הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ביצוע הנוצרות על-ידי ההטיה של חלקיקים דמויי וירוס PEGylated פלורסנט מאת כימיה Dibromomaleimide-דיסולפידי

6.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57712

⸱

27 במאי 2018

 ,  ,  , 
1Department of Chemistry & Biochemistry, University of Texas at Dallas, 2Undergraduate Biology, University of Texas at Dallas, 3Undergraduate Healthcare Studies, University of Texas at Dallas, 4Departments of Chemistry & Biochemistry and Biomedical Engineering, University of Texas at Dallas

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים את הליך כדי fluorescently functionalize את disulfides על האח מים Qβ עם dibromomaleimide. אנו מתארים Qβ ביטוי טיהור, הסינתזה של מולקולות dibromomaleimide-functionalized, ואת התגובה ההטיה בין dibromomaleimide לבין Qβ. וכתוצאה מכך צהוב הניאון מצומדת החלקיק יכול לשמש מכשיר בדיקה קרינה פלואורסצנטית בתוך תאים.

תקציר

העלייה האחרונה חלקיקים דמויי וירוס (האח מים) בביו, מחקר בנושא החומרים ניתן לייחס שלהם קלות ביוסינטזה, דיסקרטית, תיכנות גנטי בגודל biodegradability. בזמן שהם לבצע bioconjugation תגובות עבור הוספת ליגנדים סינתטי אל פני השטח שלהם, הטווח ב bioconjugation מתודולוגיות על אלה capsids נולד מימית מצומצמת יחסית. כדי להקל על הכיוון של biomaterials פונקציונלי מחקר, יש לקחת בחשבון תגובות bioconjugation לא מסורתיות. התגובה שמתואר פרוטוקול זה משתמש dibromomaleimides כדי להציג את הפונקציונליות החדשה של הממס דיסולפידי חשוף חוב של מישהו מיוחד המבוסס על Bacteriophage Qβ. יתר על כן, המוצר הסופי הוא פלורסנט, אשר יש ערך מוסף של יצירת החללית מאתריהם במבחנה באמצעות ערכת מסנן זמינים מסחרית.

מבוא

שימוש בגודל ננו capsids ויראלי התפתחה שדה מרגש, שמטרתה להרחיב את טווח יישומי מחקר ביו1,2,3. חלקיקים דמויי וירוס ביטוי recombinantly (האח מים) נגזרות מבנית וירוסים, אך הם חסרים את החומר הגנטי הנגיפי המקורי שהופך אותם חלקיקים proteinaceous שאינן זיהומיות. תכונות פני השטח הם programed גנטית, כל capsid מתבטא באופן זהה לאלה לפני ואחרי זה, זה אפשרי לדעת את המיקום ואת מספר שרשראות צד תגובתי חומצות אמינו בדייקנות קואורדינטות. במקרים רבים, הן פנים וחוץ המשטחים בעלי סוגים רבים של שאריות ממס חומצת אמינו חשוף, אשר יתכן כבניין יכול להיות functionalized דרך bioconjugation תגובות - תגובות היוצרים קשרים הדדיים בין של biomolecule סינתטיים מולקולה4,5.

