טכניקות הרבייה בסיוע (אמנויות) הן בהערכה רציפה כדי לשפר את התוצאות ולהפחית את הסיכונים הקשורים. כתב יד זה מתאר הליך מינימלית פולשני העברת העובר עם פרוטוקול הקריוגנית יעיל המאפשר שימוש בארנבים כמודל בעלי חיים אידיאלי של רבייה אנושית.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
העברת העובר פולשני המינימלי העובר ויטריפיקציה בשלב העובר אופטימלית במודל ארנב
במאמר זה
סיכום
תקציר
טכניקות הרבייה בסיוע (אמנויות), כגון תרבות העובר מחוץ לאדמה או קריוגנית העובר, להשפיע על דפוסי התפתחות טבעית עם השלכות לאחר הלידה ולידה. כדי להבטיח את innocuousness של יישומי אמנות, מחקרים במודלים של בעלי חיים נחוצים. בנוסף, כצעד אחרון, מחקרי פיתוח העובר דורשים הערכה של היכולת שלהם לפתח צאצאים בריאים לטווח מלא. כאן, העברת העובר אל הרחם הוא הכרחי לבצע כל ניסוי הקשורות לאומנויות.
הארנב שימש כאורגניזם מודל לחקר הרבייה של היונקים במשך יותר ממאה שנה. בנוסף הקרבה פילוגנטי שלו למין האנושי הגודל הקטן שלה ועלות תחזוקה נמוכה, יש לו מאפיינים הרבייה חשוב כגון ביוץ המושרה, כרונולוגיה של התפתחות עובריים מוקדם דומה לבני אדם הריון קצר המאפשרים לנו ללמוד את ההשלכות של יישום האמנות בקלות. יתר על כן, אמנויות (כגון הזרקת זרע תאיים, העובר תרבות, או הקפאה) מוחלים עם יעילות מתאימה במין הזה.
השימוש בטכניקת המעבר לפרוסקופי ובפרוטוקול הקריוגנית המוצג במאמר זה, אנו מתארים 1) כיצד להעביר עוברים דרך טכניקה קלה, פולשנית ומינימלית ו -2, פרוטוקול אפקטיבי לאחסון לטווח ארוך של ארנבים עוברים לספק יכולות לוגיסטיות זמן גמישות ויכולת להעביר את המדגם. התוצאות שהתקבלו לאחר העברת עוברי ארנבים בשלבים התפתחותיים שונים מצביעים על כך morula הוא השלב האידיאלי עבור התאוששות העובר הארנב והעברה. לפיכך, נדרשת העברה של עובר האובידיוס, המצדיקים את ההליך הכירורגי. יתר על כן, הארנב מורולאי בהצלחה מועברים והועבר לפרואו, ומוכיחים את האפקטיביות של הטכניקות המתוארות.
מבוא
עם מטרות של עקיפת פוריות האדם או שיפור הפצת בעלי חיים של ערך גנטי גבוה ושמירה על משאבים גנטיים בעלי חיים, סט של טכניקות שנקרא באופן קולקטיבי טכנולוגיות רבייה, כגון סופר ביוץ, ב הפריה חוץ גופית , תרבות העובר, או הקפאה,פותחו 1,2. כיום, מקבלים טיפולים הורמונליים כדי לעורר את השחלות ולייצר מספר רב של זקיקי השחלות העאליים1. Oocytes שנאסף מזקיקי אלה יכול להיות התבגר, מופרית, ופיתח בתוך מבחנה עד שהם הקפאה או הועבר אמהות פונדקאית3. עם זאת, במהלך טיפולים אלה, המשחק והזיטים חשופים לסדרה של תהליכים לא פיזיולוגיים שיכולים לדרוש הסתגלות העובר כדי לשרוד בתנאי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים הניסיוניים המשמשים במחקר זה בוצעו בהתאם להנחיה 2010/63/האיחוד האירופי לניסויים בבעלי חיים ולביקורת ואושר על ידי הוועדה האתית לניסויים עם בעלי חיים של הפוליטטיניקה דה ואלטק, ספרד (קוד מחקר: 2015/VSC/אפונה/00170). XGD, FMJ, MPVC ו-JSV מחזיקה אישור הרשאה שהונפק על ידי הממשל הממשלות ולנסיה להתנסות בבעלי חיים. XGD מוסמכת לפקח על הרווחה והטיפול בבעלי החיים במהלך הניסוי.
1. העברת עובר
- הכנת נקבות הנמען
- השתמש רק נשים בוגרות מינית (> 4.5 חודשים בן).
- שבוע לפני ET, להתאים נקבות ל 16 h אור/8 h משטר כהה כדי ליזום צמיחה פוליקולרית ומוגברת קבלה נשית.
