חיטוט מעבר לגבולות ביצים זיהוי באמצעות ניסויים דחייה ביצה לאורך מעברי צבע פנוטיפי

Summary

פרוטוקול זה מספק הנחיות להפעלת ביצה דחייה ניסויים: חלוקה טכניקות ציור ניסיוני ביצה מודלים כדי לחקות את הצבעים של ביצים טבעי ציפור, ביצוע עבודת שטח, וניתוח הנתונים שנאספו. פרוטוקול זה מספק שיטה אחידה עבור ניסויים דחייה ביצה דומות.

Abstract

טפילים שבוחרים מטילים את ביציהם ב קינים של נקבות אחרות, עוזב את ההורים המארחים לבקוע, גוזליהן. טפילים שבוחרים כיצד לומד לתפעל מחשבים מארחים לתוך לגדל את צאצאיהם ולגלות כיצד מארחים הטפילות לספק תובנות חשובות בתחום הביולוגיה coevolutionary. טפילים מיוחמת, כגון בקוקיות, cowbirds, להשיג יתרון אבולוציוני כי אין להם לשלם את העלויות של גידול את צאצאיהם. עם זאת, עלויות אלה בחר עבור המארח הגנות נגד בכל שלבי טפילים, כולל ביצים, שלהם צעירים, ומבוגרים התפתחותית. ביצה דחייה ניסויים הם השיטה הנפוצה ביותר המשמשות ללימוד מארח את ההגנות. במהלך ניסויים אלה, חוקר מקומות ביצה ניסיוני בקן המארח, מפקח על מה מחשבים מארחים מגיבים. צבע לעיתים קרובות מטופל, הצפי הוא כי הסבירות של אפליה ביצה ואת מידת dissimilarity בין המארח לבין ביצה ניסיוני קשורים באופן חיובי. נייר זה משמש מדריך עבור ניסויים ביצה דחייה של המתארת שיטות ליצירת צבעים עקביים ביצה לניתוח ממצאי ניסויים אלה. תשומת לב מיוחדת ניתנת שיטה חדשה הכוללת ביצים צבעוניות באופן ייחודי לאורך מעברי צבע בעל הפוטנציאל לחקור צבע הטיות בזיהוי המארח. ללא תקינה, זה בלתי אפשרי להשוות בין ממצאים בין מחקרים באופן משמעותי; פרוטוקול תקני בתוך שדה זה יאפשר יותר ויותר מדויק ותוצאות דומות לניסויים נוספים.

Introduction

טפילים שבוחרים מטילים את ביציהם ב קינים של מינים אחרים ייתכן ואז לגדל את צאצאם, לשלם את עלויות טיפול הורים^1,2,3. מעשה זה של הונאה להערים על המחשב המארח של הטפיל, בילוש כדי לאתר את הטפיל מצד המארח מספק לחצים בררניים חזק על שני שחקנים. במקרים מסוימים של העופות הטפילות מיוחמת, הזיהוי של המחשב המארח של ביצי טפילים שונים בוחר עבור טפילים המחקים מארח ביצים, המייצרת ומירוץ החימוש האבולוציוני בין המחשב המארח וטפיל⁴. לומד הטפילות מיוחמת הוא חשוב כי זה מערכת מודל עבור חוקרים coevolutionary dynamics, קבלת ההחלטות ב- בר⁵. ביצה דחייה ניסויים הם אחת השיטות הנפוצות ביותר עבור העופות הטפילות שבוחרים את השדה ואת כלי חשוב המשתמשות האקולוגים לחקור אינטראקציות interspecific⁶.

במהלך הניסויים דחייה ביצה, חוקרים בדרך כלל להציג את הטבע או מודל ביצים ולא להעריך את התגובה של המחשב המארח הביצים ניסיוני על פני תקופה סטנדרטית. ניסויים אלה יכול לכלול החלפת ביצים אמיתי (כלומר להשתנות במראה) בין קינים⁷, או צביעה או ציור של משטחי אמיתי ביצים (לחלופין הוספת תבניות), חוזרים אותם קינים המקורי שלהם⁸, או יצירת מודל ביצים זה יש מניפולציות תכונות כגון צבע⁹, סיכוייכם¹⁰, גודל¹¹, ו/או צורה¹². התגובה מארח ביצים של המראה משתנה יכול לספק תובנות בעלות ערך לתוך התוכן מידע שהם משתמשים כדי להגיע של החלטת הדחייה ביצה¹³ ו שונה זה מושלם, צריך להיות שמעודדים תגובה¹⁴. קבלה אופטימלית הסף התיאוריה¹⁵ מדינות מארחים צריך לאזן את הסיכונים של בטעות לקבל ביצה טפילי (קבלה שגיאה) או בטעות הסרת משלהם ביצה (שגיאה של דחייה) על-ידי בדיקת ההבדל בין ביצים שלהם (או תבנית פנימית של הביצים האלו) את הביצים טפילית. בתור שכזה, סף קבלה קיים מעבר אשר מארחים להחליט שגירוי שונה גם לסבול. כאשר הטפילות סיכון נמוך, הסיכון של קבלת שגיאות הוא נמוך יותר מאשר כאשר הסיכון של טפיל הוא גבוה; לפיכך, החלטות בהקשר ספציפי, יעבור כראוי כמו סיכונים נתפס השינוי^14,16,17.