תגובות Bioconjugation לעזור מולקולות של עניין יש פונקציות יותר מגוונת בצורה פשוטה יחסית. מולקולות של עניין, כגון תרופות טיפוליות6, תגיות פלורסנט7 ופולימרים8,9 יכול להיות טרום מסונתז והוא מאופיין לפני הן מצורפות על-פני האח מים. . אח נפוץ במיוחד בביו biomaterials המחקר היה האיש החשוב בהתבסס על Bacteriophage Qβ, אשר, כפי recombinantly ביטוי, הוא capsid ויראלי icosahedral 28 nm10. האתרים התגובה הנפוצה ביותר על Qβ הם lysines על ידי מרווח רחב, אבל לנו יש לאחרונה תקשרו את ההטיה מוצלחת11 של תרכובות dibromomaleimide disulfides מופחת המרפדים את הנקבוביות של Qβ באמצעות תגובה Haddleton-בייקר. התגובה ממשיך עם טוב תשואות, לא פחות חשוב, בלי לאבד את יציבות תרמית של החלקיקים. במקביל, התגובה הזו יוצרת ההטיה-induced פלורסצנטיות, בו ניתן להשתמש כדי לעקוב אחר את ספיגת חלקיקי האלה לתוך התאים. בעבודה זאת, נדגים את ההטיה של פוליאתילן גליקול (PEG) על פני Qβ דרך התגובה Haddleton-בייקר, כשהתוצאה fluorophore צהוב בהיר. לאחר מכן ניתנים למעקב חלקיקים אלה כאשר הם נלקחים ידי תאים. פרוטוקול בזאת יסייע החוקרים ליצור חדש PEGylated פלורסנט חלקיקים proteinaceous בהתבסס על Qβ, על פי עקרונותיה חלים אחד רבים אחרים האח מים המכיל disulfides חשוף הממס.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הכנה

  1. להפוך Lysogeny מרק (LB) אגר ויוצקים צלחות12.
  2. בעקבות BL21(DE3) פלסמיד pET28 המכיל את רצף החלבון של המעיל wtQβ.
    1. הפשרת e. coli BL21(DE3) תאים המוסמכת באמבט קרח. במקום 50 μL של תאים צינור microcentrifuge.
    2. להוסיף 2 μL של פלסמיד לתוך שפופרת אחת וחבוט בעדינות את הצינור. ואז תדגור על קרח למשך 30 דקות
    3. מכת החום התאים עבור 45 s באמבט מים זה בדיוק 42 מעלות צלזיוס. מקם את הצינור בחזרה באמבט קרח מיד לאחר חום-מזעזע, ולאחר תקופת דגירה של 5 דקות.
    4. הוסף μL 950 של מדיה LB שאינה מכילה כל אנטיביוטיקה.
    5. לנער את התרבות ב rpm 200 עבור 60 דקות ב 37 º C.
    6. צלחת 100 μL של התרבות על פלטות אגר ליברות (עם Kanamycin), דגירה את הצלחת בן לילה ב 37 º C. בחר מושבות לבן בעת הצורך.
  3. להפוך את המדיה סופר אופטימלית מרק (בכי).
    1. אוטוקלב בשני 2 L התפישה Erlenmeyer המבחנות על מחזור superdry.
    2. בסביבת aseptic, שוקל להוסיף 20.0 גר' טריפטון, 5.0 גר' שמרים לחלץ, g 2.469 של מגנזיום סולפט נטול מים, g 0.584 של נתרן כלורי ו- g 0.186 של אשלגן כלורי את כל הבקבוק.
    3. להביא את אמצעי האחסון 1 ליטר עם מים הנדסה גנטית כל הבקבוק, תא לחץ על מחזור נוזלי.
    4. ברגע שהתקשורת סוחטי דמעות הגיע לטמפרטורת החדר לאחר autoclaving, להוסיף 1 מ ל kanamycin (100 מ"ג/מ"ל) כל ליטר מדיה ולאחסן ב 4 º C.
  4. להפוך 0.1 M אשלגן פוספט מאגר (pH 7.00).
    1. להפוך את פתרון monobasic של אשלגן 1 מ' על ידי המסת g 68.045 של אשלגן monobasic ב 500 מ"ל מים הנדסה גנטית.
    2. להפוך את פתרון dibasic של אשלגן 1 מ' על ידי המסת g 87.09 של אשלגן dibasic ב 500 מ"ל מים הנדסה גנטית.
    3. להוסיף 38.5 מ של פתרון monobasic אשלגן ו- mL 61.5 אשלגן dibasic בקבוק 1 ליטר.
    4. להתאים את ה-pH עד 7.00 במידת הצורך, ולהביא נפח של 1 ל'
  5. להפוך 5-40% סוכרוז מעברי צבע 0.1 M אשלגן פוספט מאגר (pH 7.00).
    1. 50 מ ל צנטריפוגה צינורות, להכין פתרונות עם סוכרוז 5-40% (עולה במרווחים של 5%) מומס 0.1 M אשלגן פוספט מאגר (pH 7.00).
    2. להפקיד 3.3 מ של 5% סוכרוז פתרון בחלק התחתון של צינור עגול-התחתון פוליקרבונט 38 mL באמצעות מזרק מחט ארוכה, חזור על הפעולה עבור חמישה צינורות אחרים.
    3. בזהירות להפקיד 3.3 מיליליטר 10% סוכרוז הפתרון בתחתית הצינורית, הסר בזהירות את המחט כדי לא להפריע במעבר הצבע. חזור על הצינורות חמישה אחרים.
       
