירה, ולא מטרה התרופות הוכיח יעילות7,8 ,9.

תיאוריה חלופית אשר מקבל תשומת לב גדלה והולכת מרמז כי המנגנון הראשוני המתרחשים במהלך הקשורים ניוון מוחיים הקשורים מקבץ עצביים רגישים בעיקר לספירה3,10,11 , 12 , 13 , 14. רכזת הסלולר הטרוגנית זו הקיפה במסגרת הפרויקטים BF, המוח האמצעי, גזע המוח, באזורים מרובים, כגון ה EC, HC ו- OB15,16. למרות המגוון שלה מורפולוגיה עצביים, סינתזה נוירוטרנסמיטר, הגרעין של תאים משתף תכונה נפוצה לבטא כאב, אשר יכול להיות גם של פונקציה אנזימטי17,18. התפקיד-קלאסי זה כמו רומן איתות מולקולה שמתווכת סידן (Ca2 +) מזרימה נוירונים אשר יכול לחוות אירועים עם מחלות או רעילים ביחס במינון2 + Ca, זמינות ו עצביים בגיל17,18 , 19.

במהלך הקשורים ניוון מוחיים, אובדן תאי שנצפה יכול להיות לכן קשור עם זה פונקציה שאינה אנזימטי17,18,20, אשר אינה משרתת פפטיד 30mer (T30) ביקע מ כאב קרבוקסילי 20. בקנה אחד עם תוצאות קודמות, נישא על תרבית תאים וההכנות אופטי הדמיה18,21 , הפגנו, באמצעות גישה חדשנית המבוססת על שמחוץ עכברוש המוח פרוסות המכילות מבנים BF, שהביאה T30 המודעה דמוי22. באופן ספציפי, מתודולוגיה חדשה זו מציעה תרחיש פיזיולוגית יותר מאשר תרבית תאים מאז זה משמר רבים מהמאפיינים של רקמות ללא פגע, ועד אנטומי שימור המעגלים, גם אם עבור חלון זמן של שעות. אנחנו מוחלים פרוטוקול זה לחקור את האירועים המתרחשים במהלך השלבים המוקדמים של הקשורים ניוון מוחיים, ניטור התגובה חריפה עם יישום T30.

למרות גוף גדול של הספרות על משתמש במוח פרוסות לחקור מסלולים מולקולריים נרמז נזקים עצביים או23,נוירוג'נסיס24, פרוטוקול זה מספק בפעם הראשונה מיידי יותר, רגיש הקריא בהשוואה לשימוש משותף של פרוסות organotypic. עם זאת, כפי שקורה organotypic מקטעים המוח, הליך חריפה פרוסה יכול גם להיות מאומץ למספר מטרות, כגון הערכת neuroprotective או מולקולות העצבים, גילוי ראשוני השינויים המולקולריים המתרחשים תהליך ספציפי, immunohistochemical ניתוח ולאחר מבחני תרופתי על מערכת העצבים המרכזית הקשורים פתולוגיות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקרים שנעשו בבעלי חיים כל בוצעו תחת פרוטוקולים שאושרו.

הערה: בחלק זה, רצף השלבים העיקריים שבוצעו במהלך ההליך ניסיוני, מרווח הזמן המוצע הינו מסופק (איור 1). יתר על כן, תיאור צעד אחר צעד של הפרוטוקול בתוספת לוח המחשה, מציג פעולות קריטיות ועד המוח להסרת רקמות המגון לאחר תקופת הדגירה (איור 2). הפרטים לגבי חומרים ו הוראות לבנות את המנגנון ואת השלב שלאחר מכן לניתוח WB הם שתואר לעיל22.

