כאן, אנו מציגים את פרוטוקול לסינתזה של היפרדות כונדרויטין סולפט א איגוד פפטיד (plCSA-BP)-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים באמצעות צעד אחר צעד sonication bioconjugate וטכניקות. חלקיקים אלה מהווים כלי הרומן למסירה יישוב של הרפוי גידולים האנושי ביותר, היפרדות trophoblasts לטיפול סרטן והפרעות היפרדות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
סינתזה ואפיון של היפרדות כונדרויטין גופרתי (plCSA) - מיקוד השומנים - חלקיקי הפולימר
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
שיטה טיפולית יעילה לסרטן מפחית ומסלקת גידולים עם רעילות מינימלית מערכתית. חלקיקים באופן פעיל מיקוד מציעים גישה מבטיחה לטיפול בסרטן. גליקוזאמינוגליקן היפרדות כונדרויטין סולפט (plCSA) מתבטאת במגוון רחב של תאים סרטניים trophoblasts היפרדות, ואת מלריה חלבון ש-var2csa ניתן לאגד במיוחד plCSA. פפטיד מחייב דווח על היפרדות כונדרויטין סולפט A (plCSA-BP), נגזר מלריה חלבון VAR2CSA, באפשרותך לאגוד גם באופן ספציפי כדי plCSA על התאים הסרטניים, היפרדות trophoblasts. לפיכך, plCSA-BP-מצומדת חלקיקים יכול לשמש ככלי למשלוח שיגור תרופות סרטן אנושיים, היפרדות trophoblasts. ב פרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה לסנתז plCSA-BP-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים טעונים עם דוקסורוביצין (plCSA-DNPs); השיטה מורכבת צעד בודד sonication וטכניקות bioconjugate. בנוסף, מספר שיטות אפיון plCSA-DNPs, כולל החלטה physicochemical תכונותיהם ואת ספיגת התאית על ידי תאים choriocarcinoma היפרדות (JEG3), מתוארים.
מבוא
שיטה טיפולית יעילה לסרטן מפחית ומסלקת גידולים עם רעילות מינימלית מערכתית. ומכאן, גידול סלקטיבי המיקוד הוא המפתח לחקור שיטות טיפוליות מוצלחות. חלקיקים מציעים הזדמנות מבטיחה לטיפול בסרטן, הרכבות מולקולרית עם קבוצות פונקציונליות שונות לשפר את יעילות התרופה ולצמצם את תופעות לוואי המשויך1,2. יתר על כן, ננו-חלקיק מערכות לנצל בעיקר פסיביים ואקטיביים מיקוד כדי להגיע למטרה גידולים3.
פילוח פסיבי מנצלת את מאפייני מולדת של חלקיקים, חדירות משופרת ואפקטים השמירה (EPR) כדי להגיע תאים סרטניים. ליפוזומים cationic שימשו בהצלחה להעביר תרופות נגד סרטן שונים גידולים יישומים קליני....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנת מלאי פתרונות
- הכן תמיסה מימית של 4% אתנול על ידי דילול 4 מ"ל אתנול מוחלטת עם 100 מ של מים הנדסה גנטית. לאחסן את הפתרון ב 4 º C.
הערה: הנדסה גנטית מים מוגדר מים ללא מזהמים כגון חיידקים, חלקיקים, יונים או nucleases. הנדסה גנטית מים היה המתקבלים מערכת טיהור מים עם resistivity היעד של 18.2 עד mΩ·cm, כלומר זיהום anionic נמוכה. - להכין 1 מ"ג/מ"ל לציטין סויה פתרון מניות על ידי המסת 20 מ ג של לציטין סויה ב- 20 מ של התמיסה המימית של 4% אתנול. חנות לציטין סויה פתרון מניות ב 4 º C.
- הכן 25 מ"ג/מ"ל DSPE-יתד (2000)-COOH מניות פתרון על ידי המסת 100 מ ג של DSPE-פג-COOH ב 4 מ"ל של התמיסה המימית של 4% אתנול. חנות הפתרון מניות ב-20 ° C.