- בחר את הנקבות הנמען, התבוננות בטורגיק....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
העברה פולשנית לפרוסקופי של עוברים רעננים או מבתרים את הארנב בקרב חיות המופת הטובות ביותר ללימודי הרבייה. טבלה 1 מראה את התוצאות של ET חדש בשלבים התפתחותיים שונים (איור 4) של עוברים הועברו. שיעור ההישרדות בלידה (אחוז העוברים הנובעים גור) הוכיחה את היעילות של טכניקת הפרוסקופי המתוארת במאמר זה. הערכים הגבוהים יותר הושגו כאשר ה-ET בוצעה עם עוברים בשלב מורולה, או מוקדם או קומפקטי. בהתבסס על תוצאות אלה, ביצעו ניסוי שני כדי להדגים את שיעור ההישרדות .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מאז המתועד הראשון של מקרה הלידה החיה מעוברים הועברו9, טכניקה זו ומינים הארנב הפכו קריטיים בלימודי הרבייה. חוץ מזה, מחקרי מחקר עובר מעורבים, ייצור, הקפאה, וכו ' דורשים כצעד האחרון הערכה של יכולת העובר ליצור צאצאים בריאים לטווח מלא. לכן, טכניקת העברת העובר היא הכרחית13,28. במהלך השנים, השיטות הכירוגרפיות המועסקים בתחילה כדי להעביר עוברים אל הרחם האימהי הוחלפו בהדרגה על ידי שיטות פולשנית פחות ברוב המכריע של מינים13<.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה לגלות
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי כספים ממשרד הכלכלה והתחרותיות של ספרד (AGL2017-85162-C2-1-R) ו הכלטאת ולנסיה תוכנית מחקר (PrometeoII 2014/036). גרסת טקסט באנגלית שתוקנה על-ידי נ. מאקאן שירות לשפות אנגלית
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| סרום בקר אלבומין (BSA) | VWR | 332 | |
| בופרנורפין הידרוכלוריד | Alvet Escartí | 626 | יוזמן על ידי וטרינר מורשה. |
| בוסרלין אצטט | סיגמא אולדריץ' | B3303 | |
| סבון קלורהקסידין דיגלוקונאט | Alvet Escartí | 0265DCCJ500B | |
| תמיסת קלורהקסידין דיגלוקונאט | Alvet Escartí | 0265DCCA500B | |
| CO<תת>2 | אוויר נוזלי | 99921 | CO2 N48. |
| חממת CO2 | פישר 15385194 | ||
| דימתיל סולפוקסיד | סיגמא אולדריץ | W387509 | |
| Dulbecco' s תמיסת מלח חוצצת פוספט (DPBS) | Sigma Aldrich | D5773 | ללא סידן כלורי. |
| סכין גילוח חשמלי | אוסטר גולדן A5 | 078005-140-002 | |
| מצלמת אנדוסקופ | אופטימיק ספרד S.A | OP-714 | |
| אנדוסקופ טרוקר עם שסתום עלון סיליקון | קארל סטורץ אנדוסקופיה Ibé rica S.A. | 30114GK | דגם טרוקר קל משקל. |
| Enrofloxacin | Alvet Escartí | 9993046 | יש להזמין על ידי וטרינר מורשה. |
| מחט אפיקרנלית 23G | Alvet Escartí | 514056353 | ניתן להשתמש גם במחטים קטנות יותר. |
| קטטר אפידורלי | Vygon corporate | 187.10 | |
| מחט אפידורלית | Vygon corporate | 187.10 | |
| אתילן גליקול | סיגמא אולדריץ' | 102466-M | |
| משחת עיניים | Alvet Escartí | 5273 | |
| קטמין הידרוכלוריד | Alvet Escartí | 184 | יוזמן על ידי וטרינר מורשה. |
| ציוד לפרוסקופיה | קארל סטורץ אנדוסקופיה Ibé rica S.A. | 26003 | AA הופקינס® לפרוסקופ, לפרוסקופ 0º-מ"מ ישר לצפייה ישירה, אורך 30 ס"מ, תעלת עבודה 5 מ"מ. |
| מקור אור | Optomic ספרד SA | Fibrolux 250 | |
| חנקן | אוויר נוזלי | P1505XXX | |
| מכני CO2 אינסופלטור | קארל סטורץ אנדוסקופיה Ibé rica S.A. | אנדופלטור ® | |
| Meloxicam | Alvet Escartí | 9993501 | יש להזמין על ידי וטרינר מורשה. |
| צלחות פטרי, 35 מ"מ | Sigma Aldrich | CLS430165-500EA | |
| רוטב פלסטיק (Nobecutan) | IBOR medica | 7140028 | |
| קש פלסטיק 0.25 מ"ל | IMV - טכנולוגיות | 6431 | |
| תמיסת יודיד פובידון | Alvet Escartí | 02656DPYS500S | |
| מספריים | ROBOZ | RS-5880 | כל מספריים ישרים קטנים מפלדה בדרגה כירורגית רגילה יעבדו. |
| צינור סיליקון לאינספלטור | קארל סטורץ, אנדוסקופיה Ibé rica S.A. | ||
| סטריאומיקרוסקופ | Leica | MZ16F | ישנן אפשרויות זולות יותר כמו Leica MZ8 או Nikon SMZ-10 או SMZ-2B, אם להזכיר כמה. |
| כפפות סטריליות | Alvet Escartí | 087GL010075 | |
| שמלה סטרילית | Alvet Escartí | ||
| מסכה סטרילית | Alvet Escartí | 058B15924B | |
| תקע קש | IMV - טכנולוגיות | 6431 | |
| מזרק סוכרוז | סיגמא אולדריץ' | S7903 | |
| פישר 11750425 | 1 מ"ל | ||
| 5 מ"ל | צנתר שתן פישר 11773313 | ||
| IMV - טכנולוגיות | 17722 | ||
| אמבט מים | RAYPA | BAE-4 | |
| קסילזין | Alvet Escartí | 525225 | יש להזמין על ידי וטרינר מורשה. |
| Rabbits | Universitat Politè cnica de Valè ניתן | להשתמש בקווים אימהיים אחרים, כגון קו V או קו HP. |
מקורות
- Chen, M., Heilbronn, L. K. The health outcomes of human offspring conceived by assisted reproductive technologies (ART). Journal of Developmental Origins of Health and Disease. 8 (4), 388-402 (2017).
- Lavara, R., Baselga, M., Marco-Jiménez, F., Vicente, J. S.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