1. כלי ניתוח, Vibratome הגדרות והכנה לטיפול

הערה: בצע את השלבים הבאים לפני תחילת ההליך ניסיוני:

  1. להכין שני שונים מלאכותי מוחי שדרתי נוזלים (aCSFs), אחד משמש את המוח עם פרוסות ותיאר השני לשלב הדגירה כאמור29. בקצרה, ריכוז העבודה (ב mmol) aCSFs שני מיועדים כלנית חדד "חותך": 120 NaCl, 5 אשלגן כלורי, 20 NaHCO3, 2.4 CaCl2, 2 MgSO4, 1.2 ח'2PO4ו- 10 גלוקוז; 6.7 HEPES מלח וחומצה HEPES 3.3; pH: 7.1. זמן כלנית חדד "רישום": 124 NaCl, 3.7 אשלגן כלורי, 26 NaHCO3, 2 CaCl2, 1.3 MgSO4, 1.3 ח'2PO4ו גלוקוז 10; pH: 7.1.
  2. מערבבים היטב את הפתרונות ואז לשים קרח, חמצן של כלנית חדד עם פרוסות על מנת שיהיה קר בעת הסרת את המוח ואת חלוקתה עוקבות. לשמור בטמפרטורת החדר (RT), אספקת חמצן חנה המבר ההקלטה.
  3. מניחים את המכשירים מתחת למכסה המנוע לנתיחה עבור הסרת עריפת ראש ומוח, קרי, גיליוטינה, ערכת חיתוך כירורגי (מספריים, מלקחיים, להבים), מרית.
  4. הגדר את פרמטרי vibratome על-ידי בחירת פרוסה בעובי (300 מיקרומטר בהכנה זו) ואת התדירות-7 ואת המהירות ב-6. הוספת תא vibratome בחלל המתאים שלה, להקיף אותו עם קרח.
  5. . פתח את הברז carbogen (95% או2, 5% CO2) לחמצן את "חיתוך" (חנה המבר) במהלך חלוקתה המוח בחר את קצב זרימה מינימלית, סביב 2 mL/min.
  6. קח שני צינורות 15-mL כדי להכין את התנאים כדי לבדוק. הוסף בשפופרת אחת 10 מיליליטר "רישום" כלנית חדד לבד (קבוצת הביקורת) וב -האחר, 10 מ"ל של כלנית חדד"רישום"מועשר T30-ריכוז של 2 מיקרומטר (קבוצת מטופלים). מערבולת שני צינורות, לשמור אותם על קרח עד השימוש בהם במסגרת שלב הכנת ההתקנה (סעיף 3).

2. הרדמה, המוח החילוץ וחלוקת

הערה: במחקר זה, 9 פראי סוג P14 הגברית Wistar חולדות שימשו. המוח החילוץ וחלוקת הבאים מהווים חלק הכרחי של הפרוטוקול מאז הם במהירות לבצע (במרחק של 10 דקות) על מנת למנוע או לפחות להאט תהליכי ניוון רקמות.