התיאוריה סף קבלה אופטימלית מניח מארחים לבסס החלטות על רציף וריאציה של פנוטיפים המארח, טפיל. לכן, מדידת מארח התגובות פנוטיפים טפיל שונים יש צורך לבסס אוכלוסיה המארח (עם וריאציה פנוטיפי משלו) איך סובלני הוא מגוון פנוטיפים טפילי. עם זאת, כמעט כל מחקרים קודמים צריכים לסמוך על הביצה קטגורית צבע maculation וטיפולי (למשל, מימטי/הלא-מימטי). רק אם מארח הדקה פנוטיפים לא משתנים, אשר אינה ציפייה מעשית מבחינה ביולוגית, כל התגובות יהיה כמו ישירות (ללא קשר למידת חיקוי). אחרת, מודל "מימטי" ביצה ישתנו ב עד כמה דומה זה מארח ביצים בתוך ובין האוכלוסיות, שעשויה להוביל לבלבול בעת השוואת הממצאים¹⁸. התיאוריה מרמזת על מארח החלטות מבוססים על ההבדל בין הביצה טפיליות משלהם¹⁴, לא בהכרח צבע מסוים ביצה טפילית. לכן באמצעות סוג מודל ביצה בודדת אינה גישה אידיאלי כדי לבדוק השערות על סף החלטה מארח או יכולות אפליה, אלא אם ההבדל מורגש רק (להלן JND) בין ביצה סוג מודל צבע הביצה בודדים מארח משתנה של עניין. זה חל גם על מחקרים ניסיוניים להחליף או להוסיף ביצים טבעי לבחון תגובות מארח מגוון צבעים¹⁹טבעי. עם זאת, בעוד מחקרים אלה לאפשר וריאציה של פנוטיפים המארח, טפיל, הם מוגבלים על ידי וריאציה טבעי נמצאו תכונות⁶, במיוחד בעת שימוש ביצים conspecific⁷.

לעומת זאת, חוקרים להכין ביצים מלאכותי של צבעים מגוונים חופשיים מן האילוצים של וריאציה טבעי (למשל, הם יכולים לחקור את התגובות superstimuli²⁰), ומאפשר להם לחקור את גבולות התפיסה מארח⁶. מחקרים אחרונים השתמשה טכניקות הרומן כדי למדוד את המארח תגובות על פני מגוון פנוטיפי, על ידי ציור ביצים ניסיוני שנועד להתאים ואפילו לעלות על הטווח הטבעי של וריאציה של קליפת הביצה⁹ וצבעי ספוט²¹. לומדת המחשב המארח התגובות ביצים עם צבעים לאורך מעברי צבע יכול לחשוף תהליכים קוגניטיביים שבבסיס משום תחזיות תיאורטיות, כמו ספי קבלה¹⁵ או חיקוי coevolved⁴, מבוססים על הבדלים רציף בין תכונות. לדוגמה, על-ידי שימוש בגישה זו, Dainson. et al. ²¹ הקים כי כאשר הניגוד כרומטית בין הקרקע הדקה הגיוון צבע ספוט גבוה יותר, רובין אמריקאי ציור migratorius נוטה לדחות את הביצים בצורה חזקה יותר. ממצא זה מספק תובנות על כיצד מארח זה מעבד מידע, במקרה זה דרך הבחינה, כדי להחליט אם להסיר ביצה טפילית. על-ידי התאמה אישית של תערובות צבע, החוקרים שניתן לטפל בדיוק רב הדמיון בין ביצה ניסיוני הצבע וצבע ביצה של המחשב המארח, בעוד האחדת גורמים אחרים מבלבלים כגון איתור תבניות¹⁰, ביצה בגודל²² וביצה בצורת²³.

כדי לעודד את נוספת metareplication ושכפול²⁴ ביצה קלאסי ושהיו דחייה בעבודה, חשוב כי מדענים משתמשים אשר מתוקננים מעבר טקסונומי (מארח שונים מינים)^7,22, שטח (אוכלוסיות מארח שונים)^7,22,25,26 וזמן (עונות רבייה שונים)^{7,22,25,26 ,27}, אשר נעשה רק לעתים רחוקות. מתודולוגיות שלא היו מתוקננת²⁸ מאוחר יותר הוצגו להוביל לתוצאות artefactual^29,30. נייר זה משמש סט של הנחיות עבור חוקרים המבקשים לשכפל את זה סוג של ניסוי דחייה ביצה זה בוחן את התגובות וריאציה רציף והוא מבליט מספר מושגים חשובים מתודולוגי: החשיבות של שליטה קינים, אפריורי השערות, metareplication, pseudoreplication, ואת צבע ניתוח ספקטרלי. למרות ניסויים דחייה ביצה שולטים במגרש של קו-אבולוציה מארח העופות-טפיל, פרוטוקולים מקיפה לא קיימת עדיין. לכן, קווים מנחים אלה יהיה משאב יקר-ערך כדי להגדיל את אינטר - ו אינטרה-lab הדיר כמו המבחן האמיתי של כל השערה טמון metareplication, כלומר, חוזר כל מחקרים על פני האמיניות, מרחב וזמן²⁴, אשר והכוונה מתבצעת רק כאשר משתמשים בשיטות עקבי^29,30,31.

