פרוטוקול זה מתאר את ההקלטה של פוטנציאל שדה מקומי עם רב shank סיליקון ליניארי רגשים. המרה של האותות באמצעות ניתוח צפיפות המקור הנוכחי מאפשר השחזור של הפעילות החשמלית המקומית בהיפוקמפוס העכבר. בטכניקה זו, תנודות המוח מוגבל יכול להילמד במעבר בחופשיות עכברים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הקלטה במרחב מוגבל תנודות בהיפוקמפוס מתנהגים באופן עכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
הפוטנציאל שדה מקומי (LFP) מתגלה מתנועות יון מעבר ממברנות עצביות. מאז המתח שהוקלט על ידי אלקטרודות LFP משקף את השדה החשמלי מסוכם של כמויות גדולות של רקמת המוח, חילוץ מידע אודות פעילות מקומית הוא מאתגר. עם זאת, למדתי מתוכנת עצביים, דורש הבחנה אמין בין אירועים מקומיים באמת כמנצח נפח אותות שמקורם באזורים מרוחקים המוח. הניתוח הנוכחי של צפיפות (CSD) מקור מציע פתרון בעיה זו על-ידי מתן מידע על כיורים הנוכחי ועל מקורות באזור האלקטרודות. באזורים במוח עם למינריות cytoarchitecture כגון ההיפוקמפוס, CSD חד-ממדי ניתן להשיג על ידי הערכת המרחבי הנגזרת השנייה של LFP. כאן, אנו מתארים שיטה LFPs multilaminar הרשומה באמצעות סיליקון ליניארי הגששים מושתל לתוך ההיפוקמפוס הגבי. עקבות CSD מחושבים לאורך שאנקס בודדים של המכשיר. פרוטוקול זה ובכך מתאר הליך כדי לפתור תנודות מוגבל ברשת עצביים בהיפוקמפוס לנוע בחופשיות עכברים.
מבוא
תנודות ב- LFP מעורבים באופן ביקורתי מידע עיבוד על ידי מעגלים עצביים. הם מכסים מגוון רחב של תדרים, ועד גלים איטיים (~ 1 Hz) ריפל במהירות תנודות (~ 200 Hz)1. תדירות ברורים להקות הקשורים עם תפקודים קוגניטיביים, כולל זיכרון, עיבוד רגשי של ניווט2,3,4,5,6,7. הזרימה הנוכחית מעבר ממברנות עצביים מהווה את החלק הגדול ביותר של האות LFP8. קטיונים הזנת התא (למשל באמצעות הפעלה של הסינפסות סינאפסות glutamatergic) מייצגים כיור הנוכחי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל השיטות המערבות בעלי חיים החיים אושרו על-ידי פרייבורג Regierungspräsidium לפי חוק רווחת בעלי חיים גרמנית.
1. תכשירים
- לתכנן ולבנות כלי הכניסה המתאים transiently נושאת את החללית הסיליקון ואת המחבר אלקטרודה במהלך תהליך ההשתלה. לקבלת כלי מותאם אישית הכניסה בנוי דוגמה, ראה איור 1 .
- בזהירות לשחרר את הסיליקון החללית ואת אלקטרודה מחבר מאריזתו באמצעות מלקחיים שקצהו קרמיקה.
- הרם את לוח מחבר, בצורה מאובטחת לתקן אותו עם מלחציים תנין המצורפת עמדה.