  1. להוסיף 1.5 מ ל 100% w/w של איזופלוריין על שכבה כותנה אל החדר אינדוקציה, למקם את. החיה בפנים, סגור את המכסה. המתן עד החיה עמוק הוא מורדם, המאשרת רפלקס פדלים, העדר, אז לכרות את החיה באמצעות הגיליוטינה.
  2. . תמשיך הראש של החיה בתוך סיר המכילה קרח לחבר חנה המבר במהלך השלב הסרת המוח (איור 2 א -C).
  3. תחתכי את העור על פני הגולגולת עם להב כירורגי, ואז לחתוך את הגולגולת באמצעות מספריים בעקבות האמצע, מן החלק האחורי והמשך anteriorly עד שהגיע העצם מעל מכשול (איור 2 א).
  4. משוך רוחבית שני הצדדים של הגולגולת בעזרת זוג מלקחיים כדי לקבל גישה אל המוח (איור 2B). הכנס מרית ventrally אל המוח, סקופ בעדינות החוצה, ושומרים את שזה להתייבש תוך קר כקרח יצחק "חותך" גרגיר במשך כ 5 דקות (איור 2C).
  5. תשליך את המוח על נייר סינון, לחתוך את המוח הקטן באמצעות להב (איור דו-ממדי). הדבק את המוח בצורה אנכית על הדיסק vibratome להוסיפו בתוך החדר אופטים, למלא אותו קר כקרח "חותך" כלנית חדד ו לספק חמצן (2E איור).
  6. . להתאים את מרווח חיתוך ולהמשיך חלוקתה המוח (2F איור). לאסוף את הסעיפים המכיל אזור מעניינים, כמו מחצה המדיאלי (MS), פס אלכסוני של ברוקה (DBB) ולאחר הסובסטנציה innominata (SI), כפי שתואר לעיל22. מלמעלה למטה, שלוש פרוסות להכיל את rostral (R), בינוני (I), (ג) סימטרית, חלק BF (איור 2G).
  7. לחלק לאורך קו האמצע כל מקטע עם מספריים קטנות, קבלת שני סימונים hemislices (איור 2 H), משמש בנפרד הפיקוח ואת תנאי שטופלו על אותו מישור אנטומיים.
  8. לשמור את hemisections בבית הבליעה vibratome למשך 5-10 דקות, ולאחר מכן להעביר אותם באמצעות פיפטה מזכוכית לתוך סיר מבעבע המכיל הקלטה כלנית חדד. שמור ב RT כ 30 דקות כדי להתאושש.
  9. למלא, בינתיים, שלוש מבחנות זכוכית עם 3 מ"ל של הקלטה חנה המבר לבד (בעבר להכין בשלב 1.6 עבור קבוצת הביקורת), שלוש מבחנות עם 3 מ של חנה המבר מועשר T30 (בעבר להכין בשלב 1.6) עבור קבוצת מטופלים.

3. הגדרת הכנה

  1. להעביר את hemisections לתוך צלוחיות זכוכית המתאימים שלהם (איור 2I) על מנת לקבל שלושה hemislices רצופים (כולל אזור BF rostral ביניים, סימטרית) עבור קבוצת הביקורת (מסגרת ירוקה, איור 2J) שלהם התאמת עמיתיהם עבור קבוצת מטופלים (מסגרת אדומה, איור 2J).
  2. העברה על רקמת המוח עם שתי מברשות שונות, אחת hemislices שליטה והשניה עבור עמיתיהם שטופלו, כדי למנוע כל זיהום בין תנאי.
  3. חותם כל בקבוקון זכוכית עם מכסה המתאים, מציגים את המחט oxygenating (21 גרם) (דמות 2J). לחבר את הצינור הראשי של המנגנון המקור carbogen (איור 2 K). לספק חמצן hemislices לאורך כל תקופת הדגירה עם קצב זרימה מינימלית של 2 מ לדקה על מנת למנוע כל תנועה של רקמת המוח, פגיעה מכנית אפשרית במהלך הניסוי. תתחיל הדגירה 5 שעות. בצע את השלבים 3.1-3.3 בתוך 5 דקות.
    הערה: סימון לעתים קרובות (כל 15-20 דקות) אם החמצן המסופקת לתוך כל הבקבוקונים, כי הזרימה שלו לא זזה הרקמה מלמטה.

4. דוגמת המגון

  1. מפסיקים את זרימת החמצן לאחר הדגירה ולהסיר את כל המכסים הבקבוקונים. להעביר את hemislices, באמצעות מברשות נכונה, לתוך צינורות 1.5 mL המכיל 250 µL מאגר פירוק, שמירה על הצינורות על קרח (איור 2 L). כדי להפוך את פירוק מאגר, לערבב PBS 1 x עם קוקטיילים מעכבי פוספטאז, פרוטאז מדולל-מטריים, והן homogenize הרקמה עם בקווקז שונים למניעת זיהום בין הדגימות. להשלים את פעולות אלה תוך 10-15 דקות.
  2. Centrifuge המוח lysate-1000 g x עבור 5 דקות ב 4 º C. להעביר את תגובת שיקוע לתוך צינורות חדשים, שומרים את הדגימות ב-80 מעלות צלזיוס.