Protocol

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של אוניברסיטת לונג איילנד-Post.

1. לערבב אקריליק מצייר

1. מערבבים צבע הקרקע הדקה, אשר הוא הצבע אחיד יכסה את כל פני השטח קליפת הביצה. המתכון הבא יגרום 50 גרם של צבע, אשר ימלא קצת יותר משתי שפופרות צבע אלומיניום 22 מ"ל.
   1. ליצור צבע כחול-ירוק, המייצג את קליפת ביצה כחול-ירוק (למשל, אליפטי רובין אמריקאי migratorius ט ), באמצעות 18.24 גר' קובלט טורקיז בהיר, 20.77 גר' titanium לבן גר' 6.52 קובלט ירוק, ו- 2.86 g של טורקיז קובלט ו- 1.61 g של umber שרוף.
   2. ליצור צבע חום, המייצג את קליפת ביצה חומה (למשל, של קליפת ביצה גאלוס גאלוס דומסטיקוס עוף), באמצעות 4.12 g של תחמוצת ברזל אדום, 9.75 גר' תפוז קדמיום, g 22.15 האור umber raw ו- g 13.97 טיטניום לבן.
   3. ליצור צבע בז, המייצג את קליפת ביצה בז (למשל, של קליפת ביצה japonica שליו שליו), באמצעות 10.60 גר' צבע ביצה חומה, g 8.28 בצבע כחול-ירוק, g 18.51 טיטניום לבן ו- 12.61 גר' אוכרה צהובה.
   4. יוצרות צבע לבן באמצעות טיטניום לבן ללא ערבוב.
2. מערבבים צבע ספוט חום כהה המייצג את הנקודות על שליו japonica ג ביצים, באמצעות 8.38 גר' צבע ביצה חומה, 26.04 גר' umber שרוף 15.59 גר' מאדים שחור.
3. לערבב צבעי ביניים פורש הדקה ערכת הצבעים של כחול-ירוק להזהיב, על ידי ערבוב צבעים כחול-ירוק וחום ביחד ושלל תרומתם קישור הדדי (לדוגמה, חלקים של כחול-ירוק עד צבע חום: 10:0, 9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5. 4:6, 3:7, 2:8, 1:9, ו- 0:10, ראה איור 1E).
   1. כדי להפיק יותר צבעי ביניים, פשוט מערבבים יחד אפילו כמויות אלה צבעי ביניים וחזור עד ליצירת מספר צבעים ייחודיים הרצוי. אפילו עירוב של כחול-ירוק וחום יפיקו צבע אפור נייטרלי, אבל הצבע הזה ניתן להגדרה באמצעות לבן או בז לפי הצורך. אם צבע מדויק יותר (למשל, של ביצה הוסט ספציפי) דרושה, השתמש בצבע מופחתים ערבוב מודלים כדי לחזות את השתקפות ספקטרלי של שילוב ייחודי של צבעים ולהשתמש התערובת בהפקת הנמוך ביותר (JND) הבדל ניכר רק אל רצוי צבע (ראה שלבים 3.3 – 3.7).
4. לאחסן צבע שפופרות צבע אלומיניום mL 22 ריק.
   1. מקם את הצבע לתוך שקית פלסטיק כריך עם חלק קטן בפינה אחת לחתוך. חבר את הקצה של שקית הניילון לתוך הצינור וסוחטים הצבע לתוך הצינורית, הקשה על הצינור בעדינות כנגד השולחן.
   2. חותם הצינור משתמש הקצה דבק קיפול הסוף על עצמה לפחות 3-4 פעמים.

2. לצייר ביצה ניסיוני דוגמניות

1. להשיג ביצה ניסיוני מודלים.
   1. הדפס דגם ביצים באמצעות תלת ממדית (מכאן והלאה, 3D) למדפסת או קנייה מפיץ²⁸. גישה פשוטה זו מומלצת כי היא מייצרת ביצים שאינן בגודל אחיד, לעצב²⁸.
      הערה: מודל ביצים אפשר גם להפוך לסוג של גבס, חימר, עץ או חומרים אחרים.
2. להוסיף על המעיל אפילו של טיטניום לבן על כל ביצה כדי להכשיל את הצבע המשמש כבסיס.
3. להחזיק כל ביצה באמצעות מלקחיים, לצבוע בצבע הרצוי באמצעות צבעי אקריליק איכותיים, מברשת נקייה כדי לצבוע כל ביצה בצורה ייחודית.
4. להשתמש מייבש שיער מגניב הגדרת כדי להאיץ את תהליך הייבוש של כל ביצה הטרי.
5. השתמש עם נייר זכוכית לחול. למטה יש בליטות שעשויים להיות על הביצה פעם הביצה הוא יבש לחלוטין.
   1. חזור על שלב 2.3 עד הביצה יש ציפוי מבטל אפילו צבע ללא בליטות. ביצים דורשים לא פחות משתי שכבות.
6. להוסיף מקומות פנויים דגם הביצים בזהירות החלת אלה באמצעות מברשת צבע, spattering בקפידה את הצבע עם מברשת שיניים. רק שכבה אחת היא הכרחית.
   התראה: אם שכפול אולטרה סגול (UV) השתקפות רצוי, להחיל על שכבת אפילו UV צבע; עם זאת, לא מומלץ אלא אם כן הרשאה לשימוש צבעים אלה המתקבל מוסדיים המדינה/מחוזי, פדרלי המתיר משרדים.