- שימוש של סטריאוסקופ, יישר את המכשיר בעזרת הכלי הכניסה עם מלקחיים שקצהו קרמיקה. למרוח שכבה ~ 2 מ מ של פרפין שעווה מומסת עם cauterizer להדבי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
איור 1 מדגימה את הכלי ההכנסה שימוש עבור ההשתלה של הגששים סיליקון. הקלטות סיליקון כרוני מושתל רגשים פילוח האזור CA1, השכבה תא גרגר של הכישור משוננת מוצגים באיור2. הקלטנו LFPs מ שאנקס בדיקה במהלך תנועה חופשית ב homecage. כדי למזער את ההשפעה של אמצעי האחסון הולכה, האותות שהושג היו המרה CSD לאורך כל shank של המכשיר (איור 2Bיח). בדוגמה הראשונה המוצגת באיור 2B.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הגדלת עדויות מציינים כי תנודות המוח במעגלים עצביים בהיפוקמפוס להתרחש דיסקרטית תחומים מרחבי10,11,16. CSD ניתוח מפחיתה באופן דרסטי את השפעת אמצעי הולכה, תנאי חיוני לצורך המחקר של אירועים מקומיים תנודה. עם וידאו זה, אנו מספקים מדריך כדי להשתיל סיליקון הגששים בהיפוקמפוס העכבר לניתוח של נתונים CSD. אנו מראים דוגמאות מייצגות של אותות CSD שארפ-גל האדוות CA1, התנודות גמא המותאמות לשפות אחרות של הכישור משוננת. עם זאת, פרוטוקול זה יכול לש.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
אנחנו אסירי תודה קארין וינטרהאלטר, קרסטין Semmler לקבלת סיוע טכני עבודה זו נתמכה על ידי האשכול של מצוינות BrainLinks - BrainTools (סיפורה ה 1086) של קרן המחקר הגרמני.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מהדק תנין עם מעמד | Reichelt Elektronik | HALTER ZD-10D | |
| בדיקת סיליקון | קיימברידג' נוירוטק | P-series 32 | |
| סטריאוסקופ | אולימפוס | SZ51 | |
| חוט נחושת מבודד | לכה Bü rklin Elektronik | 89 F 232 | |
| ברגי הארקה | ברגים & More GmbH (screwsandmore.de) | DIN 84 A2 M1x2 | |
| שטף | סטנול | 114018 | |
| מלקחיים עם קצה קרמי | Fine Science Tools | 11210-60 | |
| Paraffine Wax | Sigma-Aldrich | 327204 | |
| Cauterizer | Fine Science | Tools 18010-00 | |
| ברזל הלחמה | Kurtz Ersa | OIC1300 | |
| מולטימטר | Uni-T | UT61C | |
| אתנול | קארל רוט | 9065.1 | |
| פיפטות פסטר | קארל רוט | EA65.1 | |
| מעקר חום | Fine Science Tools | 18000-45 | |
| מסגרת סטריאוטקסית | דיוויד קופף | דגם 1900 | |
| מחזיק אלקטרודות סטריאוטקסי | דיוויד קופף | דגם 1900 | |
| Isoflurane | Abbvie | B506 | |
| רכז חמצן | Respironix | 1020007 | |
| Buprenorphine | Indivior UK Limited | ||
| מכונת גילוח חשמלית | Tondeo | Eco-XS | |
| כרית חימום | Thermolux | 463265/-67 | |
| מהדקים כירורגיים | כלי מדע עדינים | 18050-28 | |
| מי חמצן | Sigma-Aldrich | H1009 | |
| מגבוני כותנה סטריליים | Carl Roth | EH12.1 | |
| Drill | Proxxon | Micromot 230/E | |
| 21G מחט הזרקה | B. Braun | 4657527 | |
| מאגר פוספט/פוספט | |||
| אטלס Elsevier | 9.78012E+12 | ||
| מספריים כירורגיים | כלי מדע עדינים | 14094-11 | |
| מלקחיים כירורגיים | כלי מדע עדינים | 11272-40 | |
| מחטי הזרקה 27G | B. Braun | 4657705 | |
| וזלין | |||
| מלט שיניים | Sun Medical | SuperBond T& M | |
| Carprofen | Zoetis | Rimadyl 50mg/ml | |
| מגבר הקלטה | Intan Technologies | C3323 | |
| לוח רכישה USB | Intan Technologies | C3004 | |
| כבלי הקלטה | Intan Technologies | C3216 | |
| קומוטטור חשמלי | עדשות דוריות | HRJ-OE_FC_12_HARW | |
| תוכנת רכישה | OpenEphys (www.open-ephys.org) | GUI | מאפשרת רכישת נתונים בלתי תלויה בפלטפורמה |
| מחשב לרכישת | |||
| סביבת ניתוח | Python (www.python.org) | מאפשרת ניתוח נתונים בלתי תלוי בפלטפורמה | |
| Urethane | Sigma-Aldrich | ||
| Vibratome | Leica | VT1000 | |
| שקופיות מיקרוסקופ | Carl Roth | H868.1 | |
| תלושי כיסוי | Carl Roth | H878.2 | |
| הטמעת בינוני | Sigma-Aldrich | 81381-50G | |
| מים מזוקקים | Millipore | Milli Q | מכונה שולחנית לייצור מים מזוקקים |
| Tergazyme | Alconox | Tergazyme |
מקורות
- Buzsáki, G., Draguhn, A. Neuronal oscillations in cortical networks. Science. 304 (5679), 1926-1929 (2004).
- Keefe, J., Recce, M. L. Phase relationship between hippocampal place units and the EEG theta rhythm. Hippocampus. 3 (3), 317-330 (1993).
- Benchenane, K., et....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