  6. להמשיך להפקיד 3.3 mL שכבות של פתרונות סוכרוז, גדל מ- 15% ל 40% בכל שפופרת, בעת היותו זהירים כדי לא להפריע במעבר הצבע.
  7. כשהפעולה תסתיים, לכסות את החלק העליון של מעברי הצבע בנייר כסף ולאחסן ב-80 מעלות צלזיוס.

2. הבעת Qβ

  1. נגב ספסל אזור עם אקונומיקה 1:1 / אתנול.
  2. להפוך שתי תרבויות starter מ ל 3 סביבה aseptic על-ידי הוספת מושבות יחיד של e. coli BL21(DE3) לתוך 3 מ"ל של מדיה סוחטי דמעות סביבה אספטי.
  3. גדלים על מטרף-250 סל"ד בחדר לחות יחסית (rH) 37 ° C ו- 0% בין לילה.
  4. לחסן starter תרבות בתקשורת סוחטי דמעות:
    1. תורידי את שתי התרבויות starter מ ל 3 ניעור, בסביבת aseptic, שופכים את כל תרבות starter לתוך אחד של שני 2 ל' התפישה Erlenmeyer מבחנות עם 1 ליטר של מדיה סוחטי דמעות טריים בכל אחד.
    2. למקם את המדיה חוסנו במטרף-250 סל"ד בחדר rH 37 ° C ו- 0%.
  5. מגדלים את החיידקים על מטרף-250 סל"ד בחדר rH 37 ° C ו- 0% עד OD600 מגיע 0.9 – 1.0.
  6. להוסיף 1 מ"ל של 1 מ' איזופרופיל β-D-1 thiogalactopyranoside (IPTG) באמצעות פיפטה P1000 לזירוז ביטוי חלבון.
  7. להשאיר את המדיה ניעור ב 250 סל"ד בחדר rH 37 ° C ו- 0% בין לילה.
  8. להסיר מדיה מהמכשיר ניעור את למחרת בבוקר צנטריפוגה אותו באמצעות 1000 mL בקבוקים ב 20,621 × g עבור h 1 ב 4 ° C כדי לקצור את התאים.
  9. למחוק את תגובת שיקוע ולאסוף בגדר התא.
    1. שופכים את תגובת שיקוע לתוך בקבוקון עם בערך 5 מ"ל של אקונומיקה כדי להרוג חיידקים. . זה בזבוז.
    2. השתמש מרית לגרד בגדר תא מתחתית הבקבוק צנטריפוגה ולשים בגדר לתוך שפופרת צנטרפוגה 50 מ.