3. לכימות צבע

1. הפעל את ספקטרומטר על-ידי לחיצה על לחצן ההפעלה.
2. כרטיס SD הוספה לתוך חריץ לכרטיס SD ולקשר אותו למערכת על-ידי הקשת האדום לבטל לחצן, בחר "מערכת הקבצים" על-ידי לחיצה על כפתור מסכים ירוקים, בחר "למצוא כרטיסי SD" על ידי לחיצה על תפריט לחצן למעלה. לאחר מכן, לחץ על לחצן ביטול אדום שני פעמים, או על ידי לחיצה על כפתור הבית.
3. לצרף את כבלי סיבים אופטיים ספקטרומטר ואור המקור.
   1. צרף לסוף מתויג "מקור אור" במודול אור וצרף הסוף מתויג "ספקטרומטר" במודול ספקטרומטר.
4. הכנס את הטיפ בדיקה בקצה של החללית סיבים אופטיים.
   הערה: דוגמה בדיקה עצה להדפסה במדפסת תלת-ממד זמינה בתור קובץ קוד משלים. אובייקט זה ידרוש שרשור של בורג כנף של הבחירה שלך.
   1. ליצור מרחק (למשל, 5 מ מ) בין הדגימה והבדיקה מדידה שימקסם את האות לרעש יחס. ודא מרחק מדידה עקבית באמצעות סרגל גמיש.
      הערה: המרחק המדויק משתנה בשילוב ייחודי של כל ספקטרומטר בודדים של הסורג ואת רוחב חריץ רוחב סיב אופטי, מקור האור. לשמור על המרחק זהה עבור כל המדידות. כלל גמיש הוא זמין להורדה כקובץ קוד משלים.
   2. השתמש זווית וצירוף מדידה רגילה (90 מעלות), אלא אם כן המארח טבעי ביצים או מודל ביצים יש משטח מבריק, ובמקרה להשתמש בזווית של 45° וצירוף למדידה עקיפה. למדוד את כל הביצים, אמיתי, מלאכותיים, תוך שימוש באותה הזווית.
   3. לשטוף את הטיפ בדיקה עם 95% אתנול.
5. להפעיל מקור האור על-ידי לחיצה על הכפתור למטה שלוש פעמים, בחר PX-המנורה על-ידי לחיצה על כפתור מסכים ירוקים, בחר התקנה על ידי לחיצה על הלחצן הימני הגלילה, בחר "בקרי תזמון" על ידי לחיצה על הלחצן הימני גלילה, לחץ על הגבעה לחצן שלוש פעמים ולאחר מכן בחר לרוץ חופשי על ידי לחיצה לחצן קבל.
   1. המתן לפחות 15 דקות לפני כל מדידה.
6. לכייל ולהגדיר את ספקטרומטר. כדי לעשות זאת, הקש על כפתור הבית, ולאחר מכן בחר "כלים" על ידי לחיצה על המגילה שמאלה לחצן, בחר "שליטה ידנית" על ידי לחיצה על תפריט לחצן למעלה ובחר "לרכוש פרמטרים של" על ידי לחיצה על תפריט לחצן למעלה.
   1. הגדר שהקרון החלקה ל-5 על-ידי לחיצה על לחצן הגלילה ימינה, הזזת הסמן ימינה שניים לרווחים על-ידי לחיצה על לחצן הגלילה ימינה פעמיים ולאחר מכן הגדלת הגדרת שהקרון על ידי לחיצה על תפריט לחצן למעלה חמש פעמים. בחר "מסכים" על-ידי לחיצה על כפתור ירוק קבל פעם אחת להשלים.
   2. קבע ממוצעים עד 10 על-ידי לחיצה על תפריט לחצן ולאחר מכן הזזת ימינה בשני מקומות על-ידי לחיצה על לחצן הגלילה ימינה פעמיים ושינוי הערך בעשרות במקום על ידי לחיצה על תפריט לחצן למעלה פעם ועובר לגור אלה במקום על ידי הקשה על o הלחצן הימני את המגילה nce, להפחית את זה לאפס על-ידי הקשה אחת על תפריט לחצן. בחר "מסכים" על-ידי לחיצה על כפתור ירוק קבל פעם אחת להשלים.
