קולטן ארעי פוטנציאל vanilloid סוג 1 (TRPV1) באזור העל-שדרתי הוצע לשחק כמה תפקידים בתפקוד המוח. מתואר כאן הוא פרוטוקול להזרקה intracerebroventricular של resiniferatoxin עבור desensitization TRPV1 על-שדרתי בעכברים. כמו כן, מוצגים הליכים לבדיקות כאב מסוימות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
טיפול תוך-ברובני עם בדיקות Resiniferatoxin וכאב בעכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
קולטן ארעי פוטנציאל vanilloid סוג 1 (TRPV1), ערוץ cation תרמוסיבי, ידוע לעורר כאב בעצבים ההיקפיים. בנוסף לתפקוד ההיקפי שלה, מעורבותה בתפקודי המוח הוצעה גם. Resiniferatoxin (RTX), אגוניסט TRPV1 אולטרהpotent, כבר ידוע לגרום לדה-רגישות לטווח ארוך של TRPV1, וdesensitization זה כבר גישה חלופית לחקירת הרלוונטיות הפיזיולוגית של תאים המביעים TRPV1. כאן אנו מתארים פרוטוקול לטיפול תוך-ברוונטרי (i.c.v. ) עם RTX בעכברים. הליכים מתוארים לבדיקת nociception לגירוי TRPV1 היקפי (בדיקת RTX) וגירוי מכני (בדיקת לחץ זנב) ולאחר מכן בצע. למרות התגובות nociceptive של עכברים שניתנו RTX i.c.v. היו דומים לאלה של קבוצות הבקרה, RTX-i.c.v.-מנוהל עכברים היו רגישים לאפקט משכך כאבים של פרצטמול, מציע כי טיפול RTX i.c.v. יכול לגרום לדה-רגישות TRPV1 סלקטיבית על-טבעית. מודל עכבר זה יכול לשמש כמערכת ניסיונית נוחה ללימוד התפקיד של TRPV1 בתפקוד המוח/על-שדרתי. טכניקות אלה ניתן להחיל גם על מחקרים של הפעולות המרכזיות של תרופות אחרות.
מבוא
בעלי חיים מקבלים גירויים פיזיים וכימיים שונים מהסביבה שלהם באמצעות חיישנים על העצבים ההיקפיים. קולטן ארעי פוטנציאל vanilloid סוג 1 (TRPV1) הוא אחד התרמוזים, לא בחירה cation ערוצים הפועלים כמו חיישניחום 1,2, והפעלה ו / או אפנון של TRPV1 ידוע להיות צעד מפתח עבור nociception בהקשרים נורמליים ודלקתיים3. למרות דפוס הביטוי הכולל הוא שנוי במחלוקת, ביטוי של TRPV1 הוצע גם באזורים על-שדרתיים, להיות מעורב בפעילויות מוח שונות (כולל nociception4, thermoregulation5,חרדה 6, הפרעת קשבוריכוז 7, ואפילפסיה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הפרוטוקולים הניסיוניים המשמשים כאן אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים ושימוש של אוניברסיטת Musashino. עכברי ddY זכר (SLC, Shizuoka, יפן) הוחזקו לפחות 7 ימים תחת מחזור אור / כהה 12 שעות לפני ניסויים עם מים ומזון אד libitum. עכברים בני 5 או 6 שבועות שימשו לניסויים.
1. הכנת סמים
-
RTX מחזירה את תחביר ה
הערה: פתרון RTX אלכוהולי עלול לגרום לכוויות חמורות בעור ולנזק לעיניים. הקפד להשתמש בכפפות גומי ומשקפיים להגנה בעת הטיפול. ניתן להשתמש בפתרון מניות זה במשך 6 חודשים.- להוסיף 500 μL של אתנול 1 מ"ג של RTX.
- להוסיף 500 μL של פוליאוקסיאתילן (20) מונוולט סורביטן לפתרון לעיל ומערבולת גם.
- מו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
העכברים שטופלו ב-i.c.v. לא מראים חריגות ניכרות במראה שלהם, פעילויות ספונטניות,משקל גוף 19 וטמפרטורת גוף ליבה (קבוצת רכב מטופל, 38.4 ± 0.3 ° C, n = 6; קבוצת RTX שטופלה, 38.7 ± 0.2 °C, n = 6).
איור 2A-B מראה את ההיענות של עכברים שטופלו ב-S.C., או i.c.v. להזרקת תוך-פלנטר של RTX. התנהגות ליקוק / נשנשך של עכברים שטופלו ברכב היה יוצא דופן ב 10 דקות
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הצעד הקריטי ביותר בניסויים אלה הוא ההצלחה של הזרקת I.C.V. טכניקת הזרקת I.c.v. בשימוש כאן הוא די פשוט אבל דורש קצת תרגול. לפני ניסויים, מומלץ להתאמן עם צבעים (למשל 0.5% טריפאן כחול בתמיסת מלח). אם הזריקה מבוצעת כראוי, סימן מחט צריך להיות ניכר על תפר הקורונה ואת הצבע המוזרק צריך להיות נוכח בחדר ההתפלה ההתפלה ובברום השלישי. יתר על כן, הכנסה בכפייה יש להימנע במהלך ההזרקה. אם קצה המחט מונח כראוי על תפר הקורונה, המחט צריכה לחדור את הגולגולת בצורה חלקה.
טכניקה זו i.c.v. ניתן להחיל גם על עכברים ערים, .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר
תודות
אף לא אחד .
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Resiniferatoxin | LKT Laboratories | R1774 | המשמש לטיפולים מקדימים של s.c./i.c.v ובדיקת RTX |
| אצטמינופן | IWAKI SEIYAKU | במתנה מ-IWAKI SEIYAKU | |
| מלח נתרן פנטוברביטל | טוקיו תעשיה כימית | P0776 | המשמש להרדמה |
| אתנול (99.5) | Wako Pure Chemical Industries | 057-00456 | המשמש להמסת RTX |
| פוליאוקסיאתילן(20) סורביטן מונואולאט | Wako Pure Chemical Industries | 161-21621 | המשמש להמסת RTX |
| 25 & #956; L מיקרו-מזרק | המילטון | 1702LT | המשמש להזרקת i.c.v. |
| 100 & #956; L מיקרו-מזרק | המילטון | 1710LT | המשמש להזרקה תוך-פלנטרית |
| 26-מד מחט חד פעמית | TERUMO | NN-2613S | המשמש להזרקת i.c.v. |
| מחט חד פעמית 30-מד | NIPRO | 01134 | המשמש להזרקה תוך-פלנטרית |
| מד לחץ | Ugo Basile | Analgesy-Meter סוג 7200 | המשמש לבדיקת לחץ זנב |
מקורות
- Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons. J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).
- Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
