מאמר שיטה

טיפול ממוקד, סלקטיבי של Teratomas נגזר תאי גזע Pluripotent באמצעות קרינה חיצוני קרן במודל של חיית-קטן

DOI:

10.3791/58115

⸱

17 בפברואר 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Stanford Cardiovascular Institute, Stanford University School of Medicine, 2Department of Medicine, Division of Cardiology, Stanford University School of Medicine, 3Medical Service, Cardiology Section, Veteran Affairs Palo Alto Health Care System, 4Department of Pathology, Stanford University School of Medicine, 5Department of Radiology, Molecular Imaging Program, Stanford University School of Medicine, 6Peking University Shenzhen Health Science Institute, 7Department of Radiation Oncology, Stanford University School of Medicine

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר על אסטרטגיות טיפול teratomas נגזר תאי גזע pluripotent חשוב התרגום קלינית של טיפול בתאי גזע. כאן, אנו מתארים לפרוטוקול, ראשית, להפיק תאי גזע-derived teratomas בעכברים ולאחר, מכן, ל סלקטיבי היעד ולטפל ויוו שימוש בעוצמה קטנה-חיה של גידולים אלה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המספר הגדל והולך של קורבנות של "תאי גזע תיירות," השתלת ללא פיקוח של תאי גזע ברחבי העולם, העלה חששות לגבי הבטיחות של השתלת תא גזע. למרות השתלת של הבדיל ולא התאים מובחן הוא מנהג נפוץ, teratomas יכול עדיין לנבוע הנוכחות של תאי גזע מובחן שיורית בזמנו של השתלה או של מוטציות ספונטניות הבדיל תאים. כי תאי הגזע טיפולים מועברות לעיתים קרובות לאתרים רגישים מבחינה אנטומית, גידולים קטנים אפילו יכולה להיות הרסנית קלינית, וכתוצאה מכך עיוורון, שיתוק, הפרעות קוגניטיביות, בתפקוד הלב וכלי הדם. גישה כירורגית באתרים אלה עשוי גם להיות מוגבל, עוזב חולים עם כמה אפשרויות טיפוליות. שליטה תאי גזע התנהגות בלתי הולמת, לפיכך, הוא קריטי עבור התרגום קלינית של טיפול בתאי גזע.

קרינה חיצוני קרן מציע אמצעי יעיל של העברת טיפול ממוקד כדי להקטין את הנטל טרטומה תוך מזעור הפגיעה סביב האיברים. בנוסף, שיטה זו מונע מניפולציה גנטית או ויראלי התמרה חושית של תאי גזע-אשר משויכים חששות יעילות ובטיחות קליניים נוספים. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול ליצירת teratomas נגזר תאי גזע pluripotent בעכברים וכדי להחיל חיצוני קרן הקרנות באופן סלקטיבי ablate ויוו גידולים אלה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ההתפתחות של תאי גזע טיפולים התחדשות רקמות נתקל מספר מחסומים בעשרות השנים האחרונות, פוגעות המאמצים לפריסה קליניים יעיל. משוכות אלה כוללים שמירה תא המסכן באתרים של משלוח, תאי הגזע immunogenicity פוטנציאל אמצעים teratomas טופס1. Tumorigenicity הוא של דאגה קלינית מסוימת כמו זה עלולים להזיק לתאי גזע להשתלות נמענים2. חשבונות היווצרות גידול עקב הזרקת תאי גזע ללא פיקוח כבר דווחו מספר הגדרות קליניים3,4,5. פוטנציאל היווצרות טרטומה הוא ביותר לעתים קרובות ציטט את הדאגה קליניים בהתפתחות תאי גזע (PSC) pluripotent יש הביא עיכובים וביטולים של מ....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניסויים בבעלי חיים זו אושרה והופיע תחת ועדת הבדיקה מוסדיים והפאנל ניהול על מעבדה חיה אכפת באוניברסיטת סטנפורד.