- הכ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
ב פרוטוקול זה, לציטין PLGA, DSPE-פג-COOH, סויה הן נציג פולימר, המספר המשלים השומנים-פג-COOH השומנים, בהתאמה. הסינתזה של חלקיקים השומנים-פולימר, ממוקדות plCSA ויה צעד אחר צעד sonication שיטה, טכניקה EDC/NHS מודגם באיור1. ראשית, בתנאים sonication, לציטין סויה, PLGA, DSPE-פג-COOH בעצמם טופס הליבה-פגז מובנים DNPs. הליבה מורכבת PLGA DOX שעברו אנקפסולציה, המעטפת מורכבת DSPE-פג-COOH, טפט לציטין סויה ממוקם על הממשק של הקליפה והליבה. לאחר מכן, הקבוצות - COOH .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פרוטוקול זה מספק שיטה לשחזור ויעיל עבור סינתזה plCSA-BP-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים. בשיטת צעד אחר צעד sonication להכין את השומנים-פולימר חלקיקים הוא מהיר, הדירים שונה בשיטות nanoprecipitation טיפוסי כולל חימום, vortexing או אידוי. לפיכך, השיטה שפותחה מפחית באופן משמעותי את הזמן סינתזה. בנוסף, bioconjugate EDC/NHS בשימוש פרוטוקול זה היא טכניקה בשימוש נפוץ ונוח מאוד? משהו שנובח פפטידים, נוגדנים חלקיקים. לכן, השילוב של שיטת sonication צעד אחר צעד עם הטכניקה bioconjugate EDC/NHS לסנתז פילוח plCSA השומנים-פולימר חלקיקים ונ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
X.f. ב עורכים: ב"צ הממציאים על הפטנטים PCT/CN2017/108646, 201710906587.6 נאספו האירוע מתקיים שמכסה על שיטת סינתזה nanoparticle ממוקדות plCSA ויישום בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. אין פוטנציאל ניגודי עניינים פורסמו על ידי המחברים האחרים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי מענקי המחקר מפתח הלאומי, תוכנית פיתוח של סין (2016YFC1000402), הקרן מדעי הטבע הלאומית (81571445 ו- 81771617), את מדעי הטבע קרן של בפרובינצית גואנג-דונג (2016A030313178) כדי X.f. ב, קרן מחקר בסיסי שנג'ן (JCYJ20170413165233512) כדי x.f. ב
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| פפטיד plCSA | שנחאי GL Biochem | 573518 | לסינתזה של פפטידים |
| אתנול מוחלט | סינופארם | 10009218 | לסינתזה של ננו-חלקיקים |
| לציטין פולי סויה | Avanti Polar Lipids | 441601 | לסינתזה של ננו-חלקיקים |
| DSPE-PEG-COOH | Avanti Polar Lipids | 880125 | לסינתזה |
| של ננו-חלקיקיםDoxorubicin | JKChemical | 113424 | לסינתזה של ננו-חלקיקים |
| Acetonitrile | Shanghai Lingfeng | 1008621 | לסינתזה של ננו-חלקיקים |
| PLGA | Sigma-Aldrich | 719897 | לסינתזה של ננו-חלקיקים |
| מעבד אולטרסאונד | Sonics | VCX130 | לסינתזה של ננו-חלקיקים |
| מסנן צנטריפוגה (MWCO 10 kDa) | Millipore | UFC801024 | לטיהור ננו-חלקיקים |
| סיגמא | 3-18KS | לטיהור ננו-חלקיקים | |
| 2-[מורפולינו] חומצה אתנסולפונית (MES) | סיגמא-אולדריץ' | M3671 | לצימוד פפטידים |
| 1-אתיל-3-(3-דימתילאמינפרופיל) קרבודימיד הידרוכלוריד (EDC) | סיגמא-אולדריץ' | 3450 | לצימוד פפטידים |
| N-הידרוקסיסוקסימיד (NHS) | סיגמא-אולדריץ' | 56480 | לצימוד פפטידים |
| שקיות דיאליזה | ספקטרום | 132592T | לטיהור ננו-חלקיקים |
| PBS | Hyclone | SH30028.01 | לתרבית תאים |
| 10 מ"ל צינורות צנטריפוגה, פוליפרופילן | אלאדין | S-025 | לסינתזה של ננו-חלקיקים |
| 15 מ"ל צינורות צנטריפוגה, פוליפרופילן | קורנינג | 430791 | ליישומים שונים |
| 0.22 μ מסנן מזרק סטרילי m | Millipore | SLGV033RB | לטיהור ננו-חלקיקים |
| מזרק 1 מ"ל, פוליפרופילן | BD | 328421 | לסינתזה של ננו-חלקיקים |
| Malvern Zetasizer | Malvern | Nano ZS | עבור מנתח גודל חלקיקים |
| חומצה פוספוטונגסטית | עבור רשת TEM | ||
| TEM | EMCN | BZ10024a | עבור TEM |
| ספקטרומטר UV-VIS | Leagene | DZ0035 | |
| למיקרוסקופ אלקטרונים שידור TEM | JEOL | JEM-100CXII | עבור מנתח גודל חלקיקים |
| מגיב BCA A | Thermo Fisher Scientific | 23228 | לבדיקת BCA |
| מגיב BCA B | Thermo Fisher Scientific | 23224 | לבדיקת BCA |
| 96-Well Plates | Corning | 3599 | עבור BCA |
| קורא צלחת | Thermo Fisher Scientific | Multiskan™ GO | לבדיקת BCA |
| צלחות 12 בארות | קורנינג | 3513 | לתרבית תאים |
| JEG3 | בנק תאים של האקדמיה הסינית למדעים | TCHu195 | שליה אנושית |
| DMEM/F12 | Hyclone | SH30272.01 | פנול ללא אדום |
| סרום בקר עוברי (FBS) | GIBCO | 10100 | לתרבית תאים |
| פניצילין/סטרפטומיצין | GIBCO | 15070063 | לתרבית תאים |
| מיקרוסקופ פלואורסצנטי | OLYMPUS | CKK53 | לספיגת תאים |
| Paraformaldehyde | Shanghai Lingfeng | 1372021 | לספיגת תאים |
| DAPI | Sangon Biotech | A606584 | לספיגת תאים |
| הרכבה בינונית | חיים P36961 | לספיגת תאים |
מקורות
- Davis, M. E., Shin, D. M. Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).
- Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. Nanotechnology applications in cancer. Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).
- Jabir, N. R., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