5. קריאה של חלבונים ריכוז וניתוח תספיג חלבון

  1. לקבוע את ריכוז חלבון כל דגימה, לאחר מכן להכין את aliquots לניתוח תספיג כפי שתואר לעיל22.
  2. לבצע ניתוח סטטיסטי כדי להעריך את השפעת הטיפול על ביטוי חלבון.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

פרוטוקול המובאת כאן מציין כי הממשל של פפטיד רעילים, T30, שמחליש באופן תלוי-אתר הביטוי של α7-nAChR, p-טאו, ו Aβ במקטעים המכילים BF (איור 3 א). הקולטן nicotinic מציג עלייה משמעותית hemislice rostral שטופלו לעומת המקביל שליטה (פרוסה 1, p = 0.0310) (איור 3B), בעוד הפרוסה ביניים אינו חושף כל שינוי בין (שני תנאים פרוסה 2, p = 0.1195) (איור 3B). במקטע האחורי הפחתה משמעותית קיים בחלק החשופי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

ההיבט העיקרי של פרוטוקול זה, המבוסס על טכניקת המוח ומבוססת ex-vivo , מאפשר לבחון באופן סינכרוני שני hemislices סימונים, המתקבל אותו מישור אנטומיים, ניטור התגובה שלהם לאחר היישום של ספציפי תנאי (לשלוט או לטפל); זה מציע לכן פרדיגמה נסיונית מבוקר חזק ככל האפשר. האפשרות של הערכת פעם, מינון-ו באופן ספציפי לאתר neurochemicals שונים הקשורים ליקוי עצביים, כפי שניתן לראות במהלך אירועים ניווניות22, מייצגת תכונה חיונית. מתודולוגיה זו מקשרת את היתרונות של סביבה ויוו פיזיולוגיים עם אלה של ההכ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים אינטרסים כלכליים מתחרים. סוזן א גרינפילד הוא מייסד נשיא מוגבלת נוירו-ביו, חברה בבעלות פרטית, מחזיק במניות החברה. כוח המוח עמנואלה, אנטונלה Cogoni עובדים של נוירו-ביו בע מ

תודות

עבודה זו מומן על ידי נוירו-ביו בע מ ברצוננו להודות Ferrati ג'ובאני ד ר ד ר סרג'יו ברוטונדו (נוירו-ביו) הערות, עצות על כתב היד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
נתרן כלורי (NaCl)סיגמא-אולדריץ', גרמניהS7653מגיב להכנת aCSF
אשלגן כלורי (KCl)סיגמא-אולדריץ', גרמניהP9333מגיב להכנת aCSF
נתרן ביקרבונט (NaHCO3)סיגמא-אולדריץ', גרמניהS5761מגיב להכנת aCSF
מגנזיום סולפט הפטהידראט (MgSO4 (7H2O))סיגמא-אולדריץ', גרמניה63138מגיב להכנת aCSF
אשלגן פוספט מונובייסי (KH2PO4)סיגמא-אולדריץ', גרמניהP5655מגיב להכנת aCSF
מלח הפססיגמא-אולדריץ', גרמניהH7006מגיב להכנת aCSF
חומצת הפססיגמא-אולדריץ', גרמניהH3375מגיב להכנת aCSF
גלוקוזסיגמא-אולדריץ', גרמניהמגיב G7528להכנת aCSF
סידן כלוריד מיובשסיגמא-אולדריץ', גרמניה223506מגיב להכנת aCSF
פפטיד T30Genosphere Biotechnologies, צרפתנבדק פפטיד שמקורו ב-AChE
ערכת ניתוח כירורגיתWorld Precision Instruments, ארה"בפריט #: MOUSEKITשלב הסרת מוח
להבים כירורגייםסוואן-מורטון, בריטניהBS 2982הסרת מוח שלב
נייר סינון פישרסיינטיפיק, ארה"ב11566873הכנת המוח לחיתוך
דבקהכנת המוח לחיתוך
VibratomeLeica, גרמניהVT1000 Sמברשות
ברקמות
מיכלחמצןשלב חיתוך ודגירה
1x מי מלח מאגר פוספט (PBS)פישר סיינטיפיק, ארה"בBP2438-4שלב הומוגניזציה
מעכבי פוספטאזפישר סיינטיפיק, ארה"ב1284-1650שלב הומוגניזציה
מעכבי פרוטאזרוש שלמים PIC, ארה"ב4693116001שלב הומוגניזציה
PestlesStarlab, בריטניהI1415-5390שלב הומוגניזציה
מיקרוצנטריפוגה
פירס 660 ננומטר בדיקת חלבוןתרמו מדעית, ארה"ב22660ריכוז חלבון
חיתוך טיפול