3. טיהור של Qβ

  1. Resuspend בגדר תא עם ~ 20 – 30 מ של 0.1 M אשלגן פוספט מאגר (pH 7.00).
  2. ודא resuspension יש אין גושים, ואת lyse התאים באמצעות מעבד microfluidizer לפי הפרוטוקול של היצרן (ראה טבלה של חומרים). Lyse התאים לפחות פעמיים כדי להגדיל את התשואה של החלקיקים.
  3. Centrifuge את lysate בבקבוקי צנטריפוגה 250 מ ל- 20,621 x g עבור משאבי אנוש 1-4 מעלות צלזיוס.
  4. למחוק את צניפה, למדוד את עוצמת הקול של תגובת שיקוע ב- mL. הכפל את הערך ב- 0.265 ומוסיפים הכמות כזו של g של אמוניום סולפט תגובת שיקוע.
  5. מערבבים ב 4 מעלות צלזיוס במשך לפחות שעה על צלחת stir ב 200 סל ד, כדי לזרז את החלבון.
  6. צנטריפוגה בבקבוקי 250 מ ל- g x 20,621 עבור h 1-4 מעלות צלזיוס.
  7. למחוק את תגובת שיקוע, resuspend בגדר עם 10 מ ל 0.1 M אשלגן פוספט מאגר (pH 7.00).
  8. להוסיף נפחים שווים של 1:1 כלורופורם/n-butanol דגימת גולמי ומיקס על ידי vortexing למשך כמה שניות.
  9. צנטריפוגה צינורות 38 mL ב 20,621 × g במשך 30 דקות ב 4 º C.
  10. לשחזר את השכבה העליונה מימית באמצעות פיפטה של פסטר. להיות זהיר לא לקחת הג'ל כמו שכבת הקימה בין השכבה המימית ואורגניים.
  11. הפשרת 6 5-40% סוכרוז מוכנות מראש מעברי צבע וטען בערך 2 מ ל התמצית על גבי כל אחד.
  12. Ultracentrifuge-99,582 g x עבור h 16 ב 4 ° C עם ההאטה חינם.
  13. אור פליטת אור דיודה (LED) תחת כל שפופרת, להקת כחול צריך להיות גלוי. לשחזר החלקיקים עם מזרק מחט ארוכה.
  14. Ultrapellet החלקיקים ב g x 370,541 עבור h 2.5-4 מעלות צלזיוס.
  15. למחוק את תגובת שיקוע, resuspend בגדר שקוף של חלקיקים מטוהרים עם 0.1 M אשלגן פוספט מאגר (pH 7.00).

4. כמת ואישור של המוצר

  1. השתמש ברדפורד Assay לכמת את המוצר13.
  2. הפחתת לרוץ, ללא הפחתת dodecyl נתרן גופרתי לזיהוי בג'ל (מרחביות-עמוד) כדי לאשר את המוצר14.
    הערה: הפחתת מרחביות-דף משמש כדי לאשר את המשקל המולקולרי של המעיל חלבון; אי-הפחתת מרחביות-דף הוא לאשר את מבנה סדר גבוהה יותר.

5. conjugating DB והמתחמים Qβ

  1. להפחית את disulfides על Qβ.
    1. להמיס 0.0020 גר' tris(2-carboxyethyl) פוספין (TCEP) לתוך 1 מ"ל של מים הנדסה גנטית כדי ליצור פתרון 100 x מניות.
      הערה: להכין TCEP טריים לפני צמצום.
    2. להוסיף 200 µL של Qβ (5 מ"ג/מ"ל) לתוך צינור microcentrifuge.
    3. פעל על-ידי הוספת 20 µL של 100 x TCEP פתרון מניות.
    4. דגירה בטמפרטורת החדר מאובטח.
  2. מחדש גשר דיסולפידי מופחתת באמצעות dibromomaleimide פוליאתילן גליקול (DB-PEG).
    1. להמיס 0.0017 גר' dibromomaleimide-פוליאתילן גליקול (DB-PEG) ב- µL 100 של DMF.
    2. הוסף µL 680 בפתרון סודיום פוספט (pH 5.00) של 10 מ מ.
    3. להוסיף מופחת Qβ לתוך הפתרון של DB-יתד ולבחון את תהליך ערבוב תחת מנורת UV nm 365. קרינה פלואורסצנטית צהוב בהיר ניתן לאבחן באופן מיידי עם 365 nm כף יד מנורת UV על ערבוב.
    4. . הנה התגובה המשך ללילה בטמפרטורת החדר (RT) על לירג
  3. לטהר את תערובת התגובה על-ידי מסנן צנטריפוגליות (COMW = 10 kDa) שלוש פעמים באמצעות 1 x PBS ב 3,283 x g עבור 20 דקות ב 4 º C.
  4. לפקח על הבניין על ידי אי-הפחתת מרחביות-דף agarose יליד בג'ל.
    הערה: האח מים לרוץ כמו חלקיקים שלמים ביליד agarose ג'ל, הם מופרדים בהתבסס על תשלום, הגודל והצורה שלהם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