1. תא תרבות של iPSCs

  1. לגדול iPSCs האדם נגזר על ידי התכנות lentiviral על 6-ובכן צלחות מצופה קרום המרתף מטריקס (למשל, matrigel, המכונה מטריקס לכאן בזמן שנסעתי).
  2. מדי יום לשנות את התקשורת של iPSCs מועשר תרבות בינונית (ראה טבלה של חומרים) המקננת-CO 37 ° C ו-5%2.
  3. ברגע התאים להגיע למפגש 80-90% (כ מדי 4 ימים), להוסיף 1 מ"ל של האנזים תא רקומביננטי-דיסוציאציה (ראה טבלה של חומרים) לכל טוב ואני דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 5 דקות.
  4. לאחר 5 דקות, לנתק את התאים מן ....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עכברים מוזרק בדרך כלל תדגים טרטומה היווצרות צמיחה לאחר 4-8 שבועות, כפי שאושר על-ידי מתה על הדמיה (איור 2). גידולים יתכווץ באופן משמעותי כאשר מוקרן עם מנה מצטברת של Gy 18 בהתחשב חודש לאחר הלידה תא, וכתוצאה מכך ירידה משמעותית אות לוציפראז (איור 2). חשוב, רקמות רגילה לקחת 5 מ מ מאתר לקרינה אינן מופיעות יש נזק משמעותי (איור 3).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקרים אנקדוטיים קורבנות של "תאי גזע תיירות" ונתונים פרה לאשר הסיכון לפתח teratomas הוא חיסרון רציני המשויך PSC טיפולים23. פיתוח של גישות זהיר כדי למנוע ולטפל שהסיכון אמצעים תאי טיפולים, לפיכך, הוא צעד חשוב בקידום התרגום קליני בתאי גזע משובי טיפולים. במאמר זה, אנחנו תיאר שיטה טיפולית פילוח של teratomas PSC-הקשורים באמצעות EBRT במודל של עכברים והראו ניוון דינמי של גידולים לקרינה באמצעות הדמיה רבנות בלי.

אנו מנוצל iPSCs האנושי, נוצר על ידי lentivirus התכנות שיטה, מוזרק במו.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים רוצה להודות את נבחרת מוסדות של בריאות R01 HL134830 (PKN) K08 HL135343 (קאי אס), 5F32HL134221 (JWR); המכון הרפואי הווארד יוז (ASL); את סטנפורד לב וכלי דם המכון (ASL) לתמיכה שלהם.

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
קו בקרת תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרה אוניברסיטתסטנפורדמעבדת נגויןתרבית תאים של iPSC
Corning מטריג'ל מטריג'ל מטריצת קרום בסיס 354234פישר סיינטיפיקCB-40234תרבית תאים של מדיום תרבית iPSC
Essential 8ATCC-מרכז המשאבים הביולוגיים העולמי30-2203תרבית תאים של iPSC
Tryple EGibco12605-036תרבית תאים של
מעכב iPSC Y27632 2 HCL (מעכב ROCK)Fisher ScientificS104950MGתרבית תאים של iPSC
LentivirusCyagenP170721-1001cjnטרנסדוקציה של iPSC עם גן מדווח היתוך כפול
Polyrbrene זיהום/טרנספקציהמגיב Millipore SigmaTR-1003-Gטרנסדוקציה של iPSC עם גן
מדווח היתוך כפולגן מדווח Fluc-eGFP מונע על ידי מקדם יוביקוויטיןאוניברסיטת סטנפורדמעבדת סם גמבירהתמרה של iPSC עם גן מדווח היתוך כפול
D-luciferinPerkin Elmer122799התמרה של iPSC עם גן מדווח היתוך כפול
וציטומטר זרימה BLI (BD FACSARIA III)BD Biosciences FACSAriaTransduction of iPSC with double fusion reporter gene
microplate spectrofluorometer (Glomax Navigator System)Promega Bio Systems, Sunnyvale, CAGM2000התמרה של iPSC עם גן מדווח היתוך כפול
Xenogen IVIS 200 Perkin Elmer124262BLI
IsofluraneSigma-AldrichCDS019936הקרנה
X-Rad SmART irradiator מונחה תמונה Precision X-ray Inc., North Branford, CTX-Rad SmARTתוכנה להקרנת
RT_Imageאוניברסיטת סטנפורד (http://rtimage.sourceforge.net/)RT_Imagev0.2βהקרנה
חבילת

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sallam, K., Wu, J. C. Embryonic stem cell biology: insights from molecular imaging. Methods in Molecular Biology. 660, 185-199 (2010).
  2. Lee, A. S., Tang, C., Rao, M. S., Weissman, I. L., Wu, J. C. Tumorigenicity as a clinical hurdle for pluripotent stem cell therapi....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Micro CT

מאמרים קשורים