מקורות

  1. Braak, H., Braak, E. Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes. Acta Neuropathologica. 82 (4), 239-259 (1991).
  2. Schliebs, R. Basal forebrain cholinergic dysfunction in Alzheimer's disease--interrelationship with beta-amyloid, inflammation and neurotrophin signaling. Neurochemical Research. 30 (6-7), 895-908 (2005).
  3. Schmitz, T. W., et al. Basal forebrain degeneration precedes and predicts the cortical spread of Alzheimer's pathology. Nature Communications. 7, 13249(2016).
  4. Fjell, A. M., McEvoy, L., Holland, D., Dale, A. M., Walhovd, K. B. Alzheimer's Disease Neuroimaging Initiative. What is normal in normal aging? Effects of aging, amyloid and Alzheimer's disease on the cerebral cortex and the hippocampus. Progress in neurobiology. 117, 20-40 (2014).
  5. Kovács, T., Cairns, N. J., Lantos, P. L. Olfactory centres in Alzheimer's disease: olfactory bulb is involved in early Braak's stages. Neuroreport. 12 (2), 285-288 (2001).
  6. Winblad, B., et al. Defeating Alzheimer's disease and other dementias: a priority for European science and society. The Lancet Neurology. 15 (5), 455-532 (2016).
  7. Herrup, K. The case for rejecting the amyloid cascade hypothesis. Nat Neurosci. 18 (6), 794-799 (2015).
  8. De Strooper, B., Karran, E. The Cellular Phase of Alzheimer's Disease. Cell. 164 (4), 603-615 (2016).
  9. Scheltens, P., et al. Alzheimer's disease. Lancet. 388 (10043), 505-517 (2016).
  10. Arendt, T., Brückner, M. K., Lange, M., Bigl, V. Changes in acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase in Alzheimer's disease resemble embryonic development-A study of molecular forms. Neurochemistry International. 21 (3), 381-396 (1992).
  11. Auld, D. S., Kornecook, T. J., Bastianetto, S., Quirion, R. Alzheimer's disease and the basal forebrain cholinergic system: relations to β-amyloid peptides, cognition, and treatment strategies. Progress in Neurobiology. 68 (3), 209-245 (2002).
  12. Arendt, T., Bruckner, M. K., Morawski, M., Jager, C., Gertz, H. J. Early neurone loss in Alzheimer's disease: cortical or subcortical? Acta Neuropathol Commun. 3, 10(2015).
  13. Mesulam, M. The Cholinergic Lesion of Alzheimer's Disease: Pivotal Factor or The Cholinergic Lesion of Alzheimer's Disease: Pivotal Factor or Side Show? Learn Mem. , 43-49 (2004).
  14. Schliebs, R., Arendt, T. The cholinergic system in aging and neuronal degeneration. Behavioural Brain Research. 221 (2), 555-563 (2011).
  15. Mesulam, M. M., Mufson, E. J., Wainer, B. H., Levey, A. I. Central cholinergic pathways in the rat: An overview based on an alternative nomenclature (Ch1-Ch6). Neuroscience. 10 (4), 1185-1201 (1983).
  16. Mesulam, M., Mufson, E. J., Levey, A. I., Wainer, B. H. Cholinergic innervation of cortex by the basal forebrain: cytochemistry and cortical connections of the septal area, diagonal band nuclei, nucleus basalis (substantia innominata), and hypothalamus in the rhesus monkey. J Comp Neurol. 214 (2), 170-197 (1983).
  17. Greenfield, S. Discovering and targeting the basic mechanism of neurodegeneration: The role of peptides from the C-terminus of acetylcholinesterase: Non-hydrolytic effects of ache: The actions of peptides derived from the C-terminal and their relevance to neurodegenerat. Chemico-Biological Interactions. 203 (3), 543-546 (2013).