   3. לחצו על כפתור הבית, בחר השתקפות על ידי לחיצה על תפריט לחצן למעלה ולאחר למקם את המכשיר בחוזקה על תקן לבן. אז לאחסן תקן התייחסות לבן על ידי לחיצה על תפריט לחצן למעלה. לאחסן תקן כהה על ידי לחיצה על הלחצן הימני הגלילה ולהציג את השתקפות על ידי לחיצה על תפריט לחצן.
7. למדוד השתקפות של קליפת ביצה כל שש פעמים על ידי מדידת פעמיים ליד הקוטב בוטה (end רחב של הביצה), פעמיים על קו המשווה של הביצה, ו פעמיים ליד הקוטב חדה (end צר יותר). הקפידו לדווח אם הכתמים הם נמנעו או לא. התנהגות זו הן ביצים ניסיוני, כמו גם הביצים של המחשב המארח.
8. השתמש פונקציה פולינום באופן מקומי משוקלל 0.25 nm החלקת span להחלקת רעש בפניות השתקפות, באמצעות צבע ניתוח תוכנה²⁹. אם צבע ציונים, כגון בהירות, אינם הדיר באופן משמעותי בין האזורים של המודל ביצה (שלב 3.7), לצבוע מחדש את הביצה (שלבים 2.2 – 2.6); אחרת, ממוצע ביצה מודל צבע על פני הביצה.
9. להחליט על הקבוצה המתאימה ביותר של רגישויות היחסי קולט אור על השאלה.
   הערה: זה עשוי להיות כלליים סגול רגיש או סגול רגיש ציפור, או פעם אחת ניתן לבחור דגם רגישויות היחסי^30,31,32.
10. לכמת קוונטית תופס³³ עבור כל קולט אור, יחידה³⁴ והן כפול קונוס^35,36, על-ידי שילוב המוצר של השתקפות הדקה, רגישויות קולט אור הולם irradiance ספקטרום הקשת חזותי העופות (קרי, 300-700 nm).
    1. השימוש היחסי קוונטית לתפוס ההערכות להפקת הקואורדינטות^33,מרחב צבע tetrahedral העופות³⁷. להבטיח כי, בניגוד תופס קוונטית, אלה קוונטית היחסי תופס סכומים ל- 1.
11. שימוש קוונטית תופס (שלב 3.10) כדי להעריך את discriminability, ב- JND, בין המארח קליפת ביצה צבע (ראה שלב 2.6.1) בצבעים הנתפסת של כל ביצה זרים באמצעות עצבית מוגבלת רעש חזותי דגם בגודל^{32 , 38 , 39}.
    1. למדוד את הגיוון הדקה של המחשב המארח באמצעות ספקטרומטר באותו מקור אור למדידת הביצים מודל (שלב 3.7), במידת האפשר.
       הערה: שיקולים מעשיים או לוגיסטית עלולה להפוך זה בלתי אפשרי, ובמקרה למדוד תת-קבוצה של הביצים מארח קינים שונים להקים את הגיוון הדקה הממוצע מארח.
    2. השתמש שבריר ובר ארוך-גל-רגיש ספירלת 0.1⁴⁰.
    3. להסביר את השפע היחסי של קונוסים ואת האיבר העיקרי של חרוט כפול³⁰.
       הערה: אם הביצה הצבעים רק על מעבר צבע המתאים לצבעי הדקה טבעי, JND בין המארח לבין ביצה ניסיוני יכול להכפיל או 1 או-1 כדי להבדיל בין הבדלים על מהערכים הקיצוניים (למשל, כחול-ירוק או חום, רואה צעדים 1.1.1–1.1.2). אם הביצה הצבעים נופלים על פני מספר מעברי צבע או למלא את החלל בצבע, מסכמים את צבע ונתנים ההבדלים בין ביצים באמצעות דיאגרמות צבעוניות אחידה perceptually⁴¹. הקואורדינטות סוג זה של תרשים מתאר את הכיוון ואת סדר הגודל של הצבע הנתפס ההבדלים בין ביצים ניסיוני, צבע ביצה מארח ואת אלה ניתן להשתמש בניתוח נוסף.