יכול להיות מסונתז נגזרים dibromomaleimide דרך תגובת דחיסה בין אנהידריד dibromomaleimide אמינים ראשי15. לחלופין, שיטה סינתטית מתון16 באמצעות הפעלת N-methoxycarbonyl 3,4-dibromomaleimide נוצל כאן מגיבים methoxypolyethylene גליקול (PEG) כדי התשואה DB-יתד (איור 1). NMR שימש כדי לזהות את המבנה המורכב (איור 2). הוי Qβ הוא 28 nm icosahedral proteinaceous ננו-חלקיק, אשר מורכב של חלבונים זהי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

בהשוואה טיהור חלבון קטן, צעד ייחודי לטיהור bacteriophage Qβ הוא צנטריפוגה הדרגתי סוכרוז. לאחר השלב כלורופורם/n-butanol החילוץ, Qβ עוד יותר מטוהרים באמצעות 5-40% סוכרוז מעברי צבע. במהלך צנטריפוגה, חלקיקים מופרדים בהתאם לגודלן. חלקיקים גדולים יותר לנסוע לאזור צפיפות גבוהה יותר, בעוד חלקיקים קטנים יותר להישאר באזור צפיפות נמוכה יותר. Qβ נוסע השליש התחתון של המילוי ההדרגתי ונשאר שם בזמן זיהומים חלבון קטן לכוד בחלק העליון של הצינור צנטריפוגה. צמיגי של Qβ מראה חזק Tyndall פיזור במעבר הצבע סוכרוז, אשר ניתן לראות בתור להקת כחול ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים כי יש להם אינטרסים כלכליים אין מתחרים.

