כדי להרחיב את היכולת של מעבדות ברחבי העולם כדי להעריך את הזכאות של חולים עם סרטן ריאות לטיפול pembrolizumab, באופן אמין לשחזור, פיתחנו וזמינותו של העושה את תרכיז נוגדן 22C 3-נרחב זמין immunohistochemical autostainer, עבור דגימות ביופסיה והן ציטולוגיה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
באמצעות 22C 3 נוגדן Anti-PD-L1 להתרכז ביופסיה ודוגמאות ציטולוגיה של חולי סרטן ריאות שאינם קטנים התא
במאמר זה
סיכום
תקציר
יחידני Pembrolizumab אושרה לטיפול, השנייה-שורה ראשונה של חולי PD-L1-הבעת מתקדמים סרטן ריאות תאים שאינם קטנים (NSCLC). בדיקות עבור הביטוי PD-L1 PD-L1 אימונוהיסטוכימיה (IHC) 22C 3 לוויה אבחון וזמינותו, אשר נותן שיעור הגידול ניקוד (TPS), אומתה על גידול רקמות. פיתחנו ממוטבת מפותחות מעבדה מבחן (LDT) המשתמשת את תרכיז נוגדן 22C 3 (אלב) על autostainer IHC נרחב זמין עבור דגימות ביופסיה ו ציטולוגיה. תוכנית-המיתאר PD-L1 הוערך עם דגימות ביופסיה ומקטעים לזווג רקמת הגידול כל 120, עם 70 לזווג דגימות ביופסיה ו ציטולוגיה (שוטף הסמפונות, n = 40; השתפכות, n = 30). Ab 22C 3 שמבוסס להתרכז LDT הראה שיעור קונקורדנציה גבוה בין ביופסיה (~ 100%) ציטולוגיה דגימות (~ 95%) בהשוואה ל- PD-L1 IHC ביטוי באמצעות וזמינותו לוויה 22C 3 IHC PD-L1-TPS שני חותכים נקודות (≥1%, ≥50%). LDT ממוטבת המובאים כאן, באמצעות את תרכיז אלב 22C 3 כדי לקבוע את הביטוי PD-L1 ברקמת הגידול שני, דגימות ציטולוגיה, ירחיב את היכולת של מעבדות ברחבי העולם כדי להעריך את הזכאות של חולי NSCLC לטיפול pembrolizumab יחידני באופן אמין לשחזור.
מבוא
האחרונות ניסויים קליניים הראו את היעילות של pembrolizumab, monoclonal IgG4 קאפה isotype מואנשים שחוסמת את האינטראקציה בין מות תאים מתוכנת 1 (PD-1), שלה ליגנדים, PD-L1 ו- PD-L2, לטיפול בחולים עם מתקדם NSCLC1,2,3,4.
כיום, pembrolizumab אושרה לטיפול של NSCLC PD-L1-הבעת ' בחולים הן טיפול-תמים עם ביטוי PD-L1 תוכנית-המיתאר של ≥50%, אין גורם הגדילה באפידרמיס קולטן (EGFR) או לימפומה אנפלסטית קינאז (ALK) הגידול גנומית סטיות3 בעבר מטופלים חולים עם תוכנית-מיתאר PD-L1 של ≥1%1.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים אושרו על ידי ועדת האתיקה המקומית (ועדת האתיקה מחקר אנושי, מרכז Hospitalier Universitaire דה ניס/Tumorothèque BB-0033-00025).
הערה: פרוטוקול זה במיוחד מותאמת לשימוש של נוגדן 22C 3 להתרכז זמינים מסחרית אוטומטיות IHC הוספת גוון לסמלים (המכונה כפי autostainer כאן, לראות את הטבלה של חומרים) עבור גידול ביופסיות ודוגמאות ציטולוגיה.
1. הכנת דגימות רקמה הגידול
- לתקן את רקמת הגידול בפורמלין 10% נייטרלי במאגר (NBF) בקלטת.
הערה: רקמת הגידול גידולים ריאות proximal מתקבל בדרך כלל על ידי ברונכוסקופיה, בביצוע הרגעה מתונה pulmonologist, או ריאות מומחה. נגעים היקפיים, מחלות ריאה ' מאטום לשקו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
באמצעות ההליך שהוצגו כאן, ולא כפי שתואר בפירוט של קבוצה זו האחרונה פרסומים10,11, LDT ממוטבת קלינית אומתה עם 120 דגימות ביופסיה ארכיוני FFPE NSCLC של חולים שעברו ניתוח כריתה או ביופסיה בבית החולים האוניברסיטאי פסטר, ניס, בין מרץ 2007 ו- 2016 מרס. יתר על כן, על הערכה PD-L1 הביטוי של דגימות ציטולוגיה, תוכנית-מיתאר הוערך 70 דגימות ביופסיה רקמות לזווג, בלוקי תא שהוכנו מ שוטף הסימפונות (n = 40) או מקרום הריאה (n = 30) .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הבדיקה והאימות של LDT ממוטב באמצעות. תתרכזי נוגדן PD-L1 22C 3, על-ידי השוואתה עם ה10,המקביל בדיקה קלינית המאומת מסחרי11. 22C 3 מרוכז נוגדן מבוססי LDT הראה שיעור קונקורדנציה גבוה בין ביופסיה (~ 100%) דגימות ציטולוגיה (~ 95%) בהשוואה הביטוי PD-L1 IHC נקבע באמצעות וזמינותו PD-L1 IHC 22C 3 ב ≥1% תב והן את ≥50% תב לחתוך נקודות. כמו לאחרונה המומלצת על ידי האגודה הבינלאומית המחקר של סרטן ריאות, האזורים חיובי PD-L1 צריך להיות זהה עבור 10 דוגמאות שליליות PD-L1, 10 דוגמאות.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
מחקר זה מומן על ידי מרק & ושות', בע מ, Kenilworth, ניו ג'רזי, ארה ב. התורמים שחיים אין תפקיד ב תכנון המחקר, איסוף נתונים, ניתוח, ההחלטה לפרסם או אופן ההכנה של כתב היד.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | תמיסה משמרת לדגימות ציטולוגיה |
| Novaprep® HQ+ B | Novacyt | NA | תמיסה מוקוליטית |
| Tissue-Tek VIP 6 | סאקורה | 6042 VIP 6 | |
| רקמות-טק TEC 5 מערכת קונסולת הטמעת רקמות | סאקורה | 5229 TEC 5 | |
| מיקרוסקופ זכוכית שקופית SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| DL-Dithiothreitol אבקת | סיגמא-אולדריץ' | D3801 | |
| Heidolph Multi Reax Vortex Shaker | Thermo Fisher Scientific | 13-889-410 | |
| Shandon Cytoblock | Thermo Fisher Scientific | 7401150 | |
| 22C3 נוגדן תרכיז אנטי-PD-L1 | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ מקשר אוניברסלי | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| מגבר OptiView | Ventana | #760-099 | |
| OptiView הגברה Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView נחושת | Ventana | #760-700 | |
| המטוקסילין II | Ventana | #790-2208 | |
| מגיב כחול | Ventana | #760-2037 | |
| מיזוג תאים 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| נעלי כיסוי לסרט Tissue-Tek | סאקורה | 4742 |
מקורות
- Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
- Herbst, R. S., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