4. עבודת שטח

1. לקבוע את המין ללמוד.
   הערה: גורמים שיש להביא בחשבון כוללים (אך אינם מוגבלים) השפע של מינים המארח ו/או טפיל, האם הוא המארח תפיסתו⁴² או ניקוב⁴³ rejecter, אשר תשפיע על הסוג של ביצה כדי לשמש (למשל, אל תשתמש קשה מודל מלאכותי ביצים לנקב מקרה חירום. המפלטים⁴⁴).
2. באופן שיטתי לחפש קינים באזור המחקר. בדוק. את רישומי הקינון הקודם יכול לספק מקום ההתחלה סבירה כמה מינים⁴⁵.
   הערה: סמני גלוי או סימון בדגל עלול להגביר את הסיכון של טריפה⁴⁶; לכן, שקול שימוש GPS כף יד במקום.
3. לפקח האלה קינים מדי יום באמצעות שיטות הקלטה ישירה או וידאו כדי להקליט את הנוכחות של כל ביצה המארח עד תחילת הניסוי (שלב 4.4); לדוגמה, יום אחד לאחר השלמת מצמד.
   הערה: פיקוח יומי הזאת תימשך עד הניסוי הגיע למסקנה (שלב 4.6).
   1. להאזין לשיחות אזעקה שנעשו על ידי מבוגרים, לעזוב את האזור, אם הם ממשיכים במשך יותר מ-30 s. לא להתקרב לקן כאשר קיים לכל טורף nest פוטנציאליים, במיוחד אם זה טורף אוריינטציה ויזואלית (למשל, corvid).
   2. הגישה ולהשאיר קינים ממקומות שונים, קרי, חולף על קינים, אז יונקים טורפים יכול לעקוב רמזים כימי ישירות אל קינים.
      הערה: גישה זו ייתכן ישים בבתי גידול מסוימים, כלומר צפופה ריד-מיטות.
   3. תמיד למזער את ההפרעה פיזית את הקן, האזור סביב הקן.
   4. לא להתקרב קינים בתקופת בניית הקן, כי ציפורים רבות ינטוש את הקנים אם הם מופרעים לפני הטלת ביצים⁴⁶.
4. להוסיף בעדינות ביצה ניסיוני לקן של מחשב מארח על-ידי הזזה לתוך הצד של הגביע של הקן. לא תזרוק את גרסאות ניסיוניות כמו זה עלול לגרום נזק הביצים של המחשב המארח.
   הערה: להקצות טיפולים באופן אקראי.
   1. רשומה אם האב המארח נותר בקרבת מקום ובכך יש הזדמנות לחזות את מעשה הטפילות מלאכותי⁴⁷. תיעוד ובקרה סטטיסטית עבור משתנה המציין אם המארח הסמיקו מן הקן⁴⁷. התנהלות ההכרות ביצה תוך ההורה הוא משם.
   2. לאסוף ביצה מארח אם הטפיל בתוך המערכת מסיר ביצה המארח.
      הערה: זה לא יהיה נחוץ ב hosts איפה ביצה ההסרה אינה משפיעה על מארח התגובות ביצים ניסיוני²².
5. מעסיקים קבוצת הבקרה קנים (קינים אשר ביקר, בדק וביצים ביצה מטפלים בזה אבל לא נסיוני נוסף או החליפו) כדי לקבוע את תעריפי עריקה הקן טבעי. הסר ביצה מארח הקן שליטה רק אם הם יוסרו קינים ניסיוני (ראה שלב 4.5.1).
   הערה: זה קריטי כי עריקה לא ניתן מענה ממוקד ביצים זרים מסוימים אבל יכול להיות תגובה עבור סוגים אחרים ביצה.
   1. לבחור המספר של שליטה קינים א-פריורי בהתבסס על גודל המדגם ידוע או צפוי מוערך אפקט. להקצות מכל קן n^th כמו קן שליטה עד קביעת סטטיסטית אם הקן עריקות מארח בתגובה ניסיוני ביצים או לא ניתן להשיג (שלב 5.1).
      הערה: אם ביצה מארח מוסר, להסיר את אותו מספר של המארח ביצים כמו טיפול ניסיוני, החזק מארח אחד למחשב מארח ביצה ביד עבור 5 s ו למקומו זה ועמדו על קן באותו אורך כמו טיפול קינים. אם המחשב המארח ביצים לא יוסרו, החזק מארח אחד למחשב מארח ביצה ביד עבור 5 s ו למקומו זה, להישאר על הקן עבור משך הזמן שבוזבז קינים ניסיוני (למשל, 10 s).
6. לתקן את הקן מספיק כדי לקבוע את התגובה על כל מחשב מארח של הקן, כולל פקדי. בדוק את הקן בתוך כמה שעות של מניפולציה ניסויית.
   הערה: במינים מסוימים, דחיות עלולה להתרחש באותו היום כמו טפיל ניסיוני; לכן, חשוב לבדוק את הקן בתוך כמה שעות של מניפולציה ניסויית על⁴⁸.
   1. השתמש מראה טלסקופית הבודקות את הקן כדי להימנע ממגע ישיר עם הקן או את המצמד.
   2. הימנע תצפיות מזג אוויר קשה (גשם, חום או קור) כי זה יכול להגביר את הסכנה של nestlings, את הביצים⁴⁶.
   3. לבצע בדיקות מדי יום עד המארח הגיב לביצה הציג או כמות מסוימת של זמן עבר.
      הערה: לפי המוסכמות, אם הביצה נשאר בקן במשך 5-6 ימים, המארח נחשב של מקבל²²; עם זאת, אנשים מסוימים מארח להגיב יותר מאוחר⁴⁹ והנטיות העדרו של התגובות הנ ל בהכרח ביצה דחייה שיעור הערכות. באופן אידיאלי, חוקרים צריכים לקבוע עליון 95% family-wise הסמך של השהיה כדי דחייה במערכת שלהם ועושים שימוש זה קריטריון שלהם.