תודות

J.J.G. מאשר את הקרן הלאומית למדע (DMR-1654405) ואת סרטן מניעה מחקר מכון טקסס (CPRIT) (RP170752s) לתמיכה שלהם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מרק LB (מילר) EMD Millipore1.10285.0500
טריפטון, PowederResearch Products InternationalT60060-1000.0
תמצית שמרים, PowederResearch Products InternationalY20020-1000.0
מגנזיום גופרתי נטול מיםP212121CI-06808-1KG
נתרן כלורי (גבישי/מוסמך ACS)FisherScientificS271-10
אשלגן כלוריפישר סיינטיפיקBP366-500
Elga PURELAB Flex 3 מערכת טיהור מיםפישר סיינטיפיק4474524
אשלגן פוספט מונו-בסיסיפישר סיינטיפיקBP362-1
אשלגן פוספט דו-בסיסינטול מים פישר סיינטיפיקP288-500
סוכרוזפישר סיינטיפיק
אתנולפישר סיינטיפיקBP2818500
איזופרופיל ובטא;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)Sigma AldrichI6758-1G
Fiberlite F10-4x1000 LEX רוטור  פישר סיינטיפיק096-041053
אמוניום גופרתיP212121KW-0066-5KG
כלורופורםאלפא Aesar32614-M6
1-בוטנולפישר סיינטיפיקA399-4
SW 28 Ti רוטור, דלי מתנדנד, אלומיניוםבקמן קולטר342204: SW 28 Ti רוטור / 342217: סט
סוג 70 Ti רוטור, זווית קבועה, טיטניום, 8 x 39 מ"ל,Beckman Coulter
Coomassie (Bradford)Fisher ScientificPI23200
TRIS HydrochlorideResearch Products InternationalT60050-1000.0
TetramethylethylenediamineAlfa AesarJ63734-AC
Tris(2-carboxyethyl)פוספין הידרוכלורידSigma AldrichC4706-2G
2 3-דיברומומלימיד 97%סיגמא אולדריץ'553603-5G
פוליתילן גליקולאלפא Aesar41561-22
נתרן פוספטפישר AC424375000
אקרילאמיד/ביס-אקרילאמידP212121RP-A11310-500.0
נתרן דודציל סולפטסיגמא אולדריץ'L3771-100G
אמוניום פרסולפטפישר סיינטיפיקBP179-100
FV3000 מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקליאולימפוס FV3000 
מסובב אקדח מתכוונן של Labnet תומאס סיינטיפיק 1190P25 
בקבוק 1000 מ"ל Sorvall בעל ביצועים גבוהים, PC, עם מכסה אלומיניום Thermo Scientific010-1459
בקבוקי צנטריפוגה Nalgene עם מכסים, קופולימר פוליפרופילןThermo Scientific3141-0250
Nunc צינורות תחתונים עגולים; 38 מ"ל; PCThermo Scientific3117-0380
2 L צלוחיות Erlenmeyer פה צר עם שפה כבדהPyrex4980-2L
Amicon Ultra-4 יחידות סינון צנטריפוגליותMillipore SigmaUFC801024
M-110P Microfluidizer חומרים מעבדמיקרופלואידיקהM-110P
Nalgene במהירות גבוהה פוליקרבונט עגול תחתון צנטריפוגה צינורותתרמו בקבוק Scientific3117-0380PK
, עם מכלול מכסה, צילינדר 41121703פוליקרבונט בקמן קולטר
, בוגר - פוליפרופילן 250 מ"למעקרי80005
533LS-EGetinge533LS-E
TrueLine, צלחת תרבית תאים, מטופלת, PS, 96 באר, עם מכסהLabSourceD36-313-CS
צינור צנטריפוגה חרוטי פלקון 15 מ"לפישר סיינטיפיק14-959-53A
צינור מיקרוצנטיפוגה: 1.5 מ"לפישר סיינטיפיק05-408-129
VWR Os-500 שייקר אורביטליVWR Scientifc מוצרים14005-830
מערכות יציקה ידניתTetra Bio-Rad1658000FC
פוליפרופילן, 250 מ"לבקמן קולטר41121703
ספקטרופלואורומטר NanoDropThermo Fisher Scientific3300
מחט ארוכה המילטון 7693
אקסל אינטרנשיונל 5 עד 6 סמ"ק מזרקים לואר לוקפישר סיינטיפיק14-841-46
P1000 פיפטמןגילסוןF123602
P200 פיפטמןגילסוןF123601
P100 פיפטמןגילסוןF123615
P20 פיפטמןגילסוןF123600
P10 פיפטמןגילסון
אינטל שקילה PM-100 מעבדה קלאסית דיוק גבוה איזון מעבדהשקלול אינטליגנטיתIWT_PM100
Falcon 50 מ"ל צינור צנטריפוגה חרוטיפישר סיינטיפיק14-432-22
4– 15% ג'ל Mini-PROTEAN TGX, 10 בארות, 50 ומיקרו; lביו-ראד456-1084
S25590Bדלי בדיקת חלבון 337922 קיטור מסדרת PolyLab F144802 טכנולוגיית