  18. Garcia-Ratés, S., et al. (I) Pharmacological profiling of a novel modulator of the α7 nicotinic receptor: Blockade of a toxic acetylcholinesterase-derived peptide increased in Alzheimer brains. Neuropharmacology. 105, 487-499 (2016).
  19. Eimerl, S., Schramm, M. The quantity of calcium that appears to induce neuronal death. Journal of neurochemistry. 62 (3), 1223-1226 (1994).
  20. Greenfield, S., Vaux, D. J. Commentary Parkinson's Disease, Alzheimer's Disease and Motor Neurone Disease: Identifying a Common Mechanism. Science. 113 (3), 485-492 (2002).
  21. Badin, A. S., Morrill, P., Devonshire, I. M., Greenfield, S. A. (II) Physiological profiling of an endogenous peptide in the basal forebrain: Age-related bioactivity and blockade with a novel modulator. Neuropharmacology. 105, 47-60 (2016).
  22. Brai, E., Stuart, S., Badin, A. -S., Greenfield, S. A. A Novel Ex Vivo Model to Investigate the Underlying Mechanisms in Alzheimer's Disease. Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 291(2017).
  23. Cho, S., Wood, A., Bowlby, M. R. Brain slices as models for neurodegenerative disease and screening platforms to identify novel therapeutics. Current neuropharmacology. 5 (1), 19-33 (2007).
  24. Humpel, C. Organotypic brain slice cultures: A review. Neuroscience. 305, 86-98 (2015).
  25. Sakmann, B., Neher, E. Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes. Annual review of physiology. 46, 455-472 (1984).
  26. Jensen, M. S., Lambert, J. D. C., Johansen, F. F. Electrophysiological recordings from rat hippocampus slices following in vivo brain ischemia. Brain Research. 554 (1-2), 166-175 (1991).
  27. Ferrati, G., Martini, F. J., Maravall, M. Presynaptic Adenosine Receptor-Mediated Regulation of Diverse Thalamocortical Short-Term Plasticity in the Mouse Whisker Pathway. Frontiers in Neural Circuits. 10, 1-9 (2016).
  28. Grinvald, A., Hildesheim, R. VSDI: a new era in functional imaging of cortical dynamics. Nature Reviews Neuroscience. 5 (11), 874-885 (2004).
  29. Badin, A. S., John, E., Susan, G. High-resolution spatio-temporal bioactivity of a novel peptide revealed by optical imaging in rat orbitofrontal cortex in vitro: Possible implications for neurodegenerative diseases. Neuropharmacology. 73, 10-18 (2013).
  30. Greenfield, S. A., Badin, A. S., Ferrati, G., Devonshire, I. M. Optical imaging of the rat brain suggests a previously missing link between top-down and bottom-up nervous system function. Neurophotonics. 4, 31213(2017).
  31. Opitz-Araya, X., Barria, A. Organotypic hippocampal slice cultures. Journal of visualized experiments: JoVE. (48), (2011).
  32. Gong, C. -X., Lidsky, T., Wegiel, J., Grundke-Iqbal, I., Iqbal, K. Metabolically active rat brain slices as a model to study the regulation of protein phosphorylation in mammalian brain. Brain Research Protocols. 6 (3), 134-140 (2001).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

פרוסות מוח ex vivoמחקר ניוון עצביחיתוך מוחהכנת חצי-פרוסה (Hemislice)נוזלe cerebrospinal מלאכותיחיתוך בויברטוםהומוגניזציה של רקמהאנליזת Western Blotאנליזה אימונוהיסטוכימית
גישה חלופית ללמוד העיקרי אירועים הקשורים ניוון מוחיים לשעבר Vivo עכברוש המוח בפרוסות
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.