5. ניתוחים סטטיסטיים

1. השתמש במבחן המדויק של פישר במחקר אקראי לחלוטין (קרי, ניסיוני קינים שליטה לחלוטין וביניהם ואת ובכך לא שונות בהנחת תאריך, מצמד או כל פרמטר אחר ידוע להשפיע על הקן עריקה) להשוות את המספר עריקות בין שליטה (שלב 4.5) טיפולים קינים. אחרת, השתמש מודל לינארי מוכללת (GLM) עם covariates שעשוי להיות רלוונטי (ראה להלן), כמו גישה זהירה יותר בדרך כלל.
   1. אם קינים ניסיוני יש שיעור עריקה גבוה משמעותית מאשר שליטה קינים, הוסר קוד שתי ביצים, ביצים נטושה כמו 'דחה'.
      הערה: לפי המוסכמות המארח 'דחה' הביצה כאשר זה זיהה את הביצה טפילי, או להסירו או נטש אותו (עם כל הקן).
   2. אם המחירים עריקה לא שונים בין ניסיוני ולשלוט קינים, לכלול עריקות מהניתוח, מכיוון שהם אינם מארח בתגובה הטפילות וקוד תגובות כמו 'הוצאת'.
      הערה: לפי המוסכמות, 'הוצאת' מתייחס כאשר ביצה למעשה הוסר מן הקן שלה.
   3. להקליט את התאריך והשעה כאשר המארח דחה את הביצה. החלפת המשתנה התגובה בהתאם התגלית שלך על צעדים 5.1.1–5.1.2.
2. דוח בדיקה מדוקדקת של פישר, יחס הסיכויים המשויכת שלו, שלה הסמך המתאים.
3. להחליט על כל covariates משמעותי זה יתווסף מודלים (למשל, צעדים 5.4 – 5.5).
   1. ציין את קידוד (למשל, רציף, קטגורית או סידורי) של כל covariate.
   2. קוד הסודר ימים והוא מרכז תאריכים בנפרד בתוך שנים כדי להסיר את כל הפוטנציאל וחיסול עקב וריאציה המיוחס שנים או seasonality^7,47,50,51.
   3. מרכז כל המעורבים באינטראקציה כדי לאפשר יותר קל פרשנות המונחים סדר התחתון שלהם בפלט דגם covariates.
      הערה: דרוג covariates מאפשרת השוואה ישירה של תופעות בין מחקרים, לפעמים יכול לשפר את מודל התכנסות.
4. לחזות תגובות המארח (הוצאה או דחה vs לקבל) באמצעות מודל לינארי מוכללת (GLM) או מודל מעורב לינארי כללית (GLMM) עם פילוגי שגיאות בינומי, logit קישור פונקציה.
   הערה: בחירה בין GLM או GLMM תלוי הנתונים, ואם כולל אפקט אקראי (לדוגמה, מזהה הקן, השנה). גורמים אקראיים צריך לפחות 5 רמות סטיות אחרת הם ככל הנראה להיות לקוי מוערך⁵².
   1. דו ח מקדם הדטרמינציה (בדרך כלל R²) כדי להראות איזו פרופורציה של השונות הוסבר על ידי^53,המודל הוא ליניארי⁵⁴.
5. לחזות כמה זמן לוקח את הציפור להגיב על ניסיוני הטפילות באמצעות GLM של התפלגות שגיאה בינומי שלילי (או התפלגות פואסון שגיאה אם הנתונים אינם overdispersed) ולהיכנס לקישור.
   הערה: החוקרים להפנות משך הזמן הדרוש עבור ציפור להגיב כמו "השהיית התגובה,' על-פי דיווחים בדייקנות ימים, כך יש לביצים דחה ביום של הניסוי של השהיה של אפס. מודל התגובה משתנים עם אפסים רבים מדי (> 50%) באמצעות ונפוח אפס או משוכה מודלים⁵⁵.
6. כלי אבחון כדי לבדוק אם המודל מנבא את הנתונים באופן משביע רצון ולהשתמש בדוח מודל סטטיסטי סיכום לכמת מה הפרופורציה של מודל סטיה הסביר^{56 , 57}. הדו ח מקדם הדטרמינציה (בדרך כלל R²), ראה שלב 5.4.2.
   1. אמת מודלים בינומי שלילי באמצעות אימות גרפי על-ידי הפקת מגרש quantile-quantile והתוויית פירסון נגד הערכים מצויד.
      הערה: מודל מנוהל היטב יהיה לא ליניאריים או דפוסי לא צפוי⁵⁵.
   2. אמת מודלים בינומי באמצעות בדיקות לאל-של-מתאים כגון בדיקות Hosmer-Lemeshow ואבחונים אחרים הזמינים בחבילה R, 'binomTools'⁵⁸ המכיל את כל הסט של כלי אבחון.
7. שקול שולט על covariates עקבית למטרות של עקביות ו comparability בין מחקרים.
   הערה: covariates נפוץ לכלול מצמד גודל²², הנחת תאריך⁵⁹, לקנן בגיל מניפולציה⁴⁹, אם המחשב המארח היה סמוקות מן הקן או לא-⁴⁷. מחקרים רבים, במיוחד מוקדם, לא השתמש בכל covariates. מחברים לשקול בנוסף ניתוח ההשפעות של סוגי ביצים (או מדרגים שונים) ללא covariates כדי להפוך את התוצאות שלהם באופן כמותי להשוות מחקרים אלו חסר covariates.
   1. השתמש בגישה מידע-תיאורטי ודווח על התוצאה של חישוב ממוצע של דגמים פוטנציאליים רבים להסביר את התנהגות מארח⁶⁰.
      הערה: לחלופין, להשתמש ניתוח רגרסיה הדרגתיים בתור מודל בחירת אלגוריתם⁶¹. החוקרים צריכים להשתמש קריטריון מוגדר מראש (למשל, מותאם R², של ח'רפיש C._p, של הוסיפי מידע קריטריון, של שוורץ המזרחי או ערך-p) ומספקים הדגם המלא (עם covariates משותף) והן דגם מוקטן הסופי.