מקורות

  1. Pokorski, J., Breitenkamp, K., Liepold, L., Qazi, S., Finn, M. G. Functional Virus-Based Polymer-Protein Nanoparticles by Atom Transfer Radical Polymerization. J. Am. Chem. Soc. 133 (24), 9242-9245 (2011).
  2. Capehart, S., Coylet, M., Glasgow, J., Francis, M. Controlled Integration of Gold Nanoparticles and Organic Fluorophores Using Synthetically Modified MS2 Viral Capsids. J. Am. Chem. Soc. 135 (8), 3011-3016 (2013).
  3. Li, S., et al. Template-Directed Synthesis of Porous and Protective Core-Shell Bionanoparticles. Angew. Chem. Int. Ed. 55 (36), 10691-10696 (2016).
  4. Chen, Z., Li, N., Li, S., Dharmarwardana, M., Schlimme, A., Gassensmith, J. J. Viral Chemistry: The Chemical Functionalization of Viral Architectures to Create New Technology. WIREs. Nanomed. Nanobiotechnol. 8 (4), 512-534 (2015).
  5. Chalker, J. M., Bernardes, G. J. L., Lin, Y. A., Davis, B. G. Chemical modification of proteins at cysteine: opportunities in chemistry and biology. Chem. - Asian J. 4 (5), 630-640 (2009).
  6. Le, D. H., Lee, K. L., Shukla, S., Commandeur, U., Steinmetz, N. F. Potato Virus X, a Filamentous Plant Viral Nanoparticle for Doxorubicin Delivery in Cancer Therapy. Nanoscale. 9 (6), 2348-2357 (2017).
  7. Chen, L., Wu, Y., Yuan, L., Wang, Q. Virus-templated FRET Platform for the Rational Design of Ratiometric Fluorescent Nanosensors. Chem. Comm. 51 (50), 10190-10193 (2015).
  8. Lee, P., et al. Polymer Structure and Conformation Alter the Antigenicity of Virus-like Particle-Polymer Conjugates. J. Am. Chem. Soc. 139 (9), 3312-3315 (2017).
  9. Zhang, X., et al. Polymer-Protein Core-Shell Nanoparticles for Enhanced Antigen Immunogenicity. ACS Macro Lett. 6 (4), 442-446 (2017).
  10. Brown, S. D., Fielder, J. D., Finn, M. G. Assembly of Hybrid Bacteriophage Qbeta virus-like particles. Biochemistry. 48 (47), 11155-11157 (2009).
  11. Chen, Z., et al. Fluorescent Functionalization across Quaternary Structure in a Virus- like Particle. Bioconjugate Chem. 28 (9), 2277-2283 (2017).
  12. Addgene. Pouring LB Agar Plates. , Available from: https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/ (2016).
  13. Bio-Rad. Bradford Protein Assay. , Available from: http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/4110065A.pdf (2017).
  14. Bio-Rad. Guide to Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Detection. , Available from: http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6040.pdf (2017).
  15. Smith, M., et al. Protein Modification, Bioconjugation, and Disulfide Bridging Using Bromomaleimides. J. Am. Chem. Soc. 132 (6), 1960-1965 (2010).
  16. Castaneda, L., et al. A Mild Synthesis of N-functionalised Bromomaleimides, Thiomaleimides and Bromopyridazinediones. Tetrahedron Lett. 54 (27), 3493-3495 (2013).
  17. Fiedler, J., et al. Engineered Mutations Change the Structure and Stability of a Virus- Like Particle. Biomacromolecules. 13 (8), 2339-2348 (2012).
  18. Manzenrieder, F., Luxenhofer, R., Retzlaff, M., Jordan, R., Finn, M. G. Stabilization of Virus-like Particles with Poly(2-oxazoline)s. Angew. Chem. Int. Ed. 50 (11), 2601-2605 (2011).
  19. Chen, Z., Li, N., Chen, L., Lee, J., Gassensmith, J. J. Dual Functionalized Bacteriophage Qβ as a Photocaged Drug Carrier. Small. 12 (33), 4563-4571 (2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

QBetaSDS PAGE
ביצוע הנוצרות על-ידי ההטיה של חלקיקים דמויי וירוס PEGylated פלורסנט מאת כימיה Dibromomaleimide-דיסולפידי
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.