Results

יצירת מודלים צבעוני ביצה

השתקפות ספקטרום של תערובות צבע מותאם אישית וביצים טבעי מוצגים איור 1A-D. תערובות צבע שימוש במחקרים הטפילות שבוחרים כדאי מקרוב להתכתב עם מדידות השתקפות טבעי מבחינת הצורה ספקטרלי (צבע) ואת גודל (בהירות). אם זה מושגת, הצבע של הביצה ניסיוני כיצירה על ידי המארח צבע טבעי ביצה. כדי להעריך את זיהוי המארח, reflectances האלה צריך להיהפך מרחב צבעים העו...

Discussion

למרות ביצה דחייה ניסויים הם השיטה הנפוצה ביותר ללמוד קו-אבולוציה שבוחרים טפיל-פונדקאי⁶⁶, ולאחד מאמצים למיגור לתקנן חומרים, טכניקות, או פרוטוקולים חסרים. . זה בעייתי במיוחד עבור meta-ניתוחים. אין מטא אנליזה, לידע שלנו, המארח ביצה דחייה עד כה יש מבוקר עבור מתודולוגי סתירות בין מחקרים^67,68, כולל מה נחשב מימטי או הלא-מימטי. זה מייצג בעיה רצינית כי ביצים מימטי (בסטנדרטים אנושיים) עלולות להידחות על ידי המארחים לעתים קרובות יותר מאשר לכאורה שאינם...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
משכפל מיני +	Makerbot
צבע אקרילי מקצועי קובלט טורקיז אור	Winsor & ניוטון	28382
צבע אקרילי מקצועי טיטניום לבן	Winsor & Newton	28489
צבע אקרילי מקצועי קובלט ירוק	Winsor & Newton	28381
צבע אקרילי מקצועי קובלט טורקיז	Winsor & Newton	28449
צבע אקרילי מקצועי שרוף Umber	Winsor & Newton	28433
צבע אקרילי מקצועי תחמוצת ברזל אדום	Winsor & ניוטון	28486
צבע אקרילי מקצועי קדמיום כתום	Winsor & Newton	28437
צבע אקרילי מקצועי גולמי Umber Light	Winsor & ניוטון	28391
צבע אקרילי מקצועי צהוב אוכרה	Winsor & ניוטון	28491
צבע אקרילי מקצועי מאדים שחור	Winsor & ניוטון	28460
מברשת צבע	אוטרכט	206-FB	מברשת פילברט מברשת
צבע	אוטרכט	206-F	מברשת שטוחה
מייבש שיער	אוסטר	202
כבלים סיבים	אופטיים אושן אופטיקה בע"מ	OCF-103813	1 מ' מכלול סיבים אופטיים מתפצל מותאם אישית עם צינור רוכסן כחול (PVDF), 3.8 מ"מ נומינלי OD ו-2 רגליים
ספקטרומטר	אופטיקה אוקיינוס בע"מ.	ג'אז	ברוחב חריץ של 50 אום, מותקנת עם גלאי 200-850 ננומטר (DET2B-200-850), ואפשרות סורג # 2.
מודול סוללה וכרטיס SD לספקטרומטר	Ocean Optics Inc.	מקור אור Jaz-B
	Ocean Optics Inc.	Jaz-PX	מקור אור קסנון פועם
לבן סטנדרטי	Ocean Optics Inc.	WS-1-SL	עשוי מספקטרלון
OHAUS Adventurer Pro Scale	OHAUS	AV114C	דיוק מיקרו-איזון
Gemini-20 משקל נייד	AWS	Gemini-20	משקל סטנדרטי
צינורות צבע אלומיניום ריקים (22 מ"ל)	Creative Mark	NA
מראה טלסקופית	SE	8014TM
GPS	Garmin	Oregon 600
נייר זכוכית 220 גריט	3M	21220-SBP-15	נייר זכוכית עדין מאוד
נייר זכוכית 400 גריט	3M	20400-SBP-5	נייר זכוכית עדין מאוד
: ' pavo', חבילת R	לשימוש ב, R: שפה וסביבה לחישוב סטטיסטי	v 1.3.1	https://cran.r-project.org/web/packages/pavo/index.html
UV שקוף	שקוף צאן כבוי!	UV-001	צבע אולטרה סגול שקוף
שקיות סנדוויץ' מפלסטיק	זיפלוק		שקיות סנדוויץ' פלסטיק רגילות מבית זיפלוק הניתנות לרכישה בסופרמרקט.
Kimwipes	Kimberly-Clark Professional	34120	11 x 21 ס"מ kimwipes
מברשת שיניים	קולגייט